新疆昌吉部分地区动物感染恙虫病东方体调查

目的了解新疆昌吉部分地区野生动物自然感染恙虫病东方体（Ot）的情况。方法采用多种方法捕鼠类,提取DNA,应用巢式PCR检测Ot-Sta56基因;阳性核苷酸序列片段测序,通过美国国家生物技术信息中心网站对基因序列进行BLAST比较分析。结果共捕获鼠432只、鸟类53只,仅在木垒县的鼠类、鸟类脾样本中检测到阳性片段,感染率分别为5.3%、11.1%;其他县市未检测到阳性。DNA序列分析表明,鼠类、鸟类阳性标本中扩增产物的核苷酸序列相同,碱基长度均为442bp。BLAST表明目的基因与Karp型的碱基序列同源性最高（98.5%）,应属于Karp型。结论新疆昌吉地区木垒县啮齿类及鸟类动物中可能存在Ot感染。     

应用分子生物学方法对黑线姬鼠体内恙虫病东方体基因型分析

从野外优势鼠种黑线姬鼠分离到的恙虫病东方体 (Orientiatsutsugamushi,Ot)与恙虫病人Ot分离株血清型别相同。为进一步从分子水平了解黑线姬鼠的宿主作用 ,采用Nested PCR结合限制性内切酶片段长度多态分析 (RFLP)技术对Ot Sta5 6基因型进行分析。Gilliam、Karp、Kato 3株国际参考株由北京军事医学科学院流行病与微生物学研究所提供。 4株Ot(FXS1、FXS2、FXS4、ZPS1株 )分离自山东费县、邹平县农田黑线姬鼠。上述毒株均于 30℃冰箱冻存。根据Ot Sta5 6外膜蛋白基因部分序列设计引物 ,由上海生工生物公司合成。Ot DNA的提取 ,…     

新疆部分地区人群及动物感染恙虫病东方体调查

目的调查新疆部分地区人群及动物感染恙虫病东方体（Ot）情况,并对媒介昆虫进行调查。方法采用多种方法捕获可能感染Ot动物取脾,当地牧民静脉取血,从野鼠体表捕获恙螨,用试剂盒提取DNA,应用巢式PCR（nPCR）检测Ot-Sta56基因;接种昆明小白鼠进行Ot病原传代分离。结果共采取人群血液2430份,在6份血液中检测并分离到Ot;捕获动物13种5783个（只）,从5种啮齿动物（小家鼠、灰仓鼠、大砂土鼠、草原兔尾鼠、灰旱獭）、2种鸟类（麻雀、灰腹鹡鸰）的脾中检测并分离到Ot,从绵羊血液中检测到Ot。其他动物体内未检测到Ot。从野鼠体表分离恙螨5种,从博乐纤恙螨体内检测分离到Ot。基因序列分析表明,新疆地区存在恙虫病东方体的基因型以Karp型为主,可能存在Saitama型。结论新疆地区存在人群及动物感染Ot,其基因型以Karp为主,可能存在Saitama型。     

中哈边境阿拉山口口岸小型兽类感染巴尔通体调查研究

为研究阿拉山口口岸小型兽类巴尔通体感染情况,对捕获的75只小型兽类进行形态学鉴定后,提取肝脏和脾脏核酸扩增巴尔通体Bartonella枸橼酸合酶基因(gltA),通过阳性序列的比对进行巴尔通体分子鉴定和序列分析。结果显示,阿拉山口口岸小型兽类巴尔通体感染率为9.33%(7/75),分别为大沙鼠3只、小家鼠2只、红尾沙鼠1只、小林姬鼠1只。经测序,7份阳性样本获得的巴尔通体分属于伊丽莎白巴尔通体、格拉汉姆巴尔通体、抚远巴尔通体和泰勒巴尔通体4种,其中3个阳性为伊丽莎白巴尔通体,各鼠种巴尔通体感染率无显著性差异。伊丽莎白巴尔通体和格拉汉姆巴尔通体为鼠传人类致病性巴尔通体,应通过灭鼠、灭蚤以降低巴尔通体自然宿主或传播媒介的密度,防止巴尔通体在国境口岸的传入传出。     

合肥首例恙虫病病人血中东方体56kDa外膜蛋白部分基因的扩增及进化分析

采用恙虫病胶体金快速诊断试剂对安徽省合肥市一例不明原因发热病人血清进行检测,从该病人血块中提取DNA为模板,用恙虫病东方体特异性引物,PCR扩增出56 kDa外膜蛋白部分基因,将扩增目的片段克隆至T载体进行测序并进行基因进化分析.结果显示,该病人血清中抗恙虫病东方体总抗体、抗东方体IgG及抗东方体IgM阳性;患者给予强力霉素治疗后迅速退热.采用PCR从病人血标本中扩增出1 320 bp东方体56 kDa外膜蛋白基因片段,将基因片段测序结果在NCBI上做BLAST比对,显示该基因序列与昆明株和内蒙古株同源基因序列完全一致;进化树分析显示该序列与标准株Kuroki位于同一个分支.研究确认该发热病例为合肥市报告的首例恙虫病,其感染的恙虫病东方体为Kuroki型,推测合肥市可能为恙虫病新疫区.     

恙虫病东方体Sta56抗原的原核表达、纯化及其在间接ELISA中的应用

目的　构建含恙虫病东方体sta5 6基因的重组表达质粒 ,在E .coli中表达Sta5 6重组抗原 ,纯化后用于间接ELISA检测恙虫病。方法　从含有恙虫病东方体Karp株sta5 6基因的重组质粒TOPO sta5 6扩增出截短的sta5 6 ,定向插入pET30a载体 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达 ,用SDS PAGE及Westernblot进行分析 ;采用电洗脱方法纯化重组抗原并应用于间接ELISA检测恙虫病。结果　以截短的sta5 6基因片段构建了重组表达质粒pETOt95 7,重组的Sta5 6抗原可在E .coli中以融合蛋白的形式有效表达 ,SDS PAGE显示了一条相对分子质量 (Mr)为 4 0 .3× 10 3 的蛋白表达带 ,West ernblot证实该融合蛋白能被恙虫病患者阳性血清所识别。电洗脱纯化的重组抗原应用于间接法ELISA检测恙虫病 ,与间接免疫荧光法IFAT比较 ,其敏感性和特异性分别为 91.7%和 76 .5 %。结论　在大肠杆菌中表达的Sta5 6重组抗原具有免疫反应性 ,纯化后可用作免疫诊断试剂。     

新疆伊犁那拉提草原啮齿动物感染恙虫病东方体调查

为了解新疆伊犁那拉提草原啮齿动物中自然感染恙虫病东方体(Ot)的情况,在那拉提草原捕获鼠和旱獭,分别取其脾组织提取DNA,应用巢式PCR(nPCR)方法检测Ot-Sta56基因;基因分型引物扩增阳性片段,判断该地区存在的Ot基因型,部分阳性标本测序,通过NCBI网站对序列进行BLAST比较分析.结果显示,在该地区共捕获...     

江苏地区2011年恙虫病暴发的分子流行病学研究

恙虫病是由携带恙虫病东方体的恙螨幼虫叮咬而传播的自然疫源性虫媒传染病.2006年江苏省盐城市滨海县出现恙虫病局部暴发,至2010年,我省恙虫病疫情较平稳,全年病例数维持在150例左右.2011年全省恙虫病病例出现大幅增加,共计报告临床诊断病例500人.本研究对2011年92份恙虫病临床标本进行核酸分子鉴定,在56-kDa基因序列分析的基础上揭示了病原的分子流行特征,为进一步监测和防控提供实验依据.     

深圳市HFRS疫源地鼠携带汉坦病毒与人感染汉坦病毒的基因特征对应性研究

目的 了解深圳市肾综合征出血热(HFRS)疫源地鼠携带汉坦病毒与人感染汉坦病毒二者的病原学特征及联系,为HFRS的防控提供科学依据.方法 收集疑似HFRS病人急性期血清标本,并在相同区域开展笼日法捕鼠,无菌取鼠肺.分别采用ELISA和直接免疫荧光法筛选阳性标本,选择代表性血清标本以及鼠肺标本进行逆转录-套式聚合酶链反应(RT-nested PCR)扩增部分M和S片段及核苷酸序列测定,与国内外的汉坦病毒毒株一起进行同源性比对和系统进化树分析.结果 472份鼠肺经直接免疫荧光检测共获得阳性鼠肺47份,带毒率为9.96%.对60份IgM抗体阳性的血液标本进行RT-nested PCR扩增,检出12份阳性,阳性率为20%.从代表性的8份鼠肺和8份病人血清中提取的标本二者之间M片段核苷酸序列的同源性高达95%以上,S片段之间的同源性高达96.5%以上.其推导的氨基酸序列同源性分别为98.0%～100%、98.4%～100%.深圳市HFRS疫源地鼠携带的汉坦病毒和人感染汉坦病毒均为汉城型S2亚型.结论 深圳市流行的汉坦病毒为SEO型S2亚型.无论是同一地区的鼠和人之间,还是不同地区的鼠和人之间,汉坦病毒都是具有较高的同源性.     

恙虫病临床诊治特点及预防

恙虫病是由恙螨叮咬,感染恙虫病东方体引起的一种自然疫源性传染病。它常常以急性发热、常伴皮疹或焦痂、对抗生素治疗敏感为特征,若救治不及时可能导致严重的多器官衰竭甚至高达70%的死亡率。延迟救治是导致恙虫病患者高死亡率的主要原因。恙虫病往往无典型症状,易与其他地区性疾病混淆,且临床诊断手段相对落后,易被忽视。本文针对恙虫病的病原体、临床诊治特点及防控策略进行文献综述,以加强公众和临床医生对恙虫病的认识,提高该疾病的诊断水平,降低恙虫病的重症率和死亡率。     

甘肃南部部分地区Q热分子流行病学调查研究

为了解甘肃南部部分地区人群、媒介及宿主动物中Q热贝氏柯克斯体感染情况,采用布旗法和夹夜法分别采集蜱、野栖鼠标本,并收集当地居民及家畜血液标本.应用巢式PCR方法扩增蜱及野栖鼠标本中Q热立克次体,共检测6种蜱1 273只,其中若蜱1 126只,成蜱147只蜱标本,若蜱67组中有5组检测到Q热病原体DNA片段.成蜱中17只检测阳性;42只野栖鼠中2个鼠种3只检测阳性;采用间接免疫荧光法进行血清Q热抗体检测.共检测当地居民血清446份,抗体阳性29份;不同职业阳性率存在差异,以牧民的阳性率为最高.共检测家畜血液标本326份,其中牛56份,阳性5份;羊270份,阳性29份,无显著差别.饲养牛羊、牛羊不明原因流产、接生时保护措施3个因素与血清阳率有关,其中前两个因素为危险因素,后者为保护因素.     

河北省人感染汉坦病毒G2片段基因分型及序列特征分析

目的 了解河北省人感染汉坦病毒的基因型和基因亚型.方法 根据76～118株和R22株的C2编码区设计型特异性引物,利用RT-nested PCR技术对采集的HFRS患者中汉坦病毒抗体阳性的血清标本进行检测及基因分型,从中选取部分标本的扩增产物纯化回收后进行核苷酸序列测定,用DNAStar软件包进行基因分析.结果 69份阳性血清标本经RT-nested PCR检测17份阳性,检出率为24.64%,其中≤7 d的标本检出率为34.29%,8～14 d的检出率为19.23%,≥14 d的未能检出.17份阳性标本均为SEO型.对其中9份扩增产物的G2区测序后表明,9份血清标本的同源性为92.0%～100.0%,其中HeB7与其他8份标本的同源性为92.0%～95.0%,属不同亚型,与R22的同源性为97.7%,同属于S1亚型;除HeB7外其余8份标本同源性高达95.7%～100%,同属于S3亚型.9份标本与76～118株的同源性仅为70.3%～72.7%.结论 河北省人感染汉坦病毒以SEO型为主,亚型以S3为主,也存在S1亚型.在一定范围内,同型汉坦病毒基因相对保守,具有区域稳定性特征.     

长沙地区1986-2000年钩端螺旋体病监测结果分析

目的探讨钩端螺旋体病的流行因素与防治措施.方法用公认的方法进行鼠情调查和对病人、动物进行病原学、血清学研究.结果①疫情在监测的15年中湖南全省年均发病率为9.86/10万,此期间有2个发病高峰年;长沙地区则年均发病率为19.06/10万,近全省发病率的2倍.1992年-2000年9年中有7年发病率高于全省发病率.②鼠情监测共布鼠夹11803只,捕鼠747只,鼠密度为6.33%,流行前期、后期鼠密度差异无显著.③病原学监测对717例钩体病人采血作钩体培养,阳性124份,阳性率17.29%,至少分属8个血清群,以流感伤寒和秋季热群为主;从416只鼠的肾中分离出49株钩体菌株,阳性率为11.78%,至少分属5个血清群,以黑线鼠携带黄疸群为主,其次为黄毛鼠携带爪哇群,占14.29%;从40只家犬肾中分离钩体菌9株,带菌率为22.50%,鼠与犬带菌率差异无显著.对72头猪117只蛙取肾培养,未获阳性结果.④血清学监测检测钩体病人双份血清抗体,黄疸出血群、犬群、澳洲群、波摩那群、流感伤寒群、七日热群6个群抗体均数差异有非常显著;爪哇群其抗体差异显著;在对动物血清抗体调查中,检测了犬、猪、牛分别为40、30、25头.具有某一抗体阳性的分别为60%、53.33%和84%,其差异有显著.犬抗体分属6个血清型,以澳洲为主;猪则分属5个血清型,以巴达维亚为主;牛分属11个血清型,以巴达维亚为主.结论①长沙地区在15年监测中平均发病率为全省的2倍左右,除个别年度外几乎每年发病率都较高,是湖南省的典型代表.②鼠类尤其是优势鼠种黑线姬鼠、犬、猪和牛是主要传染源.③病人血培养结果显示,感染菌群非常复杂,至少有8个钩体菌群.④用现行的四价菌苗接种易感人群其作用有限.     

青海省分离到肠道病毒71型及其VP1区基因特征分析

目的 研究2008年青海省手足口病（Hand,Foot and Mouth Disease,HFMD）的致病病原体中肠道病毒71型（Human Enterovirus 71,HEV71）的VP1区基因特征.方法 采集青海省HFMD患者的粪便、疱疹液和咽拭子标本共335份,并进行病毒分离,然后对阳性分离株病毒进行肠道病毒血清型别的分子定型.对分离到的HEV71阳性分离株进行VP1编码区基因扩增,核苷酸序列测定和同源进化分析.结果 在335份临床标本中,共分离到45株阳性病毒分离物,其中30株鉴定为HEV71（占66.7%）,是主要病原体.对30株HEV71进行VP1区核苷酸序列测定后,分析发现它们在VP1区核苷酸水平和氨基酸水平上有一定差异,同源性分别在95.2%～100.0%和96.6%～100%之间.它们与1998年以来在我国分离的HEV71在核苷酸和氨基酸水平上的同源性都较高.与其他35株各基因型和基因亚型的HEV71代表株构建的亲缘进化树中显示,青海省HEY71分离株与C4亚型代表株聚为一簇,属于C4基因亚型C4a进化分支.结论 青海省从HFMD病例中分离到HEV71,也确认了青海省HFMD的病原体HEV71流行株的基因型为C4基因型中的C4a进化分支,并且存在多个传播链.     

妊娠滋养细胞疾病中拓扑异构酶Ⅱα与Ki-67的免疫组织化学研究

一、材料与方法1.病例选择 :复习解放军总医院、香港大学玛丽医院和河北医科大学附属医院病理科存档的妊娠滋养细胞肿瘤 ,选择资料完整的 76例。其中 ,伴有绒毛水肿的流产 15份、部分性葡萄胎 2 0份、完全性葡萄胎 2 0份、侵蚀性葡萄胎 13份和绒癌 8份。除侵蚀性葡萄胎和绒癌为子宫切除标本外 ,余均来源于刮宫标本。所有标本均经 4%甲醛固定 ,石蜡包埋。同时选择妊娠早期和妊晚期正常胎盘作为对照组。2 .免疫组织化学方法 :采用枸橼酸 微波 ＡＢＣ法 ,检测鼠抗人拓扑异构酶 (ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ ,Ｔｏｐｏ)Ⅱα(单抗Ｋｉ Ｓ1,1∶2 0…     

北京市平谷区农村社区医院恙虫病筛查结果分析

在恙虫病疫区农村社区医院开展恙虫病早期感染病例筛查研究,选择北京市平谷区发病率较高的王辛庄镇、峪口镇、黄松峪乡、金海湖镇的乡镇卫生院作为筛查医院(筛查组),选择法定传染病疫情报告网(中国疾病预防控制信息系统)疫情上报医院平谷区医院和中医院作为对照组医院,比较同一地区社区筛查和临床诊断恙虫病病例特征的差异,为临床诊疗提供依据。在筛查组和对照组医院选择有流行病学史,具有发热、淋巴结肿大或皮疹的患者作为研究对象,采集患者的血液标本,采用ELISA和PCR法开展检测。2016年平谷区通过疫情网(对照组)报告恙虫病病例156例,同年9—11月份通过社区筛查发现恙虫病实验室检测阳性病例58例,社区监测病例总体阳性检出率为49.57%,其中9—11月病例阳性检出率分别为38.46%、65.22%和42.11%。两种发现途径的病例性别构成无统计学差异,社区筛查病例中农民构成比高于疫情网报病例(χ~2=11.042,P=0.026),监测病例诊断时间早于疫情网报病例。恙虫病早期感染病例临床症状不典型,应在接诊医生和高危人群中开展宣教,密切关注疾病进展,有助于早期诊疗。     

天津地区腹泻患儿病原体感染情况和流行病学特征分析

目的了解天津地区腹泻患儿病原体的感染情况和流行病学特征。方法收集2017年8月至2018年7月天津市儿童医院1 466例腹泻患儿粪便标本, 对所有标本进行5种肠道相关病原体(诺如病毒、轮状病毒、艰难梭菌毒素、腺病毒和星状病毒)检测。结果所检1 466份标本中, 627份标本肠道病原体核酸检测为阳性, 阳性率为42.8%。其中, 诺如病毒检出率最高, 为26.3%, 其次依次为轮状病毒(15.3%)、艰难梭菌毒素(4.6%)、腺病毒(4.1%)和星状病毒(1.84%), 感染存在明显季节性。不同性别之间患儿5种病原体阳性检出率相似, 不同年龄之间只有诺如病毒和轮状病毒的阳性检出率有统计学意义(P<0.05)。混合感染共110例, 以诺如病毒和轮状病毒混合感染最为常见, 共37例。结论天津地区婴幼儿感染性腹泻病原谱复杂多样, 主要病原体为诺如病毒和轮状病毒。     

西安地区汉坦病毒L及S部分片段的编码序列分析

应用巢氏PCR法从陕西西安地区间接免疫荧光抗原初检为阳性的黑线姬鼠标本中扩增汉坦病毒的L和S片段部分序列。序列分析显示：不同标本来源的汉坦病毒均为汉滩型病毒,彼此之间L和S部分片段序列同源性较高,与贵州地区优势汉滩型病毒S2／L4群毒株同源性最高,分别为95．0％～97．0％和97．7％～99．3％,但与该地区已报道的汉坦病毒同源性较低。系统发育树显示：所有来自西安的病毒株处在同一个进化分支上,但可分成两个较小的分支。证实目前检测到的西安地区流行的汉坦病毒株与贵州地区汉滩型病毒株亲缘关系最近,而与当地既往流行毒株的差异较大,究竟是西安地区汉坦病毒流行株发生了变化还是当地同时流行多种毒株还有待于进一步研究证实。     

一起不明原因感染性腹泻疫情的病原学诊断

目的 明确一起不明原因感染性腹泻疫情的病原体及其基因型别.方法 通过流行病学调查的方法,查明罹患率.对28例疑似病例的28份样本(粪便22份,呕吐物3份,肛拭子3份)采用RT-PCR方法进行诺如病毒核酸检测,并对5份阳性标本的核酸进行序列测定及遗传进化分析.结果 在调查的5694人中,发病160例,罹患率为2.81%.2007年3月7-9日为发病高峰.RT-PCR检测28份样本中,确定14份为阳性.对其中的5株毒株的核酸序列测定及序列遗传进化分析确定为GⅡ/4型诺如病毒,并与2006年诺如病毒流行株2006b同源性最高,为97.9%.结论 本次感染性腹泻疫情由诺如病毒引起.     

河北省鼠携带汉坦病毒G2片段基因分型及序列特征分析

目的 了解河北省肾综合征出血热(HFRS)疫源地宿主动物所携带汉坦病毒的基因型和基因亚型.方法 根据76-118株和R22株的保守序列设计型特异性引物,用RT-nested PCR从IFA筛选的阳性鼠肺中扩增部分M片段,经琼脂糖凝胶电泳进行基因分型,并从中选取部分扩增产物纯化回收后进行核苷酸序列测定,用DNAStar软件包进行基因分析.结果 32份经IFA筛选阳性的鼠肺标本经RT-nested PCR扩增出418bp特异性目的 片段,均为SEO型.10份扩增产物测序结果 表明G2片段变异不大,同源性高达98.0%～100%,与R22株和76-118株的同源性分别为93.3%～94.3%和67.7%～69.0%.结论 依据G2片段,河北省HFRS疫源地汉坦病毒基因型以SEO型病毒为主,主要为S3亚型,同亚型病毒基因高度同源,遗传物质相对稳定.不同鼠种可携带同亚型汉坦病毒.