组胺H3受体对垂体瘤AtT-20细胞分泌ACTH的调节作用

目的　观察组胺受体激动剂对AtT-20细胞分泌ACTH的影响,并探讨G蛋 白在组胺H3 受体信号转导机制中的作用. 方法　选用文献报道的高表达组胺H3受体 的垂体细胞瘤AtT-20 作为观察系统,用放免分析法测定给予组胺受体激动剂后各时间点细胞上清液中ACTH分泌量 的变化,并观察药物对细胞增殖的影响. 结果　组胺H3受体激动剂R- (α)- MeHA（0.1 μmol*L-1）作用8 h能明显促进ACTH的释放,释放量为1920 μg * L-1,与同时间对照组（780 μg*L-1）相比,明显增高（P<0.01）;H 1和H2激动剂则无此作用. 且R-(α)-MeHA引起ACTH分泌 的效应能被H3受体特异性拮抗剂thioperamide所拮抗,而H1受体和H2受体拮抗剂均不 影响 R-(α)-MeHA的效应. R-(α)-MeHA作用8和24h,对细胞增殖无明显影响. 用G蛋白失活 剂NEM 预先处理细胞后,取消了R-(α)-MeHA增强AtT-20细胞ACTH分泌的效应. 结论 　特异性激动组胺H3受体后能引起兴奋-分泌耦联过程,其信号转导过程中有G蛋白的参与.     

稳定转染H3受体基因的HEK293细胞株的鉴定及新型非咪唑类H3受体拮抗剂的筛选

目的:鉴定转染大鼠组胺H3受体基因的HEK293细胞株受体表达情况,筛选具有H3受体拮抗活性的新型非咪唑类化合物。方法:利用RT-PCR和免疫印迹的方法检测转染细胞株组胺H3受体的表达,以阳性刺激物forskolin诱导细胞内cAMP含量升高为指标,初步筛选具有拮抗作用的化合物。结果:细胞鉴定结果显示,稳定转染H3受体基因的HEK293细胞株高表达大鼠H3受体。H3受体选择性激动剂(R)-α-甲基组胺可浓度依赖性抑制阳性刺激物forskolin(10μmol/L)诱导的cAMP含量升高(P<0.05),当(R)-α-甲基组胺浓度达到30 nmol/L时,抑制率接近平台值(P>0.05)。而H3受体拮抗剂噻普酰胺和新合成的非咪唑类化合物XHA23及XHA25则能够浓度依赖性阻断(R)-α-甲基组胺对forskolin诱导的cAMP含量升高的抑制作用(P<0.05),IC50分别为3.62μmol/L、0.49μmol/L、0.14μmol/L。结论:高表达H3受体的HEK293细胞株可用于有H3受体拮抗活性化合物的筛选,而非咪唑类化合物XHA23和XHA25具有一定的H3受体拮抗剂样活性。     

组胺对β淀粉样蛋白诱导PC12细胞阿尔茨海默病体外模型的保护作用

目的:观察组胺对β淀粉样蛋白1-42(Aβ42)诱导大鼠肾上腺嗜铬瘤(PC12)细胞损伤的改善作用及其相关的受体亚型。方法:运用PC12细胞,采用Aβ42构建阿尔茨海默病体外模型,以形态学和四甲基偶氮唑盐比色法为指标,观察细胞损伤和药物的改善作用。结果:Aβ42浓度依赖性诱导细胞损伤。组胺在10-7、10-6mol/L浓度时能显著改善Aβ42(5μmol/L)作用24h引起的细胞损伤,10-6mol/L保护作用最大。组胺10-6mol/L的保护作用能被组胺H2受体拮抗剂zolantidine,H3受体拮抗剂clobenpropit所逆转,但不能被H1受体拮抗剂苯海拉明所拮抗。结论:组胺能减弱Aβ42诱发的细胞损伤,可能与组胺H2,H3受体有关。     

组胺及组胺受体拮抗剂对离体猪脑血管的调节作用

实验用离体猪脑血管标本（基底动脉环）研究组胺（His）及其受体拮抗剂对脑血管舒缩作用的影响。His10(-5)mol／L使脑血管收缩，达最大张力（055±0.14）g，但维持时间较短，随之血管舒张。H1受体拮抗剂苯海拉明、扑尔敏可拮抗His对脑血管的收缩作用，并使His的量一改曲线平行右移，最大反应不压低，其PA2值分别为8.54和9.67。H2受体拮抗剂西米替了、雷尼替了可拮抗His的舒血管效应，使其量一效曲线左移。结果表明，在猪脑血管上存在着不同的His受体亚型，分别参与对猪脑血管舒编作用的调节。     

糖皮质激素对大鼠腹腔肥大细胞分泌组胺的快速抑制作用

目的:分析糖皮质激素对大鼠腹腔肥大细胞分泌组胺的快速抑制作用.方法:采用荧光分光光度法测定邻苯二甲醛与组胺在碱性条件下生成的荧光物质,检测不同条件下大鼠腹腔肥大细胞分泌的组胺.结果:(1)用10-7mol/L皮质酮预处理细胞7 min后,肥大细胞分泌组胺即受到抑制(P＜0.05);(2)牛血清白蛋白偶联的皮质酮(B-BSA)可以模拟皮质酮的快速抑制作用;(3)糖皮质激素细胞内受体拮抗剂RU38486对皮质酮的快速抑制作用无阻断效应;(4)蛋白质合成抑制剂放线菌酮预处理细胞3 h后,皮质酮仍可快速抑制肥大细胞分泌组胺.结论:皮质酮对大鼠腹腔肥大细胞分泌组胺具有快速抑制作用,这一作用不直接依赖于细胞内蛋白质合成,也不依赖细胞内的糖皮质激素受体.此种快速抑制作用属非基因组机制.     

组胺受体H1和H4在过敏性炎症中的作用:新型抗组胺药的研究

组胺在过敏性炎症中起关键性作用,长期以来人们认为组胺释放引起的炎性反应是由H1受体介导的.H1受体拮抗剂也称为抗组胺药,用于治疗过敏性反应已很多年.但是在哮喘和慢性瘙痒症的病理状态下组胺的重要性可能被低估.已证明组胺的确在炎症和免疫调节疾病中起作用,特别是H4受体的发现及其在多种免疫和炎性细胞中的表达,提示应重新评价组胺的作用,预示新型H4受体拮抗剂将被发现,且H1,H4受体拮抗剂在许多炎性反应靶标上可能有协同作用.     

组胺对大鼠脑皮质内血管的作用

目的探讨组胺对大鼠脑片皮质内血管的调控作用和机制。方法免疫组化方法检测H1和H2受体在大鼠脑皮质内血管的表达。采用鉴别干涉对比显微镜观察大鼠脑片额叶皮质血管,实时检测和记录组胺引起的血管内径变化。为观察组胺对脑皮质内血管的收缩作用是否与组胺H1、H2受体有关,用H1受体拮抗剂苯海拉明和H2受体拮抗剂西咪替丁预处理脑片,再观察组胺的作用。结果H1受体和H2受体在脑皮质血管壁呈免疫反应阳性。组胺产生浓度依赖性血管收缩,血管收缩率从(1.48±0.67)%到(32.91±7.91)%。除在高浓度(30、100μmol/L)之间没有显著性差异(P>0.05)外,各浓度间都有显著性差异(P<0.01)。苯海拉明预处理脑片,组胺没有引起血管变化。用西咪替丁预处理脑片,组胺仍引起血管收缩,各浓度组间存在显著性差异(P<0.05)。与单纯加入组胺相比,在10和30μmol/L浓度有显著性差异(P<0.05)。结论组胺可引起脑皮质内血管的收缩,其机制是通过H1受体介导。     

组胺对N-甲基-D-天门冬氨酸诱发的神经元损伤的改善作用

目的:在细胞水平探讨组胺对N-甲基-D-天门冬氨酸 (NMDA) 诱发的神经元损伤的改善作用及初步机制.方法:采用原代新生大鼠皮层培养的方法,以形态学和二苯基四氮唑溴盐染色为指标观察神经元的损伤和药物的改善作用.结果:组胺在10-4、10-6、10-7、10-8 mol/L浓度时能显著改善NMDA 50 μmol/L作用3 h引起的神经元死亡,并在10-4和10-7 mol/L浓度时分别呈现保护双峰.组胺10-7 mol/L的改善作用只被组胺H2受体西米替丁逆转,而组胺10-4 mol/L的改善作用只被H1受体吡拉明逆转.结论:组胺能减弱NMDA诱发的神经元兴奋性死亡,其保护作用在低浓度时可能与H2受体有关,在高浓度时可能与H1受体有关.     

组胺受体激动剂对粒单核白血病细胞（WEHI－3）增殖的影响

用体外琼脂培养方法，检测经不同浓庆组胺Ｈ１受体激动剂，Ｈ２受体激动剂及其拮抗剂孵育的粒单核白血病细胞集落数。结果显示：组胺Ｈ１受体激动剂对白血病细胞集落数无明显影响；组胺Ｈ２受体激动剂ｉｍｐｒｏｍｉｄｉｎｅ１Ｏ￣５～１０－８ｍｏ１／Ｌ逍度范围内可明显增加集落数，１０－６ｍｏ１／Ｌ时集落数最高；Ｈ２受体拮抗剂甲氰咪胍可阻断这一效应。提示粒单核白血病细胞也存在在组胺Ｈ２受体，激动组胺Ｈ２全体可促进粒单核白血病细胞的进一步增殖。     

塞曲司特对致喘递质诱导的豚鼠气管条和肺条收缩作用的影响

目的:探讨血栓素A2受体拮抗剂塞曲司特对组胺、乙酰胆碱、KCl诱导的豚鼠离体气管条和肺条收缩作用的抑制影响,并与短效β2受体激动剂特布他林比较.方法:用定量药理分析方法测定和记录:①用塞曲司特孵育前后组胺、乙酰胆碱、KCl诱发的豚鼠离体气管条的收缩;②用特布他林孵育前后组胺、乙酰胆碱、KCl诱发的豚鼠离体气管条的收缩;③塞曲司特、特布他林对组胺诱导的豚鼠肺条收缩的影响.结果:①组胺、乙酰胆碱在体外引起了豚鼠离体气管条的浓度依赖性的收缩,pD2分别为(6.19±0.47)和(5.99±0.21),塞曲司特抑制了组胺、乙酰胆碱诱发的收缩,pD2分别为(4.16±0.82)和(3.61±0.57).②对60 mmol/L KCl诱发的气管条收缩,塞曲司特、特布他林均可抑制其最大收缩反应,IC50分别为7.28×10-6 mol/L、3.36×10-6mol/L.③对组胺诱导的肺条收缩,塞曲司特、特布他林均有明显的拮抗作用.结论:塞曲司特对致喘递质诱发的豚鼠离体气管条和肺条收缩有明显的抑制作用,是一种有效的支气管扩张剂.     

Dissection of the Role of Cell Type Specific Histamine Receptors in Central Nervous System Disorders

The neurotransmitter histamine receives less attention compared with other biogenic amines, because of its moderate action in the central nervous system (CNS). Recent evidence suggests that histamine plays an important role in multiple CNS disorders, however histamine receptors in different cells may have distinct actions. So, we generated mice with selective deletion of histamine receptors in different types of neuron and glia to dissect the role of cell type specific histamine receptors in CNS disorders. We discovered that histamine H2/H3 receptors in neurons, H1/H2 receptors in astrocytes, H2 receptors in oligodendrocytes are implicated in the process of excitotoxicity, neuronal autophagy, glial scar formation and remyelination following cerebral ischemia. Recently, we found that deletion of H1 receptors in cholinergic neurons (Hrh1fl/fl;ChATCre), but not the glutamatergic (Hrh1fl/fl;CaMKII?Cre) or dopaminergic neurons (Hrh1fl/fl;DATCre), selectively leads to schizophrenia-like negative symptoms, suggesting H1R in cholinergic neurons could serve as a therapeutic target for the negative symptoms of schizophrenia. The in-depth understanding of the potential action of cell type specific histamine receptors are necessary stepping stones to unlock the wide-ranging applications of histamine related agents in the clinical arena.     

五步蛇毒对大鼠脑区海马组胺受体H2 mRNA和蛋白质表达的影响

目的 研究五步蛇毒对大鼠脑区海马组胺受体H2 mRNA及蛋白质表达的影响.方法 用RT-PCR和Western blot方法检测五步蛇毒对不同时相点大鼠海马组胺受体H2 mRNA及蛋白质表达的变化.结果 五步蛇毒处理后,大鼠海马组胺受体H2 mRNA及蛋白质的表达在各时相点均发生变化,且其mRNA和蛋白质表达均为先即时上调然后下调,最后又上调.结论 大鼠海马组胺H2受体 mRNA和蛋白质表达的变化对海马的生理功能有一定的影响.     

山茛菪碱(654-2)的抗炎症作用

山莨菪碱(654-2)对二氧化硫吸入所致大鼠急性气管炎,角叉菜胶所致大鼠脚爪水肿,油酸所致大鼠急性肺损伤及博莱霉素A5所致肺纤维化均有保护作用。阻断组胺作用及抑制溶酶体酶的释放,可能是654-2抗炎症作用的部分环节。     

豚鼠第三脑室微量注射组胺对呼吸运动的影响

目的探讨第三脑室微量注射组胺对麻醉豚鼠呼吸运动的影响及其作用机制。方法采用中枢立体定位技术，在豚鼠第三脑室微量注射组胺、组胺H1受体拮抗剂扑尔敏和H2受体拮抗剂西咪替丁，观察其对呼吸流量、膈肌电活动的影响。结果与生理盐水对照组比较，微量注射组胺后0～10min，呼吸频率、潮气量、每分通气量均增加，膈肌肌电活动增强。该作用可被组胺H1受体拮抗剂扑尔敏预处理阻断，但不受组胺心受体拮抗剂西咪替丁预处理的影响。结论第三脑室微量注射组胺有兴奋呼吸的作用，该作用可能是由组胺H1受体所介导的。     

组织胺诱导胸腺细胞凋亡的研究

用苔盼蓝及吖啶橙染色，ＤＮＡ片段检定与ＤＮＡ电泳等方法进行组织胺诱导胸腺细胞凋亡的研究，旨在探讨其可能机制及其在胸腺细胞负选择中的作用。结果表明，组织胺诱导使体外培养的胸腺细胞出现典型的细胞调亡。雷尼替丁可阻断上述作用，提示胸腺细胞存在Ｈ＿２受体，活化该受体可能在胸腺细胞的负选择中起重要作用。     

荧光分光光度法检测组织中的组胺

目的建立组织中释放组胺的检测方法。方法采用邻苯二甲醛(OPA)对组织中释放的组胺(HA)进行衍生,对衍生物进行激发与发射波长扫描。采用Na3PO4沉淀组织液中的干扰离子。结果组胺-邻苯二甲醛衍生物的最大激发波长和发射波长分别为347 nm和442 nm,Na3PO4能够有效地消除Ca2 和Mg2 对荧光的淬灭作用。该法测定组胺的工作曲线回归方程为F=1.584C 40.392,相关系数r=0.999 5,线性范围为9.01×10-9~9.01×10-7mol/L,检出限为4.51×10-9mol/L。高、中、低浓度组胺的回收率为91.9%~115.8%。结论该方法可用于检测组织中释放的组胺,无须提取,操作简便、快捷,效果可靠。     

内毒素对鼠肺／肠微血管及体外培养内皮细胞通透性的影响及凋亡在其中的作用

目的观察内毒素（LPS）对鼠肺和肠微血管及体外培养内皮细胞通透性的影响及凋亡在其中的可能作用。方法（1）观察内毒素血症时大鼠肺、肠组织微血管通透性的改变。（2）观察LPS对体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）通透性的影响。（3）观察LPS对体外培养HUVEC凋亡的影响，从而探讨凋亡在内皮细胞通透性改变中的作用。结果（1）在大鼠内毒素血症模型中，5ms／ks和10mg／kg LPS均可造成肺、回肠组织伊文氏兰含量增加（P〈0．01或0．05）。（2）100μg／ml LPS可显著增加体外单层HUVEC对牛血清白蛋白的通透性（P〈0．05或0．01）。（3）LPS可引起的体外培养内皮细胞的凋亡。结论（1）LPS能迅速提高体内肺微血管内皮细胞通透性，而LPS作用后6h肠微血管通透性开始增加。（2）LPS可剂量依赖性的引起体外培养脐静脉内皮细胞通透性升高。（3）细胞凋亡可能是引起内毒索血症时内皮细胞通透性的原因之一。     

组胺和甲氰咪胍对粒-单系祖细胞的影响

用体外琼脂培养法研究组胺和甲氰咪胍对小鼠粒-单系祖细胞的影响,结果表明,10~(-9)M～10~(-5)M 组胺和10~(-8)M～10~(-4)M 甲氰咪胍分别作用时,对粒-单系祖细胞的产率没有影响,用甲氰咪胍阻断 H_2-受体后,组胺可增加粒-单系祖细胞的产率和自杀率。对此结果的理论意义和临床意义进行了讨论。