内皮素受体拮抗剂阿魏酸钠对人肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质的影响

目的:探讨内皮素受体拮抗剂阿魏酸钠对人肾小球球内系膜细胞增殖与细胞外基质的影响。方法:采用人肾小球系膜细胞(MC)体外培养技术和血清药理学方法,观察内皮素受体拮抗剂阿魏酸钠对MC增殖和细胞外基质(ECM)不同成分的影响。结果:阿魏酸钠对MC增殖和ECM合成均具有显著的抑制作用,在等效剂量浓度下,抑制效应优于苯那普利。结论:MC是阿魏酸钠发挥治疗作用的重要靶细胞,抑制MC增殖和ECM合成是阿魏酸钠延缓肾小球硬化的重要作用机制之一。     

高糖对肾小管上皮细胞系细胞因子表达的影响

目的观察高糖诱导肾小管上皮细胞中转化生长因子β1(TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-Cadherin)的改变及酪氨酸激酶(JAK)抑制剂AG490对其的影响。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞系(HKC),分别给予高糖和AG490干预,采用免疫沉淀和Western blot检测JAK2磷酸化的表达;Western blot检测α-SMA、E-cadherin及信号蛋白STAT1、STAT3等的水平;ELISA法测定细胞上清液中TGF-β1和Ⅰ型胶原的分泌;RT-PCR检测TGF-β1mRNA表达。结果与低糖组比较,高糖培养HKC中α-SMA、p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3表达明显上调,E-Cadherin表达明显下调,TGF-β1mRNA表达增加;细胞上清液中TGF-β1、Ⅰ型胶原分泌增加。AG490明显抑制高糖刺激HKC中α-SMA表达的升高,减轻E-Cadherin表达下降程度,降低TGF-β1mRNA表达及TGF-β1、Ⅰ型胶原的分泌。结论JAK/STAT信号途径可能参与高糖诱导的HKC中TGF-β1和细胞外基质的分泌。     

细胞外基质与早产儿慢性肺疾病

细胞外基质(extracellular matrix, ECM)是在个体发育过程中由细胞合成并分泌到细胞外的生物大分子所构成的动态网状结构[1].近年的研究表明:在早产儿慢性肺疾病(chronic lung disease, CLD)中,ECM及其代谢在肺组织中发生明显变化,提示ECM在早产儿CLD中起着重要作用.     

锶矿泉水对人肾小管上皮细胞增殖及ATP酶活性的影响*

背景：一定浓度的锶对人体健康有益,锶对人体多种细胞的增殖和酶活性有影响。 目的：用不同浓度的锶矿泉水配制的培养基在体外培养人肾小管上皮细胞,观察细胞增殖情况及Na+-K+-ATP酶的活性。 方法：体外培养人肾小管上皮细胞,用普通DMEM液体培养基(高糖)培养24 h后,分别用含锶质量浓度2,4,6,8 mg/L的矿泉水和双蒸水的条件培养基继续培养,分别于48,72,96和110 h行MTT法观察HK-2细胞的增殖情况。培养110 h的细胞以比色法测无机磷的量来判断Na+-K+-ATP酶的活性。 结果与结论：MTT结果表明：质量浓度2 mg/L锶矿泉水对HK-2细胞增殖无影响;细胞培养至110 h,双蒸水组出现生长抑制时,质量浓度4,6,8 mg/L锶矿泉水组却依然能保持旺盛的增殖状态(P < 0.05),生长周期延长,尤以质量浓度4 mg/L锶矿泉水组的效果最突出(P < 0.05)。Na+-K+-ATP酶活性测试结果表明：与双蒸水组比较,锶矿泉水组Na+-K+-ATP酶活性更高(P < 0.05),其中质量浓度6 mg/L锶矿泉水组的酶活性最强(P < 0.05)。结果证实,锶矿泉水可延长肾小管细胞的增殖周期,可促进肾小管细胞的转运功能。关键词：锶;肾小管细胞;增殖;ATP酶;矿泉水;浓度;组织工程 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.15.031     

维生素E对培养的肝细胞和储脂细胞细胞外基质的影响

1989 年,Chojkier 和Igarashi 分别报告脂质过氧化可发生在未受刺激、静止的培养成纤维细胞和活体正常组织。本实验旨在了解体外培养大鼠肝细胞和储脂细胞（Ito 细胞）是否存在过氧化脂质和前胶原基因表达的产物,正常培养大鼠Ito 细胞有无其它细胞外基质的产生,维生素E（ VE）能否抑制基础脂质过氧化和细胞外基质（ECM）产生。1 材料和方法用体重为180～210g、680～740g雄性Wistar 大鼠,分离培养肝细胞、Ito 细胞。参照Moshage 的方法分离大鼠Ito 细胞,培养1 周后用Desmin 多抗行免疫组化鉴定,结果显示95%以上Desmin 染色阳性…     

细胞外基质与细胞周期调控

细胞外基质 (ECM)主要包括胶原蛋白、蛋白多糖、糖蛋白和弹性蛋白等。细胞经整合素介导与 ECM粘附 ,则 ECM各成分对细胞的增殖周期产生影响。 ECM主要通过调节细胞形状和细胞骨架结构张力、p5 3- p2 1waf1 、p Rb/ E2 F、FAK、SPARC、JAK/ STAT等胞内信号途径调节细胞周期进程     

不同常规培养液对人肾小管上皮细胞的影响

目的：通过4种常规培养液对人肾小管上皮细胞株（HKC）的培养及其细胞表型特征的观察,探讨目前肾小管上皮细胞体外培养存在的有关问题。方法：采用DMEM（含10%新生牛血清）、DMEM/F12（含5%新生牛血清）、DMEM/F12（含5%胎牛血清）和keratinocyte-SFM（含rEGF和BPE）完全培养液分别进行HKC细胞的体外培养。应用细胞免疫荧光或Westernblotting法分别检测传6代细胞cytoketatin-18、E-cadherin、α-SMA和vimentin的表达。结果：HKC细胞经过DMEM（10%新生牛血清）和DMEM/F12（含5%新生牛血清）完全培养液培养3代后,α-SMA和vimentin分别转为强阳性表达,而cytoketatin-18、E-cadherin则分别转为阴性或弱阳性;keratinocyte-SFM完全培养液则具有逆转HKC细胞的cytoketatin-18、E-cadherin阴性转化作用,与此相反,DMEM/F12（含5%胎牛血清）可使这种cytoketatin-18、E-cadherin阳性的HKC细胞发生cytoketatin-18阴性转化。结论：不论是含血清还是无血清培养液培养的肾小管上皮细胞,均具有体外研究的局限性。     

组织蛋白酶与细胞外基质重塑

细胞外基质重塑是多种疾病的病理学基础,与之相关的细胞外蛋白酶中,组织蛋白酶起非常重要的作用,本文就组织蛋白酶在细胞外基质重塑相关疾病中的作用以及调节等作一综述。     

不同血液净化方法对人肾小管上皮细胞分泌细胞外基质的影响

目的探讨不同血液净化方法前后尿毒症患者血清对人近端肾小管上皮细胞株（HK-2）分泌细胞外基质（ECM）的影响。方法选择慢性肾衰竭维持性透析（MHD）的患者24例,随机分成3组,分别接受常规血液透析（HD）、高通量透析（HFHD）、血液透析滤过（HDF）后稀释法治疗,提取患者透析前后的血清。将透析前后血清分别混匀后培养HK-2细胞。应用碱水解法、ELISA法检测HK-2细胞培养上清中胶原、纤连蛋白（FN）等ECM的蛋白水平。结果HDF组透析后血清使HK-2细胞胶原蛋白和FN分泌减少,与透析前比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;而HD、HFHD组透析后与透析前比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。HDF组透析前后胶原蛋白及FN分泌的差值与HD、HFHD组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）,而HD组透析前后的差值与HFHD组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论HDF可能通过清除致肾间质ECM异常积聚的尿毒症毒素和减少透析用水对机体的影响,从而减少HK-2细胞合成胶原和FN等ECM,对肾间质纤维化的发生、发展起一定的抑制作用,而HD、HFHD在此方面的作用不显著。     

不同血液净化方法对人肾小管上皮细胞分泌细胞外基质的影响

目的 探讨不同血液净化方法前后尿毒症患者血清对人近端肾小管上皮细胞株(HK-2)分泌细胞外基质(ECM)的影响.方法 选择慢性肾衰竭维持性透析(MHD)的患者24例,随机分成3组,分别接受常规血液透析(HD)、高通量透析(HFHD)、血液透析滤过(HDF)后稀释法治疗,提取患者透析前后的血清.将透析前后血清分别混匀后培养HK-2细胞.应用碱水解法、ELISA法检测HK-2细胞培养上清中胶原、纤连蛋白(FN)等ECM的蛋白水平.结果 HDF组透析后血清使HK-2细胞胶原蛋白和FN分泌减少,与透析前比较,差异有统计学意义(P＜0.01);而HD、HFHD组透析后与透析前比较,差异无统计学意义(P＞0.05).HDF组透析前后胶原蛋白及FN分泌的差值与HD、HFHD组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),而HD组透析前后的差值与HFHD组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HDF可能通过清除致肾间质ECM异常积聚的尿毒症毒素和减少透析用水对机体的影响,从而减少HK-2细胞合成胶原和FN等ECM,对肾间质纤维化的发生、发展起一定的抑制作用,而HD、HFHD在此方面的作用不显著.     

洛伐地汀对高糖和低密度脂蛋白所致肾小管上皮细胞外基质蓄积的改善作用

为探讨洛伐他汀对高糖环境和低密度脂蛋白（LDL）刺激下人肾小管上皮细胞外基质（ECM）蓄积的作用。经体外培养人肾脏近端小管上皮细胞（HKC）,分别用LDL和/或高糖刺激HKC细胞,并与洛伐他汀共孵育。采用^3H-脯氨酸参入法测定总胶原合成,ELISA方法测定细胞培养上清中IV型胶原和板层素浓度,RT-PCR技术观察HKC细胞中IV型胶原及纤维连接蛋白（FIV）mRNA表达。结果表明高糖和LDL均可增加HKC细胞培养上清中的IV型胶原和板层素水平,并能上调IV型胶原和FN mRNA的表达,洛伐他汀可以部分或全部逆转高糖和LDL的作用。说明高糖和LDL均可促使HKC细胞合成细胞外基质,洛伐他汀可以逆转它们的作用。     

细胞外基质及其筑构对平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究细胞外基质层粘连蛋白(Laminin,LN),纤维连接蛋白(Fibronecfin,FN)和三维基膜基质Matrigel胶对平滑肌细胞增殖的作用。方法:将用酶消化法分离的兔主动脉平滑肌细胞种植在LN和FN上及三维基膜基质Matrigel胶里,然后用Brdu法检测各平滑肌细胞的增殖率。结果:生长在FN上的平滑肌细胞增殖率最高(24%),生长在LN上的平滑肌细胞增殖率次之(17%),而生长在三维基膜基质胶里的平滑肌细胞未出现细胞增殖,另外LN较FN有明显的促进平滑肌细胞分化成熟的作用。结论:细胞外基质成分和基质筑构对平滑肌细胞的增殖与分化具有重要的调节作用。     

细胞外基质对气道平滑肌细胞增殖活性的促进作用及其机制

目的 观察纤维粘连蛋白（FN），层粘连蛋白（LN），及胶原蛋白I（ColI)等主要细胞外基质成分，对气道平滑肌细胞（ASMCs)增殖活性的影响，并探讨其作用机制。方法 将原代培养的大鼠ASMCs，接种于不同细胞外基质蛋白包被的培养板，观察各时间点细胞的贴壁数量。在培养的ASMCs中分别加入两种浓度（20和60mg/L)的不同细胞外基质蛋白溶液，即FN组，LN组和Col I组，采用^3H-TdR掺入法，检测作用8，12和24h后各组ASMCs增殖活性的变化。间接免疫荧光染色法检测RAS蛋白在各组ASMCs中的表达。结果 与无包被组相比较，FN，ColI包被组及LN包被组ASMCs的贴壁数量明显高（P＜0．01或P＜0．05）。与正常对照组相比较，FN和Col I各浓度组ASMCs的增殖活性增高显著（P＜0．01），且与浓度和作用时间成正比；而LN组ASMCs的活性无明显差异。同时，FN和Col I组ASMCs的RAS染色呈强阳性；对照组及LN组ASMCs的染色则为弱阳性。结论 ASMCs对FN，LN和Col I均有良好的粘附性，但只有FN的ColI 能明显提高ASMCs的增殖活性，其作用是通过RAS信号转导途径而实现的。表明细胞外基质是哮喘气道重塑的重要刺激因子之一。     

奥曲肽抑制肝星状细胞增殖及细胞外基质合成

目的:探讨奥曲肽对肝星状细胞(HSC)增殖与细胞外基质(ECM)合成的影响。方法:采用胶原酶二步原位灌注法分离、培养大鼠HSC,并分别给予转化生长因子1(TGFβ1)(2.5μg·L-1)、奥曲肽(Oct)(0.01-10μg·L-1)或TGFβ1(2.5μg·L-1)+Oct(0.01-10mg·L-1)干预,分别用MTT法、[3H]-TdR和[3H]-脯氨酸掺入法及放射免疫法检测各处理组HSC增殖及ECM合成水平。结果:Oct能不同程度抑制HSC[3H]-TdR掺入和增殖;能够显著抑制体外培养HSC[3H]-脯氨酸掺入,降低上清液透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)和IV型胶原(CIV)水平;TGFβ1能够诱导HSC表达ECM上调,Oct能够阻断TGFβ1对HSC的调控作用。结论:Oct能够有效地抑制HSC增殖及ECM合成与分泌。     

细胞外基质对培养神经元细胞存活和轴突生长的影响

目的：探讨不同的细胞外基质对体外培养胚胎大鼠脊髓运动神经元和背根神经节感觉神经元生长的影响。方法：取大鼠胚胎脊髓腹侧组织和背根神经节体外分离培养，选取不同生长底物包括多聚赖氮酸(PLL)、Ⅰ型胶原(CoⅠ)、层粘连蛋白(LN)、PLL联合LN进行包被培养板，观察运动神经元和感觉神经元的体外生长状况。结果：PLL和LN联合包被时，神经元存活率高，细胞分散良好。CoⅠ包被时细胞聚集成团．突起粗长。结论：不同的细胞外基质影响神经元的生长方式，PLL联合LN包被是体外研究单一神经元胞体和突起的较好方法。     

细胞外基质对肝内细胞的影响

细胞外基质在汇管区和肝小叶内的过度沉积是肝纤维化的主要病理特点。目前认为激活的肝星状细胞是肝纤维化时细胞外基质的主要来源 ,细胞外基质不仅具有连接和支持细胞组织的作用 ,而且通过与膜受体结合调控细胞的迁移、增殖、分化、粘附和表型表达等生物学过程 ,它们之间的相互作用与肝纤维化过程密切相关 ,了解其作用机制可以为治疗肝纤维化提供重要信息。     

LATSl-YAP信号通路对人皮肤成纤维细胞增殖及细胞外基质合成的调控

目的探讨LATSl-YAP信号通路对人皮肤成纤维细胞活力及细胞外基质合成的调控作用。方法实验分为未干预组、LATSlsiRNA干预组和YAPsiRNA干预组。构建LATSlsiRNA和YAPsiRNA,LATSlsiRNA干预组利用LATSlsiRNA转染人皮肤成纤维细胞株HS27,YAPsiRNA干预组利用YAPsiRNA转染HS27。转染后48h利用Western．blot观察LATSl、YAP和c01．1agenI的表达情况,应用MTY检测HS27细胞株的细胞活力情况。结果LATSlsiRNA转染48h后LATSl蛋白表达显著降低,YAP蛋白和collagenI蛋白表达升高,细胞活力显著增高;YAPsiRNA转染48h后LATSl蛋白表达无变化,YAP蛋白和collagenI蛋白表达降低,细胞活力显著降低。结论LATSl．YAP信号通路可调控人皮肤成纤维细胞活力和细胞外基质的合成,可能成为皮肤创伤后修复以及阻止创伤后瘢痕形成提供潜在治疗靶点。     

尿毒血清对人类肾小管上皮细胞增殖及转分化的影响

摘要目的:探讨尿毒血清对人近端肾小管上皮细胞株(HK-2)增殖及转分化的影响,以期阐明尿毒症毒素在人肾小管－间质纤维化中的作用。方法:采用MTT比色法检测尿毒血清对细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测尿毒血清对细胞周期、细胞增殖指数(PI)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性细胞百分率的影响。结果:MTT法示5％-20％浓度尿毒血清组A₄₉₀值均高于正常对照组,流式细胞检测示10％-20％浓度尿毒血清组G₁期细胞均低于正常对照组,PI指数均高于正常对照组,但不同浓度尿毒血清组组间无明显差异;各浓度尿毒血清组α-SMA阳性细胞百分率均高于正常对照组,且随着尿毒血清浓度的增高而增高。结论:慢性肾衰竭患者体内蓄积的尿毒症毒素可能通过促进肾小管上皮细胞增殖及转分化从而加速肾小管－间质纤维化进程,导致肾功能进行性恶化。