分泌抗人角蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

角蛋白（keratin）作为一组相对分子质量（M）为40000－70000不溶于水的细胞结构蛋白，在上皮细胞的发生、分化成熟过程中逐渐形成，是所有哺乳动物细胞骨架的中间丝之一，其组成因不同上皮而异。近年来，随着分子生物学技术的推广和应用，角蛋白的基础研究得到了不断深化；同时采用多种特异性抗角蛋白的mAb进行皮肤病的临床研究，也取得很大的进展。本实验选用从剥脱性皮炎型药疹患者皮屑中提取的角蛋白免疫动物，制备出3株抗人角蛋白的mAb，并对其进行了鉴定。l材料和方法1．l角蛋自的提取取剥脱性皮炎型药疹患者的皮屑，按常规方法提取…     

抗人全T细胞单克隆抗体大鼠杂交瘤细胞株的建立

通过融合大鼠免疫细胞株IR983F和经T细胞株HPB—ALL免疫大鼠脾细胞,获得分泌单克隆抗体LO—CD6a的杂交瘤细胞株。实验证实,LO—CD6a是人全T细胞特异性的。     

分泌抗MCG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

分泌抗ＭＣＧ单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立周昌奎蓝兰张云峰＊＊（福建省计划生育科学技术研究所，福州３５００１１＊福建省立医院生物治疗中心＊＊福建省福港生物工程研究中心）谢弘王放（中国科学院上海细胞生物学研究所，上海２０００３１）以苯甲酸－丙酮一步法，从...     

抗人Ⅲ型前胶原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

抗人Ⅲ型前胶原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立邓修惠黄学梅李伟道叶学正刘兴明林丁宋蓉（重庆市肿瘤研究所，重庆６３００３０）本文报道用人工流产胎皮提取的Ⅲ型前胶原（ｈＰＣⅢ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，获得２株抗ｈＰＣⅢｍＡｂ的杂交瘤细胞（ＭＡ１和ＭＨ８），并对...     

抗血管紧张素Ⅰ杂交瘤细胞株制备方法的建立

目的 制备抗血管紧张素Ⅰ(angiotensin I,AⅠ)的杂交瘤细胞株,比较不同连接载体产出杂交瘤细胞的效果.方法 通过对载体分别为牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)的AⅠ-BSA和AⅠ-OVA免疫原进行小鼠免疫,将骨髓瘤细胞与免疫合格的小鼠进行脾细胞融合,筛选出阳性杂交瘤细胞株,经过克隆、扩大培养、腹水诱...     

分泌抗精氨酸加压素单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文报道利用杂交瘤技术制备了抗精氨酸加压素单克隆抗体,通过鉴定,证明所得抗体稳定性好,对精氨酸加压素有较强的特异性结合,对赖氨酸加压素和催产素基本无反应。用免疫双扩散技术还证明所得抗体属小鼠IgM类。     

抗小鼠凝血因子IX的大鼠—小鼠杂交瘤细胞株的建立

1997年 ,Ｓｔａｆｆｏｒｄ博士等建立了凝血因子ＩＸ基因剔除小鼠动物模型 ,薛京伦等 (1997)证实了该模型能极佳地复现人血友病Ｂ临床表型 ,从而为血友病Ｂ基因治疗研究提供了一个良好的模型。为了对该动物模型的遗传稳定性和相应临床表征作深入研究 ,以及提供小鼠凝血因子ＩＸ(ｍＦＩＸ)表达的检测手段 ,我们制备了抗小鼠ｍＦＩＸ单克隆抗体。本实验选择Ｌｏｕ/Ｍ大鼠 ,以复旦大学遗传所制备的基因工程产品ｍＦＩＸ为抗原 ,以 0 2ｍｌｍＦＩＸ(含蛋白 0 6ｍｇ)加0 2ｍｌ福氏完全佐剂腹背部皮下多点免疫 ,2周后以同等剂量ｍＦＩＸ加不完…     

抗重组人GM—CSF mAb杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定

重组人ＧＭＣＳＦ为可刺激骨髓细胞、粒细胞和巨噬细胞等多种细胞增殖，增强造血功能的细胞因子，目前，已广泛用于恶性肿瘤及各种原发性、继发性粒细胞缺乏症［１］的辅助治疗。为解决该细胞因子的纯化及检测，我们研制了抗该细胞因子的ｍＡｂ杂交瘤细胞株，并进行了初步鉴定。１　材料和方法１－１　动物免疫　用重组人ＧＭＣＳＦ按常规免疫８周龄雌性Ｂａｌｂ／ｃ小鼠３次，２０μｇ／只·次，融合前３ｄ，再经尾静脉追加免疫１次。１－２　ｍＡｂ的制备　细胞融合、筛选及克隆化，参照文献［２，３］进行。１－３　ｍＡｂ的特性鉴定…     

抗肾综合征出血热病毒人杂交瘤细胞株的无血清培养

用于治疗的人单克隆抗体（IllAl，）不仅要有一定的数量，而且要有较高的纯度。体外大规模地培养杂交瘤细胞也许能够保证其数量，但因在培养基中要补充胎牛血清和其它蛋白成分“’，可使后续rll．m－一的纯化相当困难。所以，人们一直在研究人杂交瘤细胞的无血清培养技术，试图建立一种在无血清条件下，能大量培养人杂交瘤细胞的方法。本文中我们将1株抗肾综合征出血热病毒（HFRSV）人杂交瘤细胞2D5，用无血清培养，取得了一定的结果，现报道如下。l材料和方法1．l人杂9们细胞2D5细胞株为本室建立，可分泌抗HngSV人mAnIgG（‘’。互．…     

抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

用提纯的猪流行性腹泻病毒抗原免疫BALB/c小鼠,脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,用酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法筛选,以有限稀释法克隆化,阳性率达100％,建立了1D_8、5D_7、4B_1、2B_8、1A_4五株杂交瘤细胞系。用ELISA检测培养上清及诱生的腹水的效价。培养上清效价为1D_8 1∶1280~×、5D_7 1∶640~×、4B_1 1∶320~×、2B_8 1∶320~×、1A_4 1∶640~×,腹水效价为1D_8 10~(-7)、5D_7 10~(-7)、4B_110~(-7)、2B_8 10~(-5)、1A_4 10~(-4)。用免疫双扩散试验结果,五株单抗中有一株属IgG类,四株属IgG类。将单抗提纯后用ELISA夹心间接法及间接免疫荧光试验(IFA)对6种冠状病毒进行了特异性鉴定,除猪流行腹泻病毒外,不与其它冠状病毒发生交叉反应。取效价高而稳定的1D_8、5D_7、4B_1细胞系单克隆抗体做IFA及直接ELISA试验初步证明该McAb具有敏感性高,特异性强的优点,可作为猪流行性腹泻病毒检测的一种新试剂。     

丙型肝炎病毒NS3蛋白单克隆杂交瘤细胞株的建立及…

应用国产基因工程表达的丙型肝炎病毒ＮＳ３区抗原免疫小鼠，然后取其脾与小骨髓瘤细胞系ＳＰ２／０融合，筛选出４株稳定分泌抗ＨＣＶ ＮＳ３区蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为２Ｂ６，２Ｆ３，３Ｄ８，３Ｄ９，经初步研究表明这４株单抗与ＮＳ３抗原具有良性的反应性。     

血管内皮生长因子C在人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的表达

目的：研究血管内皮生长因子C(VEGF-C)在人乳腺癌细胞中的体外表达情况，探讨其在肿瘤发生、发展中的作用。方法：运用半定量RT—PCR和免疫组织化学的方法分别检测了VEGF-CmRNA和VEGF-C在人乳腺癌细胞株MDA—MB-231中的表达。结果：半定量RT-CR检测到VEGF-CmRNA以较高水平表达，免疫组化结果显示MDA—MB-231细胞的胞浆中有棕黄色阳性颗粒，而阴性对照细胞的胞浆中则均无阳性颗粒。结论：人乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞在体外能够转录VEGF—CmRNA并翻译合成相应的蛋白。     

人源性TPO单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用人源性ＴＰＯ（ｈｕＴＰＯ）皮下免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／０实体瘤细胞融合，建立了２株稳定分泌抗ＴＰＯ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为１９Ｄ１２和４９Ａ５，并对其进行了初步鉴定，采用简易正辛酸法从腹水中纯化单克隆抗体。结果：细胞融合率为８２％，杂交瘤细胞染色体数目正常，分泌的抗体为ＩｇＧ，腹水抗体效价为０．６￣１．２×１０＾－３，与ＥＰＯ、ＧＭ－ＣＳＦ无交叉反应，连续培养生物性状     

猪鼻支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

作者用提纯的猪鼻支原体抗原免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞，在PEG1000作用下，与小鼠骨髓瘤细胞Sp2／0-Ag 14融合，共获得5株稳定分泌抗猪鼻支原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备了小鼠腹水抗体，并对杂交瘤细胞株行进了鉴定。上述细胞株经3～6个片稳定传代，冻存于液氮中．复苏后其分泌抗体的水平末见下降。     

两种分泌抗PrP单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其初步鉴定

目的 制备具有广谱种属反应性的PrP单克隆抗体(McAb)，用于可传播性海绵样脑病(TSE)的诊断及致病机制研究。方法 分别将对应于牛PrP29-48(BoP1)、PrP89-108(BoP2)的两种多肽与匙孔碱血蓝蛋白(KLH)偶联，免疫BALB／c小鼠，经细胞融合后获得分泌针对上述两种多肽的杂交瘤细胞株，用Western-blot方法检测这些细胞株分泌的McAb与牛(Bo)、人(Hu)和仓鼠(Ha)PrP蛋白的反应性。结果 通过细胞融合和2-3轮克隆化，用ELISA筛选出分泌抗BoPl和BoP2抗体的杂交瘤细胞株D11和D8。Western blot显示，获得的McAb均能分别与重组BoPrP(25-242)、重组HuPrP(23-231)和HaPrP(23-231)反应。结论 获得了可与牛、人和仓鼠PrP反应的两种McAb，可用于哺乳类PrP检测及TSE致病机制研究。     

脂蛋白（a）杂交瘤细胞株的建立及鉴定

用脂蛋白（ａ）［Ｌｎ（ａ）］免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，应用淋巴细胞杂交技术，将免疫小鼠的脾细胞与ＮＳ１骨髓瘤细胞进行融合，得到６Ｇ８、９Ｆ１１２株分泌抗Ｌｐ（ａ）单克隆抗体的杂交瘤细胞株，对２株细胞进行免疫学鉴定，应用间接ＥＬＩＳＡ法证明，培养上清效价１×１０－３～２×１０－３，培养上清与Ｌｐ（ａ）呈阳性反应，而与ａｐｏＡⅠ、ＡⅡ、Ｂ、ＣⅢ、Ｅ及血浆纤溶酶原（ＰＬＣ）均无交叉反应，ＥＬＩＳＡ相加实验证明：２株杂交瘤细胞株分别识别Ｌｐ（ａ）分子上２个不同的抗原决定簇。