miR-22-3p靶向NLRP3表达对脑缺血再灌注损伤大鼠细胞焦亡的影响北大核心CSCD

目的:探究miR-22-3p对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠细胞焦亡的作用及其对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达的靶向调控机制。方法:选取2019年12月至2020年3月甘肃医学院附属医院收治的45例急性缺血性脑卒中患者(CIRI)作为研究对象,并选同期体检的健康志愿者40例作为对照组,qRT-PCR检测血清miR-22-3p和NLRP3等相关基因表达,并进行相关性分析;双荧光素酶基因报告分析miR-22-3p与NLRP3的关系;线栓法构建CIRI大鼠模型。Sham组大鼠在造模过程中仅暴露不结扎,造模手术前4 h,CIRI+mimic组大鼠侧脑室注射10µl miR-22-3p-mimic,CIRI+mimic+pc大鼠侧脑室注射10µl miR-22-3p-mimic和pcDNA3.1-NLRP3,Sham组和CIRI组大鼠侧脑室注射等剂量miR-22-3p-mimic-NC。TTC染色检测各组大鼠脑梗死面积,尼氏染色检测各组大鼠脑组织神经细胞活性;ELISA检测大鼠血清IL-1β和IL-18含量;免疫组化检测各组大鼠脑组织半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)表达;Western blot检测各组大鼠脑组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达。结果:与对照组相比,CIRI患者血清miR-22-3p、Akt、JAK1、PI3K、STAT3等基因表达明显下降,NLRP3、IL-1β、IL-18、Caspase-1、ASC等基因表达明显升高(P<0.05)。CIRI患者血清miR-22-3p与NLRP3(r=−0.80,P=0.000)、IL-1β(r=−0.20,P=0.002)、IL-18(r=−0.25,P=0.004)、Caspase-1(r=−0.35,P=0.005)、ASC(r=−0.30,P=0.001)等基因表达呈负相关。miR-22-3p靶向调控NLRP3表达。过表达miR-22-3p明显降低CIRI大鼠脑梗死面积,增强神经细胞活性,下调IL-1β和IL-18含量及Cas-pase-1、NLRP3、ASC表达。而pcDNA3.1-NLRP3能明显逆转这些抑制作用。结论:CIRI中,miR-22-3p能够靶向调控NLPR3表达抑制神经元细胞焦亡,发挥神经保护作用。     

敲除背根神经节Fcgr1减弱类风湿关节炎模型大鼠NF-κB/NLRP 3通路活化

目的探讨外周神经元FcγRⅠ调控类风湿关节炎疼痛的机制。方法利用野生型SD大鼠和条件敲除Fcgr1大鼠建立类风湿关节炎模型。设野生型大鼠对照组(control组)、野生型大鼠类风湿关节炎(RA)组和条件敲除Fcgr1大鼠类风湿关节炎(CKO+RA)组,每组7只。用痛觉行为学检测各组大鼠建模前第3、1 d,建模后第3、5、7、9d机械痛阈值和热痛阈值变化,用荧光原位杂交实验检测条件敲除Fcgr1大鼠背根神经节(DRG)中是否表达Fcgr1m RNA,用免疫荧光实验检测大鼠DRG中p NF-_κB (p65)、NLRP3、IL-1β和IL-18表达和脊髓背角(SDH)胶质细胞活化。结果与control组比较,RA组和(CKO+RA)组大鼠机械和热疼痛阈值均降低,(CKO+RA)组大鼠机械和热疼痛阈值比RA组大鼠明显提高(P0.05);与RA组大鼠相比,(CKO+RA)组大鼠DRG中p NF-_κB (p65)、NLRP3、IL-1β和IL-18表达明显下调(P0.05); SDH中GFAP和Iba1表达降低(P0.05)。结论 DRG神经元FcγRⅠ可能通过NF-_κB/NLRP3通路促进神经元炎性细胞因子IL-1β和IL-18合成释放,引起SDH胶质细胞活化,参与类风湿关节炎疼痛。     

微小RNA-141-3p在脑出血患者血清中的表达及其作用机制

目的 分析微小RNA-141-3p（miR-141-3p）在脑出血（ICH）患者中的表达水平，并探讨miR-141-3p对大鼠脑出血损伤的作用及其机制。 方法 以40例脑出血患者和40例体检健康对照者为研究对象，采用Real-time PCR方法检测血清中miR-141-3p的含量。采用生物信息学预测miR-141-3p的靶标基因，双荧光素酶报告分析验证miR-141-3p对核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3（NLRP3）的调控作用。在大鼠脑出血模型侧脑室注射miR-141-3p激动剂（agonist）或者激动剂对照（agonist NC），治疗7 d后进行神经功能评分。麻醉处死大鼠后取出脑组织，HE染色观察脑组织病理改变。干湿重法测定脑组织含水量，并采用Real-time PCR测定miR-141-3p和NLRP3的表达，通过Western blotting方法测定白细胞介素（IL）-1β、IL-6和IL-18的表达。 结果 与健康对照组(0.520±0.028)相比，脑出血患者血清中miR-141-3p的表达水平(0.068±0.038)显著下调(t=15.93,P<0.001)，且与血肿周围水肿严重程度成负相关(r=-0.8948，-0.9434～-0.8087，P<0.001)。miR-141-3p靶向调控NLRP3基因表达。miR-141-3p的表达水平在miR-141-3p agonist组中明显高于agonist NC组（P<0.001），炎症小体NLRP3和炎症因子IL-1β、IL-6和IL-18表达水平明显低于agonist NC组（P<0.001）。与agonist NC组相比， agonist组miR-141-3p在ICH术后7 d脑水肿减轻，神经功能评分明显降低（P<0.001）。HE染色结果表明，ICH大鼠注射miR-141-3p激动剂后血肿周围水肿明显缩小。 结论 miR-141-3p通过靶向NLRP3降低炎症反应，减轻对脑出血后血肿周围脑组织的损伤。     

米诺环素对CCI大鼠抑郁样行为的影响及机制研究

目的:观察海马CA1区注射米诺环素对坐骨神经慢性缩窄性损伤(CCI)大鼠的抑郁样行为、海马和前额叶皮层小胶质细胞激活的影响并分析其机制。方法:成年SD雄性大鼠随机分为:对照组、假手术组、CCI模型组、CCI+米诺环素组。糖水偏好及旷场实验检测大鼠抑郁样行为;免疫组化观察海马以及前额叶皮层Iba-1表达;取海马以及前额叶皮层组织,real-time PCR观察Iba-1、NLRP3和caspase1 mRNA表达,ELISA测定IL-1β和IL-18含量。结果:与假手术组相比,CCI大鼠7、10 d和14 d的糖水偏好明显降低(P 0. 05),旷场中央活动距离和中央活动时间明显减少(P 0. 05);与CCI组相比,CA1区注射米诺环素后CCI大鼠7 d和14 d的糖水偏好明显升高(P 0. 05),旷场中央活动距离和中央活动时间明显增加(P 0. 05)。与假手术组相比,CCI组大鼠海马CA1、CA3及DG区和前额叶皮层Iba-1阳性细胞数目显著增多(P 0. 05),Iba-1、NLRP3和caspase1 mRNA表达明显上调; IL-1β和IL-18含量也明显升高(P 0. 05)。与CCI组相比,注射米诺环素后,CCI大鼠海马CA1、CA3及DG区和前额叶皮层Iba-1阳性细胞数目减少(P 0. 05),Iba-1、NLRP3和caspase1 mRNA表达降低(P 0. 05),IL-1β和IL-18含量降低(P 0. 05)。结论:海马CA1区注射米诺环素明显抑制CCI大鼠的抑郁样行为;其机制可能是抑制海马和前额叶皮层小胶质细胞激活,下调NLRP3和caspase1表达,从而使IL-1β和IL-18产生减少。     

miR-27a-3p通过阻断Wnt3a/β-catenin途径抑制大鼠肺纤维化

目的探讨微小RNA-27a-3p(miR-27a-3p)对博莱霉素A5所致大鼠肺纤维化(PF)的影响及分子机制。方法雄性SD大鼠45只,随机分为对照组、miR-27a-3p激动剂(miR-27a-3p agomir)组和miR-27a-3p拮抗剂(miR-27a-3p antagomir)组,每组15只。经气管内注入博莱霉素A5建立PF模型,给药后次日分别予生理盐水、miR-27a-3p agomir、miR-27a-3p antagomir尾静脉注射,每3 d注射1次,共9次。第28天收集血液,ELISA检测血清1型前胶原蛋白羧基端前肽(P1CP)和3型前胶原蛋白氨基端前肽(P3NP)水平;处死大鼠,取肺组织,HE染色和Masson染色评价PF病变程度,实时荧光定量PCR检测miR-27a-3p、1型胶原蛋白(Col1)、Col3的mRNA水平,Western blot法检测Col1、Col3、Wnt3a、β联蛋白(β-catenin)的蛋白水平。结果miR-27a-3p agomir处理明显增加肺组织miR-27a-3p表达,miR-27a-3p antagomir则降低miR-27a-3p表达,提示miR-27a-3pagomir/antagomir转染效率较高。与对照组相比,miR-27a-3p agomir显著减轻大鼠肺泡炎症和PF程度,而miR-27a-3p antagomir则明显加重大鼠肺泡炎症和PF程度。miR-27a-3p agomir组血清P1CP、P3NP水平降低、下调肺组织Col1、Col3、Wnt3a、β-catenin水平,miR-27a-3p antagomir组则作用相反。结论 miR-27a-3p通过抑制Wnt3a/β-catenin信号通路,下调Col1、Col3表达,发挥抗PF作用。     

创伤性脑损伤激活miR-124-3p/Notch通路促进大鼠神经干细胞增殖和分化

目的观察创伤性脑损伤(TBI)大鼠伤侧海马区微小RNA-124-3p(miR-124-3p)的表达变化,探讨miR-124-3p对大鼠TBI后神经再生的影响。方法将健康雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组、 TBI组、 miR-124-3p激动剂(miR-124-3p agomir)组与miR-124-3p抑制剂(miR-124-3p antagomir)组,后3组大鼠应用控制性皮层撞击(CCI)法建立TBI模型。创伤后, miR-124-3p agomir组与miR-124-3p antagomir组通过由创伤对侧侧脑室分别注射miR-124-3p agomir或miR-124-3p antagomir各1 nmoL,假手术组和TBI组注入等量溶剂。造模后12 h、 1 d、 3 d、 7 d,实时定量PCR检测大鼠伤侧海马区组织miR-124-3p的表达, Western blot法检测Delta样分子1(DLL1)的表达水平,免疫荧光组织化学染色检测海马组织5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、神经元核抗原(NeuN)、神经上皮干细胞蛋白(nestin)的表达。生物信息学软件预测并通过荧光素酶报告实验验证miR-124-3p与DLL1之间的靶向结合作用。结果与假手术组相比, TBI组大鼠海马区miR-124-3p和DLL1的表达均显著升高;与TBI组比较, miR-124-3p agomir组miR-124-3p的表达量明显升高、 DLL1表达量明显减少, miR-124-3p antagomir组miR-124-3p表达量明显降低, DLL1表达量则明显升高。创伤后7 d, TBI大鼠海马组织BrdU~+NeuN~+细胞与BrdU~+nestin~+细胞数量明显多于假手术组, miR-124-3p agomir处理增加BrdU~+NeuN~+细胞与BrdU~+nestin~+细胞数量, miR-124-3p antagomir处理则减少BrdU~+NeuN~+细胞与BrdU~+nestin~+细胞数量。生物信息学分析证实DLL1为miR-124-3p的靶基因。结论创伤区miR-124-3p的高表达可靶向抑制DLL1蛋白表达,促进神经干细胞增殖和分化。     

黄芩素调控 NLRP3 / Caspase-1 通路对牙周炎大鼠牙槽骨吸收的影响

目的 探索黄芩素调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白 3 ( nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3, NLRP3) / 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 1 ( cysteine aspartate protease 1, Caspase1) 通路对牙周炎大鼠牙槽骨吸收的影响。 方法 将 40 只牙周炎大鼠随机分为模型组、 黄芩素组、 激活剂 组、 黄芩素 + 激活剂组, 另取 10 只正常作为对照组。 检测大鼠釉牙骨质界到牙槽嵴顶 (CEJ-AC) 的距离、 血清中白细胞介素-6 (IL-6)、 转化生长因子-β (TGF-β) 含量以及牙周组织病理变化、 IL-6、 TGF-β 阳性 表达和 NLRP3、 Caspase-1 蛋白表达。 结果 模型组大鼠 CEJ-AC、 NLRP3、 Caspase-1、 IL-6、 TGF-β 水平及 阳性表达水平以及蛋白表达水平均升高 (P< 0. 05); 经黄芩素干预后, 各项指标均降低 (P< 0. 05); 引入 激活剂明显削弱了黄芩素对牙周炎大鼠的抗炎作用。 结论 黄芩素通过抑制 NLRP3 / Caspase-1 通路减轻炎性反应, 控制牙槽骨吸收。     

白藜芦醇通过SIRT1减轻蛛网膜下腔出血大鼠神经系统炎症反应

目的:白藜芦醇(RSV)对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠神经系统沉默信息调节因子同源蛋白1(SIRT1)的表达及炎症反应的影响。方法:48只成年雄性SD大鼠分为对照组(Control)、蛛网膜下腔出血组(SAH)、RSV治疗组(RSV)和RSV联合组SIRT1抑制剂EX 527处理组(RSV+EX 527),利用自身血液注射法制备SAH大鼠模型,神经功能缺损评分检测大鼠神经功能变化,Western Blot检测SIRT1表达水平变化,免疫荧光染色观察小胶质细胞表面标记CD11b的表达变化,利用ELISA检测神经系统炎性细胞因子TNF-α和IL-1β变化。结果:与正常对照组相比,SAH大鼠神经功能受损明显(P 0. 05),中枢神经系统SIRT1表达降低(P 0. 05),小胶质细胞活化明显(P 0. 05),TNF-α和IL-1β均显著升高(P 0. 05);经过RSV治疗后,与SAH大鼠相比,治疗组大鼠神经功能明显得到改善(P 0. 05),神经系统SIRT1表达增加(P 0. 05),小胶质细胞活化受到抑制(P 0. 05),炎性细胞因子TNF-α和IL-1β水平下降(P 0. 05);使用EX 527处理后,RSV的神经保护作用受到抑制,表现为SAH大鼠神经功能恢复不明显,中枢神经系统小胶质细胞持续活化,细胞因子TNF-α和IL-1β水平维持在较高水平。结论:RSV通过促进SIRT1表达抑制炎症反应发挥对SAH大鼠中枢神经系保护作用。     

NLRP2-caspase-1 炎性小体在脑缺血损伤中的表达量及作用

目的:探究NOD样受体家族蛋白2-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(NLRP2-caspase-1)炎性小体与脑缺血损伤的关系及作用机制。方法:荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western blot)检测氧糖剥夺损伤的星形胶质细胞中NLRP2基因的表达;采用小RNA干扰(siRNA)技术沉默NLRP2的表达,将其分为对照组、模型组、空载体组、siRNA NLRP2组,RT-PCR和Western blot观察转染后细胞中NLRP2的表达量;流式细胞术检测细胞的凋亡,Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)、白细胞介素-1β(IL-1β)、核转录因子k B(NF-κB) p65、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)、caspase-1前体(Pro-caspase-1)、磷酸化p65(pp65)蛋白水平。结果:结果显示,氧糖剥夺损伤的星形胶质细胞中NLRP2基因的表达量显著增加(P0. 05),促进细胞凋亡(P0. 05),显著降低Bcl-2蛋白水平(P0. 05),显著增加Bax、caspase-3蛋白水平(P0. 05)。沉默NLRP2表达较模型组显著抑制细胞的凋亡(P0. 05),上调Bcl-2蛋白水平(P0. 05),下调Bax、caspase-3蛋白水平(P0. 05); siRNA NLRP2组细胞中caspase-1、IL-1β、P65、p-P65蛋白显著低于模型组(P0. 05)。结论:NLRP2在氧糖剥夺损伤的星形胶质细胞中显著上调,可能通过调控细胞的炎症反应、凋亡信号通路以及NF-κB信号通路参与脑缺血损伤神经细胞的凋亡。     

熊果酸对肝纤维化大鼠NOX2/ROS/NLRP3炎性小体活化的影响

目的观察熊果酸(UA)对肝纤维化模型大鼠肝内胶原沉积的改善作用及其对NADPH氧化酶2(NOX2)/活性氧簇(ROS)/NLRP3炎性小体活化的影响。方法将大鼠随机分为对照组、CCl4模型组及UA治疗组。用CCl4诱导构建SD大鼠肝纤维化模型,一半用作UA治疗组。用试剂盒检测血清ALT含量;HE染色观察肝脏病理;天狼星红染色观察肝内胶原沉积;RT-q PCR法检测Nox2、Nlrp3、caspase1及IL-1βmRNA表达量;Western blot及免疫组化检测肝脏中NOX2、NLRP3、casepase-1 p45、caspase-1 p10及IL-1β蛋白表达;DCFH-DA荧光探针法检测肝脏组织内ROS水平。结果与对照组相比,CCl4模型组血清ALT水平升高(P0.05),Ishak's肝纤维化评分明显上升,胶原沉积明显增多(P0.05),Nox2、Nlrp3、Caspase1及IL-1βmRNA的表达水平明显上升(P0.05);NOX2、NLRP3、caspase-1 p10及IL-1β蛋白的表达均出现明显增加,肝组织内ROS含量增加(P0.05);与CCl4模型组相比,UA治疗组血清ALT含量下降(P0.05),肝脏Ishak's肝纤维化评分及胶原沉积减少(P0.05),Nox2、Nlrp3、caspase1及IL-1βmRNA的表达水平明显下降(P0.05),NOX2、NLRP3、caspase-1 p10及IL-1β蛋白表达明显下降,肝脏组织内ROS水平显著改善(P0.05)。结论 UA减轻肝脏炎性反应并减少肝内胶原沉积,其机制可能与其抑制肝纤维化大鼠肝内NOX2/ROS/NLRP3炎性小体活化及IL-1β的释放减少有关。     

硼替佐米调节miR-223/NLRP3轴对脂多糖诱导的人单核细胞炎症反应的影响

目的:探讨硼替佐米(BTZ)调节微小RNA-233(miR-223)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)轴对脂多糖(LPS)诱导的人单核细胞炎症反应的影响。方法:从类风湿性关节炎(RA)患者外周血中分离、纯化单核细胞。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测单核细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,并根据IL-6、IL-1β和TNF-α水平筛选LPS的最佳诱导时间和BTZ的最佳处理浓度。实验分为对照组、LPS诱导组和BTZ组。RT-qPCR法测定各组单核细胞中miR-223水平;Western blot法测定单核细胞中NLRP3、caspase-1、细胞因子信号抑制物1(SOCS1)和含SH2结构域的肌醇磷酸酶1(SHIP-1)水平。结果:成功从RA患者外周血中分离、纯化出单核细胞,其呈类球形,分布均匀;经LPS诱导24 h后,细胞多呈梭形、聚集状。根据IL-6、IL-1β和TNF-α水平筛选出LPS的最佳诱导时间为24 h,BTZ的最佳处理浓度为50 nmol/L。与对照组相比,LPS诱导组miR-223、SOCS1和SHIP-1水平显著降低(P0.05),NLRP3和caspase-1水平显著升高(P0.05);与LPS诱导组相比,BTZ组miR-223、SOCS1和SHIP-1水平显著升高(P0.05),NLRP3和caspase-1水平显著降低(P0.05)。结论:BTZ可能通过阻断miR-223/NLRP3轴活化,减少LPS诱导的人单核细胞炎症因子的分泌。     

柚皮素通过miR-22抑制NLRP3炎症小体并减轻溃疡性结肠炎大鼠模型肠屏障损伤

目的:探究柚皮素通过调控微小RNA-22(miR-22)的表达,对溃疡性结肠炎(UC)大鼠NLRP3炎症小体的影响以及对肠屏障的保护作用。方法:将SD雄性大鼠随机分成对照组、模型组、低剂量柚皮素组、高剂量柚皮素组和柚皮素+miR-22 antagomiR组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠使用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导UC大鼠模型,并给予药物处理。观察大鼠体重变化和粪便稠度等情况,评估疾病活动性指数(DAI);检测血清中促炎因子白细胞介素1β(IL-1β)水平;HE染色观察肠组织病理学变化;透射电子显微镜观察肠上皮细胞;RT-qPCR技术检测肠组织中miR-22水平;Western blot法检测肠组织中紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin和claudin-1表达水平;双萤光素酶报告基因实验检测miR-22与NLRP3靶向关系。结果:对照组大鼠肠组织结构正常;模型组大鼠肠组织黏膜结构破坏严重,有大量炎症细胞浸润,屏障受损,细胞间隙增宽;低、高剂量柚皮素组大鼠肠组织损伤减轻;柚皮素+miR-22 antagomiR组大鼠肠组织损伤较高剂量柚皮素组明显加重,炎症细胞浸润增加。与对照组相比,模型组大鼠DAI、肠黏膜损伤肉眼评分、IL-1β水平及NLRP3蛋白表达水平显著升高(P0.05),miR-22水平及ZO-1、occludin和claudin-1蛋白表达水平显著降低(P0.05);与模型组相比,低、高剂量柚皮素组大鼠DAI、肠黏膜损伤肉眼评分、IL-1β水平及NLRP3蛋白表达水平显著降低(P0.05),miR-22水平及ZO-1、occludin和claudin-1蛋白表达水平显著升高(P0.05);与高剂量柚皮素组相比,柚皮素+miR-22 antagomiR组大鼠DAI、肠黏膜损伤肉眼评分、IL-1β水平及NLRP3蛋白表达水平显著升高(P0.05),miR-22水平及ZO-1、occludin和claudin-1蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论:柚皮素通过上调miR-22水平,抑制NLRP3炎症小体活化,发挥对UC大鼠肠屏障的保护作用。     

MiR-139-3p通过靶向下调TRPV1缓解大鼠神经病理性疼痛

目的:研究miR-139-3p在大鼠神经病理性疼痛发生发展中的作用及其作用机制。方法:将大鼠随机分为假手术组(sham)、坐骨神经慢性压迫损伤模型组(chronic constriction injury group,CCI)、2 mg/kg miR-139-3p模拟物(mimic)鞘内注射组、4 mg/kg miR-139-3p mimic鞘内注射组。术后的第14 d,Real-time PCR法检测大鼠背根神经节(DRG)中miR-139-3p及TRPV1的表达。于注射前及注射后的第1、3、7、14 d,利用von Frey检测大鼠机械性痛阈及热辐射法检测大鼠热痛阈值。Western Blot法检测DRG中TRPV1的表达;ELISA法检测脊髓L4-L5组织中TNF-α及IL-1β的含量;双荧光素酶报告基因法检测miR-139-3p与TRPV1的靶向关系。结果:(1)与sham组相比较,miR-139-3p在CCI大鼠DRG中的表达显著下降,而TRPV1的表达显著上升(P0.05)。(2)与sham组相比较,CCI组中大鼠机械刺激缩足反射阈值及热刺激缩足反射潜伏期显著下降(P0.05);而与CCI组相比较,鞘内注射miR-139-3p mimic可显著促进大鼠机械刺激缩足反射阈值及热刺激缩足反射潜伏期的上升,抑制TRPV1的表达(P0.05)。(3)与sham组相比较,CCI组大鼠TNF-α及IL-1β含量显著上升(P0.05);而与CCI组相比较,鞘内注射miR-139-3p mimic可显著抑制TNF-α及IL-1β的产生(P0.05)。(4)miR-139-3p mimic转染可显著降低荧光素酶报告基因的荧光强度。结论:miR-139-3p通过靶向下调TRPV1的表达缓解大鼠神经病理性疼痛。     

自体富血小板血浆对骨关节炎模型兔软骨细胞凋亡及NLRP3/IL-1β通路的影响

目的:探究富血小板血浆(PRP)对兔骨关节炎的作用及可能的机制。方法:制备膝骨关节炎兔模型,分为模型组、玻璃酸钠(SH)组和PRP组,另设假手术组,每组6只兔。观察兔软骨大体形态,进行半定量评分;HE染色观察软骨病理形态并进行半定量评分;TUNEL染色观察软骨组织细胞凋亡情况;免疫组化法检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/白细胞介素1β(IL-1β)通路相关蛋白的表达;Western blot法检测caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达情况;分离软骨细胞,分组处理后采用ELISA测定细胞NLRP3和IL-1β水平。结果:与假手术组相比,模型组的Pelletier评分,Mankin评分,软骨细胞凋亡率,NLRP3、含caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1和IL-1β蛋白阳性表达率,以及caspase-3和Bax蛋白水平均显著升高(P0. 05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P0. 05)。与模型组相比,SH组和PRP组的Pelletier评分,Mankin评分,软骨细胞凋亡率,NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β蛋白阳性表达率,以及caspase-3和Bax蛋白水平均显著降低(P0. 05),Bcl-2蛋白水平显著升高(P0. 05)。PRP组的Pelletier评分,Mankin评分,软骨细胞凋亡率,NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β蛋白阳性表达率,以及caspase-3和Bax蛋白水平均低于SH组,Bcl-2蛋白水平高于SH组(P0. 05)。细胞培养实验中,与对照组相比,NLRP3抑制剂MCC950组NLRP3及IL-1β表达显著降低(P0. 05),IL-1β抑制剂eucalyptol组NLRP3表达无明显变化(P0. 05),IL-1β表达显著降低(P0. 05)。结论:富血小板血浆能够促进骨关节炎模型兔受损软骨的修复,效果优于SH,其机制可能与抑制NLRP3/IL-1β通路并减少软骨细胞凋亡有关。     

TLR4/NLRP3炎症复合体介导对比剂诱导的肾小管上皮细胞炎症和损伤

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)/Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎症复合体是否介导了对比剂(CM)引起的肾小管上皮细胞炎症和损伤。方法:本研究运用碘普罗胺作用于大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E建立损伤模型。应用CCK-8法测定细胞存活率;Western blot测定TLR4、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1和cleaved caspase-3的蛋白水平;ELISA法检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的水平;Hoechst 33258核染色法检测凋亡率;JC-1染色法测定线粒体膜电位。用小干扰RNA沉默NLRP3表达。结果:CM可降低NRK-52E细胞的存活率并上调cleaved caspase-3的蛋白水平(P0.05);此外,CM可上调细胞TLR4/NLRP3炎症复合体的表达并促进炎症因子IL-1β和IL-18的分泌(P0.05)。沉默NLRP3可以对抗CM诱导的炎症因子分泌;TLR4抑制剂TAK-242及沉默NLRP3能减轻CM引起的细胞凋亡和线粒体功能损伤。结论:TLR4/NLRP3炎症复合体参与了CM致急性肾损伤的发病机制,并介导了CM诱导的肾小管上皮细胞损伤和炎症。     

野百合碱致肺动脉高压大鼠肺组织中IL-1β和IL-18表达增加

目的探讨野百合碱致肺动脉高压(PAH)大鼠IL-1β和IL-18表达的变化。方法将雄性大鼠随机分为对照组和实验组(n=10),建立野百合碱致PAH大鼠实验模型,应用B超、心肌细胞HE染色和TUNNEL染色检测;ELISA检测血清NF-κB、COX2、IL-6、IL-1β、TNF-α和NO浓度;免疫组化法检测肺组织IL-1β和IL-18表达;Western blot检测肺组织NLRP3蛋白表达。结果 PAH大鼠血清中NF-κB、COX2、IL-6、IL-1β、TNF-α和NO均显著增加(P0.05);肺组织IL-1β和IL-18的表达明显增加(P0.05),PAH大鼠肺组织IL-1β和IL-18阳性细胞百分比显著增加,IL-1β的增加更明显;NLRP3蛋白表达实验组比对照组有明显增加(P0.05)。结论野百合碱致肺组织IL-1β和IL-18表达增加。     

miR-409-3p靶向癌基因ELF2抑制非小细胞肺癌细胞系A549增殖

目的观察miR-409-3p对非小细胞肺癌细胞系A549增殖的影响及其机制。方法对照组为常规条件下培养的转染阳性对照核苷酸的A549细胞寡核苷酸组。实验组在对照组的基础上采用化学合成miR-409-3p模拟物,脂质体转染构建miR-409-3p高表达A549细胞;经q PCR检测,观察2组48 h后miR-409-3p的表达; MTT法检测细胞增殖;流式细胞计量术检测细胞凋亡和周期的差异。结果 miR-409-3p模拟物转染后,A549细胞中miR-409-3p表达水平显著升高(P0. 05);细胞总凋亡比例为22. 66%±4. 61%,显著高于对照组的7. 78%±1. 95%(P0. 05); G0/G1期为40. 21%±5. 37%,显著低于对照组细胞56. 09%±5. 22%(P0. 05);双荧光报告系统表明癌基因ELF2是miR-409-3p的靶基因,过表达miR-409-3p模拟物后,内源性ELF2蛋白表达水平显著下降(P0. 05)。结论 miR-409-3p可能通过调控ELF2的转录水平抑制非小细胞肺癌细胞A549增殖并促进其凋亡。     

LncRNA MINCR靶向miR-223抑制LPS诱导的人肺泡上皮细胞系A549损伤和炎性反应

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MINCR靶向调节微小RNA(miR)-223对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞系损伤和炎性反应的影响。方法 将人肺泡上皮细胞系A549随机分为对照组、LPS组、LPS+转染组(Si NC组、Si MINCR组、miR-223 NC组、miR-223 mimic组、Si NC+miR-223 NC组、Si NC+miR-223 antagomir组、Si MINCR+miR-223 NC组、Si MINCR+miR-223 antagomir组)。RT-qPCR检测MINCR、miR-223表达水平；流式细胞仪检测细胞凋亡率；ELISA测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平；生物信息学预测和双荧光素酶报告基因验证MINCR与miR-223的靶向关系；Western blot检测细胞中活化的半胱天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平。结果 MINCR和miR-223存在靶向关系。LPS组与对照组比较，细胞凋亡率、TNF-α、IL-6水平、MINCR、...     

IL-27在小鼠结肠炎中的作用及对NLRP3炎性小体的影响

目的:观察白细胞介素27(IL-27)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠结肠组织学及NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体的影响。方法:将48只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(自由进食饮水)、DSS模型组(饮用3%DSS溶液)、低剂量IL-27组和高剂量IL-27组(在饮用DSS溶液的基础上分别腹腔注射500ng和1μg IL-27)。12 d后行疾病活动指数(DAI)及组织损伤指数(HI)评分评估炎症程度,取结肠组织行免疫组化、Western blot及qPCR检测,取血清行ELISA检测IL-1β和IL-18水平。结果:与对照组相比,模型组的DAI评分和HI评分提示小鼠的结肠炎症明显增强(P0.05),NLRP3和IL-1β的mRNA表达水平增高,NLRP3和cleaved caspase-1的蛋白水平增高,血清中IL-1β和IL-18的含量增加;与模型组相比,高剂量IL-27组的DAI评分和HI评分提示小鼠的结肠炎症明显减轻(P0.05),NLRP3和IL-1β的mRNA表达水平下降,NLRP3和cleaved caspase-1的蛋白水平降低,血清中IL-1β中和IL-18的含量也减少;与模型组比较,低剂量IL-27组除了血清中IL-1β和IL-18含量减少外,上述各项指标的差异无统计学显著性。结论:IL-27可减轻DSS结肠炎模型小鼠的炎症程度并且可抑制NLRP3炎性小体的表达和激活。     

清脑滴丸通过调控miR-223-3p抑制NLRP3炎症小体信号通路对急性脑缺血/再灌注损伤大鼠的抗炎作用机制

目的：探讨清脑滴丸（Qingnao dripping pills, QNDP）通过调控微小RNA-223-3p(microRNA-223-3p, miR-223-3p)介导核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3, NLRP3)炎症小体信号通路对急性脑缺血/再灌注损伤大鼠的作用机制。方法：建立大鼠大脑中动脉栓塞/再灌注（middle cerebral artery occlusion/reperfusion, MCAO/R）损伤模型，随机分为缺血/再灌注损伤模型（MCAO/R）组、MCAO/R+QNDP组、MCAO/R+miR-223-3p拮抗剂（antagomiR-223）组和MCAO/R+QNDP+antagomiR-223组，另设假手术组作为对照，每组18只。MCAO/R术后灌胃给予QNDP (150 mg/kg), MCAO/R术前24 h侧脑室注射给予antagomiR-223。采用Garcia评分法测定各组大鼠神经功能缺损程度；TTC染色法观察脑缺血...