CD44V6的表达对大肠癌细胞骨架的影响

目的研究ＣＤ４４Ｖ６在大肠癌细胞系ＨＴ２９、ＬｏＶｏ细胞中的表达及其对细胞骨架的影响,探讨ＣＤ４４Ｖ６影响肿瘤转移的作用机理。方法应用原位分子杂交、免疫组化、免疫荧光定量分析的方法研究ＣＤ４４Ｖ６在人大肠癌细胞中的表达,应用免疫荧光及共聚焦三维图像重构分析的方法,研究ＣＤ４４Ｖ６对大肠癌细胞的细胞骨架的影响。结果ＣＤ４４Ｖ６在ＨＴ２９、ＬｏＶｏ细胞中均有表达,不管在ｍＲＮＡ水平还是在蛋白质水平,高转移能力的ＬｏＶｏ细胞表达ＣＤ４４Ｖ６均高于低转移能力的ＨＴ２９细胞。将ＨＴ２９、ＬｏＶｏ细胞用ＣＤ４４Ｖ６单抗封闭则发现ＣＤ４４Ｖ６能使ＨＴ２９、ＬｏＶｏ细胞的细胞骨架发生改变。结论ＣＤ４４Ｖ６的表达与大肠癌细胞的转移潜能有关。ＣＤ４４Ｖ６可能通过影响大肠癌细胞骨架的构像和分布,从而影响大肠癌细胞的运动能力,影响大肠癌转移     

一个抗CEA McAb独特型抗体建立,纯化和初步鉴定

通过癌胚抗原单克隆抗体免疫家兔获得ＣＥＡ ＭｃＡｂ抗独特型抗体，Ａｂ２不但能竞争抑制ＣＥＡ ＭｃＡｂ与大肠癌细胞ＨＴ－２９的结合，而且诱导小鼠对大肠癌细胞ＨＴ－２９的迟发性过敏反应。     

IL-6对急性期川崎病患者外周血淋巴细胞凋亡的影响

目的拟通过对急性期川崎病（ＫＤ）患者外周血淋巴细胞凋亡的观察，进一步探讨ＫＤ的免疫发病机理。方法２６例ＫＤ患者和２０名正常儿童外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）经抗－ＣＤ３诱导处理，部分用ＩＬ－６单抗处理，之后培养不同时间（０，１２，２４，４８，７２小时）测定凋亡细胞百分率。结果ＫＤ患者凋亡细胞百分率和ＤＮＡ片段化均较正常对照降低（Ｐ＜０．００１）和延迟。ＰＨＡ刺激ＰＢＭＣ培养上清ＩＬ－６水平较正常对照明显升高（Ｐ＜０．００１）。加抗ＩＬ－６的单抗培养或静脉注射免疫球蛋白可显著降低ＩＬ－６水平，凋亡细胞百分率降低和ＤＮＡ片段化延迟发生逆转。结论ＫＤ患者ＰＢＭＣ存在有凋亡降低或延迟，其机理可能与ＫＤ患者异常增高的ＩＬ－６有关     

川崎病患者外周血淋巴细胞凋亡减少的初探

目的：探讨川崎病（ＫＤ）的免疫发病机制。方法：对２６例ＫＤ患者和２０名正常儿童外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）经ａｎｔｉ－ＣＤ３诱导体外培养不同时间的凋亡进行计数凋亡细胞百分率和片段ＤＮＡ分析。结果：ＫＤ患者凋亡细胞百分率和片段ＤＮＡ出现时间较正常对照降低（Ｐ〈０．００１）和延迟，ＰＢＭＣ体外培养产生ＩＬ－６水平较正常对照显著升高（Ｐ〈０．００１）；加抗ＩＬ－６单抗培养或静脉注射免疫球蛋白（ＩＶＩＧ）     

人可溶性IL-6R基因在COS7细胞中的表达及活性分析

目的在ＣＯＳ７细胞中表达具有生物学功能的人可溶性ＩＬ－６Ｒ（ｓＩＬ－６Ｒ），作为研究ｓＩＬ－６Ｒ结构与功能关系的基础。方法首先利用ＰＣＲ技术扩增出人可溶性ＩＬ－６Ｒ（ｈｓＩＬ－６Ｒ）编码基因片段，并重组入克隆载体ｐＡＬＴＥＲ－１。通过基因序列分析确定了目的基因的核苷酸序列，并进一步构建了由ＳＶ４０晚期启动子和ＨＣＭＶ早期启动子控制的表达质粒ｐＳＶＬ６Ｒ和ｐＣＭＶ６Ｒ。用脂质体介导的方法将表达质粒转染ＣＯＳ７细胞，并分别在ｍＲＮＡ水平（斑点杂交）和蛋白水平（ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ）检测ｓＩＬ－６Ｒ基因在ＣＯＳ７细胞中的表达。在７ＴＤ１，ＬＴ１２两种ＩＬ－６反应细胞系上检测转染细胞上清（含ｓＩＬ－６Ｒ）的生物学活性。结果在ｍＲＮＡ水平和蛋白水平分别检测到ｓＩＬ－６Ｒ基因在ＣＯＳ７细胞中的表达，表达产物分子量约为５００００。表达产物在７ＴＤ１，ＬＴ１２细胞系上检测到明显的生物学活性。结论天然ｓＩＬ－６Ｒ基因在ＣＯＳ７细胞中的成功表达为进一步制备ｓＩＬ－６Ｒ突变体及其结构与功能关系的研究奠定了基础     

不同细胞因子基因转导对小鼠B16细胞体内生长及免疫原性的影响

目的：通过比较不同细胞因子基因转导对肿瘤细胞体内生长及对机体免疫活性的影响,探讨基遥作用机制及因子间的协同效果。方法：采用逆转录病毒介导的方法将ＩＬ－６／ＩＬ－２融合基因及ＩＬ－６、ＩＬ－２单基因分别导入小鼠Ｂ１６黑色素瘤细胞中,检测基因修饰瘤细胞体内成瘤及对机体ＬＡＫ、ＣＴＬ活性的诱导。结果：三种基因修饰的肿瘤细胞均可表现出体内生长抑制及免疫原性增强,但融合基因转导细胞的改变,较单一基因修饰细胞     

IL—6在诱导M1白血病细胞分化后凋亡中的应用

目的 探讨ＩＬ－６能否诱导Ｍ１小鼠急性髓样白血病细胞凋亡及其分子机制。方法 透射电镜观察细胞形态判断有无凋亡发生：ＲＴ－ＰＣＲ及狭缝杂交分析ｂｃｌ－２家族成员表达水平的改变。结果：ＩＬ－６诱导Ｍ１细胞向巨噬细胞方向分化后，Ｍ１细胞发生凋亡；ｂｃｌ－２，ｂｃｌ－ＸＬ在ＩＬ－６诱导下表达下调，ｂａｘ表达上调，结论ＩＬ－６诱导Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ比例改变，使Ｍ１细胞分化后凋亡。     

人类疮疹病毒6,7型体外感染淋巴细胞对四种细胞因 …

目的 研究人类疮疹病毒６、７型（ｈｕｍａｎ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ６ ａｎｄ ７,ＨＨＶ－６、ＨＨＶ－７）体外感染对免疫功能的影响。方法 采用生物活性法或ＥＬＩＳＡ法分别检测了ＨＨＶ－７ Ｇｌａｓｇｏｗ、ＹＹ５２株病毒及ＨＨＶ－６ ＧＳ株感染脐血单个核细胞（ＣＢＭＣｓ）,培养上清中细胞因子ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２ Ｐ７０水平的动态变化。结果 ３株病毒感染ＣＰＭＣｓ后前２在均     

白细胞介素6诱导小鼠T细胞杂交瘤细胞c—fos基因表达

本文应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和斑点杂交技术，观察了ｒＩＬ－６对ＩＬ－６依赖株小鼠Ｔ细胞杂交瘤细胞ＭＨ６０的ｃ－ｆｏｓ基因表达的诱导作用。结果表明：ｒＩＬ－６可明显诱导ＭＨ６０细胞ｃ－ｆｏｓ基因表达，具有剂量效应关系。且表达程度与ＩＬ－Ｔ刺激ＭＨ６０细胞增殖速率相平行。提示ＩＬ－６促肿瘤瘤细胞分裂增殖效庆是由活化ｃ－ｆｏｓ基因所介导的。     

白细胞介素2基因转移的肿瘤细胞克隆的建立及其体内外生长特性的研究

为了开展ＩＬ－２基因转移后免疫原性增强的新型瘤苗抗肿瘤作用的研究，须首先获得ＩＬ－２基因转移后、能够高分泌ＩＬ－２的肿瘤细胞并确定其生长特性。本室构建了含５６３ｂｐ的小鼠ＩＬ－２全长ｃＤＮＡ的真核表达载体ＢＭＧＮｅｏ－ＩＬ－２，采用磷酸钙ＤＮＡ共沉淀法将ＢＭＧＮｅｏ－ＩＬ－２转移入Ｂ１６黑色素瘤细胞中，通过Ｇ４１８抗性筛选、有限稀释法及活性检测，获得一株高分泌ＩＬ－２（５０６Ｕ／ｍｌ）克隆，并经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法证实ＩＬ－２基因已转入该克隆中。结果表明ＩＬ－２基因转移的肿瘤细胞体外生长能力没有明显变化，但体内致瘤原性显著下降，从而为制备新型瘤苗打下了基础。     

基因芯片技术的研究进展

基因芯片技术的诞生是基于人类基因组计划的成果,它以一种全面、综合、系统的思维方式来研究生命现象。同时,它还是疾病诊断和治疗的重大方法学突破,也是新药开发筛选的新方法。     

降钙素基因的化学合成与克隆

本文报道用化学法全合成降钙素的基因。基因全长113碱基对。采用大肠杆菌偏爱密码子。整个基因分为6个片段合成。用T~4DNA连接酶一次连接成功,序列分析证明合成的基因序列与设计的一致。     

DMD基因突变及突变检测技术研究进展

假性肥大型进行性肌营养不良（DMD／BMD）一类发病率较高的X连锁隐性遗传病。DMD基因庞大,突变机制复杂,随着分子生物学的进展,对DMD基因及其所编码aystrophin蛋白的认识不断深入,探索更简便、准确、经济的基因突变检测技术成为目前对DMD研究的热点,本文着重对DMD基因、突变与表型关系的研究进展,以及突变检测技术的进展做一综述。     

基因定量检测方法研究进展

基因定量检测已经成为研究基因组变异以及由于基因重组所引起的相关疾病的重要手段。大片段的基因组的重复和缺失可以引起致病突变。使用PCR和测序等定性检测方法很难探测到杂合状态的缺失和重复,因此探寻高效、可靠、灵敏的基因定量检测方法是当务之急。在过去的几年中已经相继出现了一些自动高效的技术方法。现在可用的基因定量方法大致可以分成3类:DNA印迹技术,细胞遗传学方法和以PCR扩增为基础的定量。本文对基因定量的最新进展作一综述,探讨其优缺点以期对定量研究方法的选择有所帮助。     

三例眼皮肤白化病患者TYR和P基因的突变分析

目的 分析眼皮肤白化病(oculocutaneom albinism,OCA)患者酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)基因和P基因的基因突变.方法 应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction ,PCR)和变性高效液相色谱(de-naturing high-perfomanee liquia chromatography,DHPLC)技术对3例患者的眼皮肤白化病Ⅰ、Ⅱ型相关基因(TYR和P基因)的外显子进行突变检测,并对DHPLC检出的突变样本进行测序和限制性内切酶分析以验证该突变.针对未见报道的新突变,筛查100名表型正常的无关个体,排除多态的可能.结果 在3例患者中检测出两种P基因突变,未检测到TYR基因突变.其中,患者1的P基因第13外显子发生杂合突变T450M;患者2的P基因发生两个杂合突变,分别是第13外显子T450M和第23外显子G775R;患者3的P基因第23外显子发生杂合突变G775R.P基因第13外显子限制性内切酶分析显示,患者1、2均出现杂合突变T450M导致的Oli I酶切位点部分消失,100名表型正常的无关个体未检出该突变;经检索,T450M为一未见报道的新突变.结论 联合应用PCR、DHPLC、DNA测序和限制性内切酶分析的方法可有效的对白化病进行基因诊断.     

基因枪转导K-RLIS反义基因对胰腺癌细胞（K-PLASP21）蛋白表达的影响

目的观察基因枪转导K-RAS突变特异性反义基因对胰腺癌细胞K-RASP21蛋白的影响。方法利用基因枪技术，将反义基因转导入宿主细胞，通过免疫细胞化学和Westernblot方法，观察K-RAS突变特异性反义基因转导后ASPC-1、MiaPaCa-2和BxPC-3三种人胰腺癌细胞系K-RASP21蛋白的变化。结果转导K-RAS突变特异性反义基因后，AsPC-1和MiaPaCa-2胰腺癌细胞的K-RASP21蛋白表达明显降低；BxPC-3胰腺癌细胞的K-RASP21蛋白表达无明显变化。结论突变特异性K-RAS反义基因经基因枪有效转导后，可用于胰腺癌的治疗。     

基因枪转导K-RAS反义基因对胰腺癌细胞(K-RAS P21)蛋白表达的影响

目的观察基因枪转导K-RAS突变特异性反义基因对胰腺癌细胞K-RAS P21蛋白的影响。方法利用基因枪技术,将反义基因转导入宿主细胞,通过免疫细胞化学和Western blot方法,观察K-RAS突变特异性反义基因转导后AsPC-1、MiaPaCa-2和BxPC-3三种人胰腺癌细胞系K-RAS P21蛋白的变化。结果转导K-RAS突变特异性反义基因后,AsPC-1和MiaPaCa-2胰腺癌细胞的K-RAS P21蛋白表达明显降低;BxPC-3胰腺癌细胞的K-RAS P21蛋白表达无明显变化。结论突变特异性K-RAS反义基因经基因枪有效转导后,可用于胰腺癌的治疗。     

一个近亲婚配家系中的一种P基因新突变

目的在DNA水平上对1个有2例患者的姨表兄妹近亲婚配家系中的眼皮肤白化病患者进行分型诊断。方法用PCR扩增先证者P基因及TYR基因各外显子、外显子-内含子交界区及3＇端和5＇端非翻译区，以DNA序列测定技术检测基因突变，以DNA测序技术和限制性内切酶酶切法检测该家系其他成员及群体中正常人的相应基因位点。结果先证者和其白化病妹妹为P基因A787T突变纯合子，其父母和表型正常的弟弟均为A787T突变杂合子。先证者TYR基因未见突变。群体中102名表型正常者中无A787T突变等位基因。结论在基因水平确定我国存在眼皮肤白化病Ⅱ型，同时发现了一种P基因病理性新突变。     

Phylogeny of Thogoto Virus

Thogoto virus is a tick-borne member of the family Orthomyxoviridae. Previously, based on the similarity in antigenic relationship by cross-neutralization test, all virus strains were concluded to have derived from the same origin. In this study, we obtained partial gene sequences of 4 genes (PB1-like protein, PA-like protein, glycoprotein, and nucleoprotein) of 8 Thogoto virus strains isolated in Africa, Asia, and Europe and studied the genetic variation and phylogeny. Unrooted phylogenetic trees created by both neighbor-joining and maximum likelihood methods based on nucleotide and amino acid sequences for 4 genes were mostly similar and revealed two lineages, Euro-Asian and African. Intra-lineage nucleotide sequence variation was greater in the Euro-Asian lineage than in the African lineage for all 4 genes. Furthermore, for the strains of Euro-Asian lineage, variations for two genes associated with RNA-dependent RNA polymerase activities were greater than those for glycoprotein or nucleoprotein gene, based on both nucleotide and amino acid sequence differences as well as on synonymous and nonsynonymous differences, indicating greater mutation rates for the polymerase activity genes in these strains.     

视肉膜母细胞瘤(RB)抑癌基因治疗原理及策略

The retinoblastoma (RB) gene was the first tumor suppressor gene identified．It encodes a nuclear phosphoprotein which is differentially phosphorylated during the cell cycle．And the RB gene apparently plays a key role in cell growth regulation．Mutations in RB are seen in virtually all cases of retinoblastoma，and loss of RB gene function has been implicated in the progression of many common human cancers．A number of studies have indicated that replacement of the normal RB gene in RB-defective tumor cells could suppress their tumorigenic activity in nude mice．Preclinical studies also demonstrated that treatment of established human xenograft tumors in nude mice by recombinant adenovirus vectors expressing RB protein resulted in regression of the treated tumor．These studies make the emerging RB gene therapy even more attraction．