电针对阿尔茨海默病模型大鼠海马COX-2、iNOS表达的影响

目的观察电针对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力及大脑海马CA1区神经元炎性反应的影响,探讨针灸防治AD的具体作用机制。方法雄性Wistar大鼠50只,随机分为正常组、假手术组、模型组、电针组,每组10只,采用双侧海马注射凝聚态Aβ25-35制备AD大鼠模型。电针组选取双侧肾俞穴、双侧足三里穴和大椎穴,接韩氏电针仪治疗。采用Morris水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力,免疫组化法检测脑组织中海马神经元环氧合酶-2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)的表达。结果大鼠海马注射Aβ25-35导致海马CA1区锥体神经元的损伤,同时伴有COX-2、iNOS表达增加。与模型组相比,电针能有效抑制COX-2、iNOS表达(均P0.05),显著提高AD大鼠的学习记忆能力(P0.05)。结论电针能有效抑制AD大鼠脑内神经元炎性反应,改善AD大鼠空间探索的能力,其作用机制可能与减轻COX-2过表达,抑制iNOS活性有关。     

丹参酮ⅡA对人胃癌MKN-45细胞增殖及基质金属蛋白酶-2表达的影响

[目的]通过观察丹参酮ⅡA对人胃癌MKN-45细胞的抑制作用及对转移相关基因MMP-2表达的影响,探讨其抗肿瘤的机制.[方法]MTT法检测不同浓度丹参酮ⅡA作用下,体外培养的MKN-45细胞的增殖情况; RT-PCR法、酶谱分析法检测MKN-45细胞MMP-2 mRNA及蛋白的表达.[结果]丹参酮ⅡA各浓度组对肿瘤细胞增殖的抑制率与阴性对照组相比,有显著差异(P<0.05),相关回归分析表明24h、48h、72h的半数抑制浓度分别为42.5μg /ml、19.4μg /ml和7.4μg /ml.PCR半定量分析发现:丹参酮ⅡA各组的MMP-2 mRNA表达均受到抑制,抑制程度随着药物浓度的增加而增加,酶谱分析法显示:丹参酮ⅡA能降低胃癌MKN-45细胞的MMP-2蛋白表达,其作用呈剂量-效应正相关,与阴性对照组相比,差异有显著性(P<0.05).[结论]丹参酮ⅡA能有效抑制胃癌MKN-45细胞的生长,并具有明显的时间和剂量依赖性.丹参酮ⅡA可能通过抑制胃癌MKN-45细胞MMP-2 mRNA的转录下调MMP-2蛋白的表达,进而抑制肿瘤增殖.     

iNOS和MMP－2在形觉剥夺性近视中的表达变化

目的探讨诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和基质金属蛋白酶－2（MMP－2）在形觉剥夺性近视豚鼠眼后极部的表达。方法对2周龄豚鼠以半透明眼罩遮盖右眼9周制备形觉剥夺性近视（FDM）动物模型,左眼作为对照。遮盖3、6、9周后随机抽取15只豚鼠,检影验光检测双眼屈光度,A型超声测量双眼眼轴长度,免疫组织化学检测眼后极部iNOS和MMP-2的表达变化。结果形觉剥夺使豚鼠眼轴延长,近视屈光度增加,遮盖眼与对照眼屈光度和眼轴长差异均有统计学意义（P〈0．05）。遮盖眼iNOS和MMP-2免疫活性逐渐增加,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,两者的表达量在形觉剥夺过程中呈强相关性（r=0．769,P〈0．05）。结论iNOS和MMP-2可能参与形觉剥夺性近视的形成,NO信号通路可通过调节巩膜MMP-2的活性造成巩膜重塑。     

iNOS、MMP-2及Notch1在胃癌中的表达与转移的关系

目的研究iNOS、MMP-2及Notch1蛋白在胃癌组织中的表达及其与转移的关系。方法取68例胃癌组织切片,采用免疫组化染色法检测iNOS,MMP-2及Notch1在胃癌组织中的表达,并统计分析其与胃癌临床病理学特征的关系,分析三种蛋白的表达与胃癌转移的关系。结果iNOS的阳性表达与淋巴转移、浸润深度、临床分期相关（P〈0．05）。并随浸润深度的增加,其表达逐渐增强（P〈0．05）,淋巴结转移阳性者iNOS的表达高于阴性者（P〈0．05）。MMP-2蛋白阳性表达率与淋巴转移、浸润程度及临床分期相关（P〈0．05）。Notch1蛋白阳性表达率与肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移和浸润程度的相关性均有统计学意义（P〈0．05）。68例胃癌患者中,发生淋巴结转移者共39例,其中iNOS及MMP-2的表达分别与Notch1表达呈显著正相关（P〈0．05）。而MMP-2与iNOS的表达并无相关趋势（γ=0．015,P〉0．05）。结论iNOS、MMP-2及Notch1三种蛋白共同参与了胃癌的发生发展,且iNOS及MMP-2可能通过共同的Notch1信号途径,促进肿瘤血管生成而促进胃癌转移。     

ICAM-1、MMP-2及iNOS表达与胃癌侵袭转移的关系

目的 探讨细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在胃癌组织中的表达及与胃癌侵袭转移的关系.方法 RT-PCR法检测了45例胃癌组织及15例癌旁正常胃黏膜组织中ICAM-1 mRNA、MMP2 mRNA及iNOS mRNA的表达.结果 ICAM-1 mRNA、MMP2 mRNA及iNOS mRNA在胃癌组织中的阳性表达率与癌旁正常胃黏膜组织比较,差异有高度统计学意义(P<0.01);ICAM-1 mRNA、MMP-2 mRNA及iNOS mRNA表达与胃癌TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05),与肿瘤的大小及分化程度无关(P>0.05),三者之间存在着相关性(P<0.05).结论 ICAM-1、MMP-2及iNOS参与了胃癌的形成,其相互作用在胃癌浸润和转移中可能起着重要作用.     

华中五味子酮对阿尔茨海默病样大鼠海马内IL-1β及iNOS表达的影响

目的:观察华中五味子酮(schisandrone)对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)样大鼠海马内白细胞介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)mRNA水平的影响,探讨华中五味子酮对AD可能的防治作用.方法:30只雄性SD大鼠, 8～12周龄,体质量250～300 g,随机分为3组:空白对照组、AD模型组和华中五味子酮干预组(n=10).采用侧脑室立体定向注射β-淀粉样蛋白(amyloid-beta protein)Aβ25-35(溶于无菌生理盐水,浓度10 mmol/L)的方法,建立AD的动物模型,并用华中五味子酮(溶于玉米油,浓度1 mmol/L)灌胃进行药物干预,通过半定量RT-PCR的方法观察华中五味子酮对AD样大鼠海马区IL-1β及iNOS mRNA水平的影响.结果:用华中五味子酮干预,AD样大鼠海马内IL-1β及iNOS mRNA水平(0.333 7±0.122 3和0.266 6±0.088 5)较AD样大鼠(0.969 3±0.153 9和0.666 0±0.121 1)有显著降低(P<0.001).结论:华中五味子酮能够抑制Aβ诱导的氧化应激和炎性反应,在AD发病中可能具有保护作用.     

卡托普利对SHR大鼠eNOS、iNOS表达的影响

目的 探讨自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats, SHR)在高血压发展进程中,卡托普利对SHR内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)表达的改善作用。方法 以WKY(Wistar-Kyoto)大鼠为空白对照,SHR为模型进行分组实验,7～24周龄SHR灌服卡托普利(3.375 g/(kg·d)),后停药观察至32周龄。测量血压、左室质量指数(left ventricular mass index, LVMI)、主动脉舒张功能、血清亚硝酸根离子(NO₂^-)含量、iNOS、eNOS mRNA以及蛋白含量变化。结果 (1)不同周龄的SHR左室质量指数、血清NO₂^-浓度均高于WKY,主动脉的舒张度均显著低于WKY。(2)mRNA表达含量变化：与WKY相比,不同周龄的SHR的心肌和动脉eNOS和iNOS mRN...     

布洛芬对Aβ25-35所致大鼠海马损伤及iNOS表达的影响

目的研究非甾体类抗炎药布洛芬(Ibuprofen,Ibu)对大鼠脑室内注射Aβ25-35所致海马损伤及iNOS mRNA表达的影响.方法大鼠灌胃给予Ibu(7.5,15mg·kg-1)连续应用3w,脑室内注射Aβ25-35 (5μL, 2M),注射后1w,取脑组织,进行尼氏(Nissl)染色和胶质纤维酸蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)免疫组织化学染色,观察海马CA1区锥体神经元形态学改变和星形胶质细胞的活化浸润情况.RT-PCR 分析诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达水平.结果大鼠脑室内注射Aβ25-35可引起海马CA1区星形胶质细胞的激活和浸润及锥体神经元的损伤,同时伴有iNOS mRNA表达增加.Ibu(7.5,15mg·kg-1,连续应用4w)能减轻海马CA1区锥体神经元的损伤及星形胶质细胞的激活和浸润,抑制Aβ25-35引起的iNOS mRNA表达增加.结论 Ibu能够通过抑制Aβ25-35引起的iNOS mRNA表达,减轻大鼠海马锥体神经元的损伤.     

丹参酮ⅡA对RAW264.7细胞分泌MMP-12、TF的影响

目的 观察丹参酮ⅡA(TanⅡA)对RAW264.7细胞中组织因子(TF)和基质金属蛋白酶-12(MMP-12)表达的影响,从而探讨TanⅡA对急性冠脉综合征(ACS)的防治作用.方法 体外培养RAW 264.7细胞,以ox-LDL作为刺激因子,采用MTT法测定了巨噬细胞的增殖,采用ELISA法测定培养细胞上清液中TF浓度,分别采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥法测定上清液中超氧化物歧化酶活(SOD)和丙二醛浓度(MDA),并采用Western-blot法测定细胞中MMP-12的表达,从而观察TanⅡA对ox-LDL引起的巨噬细胞增殖、脂质过氧化及其MMP-12、TF分泌的影响.结果 15、30、60、120 μg/ml TanⅡA可剂量依赖性抑制50 μg/ml ox-LDL引起的RAW264.7细胞的增殖;30、60、120 μg/ml TanⅡA可明显增加细胞上清液中SOD活性、降低MDA浓度及TF浓度,并降低细胞内MMP-12的表达.结论 TanⅡA可抑制ox-LDL引起的RAW264.7细胞的增殖,可抑制该细胞中TF和MMP-12的表达,并且这种作用可能与其抗氧化作用有关.

Abstract：

Objective To investigate the effect of tanshinone ⅡA(TanⅡA) on the expression of tissue factor(TF)and matrix metalloproteinase-12 (MMP-12)in RAW264.7cells and explore the possible mechanism.Methods RAW 264.7 cells were incubated with ox-LDL in the presence or absence of different concentrations oftanshinone ⅡA.At the end of the incubation,the cell proliferation was assessed by MTT assay,and superoxide dismutase (SOD) activity and malondialdehyde(MDA) and TF concentrations in the supernatant were detected by xanthine oxidase method,thiobarbituric acid method and ELISA,respectively.Western blotting was employed to determine MMP-12 expression in the cells.Results The cell proliferation was dose-dependently inhibited by TanⅡA. SOD activity in the supernatant was increased significantly,while the MDA and TF concentration and MMP-12 expression in cells decreased after treatment of the cells with difrerent concentrations of TanⅡA.Conclusion TanⅡA inhibits the cell proliferation and TF and MMP-12 expressions in RAW264.7 cells stimulated by ox-LDL,and these effects may be related with the anti-oxidation property of TanⅡA.     

姜黄素对糖尿病脑病大鼠氧化应激及海马iNOS表达的影响

\[摘要\]目的探讨糖尿病脑病与氧化应激和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的关系,及姜黄素治疗的效果和机制。 方法大鼠随机分为正常对照组(CN)、正常姜黄素组(Cur)、糖尿病组(DM)、糖尿病+姜黄素治疗组(DM+Cur),以注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,Cur组和DM+Cur组采用Cur(60 mg·kg-1·d-1)灌胃给药。12周后测定海马组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量,RT-PCR和免疫组化方法检测海马iNOS mRNA表达水平及iNOS免疫阳性细胞平均光密度值(MOD)值。 结果与CN组相比,DM组海马组织SOD和CAT活性明显降低(P<0.01),NO和MDA含量明显增加(P<0.01),海马组织iNOS mRNA及蛋白表达较CN组明显增加(P<0.01);与DM组相比,DM+Cur组SOD和CAT活性明显增加(P<0.01),NO和MDA含量明显降低(P<0.01),海马组织iNOS mRNA及MOD值明显降低(P<0.01)。 结论糖尿病脑病与氧化应激水平及海马组织iNOS 表达升高相关;姜黄素可能通过抗氧化活性及下调iNOS表达,而对糖尿病脑病起保护作用。     

环孢素A对大鼠急性脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡的影响

目的探讨急性脊髓损伤后应用环孢素A（CsA）对诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达及细胞凋亡的影响。方法108只SD大鼠随机分为对照组、损伤组和CsA治疗组。使用免疫组织化学EnVision法检测急性脊髓损伤大鼠损失节段iNOS表达,原位末端标记法（TUNEL法）标记细胞凋亡并计算凋亡指数。结果损伤组、CsA治疗组及对照组iNOS表达及凋亡指数经单因素方差分析,差异有统计学意义。结论CsA能抑制大鼠脊髓损伤后iNOS的表达及细胞凋亡,减轻脊髓继发性损伤。     

丹参酮ⅡA对骨肉瘤细胞迁移与侵袭能力的作用及机制

目的:探讨丹参酮ⅡA对骨肉瘤MG-63细胞迁移、侵袭和基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)表达的影响.方法:不同浓度的丹参酮ⅡA处理MG-63细胞,细胞划痕法检测MG-63细胞迁移能力;Transwell小室体外侵袭实验法检测MG-63细胞侵袭能力;实时定量PCR法和蛋白印迹法(Western-blot)分别检测MG-63细胞金属基质蛋白酶(MMP-2/9)的mRNA及蛋白水平.结果:丹参酮ⅡA处理后,MG-63迁移明显下降;丹参酮ⅡA浓度在0,10,20,40μmol/L时穿过的MG-63细胞数分别为225.5±5.5、127.5±2.5、97.5±3.5、82.5±4.2个,MG-63细胞侵袭能力明显降低(P＜0.05);丹参酮ⅡA处理明显降低MMP-2及MMP-9的mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05),且具有时间和浓度依赖性.结论:丹参酮ⅡA抑制骨肉瘤MG-63细胞的体外迁移和侵袭能力,这与降低基质金属蛋白酶的表达有关.     

丹参酮ⅡA磺酸钠对2型糖尿病大鼠心肌的保护作用

目的探讨丹参酮ⅡA磺酸钠（TSN）对糖尿病（DM）大鼠心肌的保护作用。方法建立2型糖尿病大鼠模型,分组给予TSN8W后,检测血清和心肌组织中总抗氧化能力（TAC）、丙二醛（MDA）、巯基（SH）、一氧化氮（NO）的含量,血清中肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）和心肌肌钙蛋白I（c Tn I）的含量变化。结果 TSN能减低DM大鼠血清CK、LDH和c Tn I的含量,明显降低DM大鼠血清和心肌MDA（P〈0.01）,提高TAC、SH、NO含量（P〈0.05,P〈0.01）。结论 TSN对糖尿病大鼠心肌具有保护作用,其机制可能与抑制氧化应激有关。     

丹参酮ⅡA对腹膜透析患者基质金属蛋白酶-2及金属蛋白酶组织抑制剂-1的影响

目的基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprote inase-2,MMP-2)及金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inh ib itor of m et-alloprote inase-1,TIMP-1)失衡可导致细胞外基质沉积,是组织纤维化包括腹膜组织纤维化发生发展的重要机制之一。通过体外细胞培养,观察丹参酮ⅡA对人腹膜间皮细胞增殖活性及MMP-2、TIMP-1表达的影响,并通过在腹膜透析液(peritoneal dial-ysis solution,PDS)中添加丹参酮ⅡA了解其对腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)患者腹腔MMP-2和TIMP-1的影响。方法取6例择期手术患者的网膜体外培养腹膜间皮细胞,第3代细胞用于实验,细胞同步后分成对照组、PDS组、丹参酮ⅡA 1mg/L组(丹参酮ⅡA终浓度为1mg/L)、丹参酮ⅡA 5mg/L组(丹参酮ⅡA终浓度为5mg/L)、丹参酮ⅡA 10 mg/L组(丹参酮ⅡA终浓度为10 mg/L)5组(每组6例)进行干预。ELISA法检测各组上清液中MMP-2、TIMP-1的含量,RT-PCR检测各组细胞MMP-2、TIMP-1m...     

丹参酮ⅡA对Lewis肺癌小鼠Bcl-2及Bax表达的影响

目的通过研究丹参酮ⅡA（TanⅡA）对Lewis肺癌荷瘤小鼠瘤组织Bcl-2及Bax的影响,探讨TanⅡA抗肿瘤机制。方法建立Lewis肺癌小鼠模型,将动物随机分为生理盐水（NS）组、TanⅡA组、TanⅡA＋环磷酰胺（CTX）组和CTX组共四组。腹腔连续注射给药。10d后计算各组的抑瘤率。用免疫组化方法测定Bcl-2及Bax表达水平。所有数据用SPSS13.0处理。结果各用药组对Lewis肺癌小鼠肿瘤均有不同程度的抑制作用：TanⅡA＋CTX组抑瘤率最高。盐水组、TanⅡA组、TanⅡA＋CTX组、CTX组各组Bcl-2阳性表达率分别为（59.83±3.38）%、（45.89±5.31）%、（25.26±4.09）%和（30.93±4.13）%。各组Bax阳性表达率分别为（31.96±8.50）%、（39.66±3.81）%、（52.24±5.25）%和（46.58±4.10）%。各项指标以TanⅡA＋CTX组效果最好。结论 TanⅡA通过上调Bax、下调Bcl-2的表达诱导肿瘤细胞凋亡来抑制肿瘤生长,与环磷酰胺有协同作用。     

大鼠iNOS基因siRNA表达体系的构建及鉴定

目的:构建大鼠iNOS基因的siRNA表达体系,为建立RNAi干扰技术平台打下基础。方法:应用siR-NA设计软件在大鼠iNOS的mRNA上寻找特异性的短核苷酸序列,设计合成两条互补的小发夹结构的DNA序列,经退火后形成双链DNA片段,将其克隆到线性的pSilencerTM1.0-U6载体中,转化DH5α大肠杆菌,提取质粒,酶切鉴定后进行测序分析。结果:酶切和序列测定结果表明,大鼠iNOS基因的siRNA表达载体构建成功。结论:成功构建了大鼠iNOS基因的siRNA表达体系,为今后借助RNA干扰技术调节iNOS基因的表达、研究iNOS基因与其它因子的关系奠定了基础。     

局部灌注丹参酮ⅡA纳米球对损伤血管内膜MMP-2表达的影响

目的观察丹参酮ⅡA纳米球对基质金属蛋白酶表达的影响。方法将35只新西兰雄性大白兔随机分为3组,动脉损伤模型组(A组),空白纳米粒组(B组)以及丹参酮ⅡA纳米球组(C组),A组与C组每组为15只,B组为5只,然后局部灌注空白纳米粒以及PLGA包载的丹参酮ⅡA纳米球于球囊损伤后的兔颈动脉内,观察内膜增殖以及MMP-2表达的情况。结果局部灌注28d后C组与另两组相比,内膜面积明显减少(P<0.01),MMP-2表达进行IOD值分析,发现C组和A组在同一时期比较,其表达明显减少(P<0.01)。结论丹参酮A纳米粒不仅表现出显著抑制损伤后血管内膜增殖的效应,而且能够明显减少MMP-2的表达。     

丹参酮对阿尔茨海默病样大鼠海马内乙酰胆碱酯酶和一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨丹参酮治疗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)样大鼠的神经化学机制.方法应用凝聚态β-淀粉样肽1～40片段(Aβ1～ 40)在大鼠海马齿状回背侧进行微量注射以建立AD样记忆障碍的动物模型;利用改良的乙酰胆碱酯酶(AChE)组织化学方法观察大鼠海马内各亚区胆碱能纤维的变化;用免疫组织化学方法检测大鼠海马内神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达.结果大鼠双侧海马内注射Aβ1～40(20μg)14 d后,海马内各亚区AChE阳性纤维面积百分比显著低于对照组;海马内iNOS的表达上调,而nNOS的表达则明显降低.此外,大鼠海马各亚区内AChE阳性纤维面积百分比与iNOS细胞数存在显著负相关.丹参酮50 mg/kg连续灌胃14 d后,分别对上述变化有不同程度的改善作用.结论丹参酮治疗AD样大鼠的作用机制可能与保护脑内胆碱能系统和调节NOS的表达有关.     

糖皮质激素对机械通气大鼠肺组织iNOS、NO表达的影响

目的通过观察糖皮质激素对机械通气大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及一氧化氮(NO)表达的影响,探讨糖皮质激素对呼吸机所致肺损伤(ventilator induced lung injury,VILI)的干预作用。方法 24只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、机械通气组、地塞米松(DXM)干预组。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺组织iNOS mRNA表达,用免疫组织化学染色法检测肺组织iNOS蛋白表达,用硝酸还原酶法测定肺组织和血浆NO含量。结果机械通气组和DXM干预组大鼠肺组织iNOS mRNA及其蛋白表达水平,以及血浆和肺组织NO含量均明显高于对照组(P<0.01);DXM干预组上述指标与机械通气组比较均明显降低(P<0.01)。结论糖皮质激素可通过抑制肺组织iNOS的表达,减少NO的生成,对机械通气大鼠肺组织具有保护作用。