大鼠骨髓内皮祖细胞的体外扩增培养

目的探讨建立体外培养内皮祖细胞（EPC）的方法。方法通过密度梯度分离法从大鼠骨髓中分离单个核细胞,培养7 d后,行Dil-acLDL和FITC-UEA-1双荧光染色,并行流式细胞检测及细胞迁移实验。结果细胞培养7 d后,可见梭形细胞呈优势生长,Dil-acLDL与FITC-UEA-1荧光标记的双阳性细胞占细胞总数的比例为82.7%±5.1,培养第10天开始出现铺路石样细胞集落,培养后第7、14天CD34阳性细胞所占的比例分别为（32.3±3.2）%、（39.2±4.4）%（t=5.18,P〈0.01）,FLK-1阳性细胞所占的比例分别为（28.7±3.2）%、（44.5±3.8）%（t=5.32,P〈0.01）。培养7 d后迁移至膜下层的EPC数为（10.4±1.9）个,培养14 d后迁移至膜下层的EPC数为（11.8±2.5）个（t=0.83,P〉0.05）。结论分离大鼠骨髓单个核细胞,用选择性内皮生长体系培养EPC,再通过细胞免疫及细胞功能检测所分离的细胞,是一种较为良好的分离与鉴定EPC的方法。     

不同细胞生长因子组合对内皮祖细胞培养过程的影响

目的 观察不同细胞生长因子组合对体外培养过程中内皮祖细胞（EPC）数量和功能的影响。方法采用密度梯度离心法分离人脐血单个核细胞，接种至包被有人纤维连接蛋白的培养皿，按照处理方式不同分为4组：对照组（不添加细胞因子）、VEGF组[加入血管内皮生长因子（VEGF）】、VEGF＋ECGS组[加入VEGF及内皮细胞生长添加剂（ECGS）]、多因子组（加入多种细胞生长因子），6d后倒置显微镜下观察各组细胞集落形成情况，测定黏附能力及收获的EPC数量。结果VEGF组及ECGS＋VEGF组细胞集落形成能力（11.53±1.72、1310±2．09）均显著强于对照组（587±0．55）（均P〈0.01】；ECGS＋VEGF组细胞黏附能力（55．53±18.32）显著强于VEGF组（24.92±4．31）（均P〈0．01）；多因子组细胞集落形成及粘附能力（33．83±5．10、65.22±10、98）均明显强于其余各组（P〈0．05或0．01）。VEGF组及VEGF＋ECGS组收获的EPC数量分别为对照组的185、284倍，均显著增加（均P〈0.01）；多因子组EPC数量虽多于VEGF＋ECGS组，但差异并无统计学意义（P〉0．05）。结论EPC体外培养时，添加VEGF及ECGS是一种经济有效的方法，可显著改善EPC的集落形成及黏附能力，增加EPC的收获数量。     

原发性高血压条件下骨髓来源内皮祖细胞数量及功能的变化

目的了解原发性高血压对体外培养骨髓来源内皮祖细胞（EPC）数量及功能的影响。方法将自发性高血压大鼠（SHR）分为6、12周龄组,以同周龄正常血压Wistar-Kyoto（WKY）大鼠为对照。以密度梯度离心法分离骨髓来源单个核细胞体外培养．差速贴壁法培养7d后收集贴壁细胞并行鉴定为骨髓来源内皮祖细胞,测定EPC数量、细胞增殖活力（MTT法）、NO分泌及细胞凋亡率。结果6周龄SHR骨髓来源EPC数量与6周龄WKY大鼠比较差异无统计学意义（P〉0．05）,细胞增殖能力、NO分泌能力受损（P〈0．05）,凋亡率稍增多但差异无统计学意义（P〉0．05）。12周龄SHR骨髓来源EPC数量与12周龄WKY大鼠比较明显减少（P〈0．01）,细胞增殖能力、NO分泌能力受损（P〈0．01）,凋亡增多（P〈0．05）。结论随着SHR血压升高和原发性高血压病程延长．骨髓来源内皮祖细胞数量减少。功能减退,凋亡增多。     

肺动脉高压大鼠循环内皮祖细胞及血浆一氧化氮水平的实验研究

目的探讨肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)模型大鼠循环内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)水平的变化及其与血浆一氧化氮(nitric oxide,NO)浓度的关系。方法利用野百合碱诱导大鼠发生肺动脉高压,使用流式细胞仪对其外周血CD45阴性、CD34/FLK-1双阳性的单个核细胞,以表示循环EPC,同时采用Greiss法对其血浆NO浓度进行检测。利用简单线性回归分析二者之间的关系。结果 PH模型组循环EPC水平明显低于对照组(0.016%±0.007%vs 0.031%±0.011%,t=3.144,P<0.01)。血浆NO浓度亦显著下降(19.66±2.78μmol/L vs 54.31±3.81μmol/L,t=20.784,P<0.01)。二者之间呈正相关(r=0.792,P<0.05)。结论 PH的发生可能与血浆NO浓度降低导致循环EPC水平下调有关。     

COPD并发肺动脉高压病人外周血内皮祖细胞数量和功能的变化

目的观察慢性阻塞性肺疾病（COPD）并发肺动脉高压（PAH）病人外周血内皮祖细胞（EPC）数量和功能的改变,探讨其在COPD并PAH发病中的作用。方法选择非COPD非PAH（非COPD组）病人15例、COPD非PAH（COPD组）病人15例、COPD并PAH（COPD＋PAH组）病人30例,用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被培养板上,培养7d后对贴壁细胞进行细胞化学分析。通过集落形成试验、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验计数EPC的数量、测定EPC的迁移和黏附能力。结果与非COPD组及COPD组相比,COPD＋PAH组外周血EPC数量明显减少,黏附和迁移能力显著降低,差异有显著性（F=9.79～15.42,q=3.578～7.963,P〈0.05）;且EPC数量及黏附、迁移能力与肺动脉压力呈负相关（r=-0.87、-0.89、-0.93,P〈0.01）。结论COPD病人PAH的发生可能与循环EPC数量减少、迁移和黏附能力降低有关,EPC数量和功能可作为评价COPD并PAH病人预后的一项指标。     

妊娠高血压综合征患者循环内皮祖细胞功能的研究

目的研究妊娠高血压综合征患者循环内皮祖细胞功能的变化。方法选择2010年10月～2011年8月于我院产科住院的妊娠高血压综合征患者12例作为研究对象（妊娠高血压综合征组）,同时选取12例正常妊娠的同期入院患者作为对照组。分离两组患者外周血单个核细胞进行体外诱导培养以获得内皮祖细胞,并对其增殖、黏附、迁移能力进行检测。结果各组骨髓单个核细胞在体外培养下均能够获得内皮祖细胞．与对照组比较,妊娠高血压综合征组内皮祖细胞增殖、黏附、迁移能力均有不同程度的下降。结论妊娠高血压综合征的发生与循环内皮祖细胞功能的下调存在明显的相关性。     

脑出血急性期内皮祖细胞形态学和功能变化及其意义

目的 探讨高血压脑出血急性期患者外周血来源的内皮祖细胞动态形态学和功能变化及其意义.方法 分离、诱导分化高血压脑出血急性期患者和高血压患者外周血内皮祖细胞,动态观察两组内皮祖细胞形态学变化,检测两组患者内皮祖细胞集落和计数、黏附、增殖及迁移能力并进行对比研究.结果 高血压脑出血组内皮祖细胞集落计数为(5.87±0.55),细胞计数为(74.73±11.38),黏附能力为(26.13±5.13),增殖能力为(0.273±0.060),迁移能力为(15.83±2.02);高血压组内皮祖细胞集落计数为(1.73±0.24),细胞计数为(56.70±9.72),黏附能力为(19.97±3.07),增殖能力(0.192±0.058)而迁移能力为(10.33±2.30).两组相比,脑出血组内皮组细胞功能明显增强,具有显著性统计学差异(P<0.05或P<0.01).与高血压组相比,脑出血组内皮祖细胞和集落出现较早,集落体积较大和典型,细胞密度较大.结论 高血压脑出血急性期患者内皮祖细胞数目增多,黏附、增殖和迁移功能增强.这可能有助于血管损伤的修复和再生.     

自发性高血压大鼠骨髓来源内皮祖细胞生物学特性研究

目的:观察14周龄自发性高血压大鼠(SHR)体外培养骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)数量及功能的变化。方法:随机将自发性高血压大鼠及正常血压WKY大鼠分为2组,每组各12只。以密度梯度离心法分离骨髓来源单个核细胞体外培养,差速贴壁法培养后收集二次贴壁细胞并行鉴定为骨髓来源内皮祖细胞,测定EPCs数量、增殖活力(CCK8法)、迁移、黏附能力和NO分泌功能。结果:14周龄SHR骨髓来源EPC数量与14周龄WKY大鼠比较明显减少(P<0.01),细胞增殖、迁移、黏附能力和NO分泌能力受损(P<0.01)。结论:14周龄SHR大鼠比Wistar大鼠骨髓来源内皮祖细胞数量减少,功能减退。     

辛伐他汀治疗激素性股骨头坏死患者的效果观察及对循环内皮祖细胞功能的影响

目的探讨辛伐他汀治疗激素性股骨头坏死的临床疗效及其对循环内皮祖细胞功能的影响。方法选择华北油田总医院骨科2010年2月～2012年10月诊治的激素性股骨头坏死患者24例,随机分为治疗组及对照组,每组各12例,同时设立12例正常组。所有患者均予常规治疗,治疗组在常规治疗基础上加用辛伐他汀治疗。采用Harris评分对其临床疗效进行评估,同时对各组患者治疗前后循环内皮祖细胞的体外增殖、黏附、迁移能力进行检测。结果治疗组及对照组循环内皮祖细胞的体外增殖能力[（0.52±0.14）和（0.53±0.17）]、黏附能力[（5.93±1.67）个/HPF和（5.67±1.58）个/HPF]、迁移能力[（6.28±1.53）个/HPF和（6.64±1.75）个/HPF]均较正常组[（0.76±0.13）、（13.42±3.15）个/HPF、（13.62±3.73）个/HPF]显著下调,差异均有高度统计学意义（均P〈0.01）。治疗组经辛伐他汀治疗12周后其循环内皮祖细胞的体外增殖能力（0.72±0.15）、黏附能力[（11.93±3.45）个/HPF]、迁移能力[（10.56±3.09）个/HPF]较对照组[（0.62±0.11）、（8.51±3.63）个/HPF、（7.48±3.13）个/HPF]显著上调,差异均有高度统计学意义（均P〈0.01）;同时治疗组Harris评分[（93.47±4.06）分]也明显高于对照组[（87.63±3.59）分],差异有统计学意义（P〈0.05）。结论辛伐他汀能够通过显著改善激素性股骨头坏死患者循环内皮祖细胞的功能状态,从而实现对该疾病的有效治疗。     

血管内皮生长因子对大鼠骨髓内皮祖细胞生物学特性的影响

目的 观察内皮祖细胞(EPC)在不同浓度血管内皮生长因子(VEGF)作用下的生物学特性,探讨VEGF对EPC生物学特性的影响.方法 采用密度梯度离心法获取鼠骨髓单个核细胞,培养7 d后收集贴壁细胞鉴定EPC,用含不同浓度VEGF(0、10、50 ng/ml)的培养基继续培养.采用MTT比色法、Transwell小室实验观察EPC的增殖和迁移能力,应用纤维蛋白凝胶观察EPC体外血管形成能力,流式细胞术检测EPC的分化能力.结果 培养7 d的细胞CD133和CD34阳性率分别为69.44%和81.05%.MTT实验显示,10 ng/ml组细胞的吸光值明显大于0 ng/ml组和50 ng/ml组,0 ng/ml组的吸光值明显大于50 ng/ml组(P＜0.05);迁移实验、体外血管形成实验及诱导分化实验显示,50 ng/ml组和10 ng/ml组较0 ng/ml组更能促进EPC的迁移、体外血管形成及诱导分化,且50 ng/ml组强于10 ng/ml组(P＜0.05).结论 VEGF能够提高EPC迁移能力、体外血管形成能力及促进诱导分化,且随着VEGF浓度的升高而增强.VEGF能够提高EPC增殖能力,但随着浓度的升高而减弱.     

高血压患者循环内皮祖细胞改变与Ang-1／Tie-2表达的关系研究

目的研究Ang-1／Tie-2在高血压患者外周血中内皮祖细胞的表达及其调控意义。方法选择医院2012年原发性高血压患者30例为观察组,正常体检人群30例为对照组。测定外周血中内皮祖细胞数量和增殖活性,RT—PCR法和Western-blot法检测Ang-1／Tie-2表达。结果观察组内皮祖细胞数量和增殖活性为（6．17±0．89）×103／L和0．784-0．25,低于对照组（6．94±1．12）×103／L和1．14±0．36（P〈0．05）。观察组内皮祖细胞Ang-1和Tie-2的OD值分别为1．65±0．97和4．32±0．84,均低于对照组2．37±1．52和5．02±1．18（P〈0．05）;观察组内皮祖细胞Ang-1和Tie-2的蛋白表达分别为0．06±0．02和0．09±0．04,均低于对照组0．21±0．05和0．20±0．03（P〈0．05）。结论高血压患者内皮祖细胞数量减少,活性减弱,且内皮祖细胞上Ang-1／Tie-2表达下降,提示Ang-1／Tie-2通路的下调可能影响内皮祖细胞的修复功能。     

外周血内皮祖细胞移植对肺动脉高压兔模型肺动脉压力及其结构的影响

目的探讨外周血内皮祖细胞(EPCs)移植对野百合碱导致的兔模型肺动脉高压的治疗效果。方法选取健康新西兰兔50只,随机将其分为3组:(1)正常对照组(n=16);(2)野百合碱诱导肺动脉高压组(MCT模型组,n=16);(3)EPCs治疗组(n=18)。EPCs治疗组兔行外周血单个核细胞成功诱导、分化为内皮祖细胞之后,将其从兔尾静脉注入进行移植,正常对照组及MCT模型组注射相同剂量生理盐水3周后对3组肺动脉压、右心室肥大指数以及肺血管重构的情况进行观察与对比。结果与正常对照组比较,MCT模型组肺动脉压升高(30.13 mm Hg±3.12 mm Hg vs.15.99 mm Hg±2.23 mmHg),右心室肥大指数增大(0.51±0.06 vs.0.26±0.03),肺动脉管壁厚度增加(28.77μm±4.35μm vs.8.44μm±0.05μm),肺小动脉厚度增加(73.78μm±7.61μm vs.40.16μm±2.17μm),差异均有统计学意义(P<0.05)。与MCT模型组比较,EPCs治疗组各项指标均显著改善,肺动脉压为(22.78±2.71)mm Hg,右心室肥大指数为(0.41±0.05),肺动脉管壁厚度为(16.55±3.15)μm,肺小动脉厚度为(53.50±3.77)μm,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论外周血内皮祖细胞移植治疗兔模型肺动脉高压,可在一定程度上修复损伤的肺血管系统,有利于改善肺动脉高压。     

巴桑母酥油丸对放射线-化学复合损伤小鼠造血干细胞移植后重建造血能力的影响简

目的 研究藏药巴桑母酥油丸对放射线-化学复合损伤后机体骨髓造血干细胞功能的影响,探究其“补益”作用机制.方法 将经60Co γ射线照射＋环磷酰胺腹腔注射方法得到的放射线-化学复合损伤小鼠分为巴桑母酥油丸组、生理盐水组、空白组,分别灌胃巴桑母酥油丸、生理盐水及自然恢复14d后,将其骨髓作为供体移植给受致死剂量γ射线照射的同种受体小鼠,再检测受体小鼠外源性脾集落、骨髓造血祖细胞集落产率、骨髓细胞造血干细胞抗原-1（Sca-1）阳性细胞率,并与灌胃.结果 巴桑母酥油丸组的外源性脾集落、骨髓早期红系祖细胞集落（BFU-E）、粒-巨噬系祖细胞集落（CFU-GM）产率均显著高于空白组和生理盐水组（P＜0.05）,而晚期红系祖细胞集落（CFU-E）、巨核系祖细胞集落（CFU-Meg）、骨髓细胞Sca-1＋细胞率并不离于自然恢复的空白组（P＞0.05）.结论 巴桑母酥油丸可以提高放射线-化学复合损伤小鼠骨髓造血干细胞移植后造血重建能力,提示巴桑母酥油丸可经改善骨髓造血干细胞功能发挥其对放射线-化学复合损伤机体“补益”作用.     

吸烟对老年COPD患者肺功能和气道炎性反应的影响

目的探讨吸烟对老年慢性阻塞性肺病(COPD)患者肺功能和气道炎性反应的影响。方法对2007—2011年住院的212例老年COPD患者肺功能检查和临床资料进行回顾性研究,其中吸烟组110例,不吸烟组102例,调查吸烟与老年COPD患者肺功能和气道炎性反应的关系。结果 (1)肺功能分级:不吸烟组包括轻度68例(66.7%),中度23例(22.5%),重度11例(10.8%);吸烟组包括轻度35例(31.8%),中度20例(18.2%),重度55例(50.0%),2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2)肺功能指标:与不吸烟组比较,吸烟组FEV1/FVC降低,RV%、RV/TLC、TLC增加,差异有统计学意义(分别为58.01%±13.71%vs 45.02%±11.98%,2.71%±1.29%vs4.45%±1.62%,60.16%±9.00%vs 66.75%±1 1.47%,4.35L±1.62L vs 6.45L±1.86L,P<0.05,P<0.01)。(3)炎性因子:与不吸烟组比较,吸烟组CRP、IL-8、TNF-α水平均升高,差异有统计学意义[分别为(11.0±3.5)mg/Lvs(7.3±2.9)mg/L,(1.23±0.53)ng/ml vs(0.59±0.16)ng/ml,(2.42±0.98)ng/ml vs(1.92±0.71)ng/ml,P<0.01]。结论吸烟与COPD发病有着密切的关系,吸烟人群中重度COPD比例明显增多,其气道炎性因子水平叫显升高。     

普伐他汀对培养人内皮祖细胞药理作用的影响

目的观察普伐他汀对培养人内皮祖细胞（EPC）数量、增殖、迁移、黏附及一氧化氮（NO）合成能力的影响。方法采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,贴壁筛选法培养内皮祖细胞,培养7d后收集细胞并分别加入普伐他汀10μmol／L及100μmol／L,干预48h,免疫组化、荧光显微镜和流式细胞仪鉴定内皮祖细胞,分别观察内皮祖细胞的数量、增殖迁移黏附能力、细胞内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、mRNA的表达以及培养液中NO的水平。结果普伐他汀组促进外周血内皮祖细胞扩增,并显著改善外周血内皮祖细胞的黏附、迁移、增殖以及eNOSmRNA表达和NO合成的能力。结论他汀类药物可增加培养人内皮祖细胞数量并改善其功能。     

三氧化二砷对HBx-Hep G_2细胞侵袭转移能力的影响

目的探讨三氧化二砷(As_2_3)对HBx—Hep G_2细胞体外黏附、侵袭、迁移能力的影响及其机制。方法慢病毒介导构建HBx—Hep G_2细胞模型,免疫细胞化学法检测HBx蛋白表达,分别采用MTT法、Transwell小室检测As_2O_3对HBx—Hep G_2细胞黏附、迁移、侵袭能力的影响,免疫组化方法检测As_2O_3作用前后HBx-Hep G_2细胞CD44V6表达的改变。结果构建后的HBx—Hep G_2细胞呈现HBx阳性信号,主要分布于胞浆,无局部高浓度聚集。随着As_2O_3作用时间的延长及浓度增加,HBx—Hep G_2细胞对Matrigel的黏附能力也随之增加;与作用前相比,As_2O_3作用后HBx—Hep G_2细胞游走与穿透基底膜的能力明显受抑制[(128±8)vs.(102±7)、(96±5)vs.(85±6)]个/HP(P<0.05);与As_2O_3作用前比较,H-SCOKE及阴性表达率均下降[(3.75±0.55)vs.(2.54±0.68)、(92.65±4.86)%vs.(63.27±5.98)%]能抑制HBx—Hep G_2细胞CD44v6的表达(P<0.05)。结论 As_2O_3能抑制HBx-Hep G_2细胞与细胞的黏附、迁移和侵袭能力,其抑制作用可能与CD44v6的表达下调有关。     

表面修饰PET材料对骨髓间充质干细胞增殖、迁移能力的影响及其机制研究

目的：研究表面修饰聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）材料对骨髓间充质干细胞增殖、迁移能力的影响及机制。方法：取SD大鼠进行骨髓间充质干细胞培养,并参考Atthoff的方法进行PET材料表面修饰;表面修饰的PET材料与骨髓间充质干细胞复合培养为观察组,常规PET材料与骨髓间充质干细胞复合培养为对照组,通过MTT的方法检测细胞活力,划痕试验检测细胞迁移能力,Western-blot的方法检测基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、半胱氨酸蛋白酶-9（Caspase-9）的蛋白水平。结果：观察组细胞的细胞活力、迁移能力均高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;观察组细胞的MMP-2、MMP-9含量高于对照组,Caspase-3、caspase-9含量低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：表面修饰的PET人工韧带体与间充质干细胞复合培养有助于增强细胞的迁移和增殖能力,MMP-2、MMP-9、Caspase-3、Caspase-9是其可能的分子机制。