RSV 感染诱导的 RANTES、FKN、IP-10表达及 PPARγ激动剂抑制作用的体外研究

目的研究A549细胞呼吸道合胞病毒（ RSV）感染12 h、24 h、48 h后调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子（RANTES）、分形趋化因子（FKN）、干扰素诱导蛋白-10（IP-10） mRNA和蛋白水平的变化及不同剂量过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂15-脱氧前列腺素J2（15d-PGJ2）和罗格列酮及其拮抗剂（ GW9662）的干预作用。方法建立RSV感染A549细胞的体外模型,将传代培养的细胞随机分成5组：A组（15d-PGJ2＋RSV组）,B组（罗格列酮＋RSV组）、C组（DMSO＋RSV组）、D组（ GW9662＋罗格列酮＋RSV组）、E组（细胞对照组）。各组分别在培养12 h、24 h、48 h收获细胞及上清液待测。应用ELISA检测各组上清液RANTES、FKN、IP-10蛋白水平,实时荧光定量RT-PCR检测各组RANTES、FKN、IP-10 mRNA表达。结果与细胞对照组相比, RSV感染组RAN-TES、FKN、IP-10 mRNA和蛋白的表达在12 h、24 h和48 h均明显升高（P均＜0．05）,其中RANTES、FKN、IP-10 mRNA的表达量在24 h达高峰,48 h有所下降,与12 h的表达量比较差异无统计学意义（P均＞0．05）;而3种趋化因子蛋白的表达量均在48 h达高峰,与12 h、24 h比较差异有统计学意义（P均＜0．05）。在同一作用时间点上,随着15d-PGJ2和罗格列酮药物浓度的增加,RANTES、FKN、IP-10 mRNA和蛋白的表达量均呈剂量依赖性下降,与 RSV 感染组相比差异有统计学意义（ P 均＜0．05）,其中以20μmol/L 15d-PGJ2和30μmol/L罗格列酮干预后RANTES、FKN和IP-10 mRNA和蛋白的表达量最低。结论 RSV感染可导致RANTES、FKN和IP-10 mRNA及蛋白表达升高,其中mRNA水平在感染后24 h达到高峰,蛋白的表达自感染后48 h达到高峰;而PPARγ激动剂能以剂量依赖性方式抑制上述趋化因子mRNA和蛋白的表达,从而起到减轻炎症的作用。     

PPARγ受体激动剂抗肿瘤作用机制研究进展

近年来体外实验表明PPARγ受体激动剂有抗肿瘤的作用,动物实验也证明了这一点。另外,在对脂肪肉瘤及前列腺癌患者的临床研究中,也观察到了PPARγ受体激动剂的抗肿瘤作用。本文就PPARγ激动剂的抗肿瘤作用及其信号传导通路做一综述。     

PPARγ激动剂抗呼吸道合胞病毒感染作用的体外研究

目的 探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)激动剂的体外抗呼吸道合胞病毒(RSv)感染作用.方法 以细胞存活率和病毒抑制率为指标,应用细胞病变效应(CPE)法,观察不同浓度PPARγ激动剂对人肺腺癌(A549)细胞的CPE及RSV感染后CPE的抑制作用.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测PPARγ激动剂对A549细胞的毒性作用和RSV感染后细胞存活率和病毒抑制率的影响.结果 5～25μ mol/L15-脱氧前列腺素J2( 15 d-PGJ2)和10～50μmol/L罗格列酮干预的A549细胞未显示明显CPE,MTT比色法也显示以上浓度范围15 d-PCJ2和罗格列酮的A值明显高于RSV感染组(P＜0.01),但两种药物相比差异无统计学意义.15d-PGJ2和罗格列酮最适浓度分别为5μmol/L和10 μmol/L.结论 PPARγ激动剂既可减轻RSV感染后A549细胞的CPE,又可提高细胞存活率,具有体外抗RSV感染作用.     

PPARγ激动剂抗呼吸道合胞病毒感染作用的体外研究

目的 探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）激动剂的体外抗呼吸道合胞病毒（RSv）感染作用.方法 以细胞存活率和病毒抑制率为指标,应用细胞病变效应（CPE）法,观察不同浓度PPARγ激动剂对人肺腺癌（A549）细胞的CPE及RSV感染后CPE的抑制作用.采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测PPARγ激动剂对A549细胞的毒性作用和RSV感染后细胞存活率和病毒抑制率的影响.结果 5～25μ mol/L15-脱氧前列腺素J2（ 15 d-PGJ2）和10～50μmol/L罗格列酮干预的A549细胞未显示明显CPE,MTT比色法也显示以上浓度范围15 d-PCJ2和罗格列酮的A值明显高于RSV感染组（P＜0.01）,但两种药物相比差异无统计学意义.15d-PGJ2和罗格列酮最适浓度分别为5μmol/L和10 μmol/L.结论 PPARγ激动剂既可减轻RSV感染后A549细胞的CPE,又可提高细胞存活率,具有体外抗RSV感染作用.     

IFN-γ/IL-4对呼吸道合胞病毒感染呼吸道上皮细胞TLR3和TSLP mR-NA表达的影响

目的:探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染呼吸道上皮细胞16HBE对Toll样受体3(TLR3)和胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)mRNA表达的影响,并探索Th1/Th2细胞因子IFN-γ/IL-4对RSV感染16HBE细胞TLR3和TSLPmRNA表达的作用.方法:利用Hep-2细胞扩增病毒,并进行病毒毒力鉴定;不同浓度人工合成双链RNA(dsRNA)聚肌胞加入细胞培养基中,实时荧光定量RT-PCR检测16HBE细胞TLR3mRNA和TSLP mRNA表达水平变化;RSV感染16 HBE细胞试验分组:对照组、RSV感染组(MOI为2的RSV病毒感染16HBE6h)、RSV/IFN-γ组(RSV病毒感染,同时重组人IFN-γ 100μg/L加入培养基)、RSV/IL-4组(RSV病毒感染,同时重组人IL-4 100μg/L加入培养基),实时荧光定量RT-PCR检测TLR3mRNA和TSLPm RNA表达水平变化.结果:经Hep-2细胞培养扩增获得足量Long株RSV病毒;聚肌胞能有效刺激16HBE细胞TLR3mRNA和TSLPmRNA表达水平升高(P<0.01),并随聚肌胞浓度增加提高;RSV感染16HBE细胞6 h,TLR3和TSLPmRNA表达水平均升高(P<0.01);Th2细胞因子IL-4可以加强RSV感染引起的TSLPmRNA表达水平升高(P<0.01),而Th1细胞因子IFN-γ能抑制RSV感染引起的TSLP mRNA表达水平升高(P<0.01).结论:TLR3刺激物聚肌胞能有效刺激人呼吸道上皮细胞TLR3 mR-NA和TSLPmRNA表达水平升高;RSV感染16HBE细胞引起TLR3mRNA和TSLPmRNA表达水平升高;Th2细胞因子IL-4能协同病毒感染增加TSLPmRNA表达水平;Th1细胞因子IFN-γ能抑制RSV感染引起的TSLPmRNA表达水平升高.     

PPARγ激动剂与纤维增生性疾病研究进展

过氧化物酶体增殖物激活受体（Peroxisome proliferator-activated receptor，PPAR）是一类配体激活的核转录因子超家族成员。PPAR包括PPARα、PPARβ／δ和PPARγ三种表型，其中以PPARγ的研究最为深入。近来研究显示，PPARγ除了促进脂肪形成和胰岛素稳态外，还参与许多细胞功能的调控如抗炎和免疫调节等效应。在这些研究中，活化后的PPARγ抗纤维增生性疾病的有效作用成为新的研究热点。     

肥胖大鼠海马内TNF-α、胰岛素降解酶、PPARγ和Aβ的表达及其作用

目的: 检测肥胖大鼠海马内肿瘤坏死因子 α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、胰岛素降解酶(insulin-degrading enzyme,IDE)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)和淀粉样β肽(amyloid β-peptide,Aβ)水平,探讨TNF-α对肥胖大鼠海马内IDE和Aβ的影响,观察TNF-α、Aβ与PPARγ的关系。方法: 建立肥胖(obesity, OB)大鼠模型;葡萄糖氧化酶法检测大鼠血糖水平,放射免疫法测血浆胰岛素水平;实时荧光定量PCR检测大鼠海马内TNF-α、淀粉样β蛋白前体 (amyloid β-protein precursor,APP)、PPARγ及IDE的mRNA水平;蛋白免疫印记技术及免疫组织化学染色法检测大鼠海马内TNF-α、Aβ₄₂(由APP降解产生)、PPARγ及IDE的蛋白表达。结果: OB组大鼠血糖较正常组无明显差别,胰岛素明显升高并存在胰岛素抵抗(P<0.05);实时荧光定量PCR结果显示肥胖大鼠海马内TNF-α和APP mRNA水平较正常组升高(P<0.01),而PPARγ和IDE mRNA表达减少(P<0.01);蛋白免疫印记技术及免疫组织化学法检测与实时荧光定量PCR结果一致。结论: 肥胖时大鼠海马内存在炎性改变,TNF-α表达升高,IDE和PPARγ表达减少,Aβ沉积增加。IDE作为Aβ的重要降解酶,其表达减少是Aβ沉积的关键因素;PPARγ作为调控IDE转录的核转录因子,在本实验肥胖大鼠海马内表达下降,提示IDE生成减少可能与PPARγ作用下降有关。     

丹参酮Ⅱ A对LPS诱导EA.hy926细胞TLR4和TNF-α的影响

目的:观察丹参酮ⅡA对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞EA.hy926炎症反应Toll样受体4(TLR4)和TNFα表达的影响,探讨丹参酮ⅡA抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制.方法:体外培养EA.hy926细胞;RT-PCR和免疫细胞化学法检测TLR4 mRNA和蛋白的表达;RT-PCR和ELISA法检测TNF-αmRNA和蛋白的表达.结果:经LPS刺激后TLR4和TNF-α的表达与正常组比较均明显升高(P＜0.05),丹参酮ⅡA组TLR4和TNF-α的表达与刺激组相比明显受抑制(P＜0.05).结论:抑制TLR4和TNF-α的表达是丹参酮ⅡA抗AS作用的可能机制之一.     

肺炎支原体诱导A549细胞胞内TLR2的表达

肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae,Mp）是能独立存活的病原微生物,其通过黏附、定植于呼吸道上皮细胞进而引起呼吸道的炎性反应.Mp的感染存在着复杂的免疫学机制,国外近来研究显示,Toll样受体2（TLR2）在启动机体天然免疫系统并介导支原体感染所致的炎性反应中起了重要作用.     

中国HIV/AIDS患者外周血单核细胞上TLR4表达和血浆TNF-α水平

目的 观察中国HIV/AIDS患者外周血单核细胞上Toll样受体4(TLR4)表达水平和血浆TNF-α浓度,初步探讨TLR4在HIV感染中的作用.方法 分别运用流式细胞术、ELISA法测定46例HIV/AIDS患者和30例健康对照者的外周血单核细胞上TLR4的表达及血浆TNF-α浓度,采用t检验和相关分析进行数据分析.结果 HIV/AIDS患者外周血单核细胞TLR4的表达率、血浆TNF-α浓度分别是52.19%±4.37%和(35.79±5.08)pg/ml,均显著高于健康对照组;单核细胞上TLR4的表达率与血浆TNF-α浓度、HIV-1病毒载量的相关系数分别是0.645和0.708,呈正相关.结论 中国HIV/AIDS患者外周血单核细胞TLR4表达上调,并且与患者体内HIV复制存在一定的相关性.     

PPARγ对人胰腺癌细胞中抑癌基因PTEN表达的影响

目的:观察PPARγ对人胰腺癌细胞中抑癌基因PTEN表达的影响。方法:采用体外培养人胰腺癌细胞株PANC-1,使用罗格列酮、GW9662细胞处理,运用RT-PCR检测PANC-1细胞中的PTEN基因变化情况。结果:PPARγ激动剂罗格列酮可诱导抑癌基因PTEN的高表达,随着罗格列酮浓度增加,表达也逐渐增强。结论:胰腺癌细胞中PPARγ的表达和抑癌基因PTEN的表达呈一致性,PPARγ可能是通过一定信号的转导通路来调节抑癌基因PTEN的表达,以发挥抗肿瘤的作用。     

GM-CSF对TNF-α诱导白血病细胞凋亡的抑制作用

通过TNFα以及TNFα+GM-CSF对18例白血病患者髓性白血病细胞凋亡的影响研究,发现加TNFα组凋亡细胞数明显高于TNFα+GM-CSF组,两者比较有显著性差异（P<0.01）。本结果提示TNFα有捉进肿瘤细胞凋亡作用,而 GM-CSF则可抑制这种作用。     

婴幼儿呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎Toll样受体4(TLR4)的检测及分析

目的:观察婴幼儿呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎急性期外周血单核细胞表面TLR4的表达以及TLR4表达和急性感染期疾病严重程度之间的关联,并对RSV感染的发病机制作讨论。方法:应用直接免疫荧光法对2374例急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物标本进行RSV病毒抗原检测,对其中40名婴幼儿鼻咽部脱落上皮细胞RSV阳性患儿,用流式细胞仪检测其外周血单核细胞表面TLR4的表达,同时设30名同龄健康儿童为对照组。结果:1岁以内患儿RSV阳性率为50.89%,男性阳性比例高于女性,但阳性率无显著性差异(χ2=2.106,P>0.05);患儿组TLR4为87.57%±7.49%,对照组TLR4为54.92%±4.21%,两者存在显著性差异(P<0.05)。结论:①RSV是婴幼儿期间的急性下呼吸道感染的主要病原体。②RSV阳性肺炎感染患儿早期外周血单核细胞表面TLR4表达明显升高。     

PPARγ和RXRα的表达上调增强了对肿瘤细胞生长的抑制作用

目的研究过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPAPγ)和维甲类X受体α(RXRα)在人消化系统肿瘤(胃癌MGC803、结肠癌LOVO、肝癌SMMC7721)细胞中的表达及其对配体作用的反应。方法采用MTT检测细胞生长;半定量RT-PCR法检测PPARγ和RXRαmRNA的表达。结果吡格列酮(PGZ)单独作用及与9-顺式-维甲酸(9-cis-RA)联合作用72 h,对MGC803和SMMC7721产生较强的抑制作用,联合作用组的抑制作用显著强于PGZ单独作用组(P<0.01),但对LOVO的抑制作用不明显。PPARγ和RXRα在MGC803细胞中有较强表达,在SMMC7721和LOVO细胞中表达较弱。PGZ能显著上调MGC803和LOVO细胞中PPARγ的表达,联合作用组PPARγ表达比PGZ单独作用组显著升高(P<0.05);9-cis-RA能显著上调MGC803和LOVO细胞中RXRα的表达,联合作用组RXRα表达与9-cis-RA单独作用组无明显差别。结论在MGC803、LOVO和SMMC7721肿瘤细胞中,MGC803细胞PPARγ和RXRα表达最强,这对配体发挥作用可能是必需的,配体发挥的抑制细胞生长的效应可能与其介导的信号途径有关。     

TNF-α对肠上皮细胞PIgR、NF-κB亚单位表达影响

目的:研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对Caco-2细胞表达多聚免疫球蛋白受体(pIgR)和核因子-κB(NF-κB)亚单位RelA/RelB的影响。方法:采用Real-time PCR方法检测肠上皮细胞表达pIgR、RelA和RelB的变化。结果:与无TNF-α刺激比较,用不同浓度TNF-α刺激后pIgR、RelA和RelB基因的表达明显增加(P<0.01)。结论:TNF-α促进肠上皮细胞表达pIgR、NF-κB亚单位基因表达,TNF-α通过NF-κB通路激活pIgR基因的转录。     

定喘汤及宣降清分解剂对RSV感染Hela细胞的实验研究

呼吸道合胞病毒(RSV)是婴幼儿下呼吸道感染的主要病原体，我院儿科采用定喘汤加减治疗RSV感染，取得了好的疗效。为探讨定喘汤的作用机理，我们进行了定喘汤及宣、降、清分解剂在Hela细胞上抗RSV的实验研究，现报道如下。     

慢性高眼压大鼠视网膜胶质细胞TNF-α及其受体的表达

目的： 通过研究大鼠慢性高眼压模型视网膜胶质细胞TNF-α及其受体的表达，探索胶质细胞在青光眼视网膜神经节细胞损伤中的作用机制。方法: 用结扎上巩膜静脉联合术后球结膜下注射5-Fu的方法建立大鼠慢性高眼压模型。在模型建立后1月，做眼球冰冻切片，行免疫组织化学染色，在激光共聚焦显微镜下观察视网膜TNF-α-GFAP、TNF-α-OX42 、TNFR-1-GFAP以及TNFR-1-NeuN的双标染色情况。结果: 结扎上巩膜静脉联合术后结膜下注射5-Fu可诱导较长时间稳定高眼压，4周内6只高眼压眼眼压均大于22 mmHg；正常大鼠视网膜未见明显TNF-α以及TNF-R1阳性染色，1个月高眼压大鼠TNF-α在视网膜的表达高于正常对照组，并且有TNF-α-GFAP、TNF-α-OX42的共表达；在慢性高眼压情况下，TNF-R1在视网膜内层的表达也高于正常对照组，并且在视网膜内层有TNF-R1与 GFAP的共表达，但TNF-R1与神经节细胞层NeuN（神经元特异性核蛋白）没有共表达。结论: 在慢性高眼压情况中，活化的视网膜胶质细胞来源的TNF-α可能在神经节细胞损伤中发挥重要作用。     

肺炎嗜衣原体热休克蛋白10经TLR2及TLR4调控THP-1分泌TNF-α

目的 探讨肺炎嗜衣原体(Cpn)热休克蛋白10(HSP10)诱导人单核细胞分泌炎症因子的作用及Toll样受体(TLR)2、TLR4与此作用的相关性.方法 制备Cpn HSP10(CHSP10)纯化蛋白,去内毒素活性后用不同浓度(0.5、1、5、10、20、30μ/ml)刺激THP-1细胞0、6、12、24、36、48、60 h,并比较蛋白不同处理组别中TNF-α的水平差异;以间接免疫荧光及RT-PCR鉴定THP-1细胞上的TLR4及TLR2;分离C3H系野生型和TLR4缺陷型小鼠巨噬细胞,以CHSP10刺激后检测TNF-α水平;用抗TLR2/TLR4单克隆抗体预孵育细胞,ELISA检测CHSP10刺激细胞前后TNF-α的变化.结果 CHSP10刺激THP-1细胞引起上清液炎症因子TNF-α水平显著增加,经加热等处理后蛋白诱生TNF-α的作用明显降低.THP-1细胞可检测到TLR2及TLR4的mRNA及蛋白表达,CHSP10诱生C3H系野生型小鼠细胞分泌的TNF-α明显高于TLR4缺陷型小鼠细胞,TLR2/4经单克隆抗体作用后均可显著降低CHSP10诱导THP-1分泌TNF-α的水平.结论 CHSP10可能作为炎症相关蛋白参与了Cpn对宿主细胞的致炎作用;并且TLR2及TLR4在该炎症刺激信号的传递过程中发挥一定的作用.     

检测HBV和HCV重叠感染患者血清中TNF-α及IFN-γ水平的意义

有研究表明,在HBV感染的患者中,约有10%以上的患者重叠HCV感染.重叠感染者的病情不论从肝脏组织学损伤还是临床表现上都较单纯感染者为重,且易发展为进行性肝功能衰竭,但发病机制目前尚未完全阐明.本实验通过检测HBV和HCV重叠感染患者血清TNF-α及IFN-γ水平,探讨这两种细胞因子与HBV和HCV重叠感染的关系,为临床免疫治疗及预后判断提供理论依据.     

大鼠肾脏机械损伤早期TNF-α及其受体的表达

探讨外源性ADM对肾脏机械性损伤早期TNF-α及受体表达的影响.选健康成年普通级Wistar大鼠104只.随机分为四组:对照组8只、创伤组32只、创伤前注射ADM组32只、创伤后注射ADM组32只,后三组的动物分别于创伤后1、6、12和24 h各处死8只.采用自由落体打击仪直接打击大鼠脊肋区制作肾机械性损伤模型.ADM分别于创伤前或创伤后10 min采用腹腔注射法给药.实验动物采用快速心脏采血法处死.取下肾脏标本,10%甲醛固定.观察TNF-α、TNFR在组织中的表达规律.结果表明:单纯创伤组于创伤早期TNF-α表达高于正常对照组,外源性ADM早期(1 h和6 h点)可抑制,TNF-α(P<0.05).单纯创伤组于创伤早期(1 h和6 h点)TNFR表达低于正常对照组,外源性ADM(创伤前给药)早期(1 h和6 h点)可上调节TNFR(P<0.05).说明TNF-α在创伤早期即参与了肾组织炎症的急性期反应并加重损伤.TNFR对TNF-α具有动态调节作用.ADM能降低TNF-α的分泌.ADM在早期肾损伤过程中可以上调TNFR,与其相互协调,共同发挥对损伤器官的保护作用.