载脂蛋白A-Ⅰ对三磷酸腺苷结合盒转运体A1的影响

目的：以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象，观察载脂蛋白A-I对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的影响,从而探讨载脂蛋白A-I对动脉粥样硬化(As)发生发展的影响。方法:用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出, 高效液相色谱分析细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量, 运用逆转录-多聚酶链反应和Western 印迹分别检测ABCA1 mRNA 与ABCA1蛋白的表达,用流式细胞术检测细胞平均ABCA1荧光强度。 结果:载脂蛋白A-I引起THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞总胆固醇、游离胆固醇与胆固醇酯呈时间依赖性减少, 而ABCA1蛋白质水平、细胞平均ABCA1荧光强度以及细胞内胆固醇流出呈时间依赖性增加,但ABCA1 mRNA没有明显变化。巯基蛋白酶抑制剂(leupeptin 和ALLN)增加ABCA1蛋白质水平,而其它蛋白酶抑制剂(pepstatin A、aprotinin及phosphoramiddon)不增加ABCA1蛋白质水平,蛋白体抑制剂(lactacytin)和溶酶体抑制剂(NH4Cl)也不影响ABCA1蛋白质水平。 结论:巯基蛋白酶可降解THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白质,而载脂蛋白A-I可阻碍巯基蛋白酶降解ABCA1蛋白质,从而提高THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1 蛋白质水平, 增加细胞内胆固醇流出, 降低细胞内胆固醇聚积。     

内脂素对THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1表达的影响

目的：观察内脂素（visfatin）对人单核细胞株THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1（ABCA1）表达的影响,探讨visfatin诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制。方法：THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,予不同浓度和时间的visfatin进行干预,分别运用油红O染色观察细胞浆脂滴变化,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法和蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测各组细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达,酶荧光学法检测细胞内总胆固醇（TC）和游离胆固醇（FC）含量,TC与FC之差为胆固醇酯（CE）含量。结果：与对照组比较,visfatin干预组细胞浆脂滴明显增多,细胞内FC和CE含量增加（均P<0.05）。Visfatin呈浓度和时间依赖性地下调ABCA1 mRNA和蛋白表达（P<0.05）。结论：Visfatin下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1的表达,使细胞内FC流出减少,CE合成增加,从而诱导泡沫细胞的形成。     

三磷酸腺苷结合盒转运体A1在THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用

目的:以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象, 探讨ABCA1在THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用。方法:用液体闪烁计数器检测胆固醇流出。RT-PCR方法检测ABCA1mRNA的表达。结果:氧化型低密度脂蛋白可增加THP-1巨噬细胞胆固醇流出, 22(R)-羟基胆固醇剂量依赖性增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出, 而DIDS剂量依赖性减少THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出;逆转录聚合酶链反应显示, 22(R)-羟基胆固醇可增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1mRNA的表达, DIDS可抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1mRNA的表达。结论:ABCA1在巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中起着重要的作用, 并为开发和寻找对ABCA1表达有特异性调控作用的药物提供了新的思路。     

内脂素通过上调ACAT1诱导THP-1源性泡沫细胞形成

目的:观察酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)在内脂素(visfatin)诱导THP-1源性泡沫细胞形成中的作用,以初步探讨visfatin诱导泡沫细胞形成的分子机制。方法:THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,予不同浓度的visfatin(1×10-7~1×10-5mol/L)分别作用0~48小时,运用油红O染色观察细胞浆脂滴变化,酶荧光法检测细胞内总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,TC与FC之差为胆固醇酯(CE)含量。分别运用RT-PCR和Western blot检测ACAT1 mRNA和蛋白表达。结果:与对照组比较,visfatin干预组细胞浆脂滴明显增多,CE与TC的比值明显增加(>50%)。visfatin呈浓度和时间依赖性地上调ACAT1 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论:ACAT1表达上调是visfatin诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制之一,这可能为visfatin致动脉粥样硬化发病机制的研究提供一个新的理论依据。     

血管紧张素-(1-7)通过AC-cAMP途径增加THP-1源性泡沫细胞ABCA1的表达并减少细胞胆固醇含量

目的: 构建THP-1源性泡沫细胞模型,探讨血管紧张素-(1-7) 和腺苷酸环化酶抑制剂MDL对THP-1源性泡沫细胞胆固醇逆转运相关蛋白——ATP结合盒转运子A1(ABCA1)表达和胆固醇含量的影响。方法: 将THP-1源性单核细胞诱导为巨噬细胞,加入氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)建立泡沫细胞模型。实验分为4组:正常泡沫细胞组、MDL组、Ang-(1-7)组和MDL+Ang-(1-7)组。处理24 h后,分别通过ELISA法、荧光定量PCR法和Western blotting检测各组细胞cAMP表达水平、ABCA1 mRNA相对表达量和蛋白含量,闪烁计数法检测各组细胞胆固醇流出率,高效液相色谱法检测各组细胞胆固醇含量。结果: (1)Ang-(1-7)组cAMP表达水平、ABCA1 mRNA相对表达量和蛋白含量较泡沫细胞组有明显升高(P<0.05),胆固醇流出率较泡沫细胞组明显增高(P<0.05),胆固醇含量较泡沫细胞组显著降低(P<0.05)。(2)MDL组cAMP表达水平、ABCA1 mRNA相对表达量和蛋白含量较泡沫细胞组有明显降低(P<0.05),胆固醇流出率较泡沫细胞组明显降低(P<0.05),胆固醇含量较泡沫细胞组增高(P<0.05)。(3)MDL+Ang-(1-7)组数值介于Ang-(1-7)组与泡沫细胞组之间。结论: (1)Ang-(1-7)能促进泡沫细胞ABCA1的表达增加,促进胆固醇外流,减少泡沫细胞胆固醇含量,逆转泡沫细胞的形成。(2) MDL可以抑制腺苷酸环化酶的活性,减少cAMP的生成,从而部分拮抗Ang-(1-7)的上述作用,但不能完全阻断Ang-(1-7)的作用。     

血管紧张素Ⅱ对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1的影响

目的： 以THP-1源性泡沫细胞为研究对象，探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1(ABCA1)表达、细胞内胆固醇含量及胆固醇流出的影响。方法: 运用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）和Western blotting分别检测AngⅡ对ABCA1 mRNA与ABCA1蛋白表达的影响，采用酶法，通过荧光分光光度计检测细胞内胆固醇含量，应用液体闪烁计数仪检测胆固醇流出的变化。结果: AngⅡ能引起THP-1源性泡沫细胞胆固醇含量显著升高(P<0.05)、ABCA1表达显著减少（P<0.05），AngⅡ受体拮抗剂厄贝沙坦（Irb）能显著减少细胞内胆固醇含量(P<0.05)、促进细胞内胆固醇流出及减轻AngⅡ对ABCA1的抑制作用(P<0.05)。结论: AngⅡ有通过其受体抑制ABCA1表达，促进泡沫细胞形成，加速动脉粥样硬化的作用。     

丹参酮ⅡA上调ABCA1表达促进泡沫细胞胆固醇流出

目的:探讨丹参酮ⅡA对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的鼠源巨噬细胞性泡沫细胞形成的影响及其机制。方法:体外培养的鼠源性巨噬细胞株,用ox-LDL(50μg/mL)孵育细胞以诱导泡沫细胞,同时用不同质量浓度的丹参酮ⅡA(10-5,10-4和10-3mol/L)处理。用油红O染色观察细胞荷脂情况,高效液相色谱法测定细胞内总胆固醇(total cholesterol,TC)、游离胆固醇(free cholesterol,FC)和胆固醇酯(cholesteryl ester,CE)的水平。采用[3H]标记的胆固醇测定胆固醇流出率。实时定量PCR和Western印迹法分别检测细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)的mRNA和蛋白的表达。结果:Ox-LDL处理48 h后,与正常巨噬细胞相比,油红O染色阳性细胞数显著性增加,细胞体积明显增大,细胞内可见大量的脂滴,形态多呈不规则形。与泡沫细胞模型相比,10-4或10-3mol/L丹参酮ⅡA处理组油红O染色阳性细胞数显著减少,细胞内脂滴明显减少,细胞体积明显缩小。与泡沫细胞模型组相比,10-4或10-3mol/L丹参酮ⅡA显著性降低了细胞内TC,FC,CE水平和CE/TC比值,显著性增加了细胞胆固醇流出率和ABCA1mRNA和蛋白的表达。结论:丹参酮ⅡA可抑制ox-LDL诱导的鼠源巨噬细胞性泡沫细胞形成,其机制可能与丹参酮ⅡA增加泡沫细胞中ABCA1的表达,促进胆固醇流出有关。     

NF-κB在AngⅡ介导THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出及ABCA1表达调控过程中的作用研究

目的：探讨核因子NF-κB活化对AngⅡ诱导的THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1基因表达、胆固醇含量的影响。方法：体外培养THP-1细胞以构建泡沫细胞模型，以AngⅡ和NF-κB活化抑制剂TPCK孵育细胞；以RT-PCR法、Western blot法测定THP-1源泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达状态；采用酶法，通过荧光分光光度计检测细胞内胆固醇含量，应用液体闪烁技术仪检测胆固醇流出的变化；借助Sandwich ELISA法测定核因子NF-κB活化／核易位情况。结果：AngⅡ可即刻激活NF-κB表达活性，并导致干预24小时后泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达下调；若预先用TPCK孵育，则TPCK可抑制AngⅡ对NF-κB的激活，且24小时后泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达下调幅度减小。结论：AngⅡ能引起THP-1源性泡沫细胞胆固醇含量显著增高（P〈0．05）、ABCA1表达显著减少（P〈0．05）。机制可能与AngⅡ即刻激活NF-κB信号途径，早期活化的NF-κB可阻遏THP-1源泡沫细胞ABCA1基因和蛋白的表达，继而影响泡沫细胞内胆固醇的流出有关。     

肺炎衣原体通过下调ABCA1和ABCG1诱导THP-1源性泡沫细胞形成

目的:观察ATP结合盒转运体A1(ABCA1)和ABCG1在肺炎衣原体(C.pn)诱导THP-1源性泡沫细胞形成中的作用,以初步探讨C.pn诱导泡沫细胞形成的分子机制.方法:C.pn在Hep-2细胞内增殖,将不同浓度的C.pn(1×105 ～1×106 IFU)分别感染THP-1单核细胞源性巨噬细胞0～72小时,运用油红O染色观察细胞浆内脂滴的变化,用酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化,分别运用RT-PCR和Western blot检测ABCA1、ABCG1 mRNA和蛋白表达.结果:高浓度的C.pn(5×105和1×106 IFU)感染THP-1单核细胞源性巨噬细胞48小时后,细胞浆内的脂滴明显增多,胆固醇酯与总胆固醇的比值明显增加(＞50%).C.pn感染呈浓度和时间依赖性地下调ABCA1、ABCG1 mRNA和蛋白表达(P＜0.05).结论:ABCA1和ABCG1表达下调是C.pn诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制之一,这可能为C.pn感染致动脉粥样硬化发病机制的研究提供一个新的理论依据.     

肺炎衣原体下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1、ABCG1表达的机制研究

目的:观察c-Jun氨基末端激酶(JNK)对肺炎衣原体(Cpn)诱导的THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的调控作用,探讨Cpn下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1/ABCG1表达的信号转导机制。方法:将THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞后,观察Cpn感染对细胞内ABCA1/ABCG1及PPARγ mRNA和蛋白表达的影响。并用不同浓度的JNK特异性抑制剂SP600125对细胞进行预处理,观察SP600125对Cpn诱导的ABCA1/ABCG1、PPARγ mRNA和蛋白表达的影响。分别用RT-PCR和Western blotting检测各组ABCA1/ABCG1及PPARγ mRNA和蛋白表达。结果:Cpn下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1/ABCG1及其上游调控基因PPARγ mRNA和蛋白表达。而SP600125能呈浓度依赖性地抑制Cpn感染所带来的上述影响。结论:Cpn可能通过JNK-PPARγ信号转导通路下调AB-CA1/ABCG1表达,减少巨噬细胞内胆固醇流出,促进动脉粥样硬化发生发展。     

胰岛素对人单核/巨噬细胞ACAT1基因P1和P7启动子活性的影响

 目的：研究胰岛素对人单核/巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1（acyl coenzyme A:cholesterol acyltransferase 1, ACAT1）基因P1和P7启动子的活性及其转录产物表达的影响,从而探讨它们在胰岛素调控ACAT1基因表达中的作用。方法：将人ACAT1基因P1和P7启动子调控的报告基因载体pGL3E-P1和pGL3E-P7 瞬时转染入体外培养人THP-1 单核细胞系,给予不同剂量的胰岛素处理,通过双萤光素酶报告系统检测P1和P7启动子的活性。体外培养THP-1细胞和由佛波脂诱导分化的巨噬细胞,同样用不同剂量的胰岛素干预24 h,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测THP-1细胞ACAT1 基因P1和P7启动子转录产物表达,用SYBR GreenⅠ实时定量RT-PCR方法检测THP-1细胞和诱导分化的巨噬细胞ACAT1 mRNA的表达。结果：不同剂量胰岛素处理的人THP-1细胞,与对照组相比,ACAT1基因 P1启动子的活性及其转录产物量均显著增强,并随胰岛素剂量的增加而升高。应用实时定量RT-PCR方法检测ACAT1 mRNA的表达与上述结果相一致。结论：胰岛素可通过激活人单核/巨噬细胞ACAT1 基因P1启动子上调ACAT1 mRNA的表达,其作用呈剂量依赖性。     

Ghrelin对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1和G1表达的调控作用

目的： 研究单核/巨噬细胞分化成为泡沫细胞过程中ghrelin对人ATP结合盒转运子A1和G1（ABCA1/ABCG1）表达的调控作用。方法: 体外培养人源单核细胞系THP-1,由佛波酯（PMA）作用使其分化为巨噬细胞,后者可在氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）存在条件下进一步转变为泡沫细胞。巨噬细胞加入不同浓度的Ghrelin预孵2 h后再加入ox-LDL作用不同时间,油红O染色法观察细胞内脂滴含量,运用PT-PCR法检测ABCA1和ABCG1 mRNA水平,Western blotting法检测ABCA1和ABCG1蛋白表达,采用酶法,通过荧光分光光度计检测细胞内外胆固醇含量并计算胆固醇流出率。结果: Ghrelin干预可明显减少细胞内脂滴的形成,显著增加胆固醇流出率,并能显著增加单核/巨噬细胞泡沫化过程中ABCA1和ABCG1 mRNA 水平和蛋白表达,且此作用呈浓度依赖性而不呈时间依赖性。结论: Ghrelin可能通过上调ABCA1和ABCG1转录翻译水平延缓动脉粥样硬化的发生。     

肺炎衣原体对SR-A1和CD36表达的影响及相关信号机制研究

目的:探讨肺炎衣原体(Cpn)对THP-1源性巨噬细胞A1型清道夫受体(SR-A1)和B类清道夫受体CD36表达的影响及c-jun氨基端激酶(JNK)信号通路在其中的调控作用.方法:THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞后随机分为四组:对照组、Cpn组、Cpn+SP600125(JNK特异性抑制剂)组、SP600125组.运用油红O染色观察细胞浆内脂滴的变化,用酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化,分别用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测各组SR-A1、CD36 mRNA和蛋白表达.结果:SP600125能呈浓度依赖性的抑制Cpn诱导的泡沫细胞形成和SR-A1表达上调,但对Cpn诱导的CD36的表达无明显影响.结论:Cpn可通过JNK信号通路上调SR-A1表达,而Cpn对CD36表达无明显影响.     

Ghrelin inhibits foam cell formation via simultaneously down-regulating the expression of acyl-coenzyme A:cholesterol acyltransferase 1 and up-regulating adenosine triphosphate-binding cassette transporter A1

BackgroundGhrelin, an endogenous ligand of the growth hormone secretagogue receptor (GHS-R), revealed cardioprotective effects in both experimental models and human. There is far less information on the mechanisms that produce antiatherogenic effects. We assessed the expression of acyl-coenzyme A:cholesterol acyltransferase 1 (ACAT-1) and  adenosine triphosphate (ATP)-binding cassette transporter A1 (ABCA1), which have been implicated in regulating cellular cholesterol homeostasis and therefore play critical roles in foam cell formation, in THP-1-derived foam cells in the presence of various concentration of ghrelin.MethodsAfter 48 h of culture in the presence of phorbol myristate acetate, THP-1 monocytes differentiated to macrophages. After another 24 h of culture with ox-LDL, the differentiated cells transformed to foam cells. Different concentrations of ghrelin and other intervention factors were added, respectively. The expression of ACAT-1 and ABCA1 was detected by a technique in molecular biology. The content of cellular cholesterol was measured by zymochemistry via a fluorospectrophotometer.ResultsGhrelin could down-regulate the expression of ACAT-1 and up-regulate the expression of ABCA1 in a dose-dependent manner simultaneously. Ghrelin also decreased cellular cholesterol content and increased cholesterol efflux. These effects could be abolished by the specific antagonist of GHS-R and a peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ)-specific inhibitor, respectively.ConclusionsThe results suggest that ghrelin inhibited foam cell formation via simultaneously down-regulating the expression of ACAT-1 and up-regulating ABCA1. Those effects may be achieved via pathways involving GHS-R and PPARγ.     

硫酸吲哚酚对THP-1源性泡沫细胞ATP结合转运子A1和G1表达的调控

目的观察硫酸吲哚酚（is）是否调节巨噬泡沫细胞脂滴的蓄积，以及对巨噬泡沫细胞ATP结合转运子Al（ABCAl）和ATP结合转运子G1（ABCGl）表达的影响。方法体外佛波酯（PMA）诱导人源单核细胞系THP．1分化为巨噬细胞，随后加入氧化低密度脂蛋白（OX．LDL）刺激下进一步转变为泡沫细胞。巨噬细胞加入不同浓度的IS以及OX．LDL共同作用24h，油红O染色法观察细胞内脂滴的含量，RT．PCR法检测ABCAl和ABCGlmRNA水平．Western blotting法检测ABCAl和ABCGl蛋白表达。结果Is干预可明显促进细胞内脂滴蓄积。下调单核／巨噬细胞泡沫化过程中ABCAl和ABCGlmRNA和蛋白的表达，且此作用呈浓度依赖性。结论IS可通过下调ABCAl和ABCGlmRNA和蛋白的表达，增加细胞内脂滴蓄积，从而促进动脉粥样硬化的发生发展。     

PPAR γ-ACAT1途径在肺炎衣原体诱导巨噬细胞泡沫化中的作用

目的： 观察过氧化物酶体增殖活化受体γ （PPAR γ）和酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1（ACAT1）在肺炎衣原体（C.pn）诱导巨噬细胞泡沫化中的作用。方法：给予C.pn （1×105-1×106IFU）感染 和/或PPAR γ的配体罗格列酮（1-20 μmol/L）孵育 THP-1源性巨噬细胞48h。运用油红O染色观察细胞浆内脂滴的变化,酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化。分别运用RT-PCR和Western blotting检测ACAT1、PPAR γ mRNA和蛋白表达。结果：高浓度的C.pn（5×105和1×106 IFU）感染使THP-1源性巨噬细胞内脂滴明显增多,胆固醇酯与总胆固醇的比值明显增加（>50%）。C.pn感染呈浓度依赖性上调ACAT1 mRNA和蛋白表达,并且浓度依赖性地下调PPAR γ mRNA和蛋白表达（P<0.05）。高浓度的罗格列酮（10、20 μmol/L）明显抑制C.pn诱导的细胞内脂质滴的增多和胆固醇酯含量的增加, 同时罗格列酮呈浓度依赖性抑制C.pn诱导的ACAT1 mRNA和蛋白表达的上调（P<0.05）。结论：C.pn 经PPAR γ途径上调ACAT1表达,进而诱导巨噬细胞泡沫化,这为进一步阐明C.pn感染促进动脉粥样硬化发生发展提供一个新的理论依据。     

Ghrelin对THP-1细胞泡沫化过程中酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1表达的影响

目的： 研究单核/巨噬细胞分化成为泡沫细胞过程中ghrelin对人酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT-1)表达以及细胞内胆固醇酯的影响。方法: 体外培养人源单核细胞系（THP-1）,由佛波酯（PMA）作用使其分化为巨噬细胞,后者可在氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）存在条件下进一步转变为泡沫细胞。巨噬细胞加入不同浓度的ghrelin预孵2 h后再加入ox-LDL,油红O染色法观察细胞内脂滴含量,运用RT-PCR法检测ACAT-1 mRNA水平,Western blotting法检测ACAT-1蛋白表达,采用酶法,通过荧光分光光度计检测细胞内胆固醇酯含量。结果: Ghrelin可明显减少THP-1源性泡沫细胞内脂滴的形成,显著降低细胞内胆固醇酯含量,并能显著降低单核/巨噬细胞泡沫化过程中ACAT-1 mRNA 水平和蛋白表达,且此干预作用呈浓度依赖性。结论: Ghrelin可能通过ACAT-1转录翻译水平的下调延缓动脉粥样硬化的发生。