沉默ClC-3氯通道基因对HeLa细胞周期分布的影响

目的:探讨沉默HeLa细胞的ClC-3氯通道基因后细胞周期分布的变化及其作用机制。方法:依照siRNA设计原则构建沉默ClC-3基因的ClC-3 siRNA并转染HeLa细胞;实验分为空白对照组(control组)、转染试剂对照组(Lipo组)、阴性对照组(negative siRNA组)和ClC-3 siRNA组。采用real-time PCR检测ClC-3 siRNA的沉默效率;流式细胞术检测细胞周期分布情况;Western blot检测ClC-3蛋白及相关细胞周期蛋白(cyclin)D1、细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)4、CDK6、P21和P27等表达。结果:CIC-3 siRNA成功沉默HeLa细胞的ClC-3基因。和其它组相比,ClC-3 siRNA组的细胞周期被阻抑在G_0/G_1期。CIC-3 siRNA组的cyclin D1、CDK4和CDK6蛋白表达水平明显下降,P21和P27蛋白表达水平明显上升。结论:沉默HeLa细胞ClC-3氯通道基因可影响cyclin D1、CDK4、CDK6、P21和27蛋白的表达水平胆抑HeLa细胞周期停滞在G_0/G_1期。     

敲低IK1钾通道抑制ClC-3氯通道的表达和功能

 目的: 探讨ClC-3氯通道是否为IK1钾通道的调节靶点,重点研究鼻咽癌细胞IK1钾通道对ClC-3氯通道功能及蛋白表达的影响。方法: 采用siRNA转染技术抑制低分化鼻咽癌上皮细胞(CNE-2Z) IK1 基因的表达;real-time PCR技术检测ClC-3 mRNA的表达;Western blot检测ClC-3的蛋白表达;细胞免疫荧光结合激光共聚焦显微镜技术检测ClC-3和IK1蛋白在细胞内分布;全细胞膜片钳记录细胞氯电流。结果: IK1 siRNA可以成功转染CNE-2Z细胞,有效抑制鼻咽癌细胞IK1钾离子通道的表达;用IK1 siRNA抑制鼻咽癌细胞IK1钾离子通道的表达后, ClC-3的mRNA表达上调而ClC-3蛋白却表达减少:在低分化鼻咽癌上皮细胞,低渗刺激可激活氯通道,产生一个较大的氯电流,在成功转染IK1 siRNA的细胞,此氯电流明显减弱。结论: 敲低IK1钾离子通道可抑制ClC-3氯离子通道的表达和功能。     

ClC-3氯通道蛋白磷酸化及其功能的研究进展

细胞容积调节广泛参与细胞的各种生理病理过程,如上皮细胞物质转运、物质代谢、细胞兴奋性、激素释放、细胞迁移、细胞增殖及细胞坏死凋亡等[1, 2].在低渗环境刺激下,容积激活性氯通道参与细胞容积调节,对维持细胞容积起着重要调节作用.     

抑制氯通道阻抑鼻咽癌细胞周期和细胞增殖

目的:研究Cl^-通道在鼻咽癌细胞调节性容积回缩(RVD)、增殖及细胞周期分布中的作用。方法:活细胞图像分析低分化鼻咽癌细胞(CNE－2Z)RVD,用台盼蓝拒染法检测细胞存活率,MTT法检测细胞增殖能力。用流式细胞仪测定细胞周期不同时相细胞百分率。结果:Cl^-通道抑制剂硝基苯丙胺基苯甲酸(NPPB)剂量依赖性抑制RVD和细胞增殖,100μmol/LNPPB明显阻抑细胞周期进程,使细胞停滞于G₁期,G₁期细胞百分率从54%提高到71%,但对细胞存活率没有显著性影响。结论:阻抑Cl^-通道可阻滞细胞于G₁期而抑制细胞增殖。提示Cl^-通道和RVD的激活是促进细胞从G₁期进入S期和维持增殖所必需的因素。     

ClC-3氯通道蛋白调控细胞增殖机制的研究进展

Cl C-3是电压门控性氯离子通道家族的成员,主要作为容积激活性氯通道通过调节容积激活性氯电流[Cl,（vol）],调节细胞体积,细胞膜电位等影响细胞增殖。近年的研究发现Cl C-3也可通过调节有丝分裂前凝集（premitotic condensation,PMC）过程,或维持细胞囊泡酸化和细胞内氧压,或作为调控因子通过Akt-GSK-3β信号通路和Ca MKII调节的信号通路等途径参与细胞增殖的调控。     

ClC-3氯离子通道与肿瘤

ClC-3氯离子通道的功能主要是调节细胞容积和保持胞内囊泡腔电中性,是正常细胞生长和增殖必不可少的元件.近年研究发现ClC-3也与肿瘤的发生和发展密切相关,其在肿瘤组织中呈高表达,在肿瘤细胞周期和凋亡的调控以及细胞迁移等过程中扮演了重要的角色,有望成为抗肿瘤新靶点.     

二甲双胍干预哮喘作用机制的研究进展

支气管哮喘是由过敏原、刺激性暴露等多种因素触发,以气道慢性炎症、气道高反应性和气道重塑为主要特征的慢性气道疾病,多伴有喘息、气短、胸闷、咳嗽和呼气气流受限等症状[1].国内外流行病学显示,支气管哮喘作为严重降低人们生活质量的健康问题,其患病率呈明显的上升趋势,预计2025年可能到达十亿人[2].有报道指出,肥胖、2型糖...     

观察二甲双胍在治疗甲状腺结节伴胰岛素抵抗中的作用

目的：探究分析对甲状腺良性结节并伴有胰岛素抵抗的患者采用二甲双胍进行治疗的临床效果。方法选取我院2011年10月~2013年10月接收治疗的42例甲状腺结节伴有胰岛素抵抗的患者作为临床研究对象,根据患者治疗方式分为观察组和对照组,各21例,对照组给予左旋甲状腺素,观察组给予左旋甲状腺素联合二甲双胍治疗。结果观察组患者的甲状腺结节体积明显小于对照组(<0.05);治疗后,观察组患者的FT3、FT4以及TSH明显优于对照组(<0.05);观察组患者的HMOA-IR明显低于对照组(<0.05)。结论对甲状腺结节伴胰岛素抵抗患者采取二甲双胍联合左旋甲状腺素治疗,能够有效缩小患者的甲状腺小结节,降低患者的血TSH水平,值得临床推广。     

二甲双胍联合促排卵药治疗耐氯米芬多囊卵巢综合征疗效观察

目的探讨二甲双胍对多囊卵巢综合征治疗效果。方法 32例PCOS耐氯米芬患者服用二甲双胍和氯米芬治疗3个月后,观察血清促卵泡激素（FSH）、黄体生成素（LH）、睾酮（T）、空腹血糖及空腹胰岛素水平,体质指数（BMI）、排卵及妊娠情况。结果治疗3个周期后,LH、T、空腹胰岛素水平均显著下降,BMI也有一定程度的降低,有59.37%（19/32）患者排卵;16.13%（6/32）患者妊娠。结论氯米芬联合二甲双胍治疗多囊卵巢综合征是安全、有效、理想的新途径。     

二甲双胍联合促排卵药治疗耐氯米芬多囊卵巢综合征疗效观察

目的 探讨二甲双胍对多囊卵巢综合征治疗效果.方法 32例PCOS耐氯米芬患者服用二甲双胍和氯米芬治疗3个月后,观察血清促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)、空腹血糖及空腹胰岛素水平,体质指数(BMI)、排卵及妊娠情况.结果 治疗3个周期后,LH、T、空腹胰岛素水平均显著下降,BMI也有一定程度的降低,有59.37%(19/32)患者排卵;16.13%(6/32)患者妊娠.结论 氯米芬联合二甲双胍治疗多囊卵巢综合征是安全、有效、理想的新途径.     

氯通道在不同生长周期的鼻咽癌细胞迁移中的作用

目的：研究不同生长周期的鼻咽癌低分化上皮细胞（CNE-2Z）的迁移能力及氯通道在迁移过程中所起的作用。 方法： 运用血清饥饿法、化学药物双阻断法、有丝分裂药物阻断及摇落法分别将CNE-2Z细胞同步化至细胞周期的G1、S、M期，流式细胞仪检测其同步化效果。结合应用迁移小室和图像分析法，测定迁移率。台盼蓝活细胞染色法测定药物的细胞毒性。 结果： 不同生长周期的细胞迁移能力不同，G1期细胞迁移能力最强，随后是M期， S期迁移能力最弱。氯通道阻断剂（ATP、NPPB、tamoxifen）抑制CNE-2Z细胞迁移，但不同的氯通道阻断剂对不同生长周期CNE-2Z细胞迁移的阻滞效应不相同。 结论： CNE-2Z细胞的迁移能力与其所在的生长周期密切相关，氯通道在各期CNE-2Z细胞的迁移过程中起着重要作用。     

电压门控氯通道3（ClC-3）的生物学作用及其与疾病的关系

ClC-3属于电压门控氯通道家族,存在于细胞膜和细胞质,以及某些肿瘤细胞的细胞核内,高表达于中枢神经系统、肾脏和肠道。ClC-3参与离子转运、容积调节、免疫应答、细胞迁移、增殖、分化、凋亡等生理生物学活动,近年发现ClC-3与肿瘤、糖尿病等疾病的发生密切相关。     

EB病毒LMP1表达对鼻咽癌细胞增殖及细胞周期分布的影响

目的:观察EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)表达对鼻咽癌细胞系增殖和细胞周期分布的作用。方法:用免疫组化(LSAB)法检测LMP1蛋白的表达;用MTT法测定鼻咽癌细胞系的增殖能力;用流式细胞术检测细胞周期的分布。结果:表达LMP1的鼻咽癌细胞系L-CNE1的OD值明显高于LMP1阴性的鼻咽癌细胞系V-CNE1和CNE1(P＜0.001)。L-CNE1细胞系的G₁期细胞百分率明显减少和S期细胞百分率明显增加,与V-CNE1和CNE1细胞系比较均有非常显著性差异(P＜0.001)。而V-CNE1与CNE1细胞系之间各期细胞百分率则无明显差异(P＞0.05)。结论:EBV-LMP1表达可使鼻咽癌细胞系细胞周期分布改变和增殖能力增强。     

氯通道对血小板活化标志物PAC-1和P-选择素的影响

目的：探讨氯通道对血小板活化标志物PAC-1和P-选择素的影响。方法：采用Western blot和免疫荧光技术检测ClC-3在人外周血来源的血小板上的表达;ADP(20μM)不同时间点(15、30、60、120、180 min)处理血小板后,Western blot检测ClC-3蛋白的表达变化;利用流式细胞术检测空白对照组, ADP组,DIDS(100μM)+ADP组,NFA(100μM)+ADP组,NPPB(100μM)+ADP和低氯对照组,低氯+ADP组的血小板活化分子标志物PAC-1和P-选择素的表达变化。结果：在健康成人外周血分离的血小板上表达ClC-3蛋白;ADP时间依赖性地处理血小板,ClC-3蛋白表达呈增加趋势,15 min相较于空白对照组已有统计学意义(P<0.05);ADP组PAC-1(32.13%±2.0%)及P-选择素(52.32%±5.31%)表达均高于空白对照组(1.76%±0.41%,1.89%±0.32%,P<0.01);低氯对照组PAC-1(8.01%±1.36%)和P-选择素(12.19%±0.84%)的表达与空白对照组相比,均上调(P<0.05);与ADP组PAC-1相比, DIDS+ADP(5.62%±1.22%),NFA+ADP(1.96%±0.54%)和NPPB+ADP(3.56%±0.79%)组表达降低,低氯+ADP组(45.26%±4.43%)表达增加(P<0.01);与ADP组P-选择素相比,DIDS+ADP(16.64%±1.52%), NFA+ADP(4.97%±0.64%)和NPPB+ADP(8.56%±2.04%)组表达均降低,低氯+ADP组(73.33%±3.80%)表达增加(P<0.01)。结论：人血小板上ClC-3氯通道参与血小板的活化,氯通道阻断剂抑制ADP诱导的血小板活化,降低血小板胞外氯浓度可促进ADP诱导的血小板的活化。     

低氧-复氧对人鼻咽癌细胞增殖、细胞周期、黏附和侵袭能力的影响

目的: 研究细胞外微环境低氧-复氧对人鼻咽癌细胞(CNE-2Z)增殖、细胞周期、黏附和侵袭能力的影响。方法: 以混合气体(5% CO₂, 95% N₂, O₂<0.1%)置换法建立体外低氧培养模型;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期分布;同质黏附实验和细胞-基质黏附实验检测细胞黏附能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果: (1) 低氧24 h后抑制CNE-2Z细胞增殖(P<0.01),复氧后细胞快速增殖,在复氧第5 d A值与常氧对照组相比无显著差异(P>0.05);(2) 低氧24 h后细胞阻滞于G₁期(P<0.01),复氧后G₁期阻滞得到快速解除,在复氧24 h细胞周期分布与常氧对照组相比无显著差异(P>0.05);(3)低氧24 h后细胞的同质黏附能力下降(P<0.01)而细胞-基质黏附能力无明显改变(P>0.05),细胞侵袭能力降低(P<0.01);复氧24 h细胞同质黏附能力恢复至常氧对照组水平(P>0.05),而细胞-基质黏附能力(P<0.01)和细胞侵袭能力较常氧对照组显著增加(P<0.01)。结论: 鼻咽癌细胞能耐受微环境低氧的不利影响;低氧环境下存活的鼻咽癌细胞产生的适应性变化赋予肿瘤更强的增殖和转移潜能,从而促进肿瘤细胞的恶性演进。     

他莫昔芬对不同生长周期鼻咽癌细胞容积激活性电流的作用

 目的：研究Cl-通道抑制剂他莫昔芬（tamoxifen）对G₁期和S期鼻咽癌细胞容积激活性电流的抑制效应。方法：运用血清饥饿法或化学药物双阻断法分别将鼻咽癌低分化上皮细胞（CNE-2Z）同步化至G₁或S期，用膜片钳技术研究不同细胞周期细胞容积激活性氯通道对阴离子的通透性及他莫昔芬对CNE-2Z细胞容积激活性电流的作用。结果：47%低渗刺激下，G₁期和S期细胞产生容积激活性电流，G₁期的电流密度大于S期。10-30 μmol/L他莫昔芬能完全抑制G₁期和S期容积激活性电流，但随浓度升高，达到完全抑制效应所需要的时间缩短。G₁期或S期细胞电流被完全抑制的时间有明显差异，在相同浓度他莫昔芬作用下，G₁期细胞达到最大抑制效应时间明显短于S期细胞。 G₁期与S期细胞容积激活性氯通道对阴离子的通透性均为I->Cl->葡萄糖酸根离子，但G₁期细胞对I-的通透性高于S期，S期细胞对葡萄糖酸的通透性高于G₁期。结论：CNE-2Z细胞G₁期与S期的容积激活性电流密度及对阴离子的通透性有差异， G₁期和S期细胞对他莫昔芬敏感性不同，提示CNE-2Z细胞对他莫昔芬敏感的容积激活性氯通道在不同生长周期中表达有差异。