抗bFGF McAb制备、鉴定及轻链可变区基因克隆和序列分析

目的以重组人碱性成纤维细胞生长因子为抗原免疫小鼠,建立多株稳定分泌bFGF单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞.并对bFGF单克隆抗体(McAb)可变区基因进行扩增及序列分析.方法采用Western blot法和免疫沉淀法对抗体特异性和Ig类型进行鉴定,同时,应用分子生物学技术,对Vk基因的DNA片段进行克隆,并对4a2Vk基因进行序列测定.结果bFGF单克隆抗体可特异性结合人重组bFGF抗原,且均为IgM.由杂交瘤4a2、3d3细胞株扩增Vk基因是由330个碱基组成,编码110个氨基酸残基.通过国际联机检索进行EMBL和Kabat基因库扫描发现,4a2VkDNA仅与Ig同源,符合小鼠Ig的Vk基因特征;同源性为90%～98%,应归属于Ig的Vk基因.结论杂交瘤4a2、3d3细胞株可稳定分泌bFGF单克隆抗体,并获得其轻链可变区基因,为进一步构建和表达单链Fv(ScFv)抗体打下良好的基础.     

抗牛碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的：制备抗牛碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单克隆抗体(mAh)，并鉴定其亚类，建立ELISA检测bFGF含量的方法。方法：应用基因重组的牛bFGF免疫BALB／c小鼠，通过细胞融合，建立分泌抗bFGF mAh的杂交瘤细胞株。应用免疫沉淀技术鉴定抗bFGF mAh的亚类；应用基因重组的牛bFGF免疫青紫蓝兔，制备抗bFGF的多抗血清；将抗bFGF mAb及兔抗血清用Protein A亲和层析纯化后，建立检测bFGF含量的ELISA方法。结果：共获得3株稳定分泌抗bFGF mAb的杂交瘤细胞株；它们所分泌的mAb均为IgG1；采用夹心ELISA法检测bFGF的敏感性达ng水平。结论：抗bFGF mAb(IgG1)和多克隆抗体制备为临床应用及相关研究提供了必要的试剂。     

重组人碱性成纤细胞生长因子单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的制备重组人碱性成纤维细胞生长因子(recombinant human basic fibroblast growth factor,rhbFGF)单克隆抗体,鉴定其特性,建立双抗体夹心ELISA检测方法。方法以rhbFGF为免疫原,免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合技术建立能稳定分泌抗rhbFGF杂交瘤细胞株,制备抗rhbFGF单克隆抗体,采用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗体亚类,间接ELISA法检测抗体效,Western blot鉴定抗体特异性。HRP标记McAb并建立夹心ELISA检测方法。结果获得2株(分别命名2D3、5F7)可分泌特异性McAb的强阳性细胞株,腹水抗体效价在10-5以上,IgG亚类均为IgG1,轻链为K链。Western blot证明2株McAb特异性良好,双抗体夹心ELISA检测rhbFGF最低检测限达到2 ng/ml。结论成功制备高效价的抗rhbFGF单克隆抗体,建立抗rhbFGF双抗体夹心ELISA定量检测方法。     

碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）抗体研究进展

碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是由Gospodarowiz等[1]于1974年在牛脑垂体中发现的,因对3T3细胞有强烈的促增殖和有丝分裂作用,且等电点为9.6而得名.此次发现展开了对成纤维细胞生长因子的鉴定,纯化及测序等研究的序幕.     

双抗体夹心ELISA检测碱性成纤维细胞生长因子

碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）分布于几乎所有来源于中胚层和神经外胚层的组织中, 等电点9.6, 是相对分子质量（Mr）为18 000的单亚基多肽.bFGF在促进血管生成、创伤愈合、骨骼修复、神经营养与修复、眼晶体再生以及胚胎的发育与分化方面均显示出生物学活性[1, 2], 其生产和应用过程中需要高灵敏度的定量检测方法.1992年本室用鼠抗bFGF多克隆抗体（pAb）在国内首次建立了bFGF间接ELISA检测方法[3], 已经应用于bFGF生产过程中的质控和定量检测以及科学研究等工作.在此基础上, 用本室制备的bFGF单克隆抗体（mAb）与抗bFGF酶标pAb, 建立了bFGF双抗体夹心ELISA方法, 并对其重复性、精密度和适合性做了分析, 为bFGF的定量检测提供了有效的手段.……     

bFGF在恶性肿瘤中的表达及其临床病理意义

目的:检测临床常见恶性肿瘤(非小细胞肺癌、乳腺癌、结肠癌和黑色素瘤)组织中碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)的表达情况,并分析其与恶性肿瘤临床病理学特征之间的相关性。方法:采用免疫组织化学SP技术检测208例原发性恶性肿瘤(肺癌68例,乳腺癌80例,结肠癌41例和黑色素瘤19例)石蜡包埋组织中b FGF蛋白的表达水平。结果:在肺癌中b FGF蛋白高表达多见于伴有淋巴结转移的低分化患者,与肿瘤原发灶大小、淋巴结受累、远处转移(TNM)分期呈正相关,且b FGF的表达对患者中位生存期无明显影响;在乳腺癌中,b FGF高表达多见于伴淋巴结转移的晚期患者;在结肠癌中b FGF蛋白表达多见于伴有区域淋巴结转移的中高分化患者;此外,在晚期有淋巴结转移的黑色素瘤患者中,b FGF蛋白呈高表达。结论:b FGF可能参与了临床常见恶性肿瘤的发生和演变过程,b FGF蛋白表达可能成为判断恶性肿瘤是否发生转移的有效参考指标之一。     

bFGF和VSMC增殖的研究进展

碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）分布于正常和病理状态的血管壁,能显著促进血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖。与其它生长因子不同,ｂＦＧＦ除了激活经典的酪氨酸激酶受体后信号传导通路,还能经特异的ＨＳＰＧ受体内化后调节细胞周期,促进ＶＳＭＣ增殖。多种生长因子、细胞因子和血管活性物质参与调节ｂＦＧＦ的ＶＳＭＣ细胞增促进作用。     

碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体ELISA微量检测技术

目的：用本室制备的单克隆抗体建立间接ELISA检测微量bFGF的技术。方法：将抗重组牛碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的杂交瘤细胞株，经再克隆化，选择高亲和力的抗bFGF杂交瘤细胞2H2。用Protein A亲和层析法对2H2腹水型单抗进行纯化。结果：用2H2 mAb建立了高灵敏度的间接、竞争ELISA检测bFGF方法，灵敏度分别达到10和1．0pg/孔，并用间接ELISA检测神经胶质瘤细胞SWO-38上清中的bFGF含量。结论：为实验研究和临床应用提供了微量bFGF的检测方法。     

bFGF及其受体的研究进展

FGF家族是目前已知最大的生长因子家族之一 ,在胚胎发育、血管生成、骨的形成和修复、促进细胞增生等有广泛的作用。FGF家族的原型bFGF在体内广泛分布 ,具有很强的生物学活性 ,本文着重讨论了bFGF的生物学特性、信号传导和促进创伤愈合的作用机制     

Identification of basic fibroblast growth factor in papillary carcinoma of the thyroid

Basic fibroblast growth factor (bFGF) was identified in the papillary carcinoma of the human thyroid. Immunohistochemically, it was found that the reactivity for bFGF was localized in the cytoplasm of the neoplastic cells of the five papillary carcinomas. However the extract of the papillary carcinomas contained the mitogenic activity for endothelial cells. This bioactive molecule was determined as bFGF by using the heparin-Sepharose affinity chromatography and western blot analysis. The bFGF derived from human thyroid papillary carcinoma and the recombinant human bFGF stimulated the bromodeoxyuridine incorporation by the cultured human thyroid papillary carcinoma cells. These cells also showed positive staining for thyroglobulin and cytokeratin. These results indicate that bFGF, probably produced by the neoplastic cells, plays an important role in the development of papillary carcinoma of the thyroid with stimulation of angiogenesis as well as proliferation of the parenchymal cells.     

碱性成纤维细胞生长因子骨诱导作用的研究进展

介绍碱性成纤维细胞生长因子对骨干细胞、成骨细胞、破骨细胞和血管形成的可能作用机理,及其与其它生长因子之间的相互作用。对碱性成纤维细胞生长因子骨诱导作用的研究进展进行综述。     

The development of a quantitative RIA for basic fibroblast growth factor using polyclonal antibodies against the 157 amino acid form of human bFGF: The identification of bFGF in adherent elicited murine peritoneal macrophages

Polyclonal antibodies which have the capacity to neutralize the biological activity of basic fibriblast growth factor (bFGF) in vitro, have been raised in rabbits against the 157 amino acid form of bFGF purified from human placenta. In a dot blot assay the anti-bFGF antibodies do not recognize the acidic form of FGF (aFGF) with which the basic form shares significant amino acid sequence homology. As determined by immunoblotting, bFGF antibodies recognized only bFGF in a mixture of placentally derived heparin-binding proteins, demonstrating the specificity of these antibodies. Using the anti-human bFGF antibodies, we have developed a solid-phase competitive radioimmunoassay sensitive to 7.8 ng/ml (0.4 pmol/ml) for bFGF. aFGF does not compete with bFGF for binding to the antibodies in the radioimmunoassay even at 2.04 μg/ml. The specificity of the assay was further demonstrated by a lack of competition of cytochrome C, myoglobin, epidermal growth factor or bovine serum albumin with bFGF for binding to the antibodies. We have identified bFGF in extracts of adherent thioglycollate-stimulated mouse peritoneal macrophages by immunological criteria including the ability of the extract to compete with ¹²⁵I-bFGF for binding to affinity-purified anti-human bFGF antibodies in the RIA and the ability of these antibodies in inhibit the bFGF-like biological activity of the macrophage extract.     

Purification and assay of intact human basic fibroblast growth factor using heparin-sepharose chromatography

Summary Intact human hepatoma derived basic fibroblast growth factor (bFGF) is a cationic 18 400-molecular-weight polypeptide, which stimulates the proliferation of 3T3 and endothelial cells at 1 ng/ml. bFGF has a strong affinity for heparin, and can be purified to homogeneity from human hepatoma cells using heparin-Sepharose chromatography. A three-step procedure is used: (a) extraction of the cells with 1M NaCl at pH 7.5; (b) Bio-Rex 70 cation exchange chromatography; and (c) heparin-Sepharose chromatography. The molecular weight of bFGF depends on the pH of the cell extraction step. When extracted at neutral pH, intact bFGF is obtained with a molecular weight of 18 400, however when extracted at pH 3.5 to 4.5 the molecular weight of bFGF is about 16 500. Lowering the molecular weight by acid pH extraction can be inhibited with a mixture of the proteinase inhibitors, PMSF, leupeptin, and pepstatin. These results suggest that degradation of bFGF is the result of cleavages by acid proteinases. It has been determined by amino acid sequence data and western blot analysis that the cleavages occur at the amino terminus of bFGF. The lower molecular weight form of bFGF has the same biological activity and exhibits the same chromatographic behavior on heparin-Sepharose as does intact bFGF.     

碱性成纤维细胞生长因子与卵巢癌的关系

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growth factor,b FGF)对卵巢癌细胞增殖、浸润和肿瘤血管生成的影响 ,及 b FGF单克隆抗体 (b FGF monoclonal antibody,b FGF- MAb)的治疗作用。　方法　将人卵巢癌细胞株 SKOV3接种于 2 4孔板 ,加入不同浓度的 b FGF,每日行结晶紫染色后测定光密度 (D4 90 )值 ,绘制细胞生长曲线 ;将 SKOV3细胞团接种于铺设有细胞外基质凝胶的 4孔板 ,每日测定癌细胞在凝胶中的浸润距离 ;建立 SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤模型 ,每周两次分别将 b FGF、b FGF-MAb和生理盐水注射于移植瘤周围 ,8周后测量肿瘤体积 ;对移植瘤组织切片行 因子的免疫组化染色、测定肿瘤内微血管密度 (microvessel density,MVD)。　结果　 b FGF能促进 SKOV3细胞增殖并呈浓度依赖 ,实验第 5天 ,5 ng/ml、10 ng/ml组细胞 D4 90 值是对照组的 1.0 9倍和 1.2 1倍 ;b FGF能促进 SKOV3细胞浸润并呈浓度依赖 (P<0 .0 5 ) ,第 7天 ,5 ng/ml、10 ng/ml组细胞浸润距离分别是对照组的 1.5 3倍和2 .4 5倍 ;b FGF组移植瘤体积和 MVD分别是对照组的 1.80倍和 1.4 6倍 (P<0 .0 5 ) ,b FGF- MAb组移植瘤体积和 MVD分别是对照组的 6 3.7%和 6 2 .8% (P<0 .0 5 )。　结论　b FGF能明显促进卵巢癌细胞的增殖、     

糖尿病小鼠视网膜碱性成纤维细胞生长因子的表达及细胞损害的电镜观察

目的：为临床研究提供形态学资料。方法：用免疫组化方法，观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在糖尿病小鼠视网膜的分布及表达密度；用透射电镜观察不同病程视网膜细胞的损害情况。结果：糖尿病及正常小鼠视网膜各层细胞均表达bFGF，反应强度和密度不同。发病组自6月龄起，居于大血管周围的阳性节细胞密度增加；不同病程bFGF的表达有不同程度的增加。随糖尿病病程延长，细胞超微结构受到不同程度的损害。结论：糖尿病时增多的bFGF直接或间接作用于血管内皮细胞和平滑肌细胞，刺激二者增殖，促进微血管病变的发生；另一方面，减弱视细胞与双极细胞间的信息传递，对糖尿病性盲的发生起重要作用。同时，各种细胞的超微结构及相应的功能也受到不同程度的损害。     

碱性成纤维细胞生长因子诱导非贴壁骨髓基质细胞向成骨细胞分化

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对非贴壁骨髓前体细胞(NASP)的增殖分化作用。方法：分离骨髓前体细胞体外培养，用碱性磷酸酶化学染色及图象分析测定细胞克隆数；采用免疫组化(ABC法)进行骨钙素及碱性磷酸酶(ALP)测定，研究bFGF对NASP的促增殖作用。结果：bFGF能促进NASP细胞增殖，诱导NASP细胞产生碱性磷酸酶及骨钙素。结论：bFGF主要作用于非贴壁生长的基质前体细胞，bFGF能增加骨的数量，促进骨样组织形成。     

肠道缺血再灌流对肾内源性碱性成纤维细胞生长因子和 …

目的和方法：研究肠道缺血再灌流过程对肾脏内源性碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子β基因表达的影响，采用肠系膜上动脉夹闭４５ｍｉｎ与再灌流６ｈ和２４ｈ动物模型，用原位杂交与逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）技术研究两种生长因子基因在正常，缺血以及再灌流肾组织中的表达。