不同强度热休克预处理对氧化应激所致乳鼠心肌细胞损伤的影响

目的:探讨不同强度热休克预处理对氧化应激所致体外培养的乳鼠心肌细胞损伤的影响.方法:用热休克预处理原代培养的乳鼠心肌细胞,向心肌细胞中加入终浓度为0.5 mmol/L的过氧化氢(H20:),以模拟氧化应激造成心肌细胞损伤.将心肌细胞分为5组:对照组(Ctrl组)、H2O2损伤组(H2O2组)、低强度热休克预处理(42℃,15 min,恢复12 h) H2O2组(HSR15 min H2O2组)、中等强度热休克预处理(HSR45 min) H2O2组和高强度热休克预处(HSR90 min) H2O2组.四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察处理后各组细胞的活力;流式细胞仪测定细胞凋亡率;检测各组培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量.细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量.结果:与Ctrl组比较,H2O2组的细胞活力和SOD活性都明显降低(P<0.01),而细胞凋亡率、LDH和MDA含量明显增高(P<0.01);与H2O2组比较,HSR15 min H2O2组和HSR45min H2O2组的细胞活力和SOD活性明显增高(P<0.01),而细胞凋亡率、LDH和MDA含量明显降低(P<0.01),HSR90 min H2O2组与H2O2组无明显差异(P>0.05);与HSR45 min H2O2组比较,HSR15 min H2O2组和HSR90 min H2O2组的细胞活力和SOD活性明显降低(P<0.01).而细胞凋亡率和MDA含量明显增高(P<0.01),LDH也明显增高(P<0.05或P<0.01).结论:热休克预处理能减轻过氧化氢所致体外培养的新生大鼠心肌细胞损伤,且不同强度热休克预处理对心肌细胞的保护作用不同.     

采用反义寡核苷酸探讨HSP70对活性氧所致心肌细胞损伤的影响

目的探讨HSP70对活性氧所致心肌细胞急性损伤的保护作用.方法用热休克预处理诱导新生大鼠心肌细胞中HSP70的表达,采用HSP70反义寡核苷酸阻断HSP70的表达,乳酸脱氢酶释放率和细胞总蛋白质合成能力来反映H2O2 0.5 mM所致心肌细胞损伤程度.结果H2O2引起心肌细胞乳酸脱氢酶释放率明显升高,而细胞总蛋白质的合成降低.热休克预处理导致心肌细胞中HSP70表达明显增加,并使H2O:所致心肌细胞LDH释放率显著降低,细胞总蛋白质的合成基本恢复正常水平.HSP70反义寡核苷酸很大程度上阻断了HSP70的表达及热休克预处理的心肌细胞保护作用.结论在热休克预处理减轻过氧化氢所致乳鼠心肌细胞急性损伤的作用中,HSP70发挥了最主要的作用.     

热休克蛋白90对抗氯化钴引起的心肌细胞损伤

目的探讨热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)在对抗氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)诱导H9C2心肌细胞损伤中的作用。方法应用不同浓度的CoCl2处理H9C2心肌细胞,建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型。应用CCK-8比色法检测细胞存活率;Western-blot法检测HSP90的表达;双氯荧光素染色荧光显微镜照相检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)检测试剂盒分析SOD活性抑制率。结果在400～1000μmol/L浓度范围内,CoCl2处理H9C2心肌细胞36 h,呈剂量依赖性地抑制细胞存活率。在0.5～36 h时间范围内,600μmol/L CoCl2呈时间依赖性地促进H9C2心肌细胞HSP90的表达。2～16μmol/L HSP90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-allylamino-17demethoxygeldanamycin,17AAG)呈剂量依赖性地加重600μmol/L CoCl2对H9C2细胞存活率的抑制。...     

Akt参与热休克蛋白27保护大鼠心肌细胞过氧化损伤

目的:探讨小分子热休克蛋白27保护大鼠心肌细胞过氧化损伤的机制.方法:①以稳定转染 pCDNA3.1/Hsp27质粒并稳定高表达Hsp27的大鼠心肌细胞株H9c2(H9c2-Hsp27)为研究对象.对照组采用稳定转染pCDNA3.1质粒的H9c2(H9c2-Vector)细胞;②氧化应激诱导和检测:500 μmol/L H2O2处理细胞后进行如下分析:培养上清中的 LDH 活性、细胞形态学改变、细胞内Akt激活水平;③Akt在Hsp27保护 H2O2诱导H9c2损伤中的作用:以Akt抑制剂Triciribine处理H9c2-Hsp27,观察其对Hsp27保护H2O2诱导H9c2形态学变化的影响.结果:①H2O2诱导H9c2细胞向培养上清释放的LDH显著增加(P<0.01),但与对照组相比,Hsp27 高表达显著抑制了 H2O2诱导的LDH释放(P<0.01);②H2O2处理后,H9c2细胞Akt磷酸化水平增加(P<0.01或P<0.05),但与H9c2-Vector比较,H9c2-Hsp27的Akt磷酸化水平进一步增强(P<0.05);③Akt磷酸化被抑制后,Hsp27对H2O2诱导H9c2细胞形态学改变的保护作用消失.结论:Akt激活是Hsp27保护大鼠心肌细胞过氧化损伤的重要机制.     

急性低氧环境下热休克蛋白72在大鼠肾脏中的表达及意义

目的 探讨急性低氧环境下大鼠肾脏热休克蛋白72（heat shock protein,HSP72）的表达.方法 将30只雄性SD大鼠随机分为急性低氧组：12 h、24 h、48 h、72 h、1 w组,同时设立对照组（西宁地区）.将五组大鼠放入低压氧舱建立急性低氧模型,分别在不同时间段取大鼠肾脏组织用蛋白免疫印迹（Western Blotting）法检测HSP72表达水平;收集大鼠尿液,用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测尿微量白蛋白及尿肌酐浓度.结果 大鼠急性缺氧后,其肾组织中HSP72蛋白的表达随着缺氧时间的延长逐渐升高,72 h达最高水平（2.68±0.08）,到1 w时其表达水平有所下降（1.59±0.17）,各组与对照组（0.19±0.12）比较差异均有统计学意义（P＜0.01）;大鼠尿微量白蛋白与尿肌酐比值从48 h开始升高,48 h组（235.40±20.60）与对照组（169.63±17.45）比较差异有统计学意义（P＜0.05）,72 h（378.12±61.31）、1 w组（504.55±48.77）与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 急性低氧可以引起大鼠尿微量白蛋白排泄量增加,并随着缺氧时间的延长而增加,同时伴有肾脏HSP72表达的增加,但二者表达呈现不一致性.提示缺氧是引起肾脏损伤的重要原因,虽然HSP72升高是机体保护性应激反应,但在急性缺氧时,并不能充分缓解缺氧引起的脏器损伤,其保护作用可能具有一定的滞后性.     

含有人热休克蛋白基因的重组腺病毒转染乳鼠心肌细胞的实验研究

目的:研究含有人热休克蛋白70(HSP70)基因的重组腺病毒对乳鼠心肌细胞的转染效率以及基因转染后HSP70的表达。方法:体外原代培养乳鼠心肌细胞,以携带增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的腺病毒载体(Ad.EGFP)按不同感染倍数(MOI)体外感染心肌细胞,通过荧光显微镜、流式细胞仪观察所构建的腺病毒的感染力和安全性;应用含有人HSP70基因的重组腺病毒(Ad.HSP70)进行体外感染,采用ELISA法、Western印迹法及免疫组化染色法检测HSP70基因在心肌细胞中的表达情况。结果:Ad.EGFP感染心肌细胞的效率高于90%,在MOI值为200时,未见心肌细胞的生长明显受抑;ELISA法、Western印迹法以及免疫组化染色法证实转染的心肌细胞在正常生理状态下,可高水平表达HSP70。结论:重组腺病毒Ad.HSP70能够在体外高效、安全地感染心肌细胞,并成功地表达HSP70。     

热休克预处理抑制过氧化氢所致心肌细胞Smac的释放及细胞凋亡

目的：探讨热休克预处理(heat shock pretreatment，HS)对过氧化氢(hydrogen peroxide，H2O2)所致心肌细胞凋亡及促凋亡分子线粒体释放的第二种Caspase激活物(the second mitochondria-deftved activator of easpases，Smac)从线粒体释放的影响。方法：①采用H2O2(0．5mmol／L)导致心肌细胞凋亡；②采用热休克预处理(42℃，1h，恢复12h)诱导热休克蛋白表达；③采用Hoechst荧光染色，观察细胞凋亡发生并计算凋亡核百分率；④采用easpase活性定量检测及Western-blotting观察caspase-3，9的活化；采用免疫荧光及Western-blotting检测细胞成分分离后Smac从线粒体的释放。结果：①H2O2处理2h，Smac从心肌细胞线粒体释放入胞浆；处理4hcaspase-3，9活性升高，12h达高峰；处理24h心肌细胞明显出现凋亡，凋亡核百分率明显升高；②热休克预处理可诱导心肌细胞中HSP90。HSP70及αB-晶状体蛋白的表达增高；抑制Smac释放、caspase-3，9的活化及细胞凋亡的发生。结论：线粒体信号通路在H2O2所致的心肌细胞凋亡中发挥重要作用；热休克预处理通过抑制上述通路而减轻H2O2所致的细胞凋亡，其机制与其诱导热休克蛋白表达、阻断Smac从线粒体向胞浆释放、抑制caspase-3，9的活化有关。     

重组热休克蛋白72对体外培养大鼠肝细胞脂肪变性的影响

目的探讨重组热休克蛋白72（HSP72）对体外50％胎牛血清培养的大鼠肝细胞脂肪变性及肝细胞损伤的影响。方法sD大鼠肝细胞分4组培养。①对照组：DMEM培养液（不含血清）与多粘菌素B;②实验组1：对照组培养液中加50％胎牛血清;③实验组2：对照组培养液中加50％胎牛血清与重组HSP72;④实验组3：对照组培养液中加重组HSP72。动态检测各组肝细胞内甘油三酯（TG）含量、脂肪变性率及悬液中ALT、AST含量。SPSS11．5软件统计分析实验结果。结果对照组肝细胞内TG含量及悬液中AIJT、AST含量无显著变化（均P〉0．05）,肝细胞脂肪变性率为0。实验组1、2肝细胞脂肪变性明显,肝细胞内TG及悬液中ALT、AST含量较对照组均显著升高（均P〈0．01）,且与其它组比较实验组2变化更为显著（P〈0．01）;实验组3肝细胞内TG无明显变化（P〉0．05）,肝细胞脂肪变性率为0,但悬液中A¨、AST含量却较对照组有显著升高（均P〈0．01）。结论重组HSP72能导致肝细胞损伤,但不能诱导肝细胞脂肪变性;重组HSP72能加重50％胎牛血清所诱导的肝细胞脂肪变性及肝细胞损伤。     

地塞米松诱导热休克蛋白72减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的 探讨地塞米松预处理诱导SD大鼠心肌热休克蛋白72(HSP72)表达对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用.方法 将SD大鼠予地塞米松预处理,生理盐水预处理设为对照.预处理后构建缺血再灌注损伤动物模型.Western blot法观察HSP72表达;动态观测缺血前及再灌注期间心功能、心律失常的变化;测定心肌梗塞面积及冠状动脉流出液肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)的总量.结果 与对照组相比,地塞米松预处理诱导大鼠心肌HSP72的表达显著增加(P<0.05);改善再灌注期间心功能(P<0.01);减少室性心律失常的积分(P<0.01);缩小心肌梗塞面积(P<0.01);降低冠状动脉流出液CK-MB的总量(P<0.05).结论 地塞米松作为新型HSP72诱导剂,上调HSP72表达,可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.     

氧化应激在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的:探讨氧化应激在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,分别用10～50mmol/L终浓度的葡萄糖进行干预,MTT测定各组心肌细胞的生长活力;激光共聚焦显微镜、脱氧核糖核酸转移酶原位缺口末端标记法(TUNEL)和流式细胞术用于观察和检测心肌细胞凋亡;将心肌细胞分为3组:对照组、高糖组和抗氧化剂组,分别检测各组上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量以反映心肌细胞的氧化应激水平。结果:MTT结果显示高糖能浓度依赖性地抑制心肌细胞的生长活力;激光共聚焦显微镜、TUNEL染色和流式细胞术均表明高糖能诱导心肌细胞凋亡;与对照组相比,高糖组LDH、MDA含量明显增高,SOD含量显著下降,与高糖组相比,抗氧化剂组LDH,MDA含量明显下降,SOD含量显著升高;流式细胞检测显示高糖组细胞凋亡率较对照组明显增加,而抗氧化剂组细胞凋亡率较高糖组则显著下降。结论:氧化应激是高糖诱导心肌细胞凋亡的一个重要机制。     

HSF1调控的炎症相关基因的筛选及SOCS3基因的实验验证

目的：筛选热休克因子1（HSF1）调控的炎症相关基因,初步探讨HSF1对下游基因的调控作用。方法：采用HSF1基因敲除小鼠,制备内毒素腹腔注射以及热休克反应后再给予内毒素腹腔注射的内毒素血症模型,分别抽提HSF1缺失突变纯合子和HSF1野生型小鼠肺组织总RNA,用微阵列进行筛选;用转录元件搜索软件分析差异表达基因的启动子区;选取启动子区含有热休克元件的基因：细胞因子信号转导抑制子3（SOCS3）,采用热休克反应（HSR）和HSF1过表达的RAW264,7巨噬细胞给予内毒素刺激,抽提总RNA进行RT—PCR,Northern印迹实验,观察HSR和HSF1过表达对内毒素诱导的SOCS3基因表达的影响。结果：用微阵列的方法筛选到HSF1可能抑制表达的炎症介质基因15个,其中9个基因的启动子区含有热休克元件;HSF1可能促进表达的炎症介质基因11个,其中8个基因的启动子区含有热休克元件;HSR和HSF1过表达可明显抑制小鼠RAW264．7巨噬细胞内毒素诱导的SOCS3mRNA的表达。结论：HSF1可抑制炎症介质SOCS3mRNA的表达。     

慢性应激对大鼠海马神经元PKA和P-CREB蛋白表达的影响及抗抑郁剂的拮抗作用

目的：探讨慢性轻度不可预见应激对大鼠海马神经元内环磷酸腺苷依赖性蛋白激酶A（cAMP—dependent protein kinaseA，PKA）和磷酸化的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（phosphorylated cAMP-responsive element binding protein，P—CREB）表达的影响以及抗抑郁剂（氟西汀）的拮抗作用。方法：将36只SD雄性大鼠随机均分为正常组、慢性应激模型组、氟西汀治疗组。选用慢性轻度不可预见性应激加孤养造模，应用免疫组织化学以及蛋白质印迹技术研究各组大鼠脑内PKA、磷酸化的CREB（P-CREB）在海马区域的分布以及表达量的差异。结果：免疫组织化学和蛋白免疫印迹结果显示模型组大鼠海马细胞内的PKA和P-CREB蛋白表达量明显低于正常组（P〈0．05）；氟西汀组大鼠海马细胞内PKA和P-CREB蛋白表达量明显高于模型组（P〈0．05）。结论：慢性轻度不可预见性应激可使大鼠海马神经元内的PKA和P—CREB蛋白表达水平下降，氟西汀具有一定的拮抗作用。     

氧化应激、炎症与冠心病患者冠状动脉斑块的关系

目的：探讨斑块破裂的原因及其与氧化应激、炎症的关系。方法：收集冠脉造影的冠心病患者85例，根据斑块形态，冠心病患者分为3组，即Ⅰ型病变（表面光滑）组（n=31），Ⅱ型病变（表面不规则）组（n=35）及Ⅲ型病变（长段不规则）组（n=19），冠脉造影正常的25例为对照组。检测各组血浆MDA-LDL，hs-CRP，血清肌酸激酶（CK）及肌酸激酶MB同工酶（CK-MB）。结果：Ⅱ型病变组血浆MDA-LDL，hs-CRP显著高于对照组、Ⅰ型病变组、Ⅲ型病变组（均P〈0．01）。Ⅱ型病变组血浆MDA-LDL与LDL，HDL无明显相关性（均P〉0．05）。Ⅱ型病变组血浆MDA-LDL与hs-CRP呈中度正相关（r=0．630，P〈0．01）。结论：氧化应激、炎症反应加强均是导致斑块破裂的原因，且氧化应激通过诱导、加剧炎症反应或与炎症因子交互作用发挥其致斑块破裂作用。     

Survivin反义寡核苷酸治疗耐顺铂人肺腺癌细胞裸鼠移植瘤的实验研究

目的:探讨以存活素基因(survivin)为靶点反义基因治疗耐顺铂(CDDP)人肺腺癌移植瘤的可行性。方法:常规体外培养A549/CDDP细胞,采用皮下注射法建立移植瘤裸鼠动物模型。以脂质体包裹的survivin反义寡核苷酸(ASODN)直接移植瘤内注射,观察肿瘤生长情况,计算抑瘤率和肿瘤生长指数。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学分别检测survivinmRNA和蛋白的表达。结果:单用ASODN组的抑瘤率和肿瘤生长指数分别为35.4%和4.230±0.886,和空白对照组比较,抑瘤率较高,肿瘤生长减缓(P<0.05)。而ASODN联合CDDP组的抑瘤率和肿瘤生长指数则分别为63.7%和1.700±0.436,与CDDP组、Lip与CDDP联用组及单用ASODN组比较均有统计学差异(P<0.05)。RT-PCR半定量和免疫组织化学显示,ASODN组和ASODN联合CDDP组肿瘤组织中survivinmRNA及其蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论:Survivin反义寡核苷酸可以抑制耐顺铂人肺腺癌移植瘤的生长,可能主要与其特异性下调survivin基因表达有关。特异性靶向survivin反义寡核苷酸可用于肺癌顺铂耐药的辅助治疗,其临床实际应用有待进一步研究。     

氯沙坦保护ox-LDL诱导的内皮细胞损伤与ADMA的关系

目的：探讨氯沙坦对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的内皮细胞损伤的保护作用及其与内源性一氧化氮合酶抑制物非对称性二甲基精氨酸（ADMA）的关系。方法：用ox-LDL（100mg／L）孵育人脐静脉内皮细胞株HUVEC12 24h或用10^-8～10^-6mmol／L的氯沙坦预孵育HUVEC12 30min后再与ox-LDL共孵育24h,测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性、一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、ADMA含量和细胞内二甲基精氨酸二甲胺水解酶（DDAH）活性。结果ox-LDL孵育HUVEC12细胞24h后细胞培养液中LDH活性、TNF-α和ADMA含量明显增加（P〈0．05）,同时NO含量下降和细胞DDAH酶活性受到抑制（P〈0．05）;氯沙坦（10^-8～10^-6mmoL／L）可显著减轻ox-LDL诱导的LDH活性、TNF-α和ADMA含量的增加以及NO含量的降低（P〈0．05）,并呈浓度依赖性的增加DDAH活性（P〈0.05）。结论：氯沙坦对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤具有保护作用,该作用可能与增加DDAH活性,降低ADMA浓度有关。     

不同剂量芬太尼对心脏瓣膜置换患者围术期应激反应的影响

目的：探讨不同剂量芬太尼对心脏瓣膜置换患者围术期应激反应的影响。方法：择期行首次心脏瓣膜置换术患者30例，随机分为3组，每组各10例：A组（芬太尼30μg/kg），B组（芬太尼60μg/kg），C组（芬太尼100μg／kg），分别于术前（T1）、心肺转流术（CPB）转流前（T2）、开放主动脉后30min（T3）、开放主动脉后2h（T4）及术后24h（T5）各时间点测定动脉血中血糖（glucose）、血浆促肾上腺素皮质激素（ACTH）、血管紧张素Ⅱ（ATⅡ）和皮质醇（cortisol）的含量，并记录3组患者在ICU的停留时间和拔管时间。结果：3组患者的血糖、血浆ACTH．ATⅡ和皮质醇在T2时无变化，在T3，T4和T5各时间点均显著高于T1（P〈0．01或P〈0．05）。转流后同一时间点3组患者各指标以A组最高，C组最低，且B组和C组在T3和T4时间点血糖、血浆ACTH，ATⅡ和皮质醇均明显低于A组（P〈0．05），但B组和C组比较无显著差别，C组患者ICU停留时间和术后拔管时间明显比A组和B组延长（P〈0．05）。结论：芬太尼（30～100μg／kg）能完全抑制气管插管，CPB转流前手术操作所致的应激反应。芬太尼对CPB促发的应激反应有平抑作用。但当芬太尼达一定剂量后这种作用并不随剂量增加而增加，反使患者拔管时间和术后ICU停留时间延长。因此，60μg/k可认为是比较理想的剂量。     

白松片对大鼠慢性应激抑郁模型的抗抑郁实验研究

目的：探讨慢性应激抑郁模型大鼠神经生化、神经内分泌的变化及白松片对其的干预作用。方法：60只SD雄性大鼠随机分为正常对照组（NC组）、模型对照组（MC组）、氟西汀对照组（FC组）和白松片治疗组（BST）,每组15只。采用长期轻度不可预见性应激＋孤养复制大鼠抑郁模型,用高效液相色谱仪法检测海马5-羟色胺（5-HT）、谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）含量;放射免疫方法测定大鼠血浆促肾上腺皮质素释放激素（CRH）、促肾上腺皮质激素（ACTH）、皮质醇（CORT）的水平;应用逆转录聚合酶联反应方法测定大鼠下丘脑和大脑皮质CRH mRNA表达水平;免疫组织化学法测定海马脑源性神经营养因子、酪氨酸羟化酶的表达。结果：与NC比较,模型大鼠海马5-HT,GABA含量显著降低;血浆CRH,ACTH,CORT及海马Glu含量增加;脑内CRH mRNA表达显著升高（P〈0．01）;与MC组比,BST组和FC组大鼠海马5-HT,GABA含量升高（P〈0.01,或P〈0.05）;血浆CRH,ACTH,CORT及海马Glu含量降低;脑内CRH mRNA表达下降（P〈0．01）。结论：慢性轻度不可预见性应激可使大鼠神经内分泌、神经生化发生异常改变,白松片对此具有一定调节作用。     

鼻息肉的2-DE图谱建立和蛋白质组学分析

目的:建立鼻息肉及鼻黏膜双向凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE)图谱,鉴定差异表达蛋白质。方法:收集鼻息肉及鼻黏膜样本各7例,采用固相pH梯度2-DE,凝胶银染,扫描图像,ImageMaster2-DE软件比较分析等方法,识别差异表达蛋白质,通过质谱分析得到相应肽质指纹图谱(peptide mass fingerprint,PMF),采用PeptIdent软件查询Swiss-Protand TreMBL数据库,鉴定差异表达蛋白质。结果:建立了鼻息肉和鼻黏膜蛋白质的2-DE图谱。鼻息肉和鼻黏膜3块凝胶的平均蛋白质点数分别为825±78和936±62;平均匹配点数为682±96和821±78,匹配百分率为82.7%和87.7%;同一鼻息肉的3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦(IEF)方向偏差为(1.06±0.14)mm,在SDS-PAGE方向偏差为(1.45±0.21)mm。比较分析两种组织各7例样本的2-DE图谱,鼻息肉和鼻黏膜蛋白质点数为1458个和1617个,平均匹配点数为1026个。质谱分析差异蛋白质点40个,获取34张PMF,查询数据库鉴定出蛋白质24个。结论:建立了分辨率高和重复性好的鼻息肉及鼻黏膜2-DE图谱,识别鉴定出一些与鼻息肉病变相关的蛋白质。     

形觉剥夺性近视视网膜细胞的凋亡及c-myc的表达

目的：研究形觉剥夺性近视眼（FDM）中视网膜细胞的凋亡及c-myc蛋白在视网膜的表达。方法：孵化2d的雏鸡，右眼眼睑缝合4，8，12周后检影验光，眼底视网膜照片和光镜观察，TUNEL（TdT-mediated biotin—duTP nick—end labelling，TUNEL）检测及流式细胞术检测视网膜的凋亡细胞，免疫组织化学法及流式细胞术定量测定．c—myc蛋白的表达。结果：12周时缝合眼中出现漆裂纹样眼底改变，视网膜内、外核层发现凋亡细胞，出现明显凋亡峰。8，12周视网膜c-myc蛋白表达高于对照组。结论：鸡眼近视形成伴眼底改变时，视网膜细胞出现凋亡，c—myc在近视视网膜细胞的凋亡过程中发挥重要作用。     

日本血吸虫中国大陆株琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白的克隆与表达

目的：克隆日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白（sjSDISP）全长编码基因,并对所获基因在大肠杆菌中进行表达。方法：根据基因库中SjSDISP对应的EST（BU804141）以及日本血吸虫成虫cDNA文库载体λgtl1多克隆位点邻近核苷酸序列设计引物,以日本血吸虫成虫cDNA文库为模板,采用锚式PCR对SjSDISP基因不完整的3′端和5′端进行扩增、测序,用电子软件拼接成全长cDNA,将其克隆到表达载体pGEX-4T-1上,经琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶消化、PCR和测序鉴定后,选择阳性克隆进行表达及Western印迹分析。结果：获得1071bp全长cDNA,其理论推导为编码278个氨基酸残基的蛋白质。SjSDISP基因在大肠杆菌BL2．中获得良好表达。该融合表达产物相对分子质量约为56kD,且能被日本血吸虫成虫抗原免疫血清特异识别。结论：编码日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白全长cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达获得成功。