瞬时受体电位离子通道与血管衰老

衰老是多种心血管疾病的危险因素,如高血压、脑卒中及腹主动脉瘤。人口老龄化伴随衰老相关血管病发病率升高使得阐明血管衰老机制十分迫切。内皮细胞一氧化氮(NO)生成障碍在血管衰老中发挥重要作用,与一氧化氮合酶(eNOS)表达下降及调控异常密切相关。瞬时受体电位(TRP)通道是一大类阳离子通道,对维持细胞稳态十分关键。近年来有研究表明瞬时受体电位通道调控内皮细胞一氧化氮生成而维持正常血管功能,而衰老时瞬时受体电位通道表达及功能障碍。本文综述瞬时受体电位通道与内皮细胞一氧化氮合成间的关系以及二者调控失常在血管衰老中的作用。     

肿瘤坏死因子诱导内皮细胞衰老中单核细胞趋化蛋白-1的表达机制及意义

目的 探讨衰老血管内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达变化及与活性氧之间的关系.方法 体外培养血管内皮细胞,应用TNF-α诱导血管内皮细胞衰老模型,应用RT-PCR方法检测细胞内MCP-1的表达.应用流式细胞术检测细胞内活性氧的含量.结果 试验组血管内皮细胞内活性氧含量增加,细胞内MCP-1的表达明显高于对照组.结论 衰老血管内皮细胞中活性氧及MCP-1均增加,两者相互促进,相互影响,加重细胞的损伤.     

循环血内皮细胞分离技术

循环血内皮细胞（circulating endothelial cells，CEC）是机体在生理或病理情况下，从外周血中所获取的内皮细胞。生理状况下，机体细胞不断新陈代谢，衰老的内皮细胞脱落，进入血液循环，其数量一般较少，易于辨认。当机体由于心血管疾病、缺氧、损伤、应激等导致血管受损，大量内皮细胞衰老、死亡、脱落进入血液循环，导致循环血中内皮细胞数量急剧增多，形态多样。因此，循环血内皮细胞作为机体内血管损伤的特异而直接的指示物，具有极高的科研和临床价值，备受国内外学者的关注。但由于循环血内皮细胞大小不一、形态多样，迄今为止对CEC的基本形态学特征尚未完全阐明，对循环血内皮细胞的分离方法还无统一标准。目前常用的分离方法有以下几种。[第一段]     

高糖通过Akt信号通路诱导内皮细胞衰老

目的:探讨高糖对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)衰老及Akt表达的影响。方法:不同浓度的葡萄糖(5.6mmol/L、16.7mmol/L、33mmol/L)加入体外培养的人脐静脉内皮细胞,24小时后β半乳糖甘酶染色检测细胞衰老率和免疫组化法检测Akt活性。结果:5.6mmol/L葡萄糖对内皮细胞衰老作用不明显,16.7mmol/L和33mmol/L均导致细胞的衰老,并且随着浓度增加,衰老更为显著。同时,出现了Akt磷酸化水平的下降。结论:高糖可导致血管内皮细胞的衰老,其机制可能与Akt蛋白活性下调有关。     

血管形成在血管瘤中的表达及研究进展

血管生成是一个复杂的过程,它是从已存在的血管中形成新的血管,涉及内皮细胞、外周的周细胞与平滑肌细胞、细胞外基质以及生成血管的细胞因子等多个相互作用。具体步骤包括现有血管外基膜的降解,内皮细胞的迁移和增殖导致形成新空间,以及血管床的分化和成熟。血管生成初始释放前血管生成因子发起的促进血管形成的因素（如血管内皮生长因子、碱性成纤维生长因子和肿瘤坏死因子）。这些因素结合到内皮细胞各自的细胞表面受体,导致其激活,其中包括诱导细胞的增殖,增强细胞粘附分子的表达,基质金属蛋白酶的分泌进而增加内皮细胞迁移和侵袭。了解蛋白酶在血管生成中的复杂性,对于血管瘤中新生血管的刺激和抑制,有助于认识新的靶点。     

钩藤总生物碱干预大鼠血管内皮细胞衰老研究

目的;探讨钩藤总生物碱对血管紧张素Ⅱ、D半乳糖诱导的大鼠主动脉内皮细胞增殖、衰老的抑制效应及相关机制。方法;分别建立血管紧张素Ⅱ、D半乳糖诱导的大鼠主动脉内皮细胞增殖、衰老模型,分别通过MTT法、流式细胞术观察钩藤总生物碱对其增殖、细胞周期的影响。结果;钩藤总生物碱呈浓度依赖性抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠主动脉内皮细胞增殖;在钩藤总生物碱作用下,D半乳糖诱导的大鼠主动脉内皮细胞处于G₀/G₁期细胞数减少,S期细胞数增多。结论;钩藤总生物碱可剂量依赖性地抑制AngⅡ的促内皮细胞增殖效应,对D半乳糖介导的内皮细胞衰老具有明显的抑制作用。      

血管内皮细胞来源的主要酶类及其功能

血管内皮细胞不仅仅在血管与血液中间起屏障作用,而且还有分泌功能,其功能紊乱是导致血管功能和结构改变的重要因素。目前,人们对血管内皮细胞所分泌的酶研究比较清楚的主要包括一氧化氮合酶(NOS),血管紧张素转换酶(ACE),还原型辅酶Ⅱ氧化酶(NADPH)和环氧合酶(COX)等。这些酶分泌失调不同程度地影响血管功能,进而导致心血管疾病的发生和发展。     

中药抗血管内皮细胞损伤机制的研究进展

研究表明,高血压、高血脂、高血糖、缺氧、衰老、吸烟等心血管危险因素均可导致血管内皮细胞（VEC）受损。VEC的大量损伤可使血管抗血栓能力减退或丧失,造成血栓形成。因此,如何保护VEC功能,延缓心脑血管疾病发展。是亟待解决的课题。而多种中药及有效成分具有抗VEC损伤,调节VEC功能,从而发挥抗血栓作用,在临床应用中也取得良好效果。现将近年的研究进展综述如下。     

血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞活性氧和线粒体功能的影响

目的：分析血管紧张素Ⅱ（ AngⅡ）对人血管内皮细胞和猪血管内皮细胞的活性氧和线粒体功能的影响。方法体外培养血管内皮细胞ECV-304和PAE,用不同浓度AngⅡ处理细胞,采用流式细胞术分析细胞内活性氧、线粒体膜电位和细胞凋亡。结果血管内皮细胞内的ROS水平随AngⅡ浓度增加而增加,AngⅡ导致线粒体功能损伤和凋亡。结论血管紧张素以浓度依赖的方式导致内皮细胞活性氧水平增加,并参与血管内皮细胞的损伤。     

血管内皮生长因子对缺氧诱导内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨缺氧对培养人静脉内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预性影响。方法 （1）人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定。（2）建立人脐静脉内皮细胞缺氧模型,TUNEL法观测不同缺氧时间（0、12、24、48h）对内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预作用。结果 随缺氧时间延长,NUVECs凋亡率显著升高,血管内皮生长因子抑制缺氧导致的内皮细胞凋亡。结论 内皮细胞的过渡凋亡是引起内皮功能障碍的一个重要因素,血管内皮生长因子通过抑制内皮细胞凋亡,而具有内皮细胞保护作用。     

Bmi-1基因表达与血管内皮细胞衰老的相关性

目的:探讨Bmi-1基因与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老的相关性,为研究血管内皮细胞衰老的分子机制打下基础。方法:采用细胞传代及肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激方法模拟内皮细胞衰老,用SA-β-半乳糖酐酶(SA-β-gal)染色检测衰老,Real-time PCR检测P16INK4A及Bmi-1基因的表达变化。结果:随着细胞传代次数的增加,HUVECs体积变大,细胞浆内颗粒和空泡增多,β-gal阳性染色率显著增多,P16INK4A mRNA表达逐渐升高(第6、8代与第1代相比P<0.05),同时Bmi-1 mRNA表达下降(第2、4、6、8代与第1代相比均P<0.05)。TNF-α(10 ng/mL)孵育HUVECs 48 h,与对照组相比,P16INK4A mRNA表达明显增加(P<0.05),Bmi-1 mRNA表达下降(P<0.05)。结论:Bmi-1在衰老内皮细胞中表达显著降低,提示其在血管内皮细胞衰老发生发展中起重要作用。     

胰岛素对血管内皮细胞衰老及Akt表达的研究

目的:探讨胰岛素对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)衰老及Akt表达的影响。方法:不同浓度的胰岛素(对照组、1 nmol/L、10 nmol/L、胰岛素100 nmol/L)加入体外培养的人脐静脉内皮细胞,24 h后β半乳糖酶染色检测细胞衰老率和免疫组化检测Akt活性。结果:与对照组比较,1 nmol/L组和10 nmol/L组细胞衰老程度降低,Akt表达上调。但随着浓度增加,100 nmol/L组细胞衰老反而加重。而Akt表达无统计学差异。结论:低浓度胰岛素可延缓内皮细胞衰老,可能与Akt基因表达上调有关。而高浓度胰岛素加重细胞衰老,其机制可能与Akt蛋白无关。     

胰岛素样生长因子-1对高胆固醇血症患者内皮的保护作用及机制

目的:探讨血清胰岛素样生长因子-1 (insulin-like growth factor-1, IGF-1) 对高胆固醇血症血管内皮的保护作用及机制。方法:观察高胆固醇血症患者和正常对照( 各25 例) 肱动脉血流介导的血管舒张功能(flow-mediatedarterial diastolic function, FMD), 并检测血清中IGF-1、非对称二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine, ADMA)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS) 以及一氧化氮(NO) 水平;将培养的人脐静脉内皮细胞分为3 组:正常对照组、氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL) 损伤组和IGF-1 干预组, 培养24 h 后, 检测各组细胞培养液中ADMA, NOS, NO 水平, 细胞裂解液中二甲基精氨酸二甲胺水解酶(dimethylarginine dimethylamine hydrolase, DDAH) 活性, 并进行β- 半乳糖苷酶染色, 计算细胞衰老率。结果:临床实验中, 高胆固醇血症患者FMD 显著下降;伴随血清IGF-1, NOS 以及NO 水平的下降, ADMA 水平升高。多元线性回归分析显示IGF-1 与FMD 呈正相关, ADMA 与FMD 呈负相关。细胞实验中, ox-LDL 处理24 h 后, 细胞裂解液DDAH 活性下降;伴随上清液中ADMA 水平升高, NOS 和NO 水平下降和细胞衰老率增加, 给予IGF-1 干预能部分逆转上述作用。结论:血液中IGF-1 水平下降可能是高胆固醇血症患者血管内皮舒张功能受损的重要原因之一;IGF-1 具有抗内皮细胞衰老作用, 其机制可能涉及对DDAH/ADMA 途径的调节。     

Biological behaviour and role of endothelial progenitor cells in vascular diseases

Objective To review the biological behaviour of endothelial progenitor cells and their role in vascular diseases.Data sources The data used in this review were mainly from Medline and PubMed for relevant English language articles published from 1985 to March 2007. The search term was “endothelial progenitor cells”.Study selection Articles about the biological behaviour of endothelial progenitor cells and their roles in the pathogenesis of vascular diseases such as atherogenesis were used.Results Progenitor cells in bone marrow, peripheral blood and adventitia can differentiate into mature endothelial cells (ECs). The progenitor cells, which express certain surface markers including AC133, CD34 and KDR, enable restoration of the microcirculation and ECs when injury or ischaemia occurs. Endothelial progenitor cells used in experimental models and clinical trials for ischaemic syndromes could restore endothelial integrity and inhibit neointima development. Moreover, their number and functional properties are influenced by certain cytokines and atherosclerotic risk factors. Impairment of the progenitor cells might limit the regenerative capacity, even lead to the development of atherosclerosis or other vascular diseases.Conclusions Endothelial progenitor cells have a particular role in prevention and treatment of certain cardiovascular diseases. However, many challenges remain in understanding differentiation of endothelial progenitor cells, their mobilization and revascularization.     

p16~(INK4a)/p14~(ARF)基因在细胞衰老和肿瘤抑制中的作用研究进展

细胞衰老发生后细胞在形态和生化成分都发生改变,进而发生生理性功能障碍,最终进入凋亡和死亡程序。细胞衰老是生命体在细胞水平防止永生化和恶变、预防肿瘤发生的一种机制。细胞衰老由多种原因引起,近年来的研究发现,p16INK4a-pRb(视网膜母细胞瘤抗癌蛋白)和p14ARF-p53这2条途径的活化与细胞衰老的启动和调节过程密切相关,对细胞衰老的信号传导通路及其调节因子等方面的深入研究,可以进一步认识细胞增生、衰老进程,以及防治肿瘤的规律,并为衰老相关疾病的治疗提示研究方向。     

Relation Between Cellular Senescence and Liver Diseases

Cellular senescence refers to a process that cellular proliferation and differentiation modulated by the multiple stimulating factors gradually decline.Aging cells present the irreversible stop of proliferation and differentiation and change in secretory function because the cell cycle of aging cells is steadily blocked at some point. It has have been shown that cellular senescence plays an important role in the occurrence and development of liver diseases. In this paper, we review the advances in relations between cellular senescence and liver diseases.     

Effect of aspirin on high glucose-induced senescence of endothelial cells

Background Endothelial cell senescence is accelerated under high glucose condition, which may contribute to the vascular complications in the diabetics, tt has been proved that aspirin has multiple cytoprotective effects. This study aimed to investigate the effect of aspirin on high glucose-induced endothelial cell senescence and its possible mechanism. Methods Human umbilical venous endothelial cells were cultured in Dulbecco＇s modified Eagle＇s medium （DMEM） with different treatments including the normal glucose （5.5 mmol/L）, high glucose （33 mmol/L） and aspirin （0.01-1.00 mmol/L） with high glucose. And 300 umol/L L-NAME was added to the culture medium when needed. After 48 hours, SA-13-gal staining was used to evaluate the senescence. Total nitric oxide （NO） production and NO synthase （NOS） activity were measured using Griess reaction and molecular probes of 3-amino-4-aminomethyl-2＇, 7＇- difluorescein, diacetate. The level of intracellular reactive oxygen species was monitored by flow cytometry using 2＇, 7＇-dichlorofluorescein diacetate. Endothelial NOS （eNOS）, caveolin-1 protein expressions and caveolin-1/eNOS interaction were analyzed by immunoblotting and immunoprecipitation respectively. Asymmetric dimethylarginine （ADMA） concentration was determined by high-performance liquid chromatography. Results Exposure to 33 mmol/L glucose for 48 hours significantly increased the number of SA-13-gal positive cells. Co-incubation with aspirin markedly inhibited SA-13-gal activity dose-dependently. Aspirin increased NOS activity with eNOS protein expression unchanged and increased NO levels and alleviated oxidative stress. Consistent with these findings, caveolin-1 expression, caveolin-1/eNOS interaction and ADMA accumulation were also decreased. All the inhibitory effects of aspirin on senescence were completely obliterated by L-NAME, the NOS inhibitor. Conclusion The anti-senescent effects of aspirin are fulfilled by increasing NO production via the up-regulation of NOS activity and preventing caveolin-1 expression, caveolin-1/eNOS interaction and ADMA accumulation.     

脑出血事件应激对患者内皮祖细胞增殖能力和衰老的影响

目的 探讨脑出血事件应激对患者外周血来源的内皮祖细胞增殖能力和衰老的影响.方法 诱导分化脑出血急性期和基础疾病与其相同的对照组患者的内皮祖细胞,检测两组内皮祖细胞增殖能力、集落、细胞计数和衰老情况并进行对比研究.结果 脑出血事件应激组内皮祖细胞增殖能力较对照组增强(0.270±0.074,0.185±0.050,t=3.802),集落[(5.10±0.79)个/高倍视野,(1.90±0.41)个/高倍视野,t=14.407]和细胞计数[(75.15±10.48)个/高倍视野和(57.10±9.28)个/高倍视野,t=5.157]增加,两组相比差异均具有统计学意义(P＜0.01);但2组内皮祖细胞衰老[(45.54±5.74)个/100细胞和(46.86±5.06)个/100细胞,t=0.686]差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脑出血事件应激可增强内皮祖细胞的增殖能力,但并不能改变患者内皮祖细胞易于衰老的转归.     

高迁移率族蛋白B1在IL-1α诱导的内皮细胞衰老过程中的作用

目的：探讨炎症因子白介素-1α(interleukin-1α,IL-1α)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)衰老的影响,并探讨高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)在其中的作用及机制。方法：将HUVECs随机分为对照组(不加处理)、IL-1α组(10 ng/mL IL-1α孵育)、HMGB1组(100 ng/mL HMGB1孵育)、HMGB1+IL-1α组(100 ng/mL HMGB1和10 ng/mL IL-1α共同孵育),采用细胞衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence associated β-galactosidase,SA β-gal)染色检测细胞衰老数目,采用Western 印迹检测沉默信息调节子1(silent information regulator 1,SIRT1)的蛋白表达,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测衰老相关基因p53,p21和p16的mRNA表达。结果：与对照组相比,IL-1α组SA β-gal染色阳性细胞数目明显增加(P<0.05),SIRT1蛋白表达水平明显下调(P<0.01)。与IL-1α组相比,HMGB1+IL-1α组SA β-gal染色阳性细胞减少,p21和p53的mRNA表达下调(均P<0.05),但p16的mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论：IL-1α能诱导血管内皮细胞的衰老,其中HMGB1可能通过p53-p21 途径抑制IL-1α诱导的内皮细胞衰老过程。