自噬相关基因Beclin 1沉默对人肺癌A549细胞顺铂耐药性的影响

目的探讨应用RNAi技术沉默Beclin 1基因对人肺癌A549细胞顺铂(DDP)耐药性的影响。方法应用真核细胞转染技术将Psilencer 3.1-siRNA-Beclin 1重组质粒转入人肺癌DDP耐药A549/DDP细胞,通过RT-PCR和Western印迹检测Beclin-1基因表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞对DDP的耐药性及细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与空白对照组及空质粒对照组相比,重组质粒组Beclin 1mRNA及蛋白表达下降,凋亡率增加,对DDP的敏感性增加(均P<0.05)。结论 Psilencer 3.1-siRNA-Beclin 1转染人肺癌A549细胞后,可有效抑制Beclin-1基因的表达,增加人肺癌A549细胞对DDP的敏感性,促进细胞凋亡。     

miRNA-216b通过靶向调控Beclin1对顺铂诱导的胃癌细胞自噬及凋亡的影响

目的:探究miRNA-216b(miR-216b)对顺铂处理的胃癌细胞的影响及其可能的作用机制.方法:体外培养人胃黏膜细胞系GES-1、人胃癌细胞系SGC7901和胃癌顺铂耐药细胞系SGC7901/DDP,将SGC7901/DDP细胞随机分为空白对照组、agomir-NC+ oe-NC组、agomir-miR-216b...     

泮托拉唑通过抑制自噬提高人胃腺癌细胞对顺铂的敏感性

背景：肿瘤细胞对化疗药物不敏感／耐药是肿瘤治疗的主要障碍之一．应用高效低毒性化疗增敏剂可优化化疗方案,提高疗效。前期研究显示质子泵抑制剂泮托拉唑（PPZ）预处理可抑制空泡型质子泵V-H＋-ATP酶,逆转细胞内外pH梯度．提高人胃腺癌细胞的化疗敏感性。目的：探讨PPZ能否通过抑制自噬提高人胃腺癌细胞对顺铂（DDP）的敏感性及其可能机制。方法：以免疫荧光法和（或）蛋白质印迹法观察经PPZ或DDP处理或ATG7siRNA干扰,或先予PPZ预处理或ATG7siRNA干扰再予DDP处理的人胃腺癌细胞株SGC7901的自噬体以及自噬特异性标记物LC3、p62、自噬相关蛋白ATG7、自噬调节关键分子mTOR表达,以CCK-8实验检测各组SGC7901细胞增殖率的变化。结果：DDP能诱导SGC7901细胞自噬,PPZ能抑制SGC7901细胞自噬。PPZ预处理能增强DDP对SGC7901细胞的生长抑制作用．并上调mTOR蛋白表达．其作用与ATG7基因干扰一致。结论：PPZ预处理可通过抑制自噬提高人胃腺癌细胞对DDP的敏感性．其机制可能与激活mTOR有关。     

顺铂对人舌鳞状细胞癌细胞Tca8113细胞凋亡与自噬的影响

目的 探讨顺铂对人舌鳞状细胞癌细胞Tca8113细胞凋亡与自噬的影响.方法 体外培养人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,给予不同浓度的顺铂(CDDP),通过MTT检测细胞增殖率;Western印迹检测CDDP对Tca8113细胞凋亡以及自噬相关蛋白表达水平的影响.结果 与对照组相比,CDDP可以明显降低Tca8113细胞增殖率(P＜0.05);Western印迹结果显示,CDDP可以明显增加凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3,Cleaved PARP以及Cytochrome C的表达水平;同时,自噬相关蛋白LC3,Beclin 1和p62表达水平也发生明显的自噬性改变.结论 CDDP可以明显抑制Tca8113细胞增殖,其增殖抑制作用可能来源于凋亡,同时CDDP可以诱导Tca8113细胞发生自噬.     

顺铂对食管癌细胞周期及端粒酶活性的影响

目的 研究顺铂对食管癌细胞周期和端粒酶活性的影响，为其临床应用提供理论依据。方法 用2μg/ml顺铂处理食管癌EC9706细胞，流式细胞仪分析细胞周期的改变，TRAP—ELISA法检测细胞端粒酶活性的改变。结果 顺铂可使食管癌细胞阻滞于S期，诱导细胞凋亡；同时降低食管癌端粒酶活性。结论 顺铂对食管癌有治疗作用，端粒酶活性可作为观察食管癌化疗疗效的一个指标。     

自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对顺铂诱导肺癌A549细胞凋亡的影响

目的 探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对顺铂(DDP)诱导肺癌A549细胞凋亡的影响.方法 用MTT法检测药物最适浓度和作用时间,以及不同组肺癌A549细胞增殖率;通过MDC染色法将细胞染色检测自噬空泡的变化;Hoechst33342染色检测细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 DDP作用于A549细胞后细胞增殖率明显下降,并在细胞内可见大量自噬空泡及细胞核染色质凝聚.3-MA和DDP联合作用组细胞增殖率较单独应用DDP组明显下降,细胞自噬水平降低,细胞凋亡率明显增加.结论 DDP能诱导肺癌A549细胞发生自噬和凋亡,而抑制自噬可以促进DDP诱导的细胞凋亡.     

顺铂诱导食管癌EC9706耐药细胞中Bcl-2的表达

目的探讨凋亡抑制蛋白Bcl-2在顺铂(DDP)诱导食管癌EC9706耐药细胞中的表达。方法建立EC9706/DDP细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,Western印迹检测DDP处理后EC9706细胞及EC9706/DDP细胞Bcl-2蛋白表达,RTPCR、荧光定量PCR检测Bcl-2 mRNA水平。结果 EC9706/DDP细胞对DDP诱导的凋亡不敏感,Western印迹检测到EC9706/DDP细胞中Bcl-2表达上调,与EC9706细胞相比具有统计学意义(P0.05)。RT-PCR、荧光定量PCR检测到EC9706/DDP细胞中Bcl-2 mRNA水平上调,与EC9706细胞相比具有统计学意义(P0.05)。结论 Bcl-2表达上调可能为食管癌EC9706细胞对DDP耐药的重要机制。     

糖尿病大鼠VFN水平与GLUT1、GLUT4基因表达的相关性

目的探讨内脏脂肪素(VFN)与葡萄糖转运蛋白(GLUT)1、GLUT4基因表达的相关性。方法健康雄性Wistar大鼠33只随机分为正常对照组(NC组),糖尿病模型组(DM组),高脂饮食组(HF组),分别为10只、13只、10只。检测3组大鼠体重、空腹血糖(FBG)和空腹血清胰岛素(FINS),用稳态模型评估法(HOMA)评价胰岛素抵抗(IR)指数,采尾血以酶联免疫吸附试验(ELISA)测定VFN的含量。处死,分离附睾、肠系膜、折返腹膜脂肪及肾脏脂肪垫,称重,计为内脏脂肪重量,利用RT-PCR法分别检测3组大鼠内脏脂肪中VFN的表达。RT-PCR方法检测各组大鼠心肌组织GLUT1、GLUT4的基因表达水平。结果成功建立大鼠糖尿病模型。DM组VFN表达明显增加,GLUT1、GLUT4的相对表达水平明显降低(P0.05)。结论糖尿病大鼠体内VFN水平可影响GLUT1、GLUT4 mRNA的表达,且具有负相关性。     

低氧对顺铂损伤A549细胞的影响

目的 探讨低氧条件对顺铂损伤人非小细胞肺癌A549细胞的影响.方法 实验分为两大组:常氧组(正常对照组、顺铂10 μmol/L组、顺铂20μmol/L组);1％低氧组(正常对照组、顺铂10 μmol/L组、顺铂20μmol/L组).应用MTT法检测顺铂在常氧和低氧条件下对A549细胞增殖率的影响;MDC染色检测细胞自噬空泡的变化;Hoechst33342染色检测细胞核变化.结果 与对照组相比,顺铂能降低A549细胞增殖率,并呈剂量依赖性,细胞自噬空泡无明显积聚,但细胞核发生显著皱缩;低氧条件下细胞内出现大量自噬空泡积聚,且低氧明显降低了顺铂对A549细胞增殖率的影响,降低了顺铂对细胞的损伤作用.结论 顺铂能够诱导A549细胞损伤,而低氧条件引起了细胞自噬过程,并降低了顺铂的损伤作用.推测低氧时的细胞自噬在顺铂损伤A549细胞过程中可能是一种保护作用.     

铜离子转运蛋白家族与肺癌顺铂耐药的研究进展

铂类药作为化疗一种关键药之一,被广泛用于治疗各种恶性肿瘤,如卵巢、膀胱、头颈部肿瘤及肺癌.但铂类耐药的发生限制了化疗反应,影响了患者的预后.目前在铂类耐药的机制方面已经有一些重要的发展,其中之一是肿瘤铂类耐药与细胞内浓度的蓄积之间的相关性,摄入的减少和泵出过多均可减少药物在细胞内的聚积,导致耐药.但是具体耐药机制尚不清楚.铜离子动态平衡是由铜离子转运蛋白及其分子伴侣来维持.铜离子转运蛋白家族包括铜离子转运蛋白和铜离子转运磷酸化ATP酶.本文将就铜离子转运蛋白家族与肺癌顺铂耐药作一综述.     

YB-1抑制三氧化二砷诱导的胃癌细胞自噬机制

目的研究YB-1抑制三氧化二砷(As2O3)诱导人胃癌BGC-823细胞自噬的机制。方法采用脂质体转染siRNA干扰YB-1和腺病毒转染pAd1Easy/YB-1过表达YB-1;实时荧光定量PCR检测Bcl-2和Beclin1基因转录;Western blot检测YB-1、Bcl-2、Beclin1、P62和LC3Ⅱ蛋白的表达;MDC染色、荧光显微镜观察自噬泡。结果与空病毒(AdGFP)组相比,pAd1Easy/YB-1(AdYB-1)组Bcl-2基因表达增高,而干扰质粒(siYB-1)组Bcl-2基因表达水平较空质粒(HK)组降低(P均<0.05),各组Beclin1基因表达比较无统计学差异。与AdGFP和HK组相比,AdYB-1组Beclin1和LC3Ⅱ蛋白减少,Bcl-2和P62蛋白增加(P均<0.01),siYB-1组Beclin1和LC3Ⅱ蛋白增加,Bcl-2和P62蛋白减少(P均<0.01)。与AdGFP组相比,AdYB-1组自噬泡聚集减少,加入Bcl-2抑制剂HA14-1后自噬泡重新聚集,Beclin1蛋白恢复表达,P62降解增加,LC3Ⅱ升高。结论 YB-1可能通过上调Bcl-2、抑制Bec-lin1,实现对As2O3诱导的BGC-823细胞自噬的抑制。     

针刺通过调节自噬反应对脑卒中大鼠的神经元损伤的影响

目的 探讨针刺通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、UNC-51样自噬激活激酶(ULK)1/2介导的自噬对脑卒中大鼠神经元的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、针刺+5-氨基-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸(AICAR)组,每组10只,除假手术组其他4组采用中动脉栓塞法构建模型,并给予相应治疗。治疗后24 h,对各组大鼠神经功能缺损程度进行评分。结果 与假手术组比较,模型组治疗后神经功能缺损评分、海马组织AMPK、磷酸化ULK1(p-ULK1)/ULK1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)B/A、Beclin-1表达升高,mTOR表达降低(P<0.05);与模型组比较,针刺组和3-MA组大鼠神经元损伤、自噬减轻,神经功能缺损评分、海马组织AMPK、p-ULK1/ULK1、LC3B/A、Beclin-1表达降低,mTOR表达升高(P<0.05);针刺+AICAR组治疗后神经功能缺损评分、海马组织AMPK、p-ULK1/ULK1、LC3B/A、Beclin-1表达明显高于针刺组(P<0.05),...     

奥沙利铂联合顺铂对肝癌细胞株HepG2抑制作用的研究

目的 通过对奥沙利铂(L-OHP)、顺铂(DDP)单独及联合作用抑制肝癌细胞株HepG2生长的实验研究,探讨两药合用的效果及最佳剂量.方法 采用一定浓度梯度L-OHP和DDP单独及联合与人肝癌细胞株HepG2孵育后,采用MTT法检测细胞生长变化,并采用两药相互作用系数来评价两药相互作用性质.结果 在各作用时间点,联合组对肝癌细胞HepG2的生长抑制率与相应浓度L-OHP、DDP单药组相比均显著增强.结论 L-OHP与DDP联用可增强互补,减少各自用药剂量,达到减毒增效的目的 .     

低浓度顺铂诱导胃癌原代细胞耐药的研究

近年来，5-FU与顺铂（DDP）已成为治疗消化道肿瘤的基本用药。肿瘤对药物的原发性耐药及获得性耐药已成为导致化学治疗失败的主要原因。DDP呈浓度依赖性细胞毒作用，但因毒性大且有体内蓄积现象，故应用剂量受到限制。有研究提出采用小剂量分次用药方式。但有学者认为该种给药方式可能疗效不佳又易诱发耐药，存在较多争议。     

灵芝多糖对顺铂诱导卵巢癌细胞耐药株的逆转

目的 探讨灵芝多糖对卵巢癌耐药细胞SKOV-3/DDP耐药逆转的作用及机制.方法 (1)采用浓度递增法建立人卵巢癌DDP耐药细胞系SKOV-3/DDP,用MTT法、光学显微镜和透射电子显微镜验证实验结果.(2)采用MTT比色法检测灵芝多糖和顺铂连续用药(灵芝多糖作用12 h后,加入顺铂作用12 h)及灵芝多糖和顺铂联合用药对SKOV-3/DDP细胞的生长抑制作用.结果 成功建立了SKOV-3/DDP耐药株,其耐药指数为6.02.灵芝多糖和顺铂连续用药对SKOV-3/DDP细胞的抑制率为32.3%,灵芝多糖和顺铂联合用药对SKOV-3/DDP细胞的抑制率为23.1%.结论 灵芝多糖不仅均有抗肿瘤的作用,还能改善肿瘤细胞的耐药性,增强其对化疗药物的敏感性.     

核桃青皮提取物联合顺铂对Lewis肺癌细胞的诱导凋亡作用

目的观察不同浓度核桃青皮提取物对Lewis肺癌细胞的诱导凋亡作用。方法用0、1、2和4μg/L浓度核桃青皮提取物分别或联合顺铂作用于体外培养的大鼠Lewis肺癌细胞,采用MTT法检测药物对细胞的诱导凋亡作用。结果不同浓度核桃青皮提取物作用30 min、3、12、24 h,均能明显诱导Lewis肺癌细胞发生凋亡,作用呈现时间-剂量依赖性;联合顺铂后,可使细胞凋亡更加明显。结论低浓度的核桃青皮提取物可明显诱导Lewis肺癌细胞发生凋亡,与顺铂联合可产生协同作用。     

Beclin-1表达对舌癌细胞 Tca8113顺铂敏感性的影响

目的：观察自噬基因Beclin-1表达对舌癌细胞Tca8113顺铂敏感性的影响。方法分别构建过表达和干扰Beclin-1的真核表达载体,并建立稳定表达和稳定干扰Beclin-1的Tca8113细胞模型,RT-PCR和Western blotting法检测Beclin-1表达,MTT法检测上述细胞模型对顺铂的敏感性。结果成功建立稳定表达Beclin-1的细胞模型Tca8113/pLEX-Beclin-1,其与对照细胞系对顺铂的半数抑制浓度（IC50）分别为（11．99±0．34）、（5．03±0．16） mg/L,P＜0．01;成功建立干扰Beclin-1表达的细胞模型Tca8113/pRNAT-Beclin-1-sh1,其与对照细胞系对顺铂的IC50分别为（2．76±0．09）、（5．01±0．18）mg/L,P＜0．01。结论下调Beclin-1表达可增加舌癌细胞Tca8113对顺铂的敏感性。     

外源性睾酮通过诱导自噬致大鼠肾脏损伤

目的 探索外源性睾酮(TP)致大鼠肾脏损伤的作用及可能机制.方法 SD雄性大鼠48只,随机分为6组(每组8只):control组、TP组、TP+氯喹(CQ)组、TP+甘草甜素(Gly)组、CQ(自噬抑制剂)组、Gly〔高迁移率族蛋白(HMG)B1抑制剂〕组.各组大鼠处理21 d后,测量其体重、肾脏湿重、计算肾脏指数;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏组织病理形态学变化;免疫组化法和Western印迹印迹法分析大鼠肾脏组织自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、Beclin1、P62、HMGB1的定位和表达情况.结果 与control组比较,TP组大鼠肾脏湿重、肾脏指数无明显变化(P>0.05);肾小球毛细血管襻多呈分叶状改变,肾小囊间隙变窄,肾小管上皮细胞水肿,管腔变窄;肾脏组织LC3B-Ⅱ、Beclin1和HMGB1蛋白表达水平上调(P<0.05),联合给予TP与CQ后,仅见少数肾小体血管球呈分叶状改变,肾小管水肿明显减轻;Beclin1、LC3B-Ⅱ和HMGB1蛋白表达水平均下调(P<0.05);TP+Gly组大鼠肾脏组织病理学改变及自噬相关蛋白表达水平结果 与TP+CQ组类似.结论 外源性TP可能通过上调细胞自噬致大鼠肾脏组织损伤的发生,HMGB1可能参与此过程自噬水平的调节.     

自噬与心肌病相关性的研究进展

自噬这个词来源于希腊语,原意为“吃自己”和“精确的细胞作用”。自噬从最初发现到如今经历了近50年,研究发现自噬可以被许多刺激所激活,包括饥饿、毒素、氧化应激和感染。在正常情况下,心肌细胞自噬维持在较低的情况,但在应激反应的高度激活下,自噬活动增强并在调节心脏稳态和功能中起重要作用。该文对自噬与心肌病相关性的研究进展进行综述。