PDTC联合泰素帝对SGC-7901人胃癌细胞抑制效应及其机制

目的研究PDTC合并泰素帝对SGC-7901人胃癌细胞的抑制效应及其机制。方法应用MTT法观察PDTC及泰素帝对SGC-7901细胞的增殖抑制效应,采用流式细胞术检测不同处理后SGC-7901细胞凋亡率的变化,采用实时荧光定量PCR法测定c-IAP2及XIAP基因表达的改变,采用Western印迹法检测NF-κB P65、I-κB蛋白表达的改变。结果 PDTC组、泰素帝组及联合用药组的细胞活力都明显比对照组降低（P〈0.05）,与相应的泰素帝组相比,联合用药组降低明显（P〈0.01）;PDTC、泰素帝及联合用药组的凋亡率高于对照组（P〈0.01）,联合用药组细胞凋亡率明显升高,达到29.37%,与泰素帝及PDTC单药组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）;PDTC组XIAP及c-IAP2 mRNA表达较对照组下降,泰素帝组XIAP及c-IAP2 mRNA表达较对照组升高,联合用药组XIAP及c-IAP2 mRNA表达较对照组、泰素帝组明显下降（P〈0.01）;泰素帝处理后胞核NF-κB P65含量增加（P〈0.01）,而PDTC联合作用后胞浆及胞核NF-κB P65含量较泰素帝组及对照组明显降低（P〈0.01）。结论泰素帝与PDTC均能抑制SGC-7901细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与PDTC可拮抗泰素帝的NF-κB激活、抑制其下游凋亡抑制蛋白基因表达有关。     

泰素帝合并PDTC对PC-3细胞凋亡及NF-κB表达的影响

目的探讨泰素帝合并PDTC对PC-3人前列腺癌细胞的杀伤效应及机制。方法应用流式细胞术、RT-PCR、免疫细胞化学方法,观察不同处理后PC-3细胞凋亡率及NF-κB表达的改变。结果PDTC组PC-3细胞凋亡率和死亡率分别为12%和6.8%,泰素帝组为12.5%和7.2%,两药合并后,凋亡率和死亡率分别增加为25.5%和11.5%;泰素帝有促进NF-κB表达和向核内转移作用;PDTC对NF-κB表达及核转位具有抑制作用;两者合并,NF-κB表达量及核转位减少,与单独PDTC相近。结论泰素帝与PDTC均能诱导PC-3细胞凋亡,并且两者具有协同作用,其机制可能与PDTC拮抗泰素帝的激活NF-κB效应有关。     

NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐提高胃癌细胞对多西他赛化疗的敏感性

目的探讨NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）提高胃癌SGC-7901细胞对多西他赛化疗敏感性的作用及其可能的机制。方法体外培养SGC-7901细胞,药物作用分为空白组、PDTC组、多西他赛组和PDTC＋多西他赛联合组。各组药物处理后,MTT法检测细胞生长抑制率,FCM法检测细胞凋亡率情况,免疫细胞化学方法观察核转录因子KB（nuclearfactor-kappa B,NF-κB）p65在细胞质和细胞核中表达水平的变化。结果 MTT法检测结果显示,PDTC能够有效地抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,呈剂量依赖关系;小剂量（10μmol/L）PDTC和多西他赛联合应用较单用多西他赛,能明显提高细胞生长抑制率（P〈0.05）。FCM法检测结果显示,各用药组较对照组以及PDTC＋多西他赛联用组与单用多西他赛组比较,胃癌SGC-7901细胞的凋亡率差异有统计学意义（P〈0.05）。免疫细胞化学法检测结果显示,NF-KBp65在胃癌SGC-7901细胞中主要表达于细胞质,多西他赛诱导24h后细胞质中NF-κBp65转移至细胞核,其活性增强,而联合使用PDTC后可抑制此现象。结论低剂量PDTC可增强胃癌SGC-7901细胞对多西他赛的敏感性,这一作用可能与PDTC降低了NF-κB表达,从而抑制其进入核内有关。     

PDTC对顺铂抑制胃癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的探讨核因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)对顺铂抑制胃癌细胞SGC-7901增殖的影响。方法不同浓度的PDTC(25,50,75μmol/L)联合顺铂(4mg/L)作用于胃癌细胞SGC-7901,采用细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8试剂盒)检测细胞增殖抑制率;实时荧光定量多聚酶链反应(RTPCR)检测NF-κB p65 mRNA的表达情况;免疫荧光细胞化学(IF)检测NF-κB p65蛋白的表达变化。结果CCK-8结果显示,SGC-7901细胞增殖抑制率随PDTC浓度的增加而增加,且高于单独顺铂组,差异有统计学意义。RT-PCR结果显示,与对照组比较,顺铂(4mg/L)能增加p65 mRNA的表达,差异有统计学意义;当与不同浓度PDTC(25,50,75μmol/L)联合作用时,p65 mRNA相对表达量呈剂量依赖性降低,且低于顺铂单独组。免疫荧光结果与RT-PCR结果一致,与对照组比较,顺铂(4mg/L)能增加NF-κB p65蛋白的表达;与PDTC联合时,随PDTC浓度的增加,p65蛋白的表达量降低,积分光密度(IOD)逐渐降低,且低于顺铂单独组。结论 NF-κB抑制剂PDTC能增加顺铂对胃癌细胞SGC-7901化疗的敏感性,提示NF-κB途径是胃癌治疗的重要靶点。     

抑制NF-κB的表达对人癌裸鼠移植瘤放疗敏感性的影响

目的探讨抑制NF-κB的表达对人癌裸鼠移植瘤放疗敏感性的影响。方法裸鼠皮下接种人宫颈癌HeLa细胞，建立人宫颈癌裸鼠模型。将成瘤的40只裸鼠分为实验组，瘤周注射特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸脂（PDTC）50mg／kg；对照组，不加PDTC，两组均给予直线加速器照射，剂量分别为0、2、4、6Gy。应用免疫组化方法检测放疗及用药前后人癌裸鼠移植瘤组织NF—κBp65的表达，流式细胞仪检测细胞凋亡百分率，光镜下观察细胞凋亡情况。结果射线诱导的NF—κB表达的增加可以被PDTC抑制；抑制NF—κB的表达使细胞凋亡指数增加。结论放疗诱导的人癌裸鼠移植瘤细胞胞浆内NF-κB的高表达可以通过抑制剂PDTC得到抑制；抑制NF-κB的表达增加了人癌裸鼠移植瘤细胞的放疗敏感性。     

TRAIL联合PDTC对SGC-7901细胞生长抑制和凋亡诱导的实验研究

目的观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）及TRAIL联合核转录因子核因子-κB（NF-κB）活性特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对胃癌细胞SGC-7901的生长抑制和凋亡诱导作用,并寻找逆转TRAIL耐药的方法。方法采用不同浓度的TRAIL及TRAIL联合PDTC作用于胃癌细胞后,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,免疫细胞化学染色方法观察药物作用前后NF-κB表达情况。结果单独使用TRAIL时,随着浓度从50μg/L增加到500μg/L,细胞的生长抑制率和凋亡率逐渐增加（P〈0.05）,但这种作用是非线性的。TRAIL联合0.05μmol/L、0.1μmol/L PDTC后肿瘤细胞的生长抑制率和凋亡率较单用TRAIL显著下降（P〈0.05）;而联合1μmol/L、10μmol/L PDTC后其作用较上有所上升（P〈0.05）。联合作用组p65蛋白在胞核中染色的强度低于单纯使用TRAIL组（P〈0.05）。结论TRAIL对胃癌细胞株SGC-7901具有一定程度的生长抑制和凋亡诱导作用;NF-κB信号转导途径可能具有双向调节作用,大剂量PDTC可能逆转胃癌细胞对TRA...     

辣椒素抑制胰腺癌裸鼠皮下移植瘤生长的实验研究

目的探讨辣椒素对胰腺癌BXPC-3细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其机制。方法建立耐药胰腺癌BXPC-3细胞的裸鼠皮下移植瘤动物模型,将荷瘤鼠随机分为:对照组(control,N组)、吉西他滨组(GEM)、低剂量辣椒素组(L-CAP)和高剂量辣椒素组(H-CAP)。第3周开始分别给予溶媒(生理盐水)0.2毫升/只、吉西他滨100mg/kg、辣椒素10mg/kg和辣椒素20mg/kg治疗。3天1次,共8次。实验过程中称测量肿瘤体积,末次用药1周后处死裸鼠。免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67(细胞增殖因子)、XIAP(X连锁凋亡抑制蛋白)和NF-κB(核转录因子)的表达。采用RT-PCR检测核转录因子NF-κB和XIAP mRNA的表达。结果末次用药1周后H-CAP组肿瘤体积和质量明显小于其他各组。免疫组织化学染色结果显示L-CAP组和H-CAP组的NF-κB和XIAP蛋白的表达量明显低于N组和GEM组。H-CAP组Ki-67的表达量明显低于其他各组。RT-PCR结果显示L-CAP组和H-CAP组的NF-κB和XIAP mRNA的表达量明显低于N组和GEM组。结论辣椒素可以通过下调NF-κB和XIAP基因和蛋白表达,从而产生对胰腺癌BXPC-3细胞移植瘤的抑制作用。     

复方藤梨根制剂对人胃癌裸鼠腹腔移植瘤NF-κB p65表达的影响

目的研究复方藤梨根制剂（FFTLG）对人胃癌裸鼠腹腔移植瘤的抑制效应及其与瘤组织核转录因子（NF-κBp65）表达的关系。方法建立人胃癌裸鼠腹腔移植模型。24只裸鼠随机分为4组：FFTLG高、中、低剂量组和生理盐水组,分别观察荷瘤裸鼠腹腔移植瘤的生长情况,检测NF-κB p65的表达。结果生理盐水组、FFTLG低、中、高剂量组的抑瘤率分别为0、7.8%、30.0%和33.3%,FFTLG各组与生理盐水组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;腹腔瘤组织中NF-κB p65阳性表达细胞百分比分别为（39.67±19.82）%、（33.00±19.94）%、（29.20±17.68）%、（27.17±15.75）%。FFTLG组的中、高剂量组与生理盐水组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 FFTLG对裸鼠腹腔移植瘤生长具有抑制作用,且随着剂量的增加其作用增强,其作用途径之一可能是通过下调NF-κB p65的表达。     

NF-κB抑制剂PDTC对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及Livin和Caspase-3表达的影响

目的:观察核因子-кB(NF-кB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对人胃癌SGC-7901细胞生长及凋亡的影响,研究其对凋亡抑制蛋白Livin和Caspase-3表达水平的调控,探讨PDTC对人胃癌SGC-7901细胞凋亡影响的机制.方法:不同浓度的PDTC作用于SGC-7901细胞不同时间后,MTr法测定其对SGC-7901细胞增殖的抑制率;流式细胞仪观察SGC-7901细胞的凋亡情况;real time PCR法和Western blot法检测SGC-7901细胞Livin和Caspase-3 mRNA和蛋白的表达情况.结果:PDTC作用不同时间后对SGC-7901细胞生长有抑制作用,并诱导SGC-7901细胞凋亡,呈剂量-时间依赖性;PDTC可降低Livin mRNA及蛋白的表达.增加Caspase-3 mRNA及蛋白的表达,且Livin的表达量与PDTC的作用呈剂量,时间负相关.结论:PDTC可诱导人胃癌细胞株SGC-7901凋亡,其机制可能与PDTC抑制NF-кB信号转导通路,下调Livin表达继而上调Caspase-3表达有关.     

铁线莲皂苷对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及NF-κB表达的影响

目的:观察扬子铁线莲中提取的三萜类皂苷成分对人胃癌SGC-7901 细胞株生长及凋亡的作用,研究其对核转录因子NF-κB 活性的影响,初步探讨其可能的作用机制?方法:应用不同浓度铁线莲皂苷作用于SGC-7901细胞48 h后,MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞仪Annexin V/PI双染法检测联合应用铁线莲皂苷及5-氟尿嘧啶(5-FU)后SGC-7901细胞凋亡率;应用Western blot 方法检测各组胞核中NF-κB p65表达情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)进一步确定胞核内NF-κB的活性?结果:铁线莲皂苷各浓度组对胃癌SGC-7901细胞生长抑制率均明显高于对照组(P < 0.05),且随药物浓度的增加而上升?铁线莲皂苷对5-FU 诱导的细胞凋亡有明显的促进作用?Western blot及ELISA法均证实铁线莲皂苷对胞核NF-κB 表达及活性有一定的抑制作用,并且这种抑制作用存在着剂量依赖现象?结论:铁线莲皂苷对胃癌SGC-7901细胞具有抑制增殖?诱导凋亡的作用,其诱导细胞凋亡的机制可能与抑制胞核NF-κB表达有关?     

核因子-κB对糖尿病大鼠肾组织P-选择素表达的影响

目的研究糖尿病大鼠肾组织核因子-κB（NF-κB）和P-选择素（P-selectin）的表达,以及NF-κB抑制剂吡咯烷二硫基甲酸酯（PDTC）对其表达的影响。方法30只雄性Wistar大鼠随机分为三组：正常对照组（NC组）、糖尿病组（DM组）、吡咯烷二硫基甲酸酯干预组（DP组）,每组10只。喂养8周末检测血糖、糖化血红蛋白、肾重指数及尿白蛋白排泄率。采用免疫组织化学染色技术检测肾组织P—selectin及NF-κB表达。结果8周末,DM组大鼠肾组织中NF-κB和P—selectin表达明显高于NC组（P〈0．01）,DP组的表达显著低于DM组,高于NC组（P〈0．01）;P—selectin表达与NF-κB呈正相关（r=0．954,P〈0．01）。结论NF-κB及P—selectin表达在糖尿病大鼠肾组织中明显增加,抑制NF-κB表达可减少P—selectin的表达。     

NF-κB途径在舒林酸促人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用

目的探讨核因子κB（NF-κB）途径在舒林酸促人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,舒林酸（0.1、0.3、0.6、1.2、2.4 mmol/L）作用后,苏木精-伊红染色、电镜观察药物作用后细胞形态学变化,免疫组化、Western-blot方法检测药物对人胃癌SGC-7901细胞核因子κB（NF-κB）、bcl-2、bax蛋白表达的影响。结果苏木精-伊红染色检测结果显示舒林酸抑制肿瘤细胞生长,肿瘤细胞出现核固缩、核碎裂、染色质边集等凋亡及坏死的形态学表现;电镜下可看到染色质边集、凋亡小体;免疫组化、West-ern-blot结果显示舒林酸作用48 h后人胃癌SGC-7901细胞NF-κB、bcl-2表达逐渐下降,bax表达逐渐上升,具有剂量依赖性。NF-κB与bcl-2蛋白表达率之间具有相关性（r=0.846 5,P〈0.01）。结论舒林酸可以促进人胃癌SGC-7901细胞凋亡,NF-κB途径在舒林酸促进胃癌SGC-7901细胞凋亡中发挥部分作用。     

灭幽汤对实验性幽门螺杆菌相关性胃炎IKKβ表达的影响及意义

目的探讨IκB分子的上游蛋白激酶（IKKβ）对幽门螺杆菌相关性胃炎（HAG）病理变化的可能机制及灭幽汤在治疗HAG时的影响效应。方法建立HAG模型,采用幽门螺杆菌（H.py-lori）菌液灌胃造模,将造模成功的小鼠按体重随机分为模型组、丽珠得乐组、灭幽汤组。采用免疫组化法检测胃黏膜组织中核转录因子（NF-κB）I、KKβ的蛋白表达情况。HE染色观察胃组织病理变化。结果灭幽汤组能明显减轻胃组织的炎症反应,能抑制HAG胃组织中NF-κBI、KKβ蛋白的活性。正常对照组小鼠胃黏膜组织细胞内均有少量IKKβ、NF-κB表达。与正常对照组比较,模型组小鼠胃黏膜IKKβ及NF-κB表达增加（P〈0.05）;与模型组比较,灭幽汤组小鼠胃黏膜IKKβ及NF-κB表达降低（P〈0.05）。结论灭幽汤能抑制H.pylori,改善胃黏膜血流,减轻胃黏膜炎症。NF-κB和IKKβ在HAG的炎症反应中发挥重要的作用,灭幽汤治疗HAG的机制可能是通过抑制IKKβ的激活和阻止NF-κB的活化实现的。     

生长抑素对胃癌SGC-7901细胞VEGF、NF_κB表达的影响

目的研究生长抑素对胃癌SGC-7901细胞血管内皮生长因子（VEGF）、核转录因子-κB（NFκB）表达的影响。方法不同浓度生长抑素处理SGC-7901。MTT法测量吸光度值,计算细胞生长抑制率;免疫细胞化学（SP）法检测VEGF、NFκB蛋白表达的变化;RT-PCR半定量检测VEGF、NFκB mRNA表达水平。结果实验组与对照组比较,细胞生长抑制率有明显差异（P〈0.05）,同一实验组不同时间点（24、48、72h）间比较,细胞生长抑制率也有明显差异（P〈0.05）,表明生长抑素对SGC-7901细胞生长抑制作用有剂量时间依赖性;不同浓度生长抑素处理48h后,SGC-7901细胞VEGF、NFκB蛋白表达下降,实验组与对照组比较有明显差异（P〈0.05）;mRNA的表达呈浓度依赖性降低,实验组与对照组比较有明显差异（P〈0.05）。结论生长抑素能下调胃癌SGC-7901细胞VEGF、NFκB表达,抑制胃癌细胞增殖。     

阻断NF-κB通路对梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡的影响

目的:探讨梗阻性黄疸时肝组织核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的表达与细胞凋亡的变化,并观察NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对肝脏损伤的保护作用。方法:将雄性SD大鼠72只随机分成胆总管结扎组(BDL组)、胆总管结扎+PDTC干预组(PDTC组)、假手术组(Sham组)。分别于术后第3天、第7天、第14天处死大鼠,观察肝组织细胞凋亡和NF-κB p65蛋白的表达。结果:BDL组和PDTC组NF-κB p65表达及细胞凋亡数明显增加,但在PDTC组明显低于BDL组。结论:NF-κB的活化可能是梗阻性黄疸时介导肝脏功能损害的重要因素。     

SN50对裸鼠人胃癌移植瘤生长的影响

目的探讨核转录因子（NF）-κB p65的阻断剂SN50对裸鼠人胃癌移植瘤生长的影响。方法建立裸鼠胃癌移植瘤模型后将20只裸鼠随机分成对照组（n=5）和SN50实验组（n=15）,用生理盐水处理对照组、SN50处理实验组,于第5 d、10 d、15 d分别取5只裸鼠测量肿瘤体积,计算抑瘤率。采用免疫组织化学染色观察凋亡指标Bcl-2、Bax和p53表达的变化。结果使用SN50处理肿瘤后5 d、10 d、15 d肿瘤生长抑制率逐渐增高;与对照组相比,凋亡指标Bcl-2的表达下调,p53和Bax的表达上调（均P〈0.05）。结论 NF-κB p65的阻断剂SN50可能通过下调Bcl-2的表达和上调p53、Bax的表达导致细胞凋亡,从而最终抑制移植瘤的生长。     

HSV-1对星形胶质细胞炎性细胞因子表达的影响

目的：探讨单纯疱疹病毒1型（HSV-1）对星形胶质细胞内胞核转录因子kappa B（NF-κB）转录活性及炎性细胞因子肿瘤坏死因子α（ TNF-α）和白细胞介素10（ IL-10）表达的影响。方法 HSV-1感染星形胶质细胞,通过ELISA,Western blot等方法检测星形胶质细胞NF-κB,TNF-α,IL-10的表达;同时研究NF-κB通路抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸（ PDTC）对TNF-α,IL-10表达的影响。结果星形胶质细胞被HSV-1感染后,胞核内NF-κB蛋白表达明显增强,星形胶质细胞分泌的TNF-α,IL-10均上调,与对照组比较差异有显著性（P＜0．05）。PDTC可抑制NF-κB活化,导致核内NF-κB蛋白表达下调,使得细胞分泌TNF-α,IL-10降低,与HSV-1组比较差异显著（ P＜0．05）。结论被HSV-1感染的星形胶质细胞通过活化NF-κB,从而上调TNF-α,IL-10的表达。     

趋化因子FKN对人外周血单个核细胞IL-8表达的影响及ERK、PI3K和NF-κB在其中的作用

目的：通过研究趋化因子Fractalkine（FKN）对人外周血单个核细胞IL-8表达的影响,以及信号分子细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）、磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K）、核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）在其中的作用,探讨FKN促进动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的机制。方法利用密度梯度离心法分离健康人外周血单个核细胞;将提取的单个核细胞分为：空白对照组、FKN组、PD98059（ERK阻断剂）组、LY294002（PI3K阻断剂）组、PDTC（NF-κB阻断剂）组、FKN＋PD98059组、FKN＋LY294002组、FKN＋PDTC组;分别于培养12 h和24 h后收集细胞培养上清,应用ELISA检测各组单个核细胞中IL-8的表达情况。结果（1）细胞培养12 h或24 h后,PD98059组、LY294002组和PDTC组与空白组比较,IL-8表达有减少趋势,但差异无显著性意义（P＞0.05）。（2）FKN组较空白组IL-8表达明显减少（P＜0.05）,FKN＋PD98059组和FKN＋LY294002组较FKN组IL-8表达明显增加（P＜0.05）,FKN＋PDTC组较FKN组、FKN＋PD98059组和FKN＋LY294002组IL-8表达均明显减少（P＜0.05）。（3）细胞培养24 h后,各组IL-8表达均较12 h明显减少（P＜0.05）。结论趋化因子FKN可能通过ERK、PI3K信号途径抑制单个核细胞IL-8的表达,而通过NF-κB途径促进IL-8的表达,FKN对单个核细胞IL-8的表达具有双向调节作用,但以抑制作用为主。