2,3,7,8-四氯二苯并二噁英诱导腭裂发生中相关信号通路的作用研究进展

二噁英可导致包括腭裂在内的多种新生儿出生缺陷。2,3,7,8-四氯二苯并二噁英(TCDD)作为二噁英毒性效应的代表性受试物,其毒性最强。本文就TCDD毒性相关的信号通路进行综述,并着重介绍芳香烃受体、转化生长因子-β、Wnt和表皮生长因子受体信号通路在新生儿腭裂中发挥的功能,以期全面了解TCDD毒性作用机制,并为新生儿腭裂的预防和治疗提供理论依据。     

2,3,7,8-四氯二苯二噁英诱导腭裂发生的差异蛋白筛选

目的:以蛋白质组学方法筛选2,3,7,8-四氯二苯二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)致先天性腭裂发生的差异表达蛋白.方法:以TCDD诱导建立胎鼠先天性腭裂模型,行腭部的大体解剖及组织学检查.取实验组和对照组胎鼠的腭组织,分别提取组织总蛋白.通过双向电泳和质谱分析,...     

亚慢性2,3,7,8四氯二苯并二噁英暴露对大鼠肝脏的毒性

目的：了解亚慢性2,3,7,8四氯二苯并二噁英（TCDD）暴露对大鼠肝脏的毒性作用。方法：1月龄SD大鼠随机分为阴性对照组（予玉米油）和3个TCDD（2、10和50 ng.kg-1.d-1）实验组,每组30只,雌雄各半,连续暴露13周后测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性,观察肝脏病理组织学变化。结果：亚慢性TCDD暴露对大鼠体质量和主要脏器相对重量无明显影响;血清AST和ALT活性在实验组升高：雌鼠AST和ALT在10和50 ng.kg-1.d-1组高于对照组和2 ng.kg-1.d-1组（P〈0.05）;雄鼠AST在50 ng.kg-1.d-1组高于其它3组（P〈0.05）,ALT在各组间差异无统计学意义;病理观察发现实验组肝组织坏死,肝血窦瘀血和肝细胞空泡样变。结论：亚慢性TCDD暴露对大鼠肝脏具有毒性作用,且雌鼠比雄鼠的肝脏对TCDD的毒性更敏感。     

黄芪提取物对乳鼠肥大心肌细胞PKD1 mRNA表达的影响

目的 探讨黄芪提取物对乳鼠肥大心肌细胞中蛋白激酶D1(PKD1)mRNA转录表达的影响及其作用机制.方法 乳鼠心肌细胞原代培养,复制AngⅡ致心肌细胞肥大模型后,分别从不同剂量和不同处理时间研究黄芪提取物对乳鼠肥大心肌细胞PKD1 mRNA表达的影响.不同剂量组随机分为正常对照组、模型组、缬沙坦(Val)对照组及黄芪提取物组.正常对照组不加入任何药物;模型组加入终浓度为10-6 g/L AngⅡ;Val组在模型组的基础上加入终浓度为10-6 g/L的Val;黄芪提取物组在模型组的基础上加入10-4、5× 10-4、10-3和2×10-3 g/L不同浓度的黄芪提取物.不同处理时间组随机分为正常对照组、模型组、Val组、10-3g/L剂量黄芪提取物组;收集心肌细胞的不同时间点分别为24、48、72和96 h.应用RT-PCR法测定PKD1的mRNA表达.结果 黄芪提取物不同剂量组对乳鼠肥大心肌细胞PKD1 mRNA表达的影响结果表明,与模型组相比,Val组PKD1 mRNA的表达显著降低(P＜0.05);黄芪提取物5×10-4、10-3和2×10-3 g/L剂量干预组PKD1 mRNA的表达显著降低(P＜0.05),且呈剂量依赖性趋势.黄芪提取物10-3 g/L及2×10-3 g/L剂量组和Val组相比,其对PKD1 mRNA的表达抑制效果基本相当.而黄芪提取物不同作用时间对乳鼠肥大心肌细胞PKD1 mRNA表达的影响结果表明,和模型组相比,24、48、72和96 h不同处理时间的Val组及黄芪提取物组心肌细胞PKD1的mRNA表达均显著降低(P＜0.05),且黄芪提取物组心肌细胞PKD1 mRNA的表达呈时间依赖性下降趋势;黄芪提取物72、96h处理组和同一时间点Val组相比,两者对PKD1 mRNA的表达抑制效果基本相当.结论 黄芪提取物可显著抑制AngⅡ诱导的肥大心肌细胞中PKD1 mRNA的表达,且呈时间和浓度依赖性,这可能为心肌梗死后心肌肥厚的逆转提供新的研究思路.     

急性心肌缺血大鼠心脏孤啡肽表达的变化

目的 观察急性心肌缺血大鼠心肌组织内孤啡肽(orphanin FQ,OFQ)的表达变化,探讨孤啡肽在急性心肌缺血中的作用.方法 54只260～280 g健康成年雄性SD大鼠,按随机数字表法分为3组:①动物对照组(C组);②手术对照组(Sham组);③结扎冠状动脉组(CAO组).采用免疫组织化学染色(SABC法),观察冠脉结扎大鼠不同时点心肌组织内OFQ的表达变化,以平均光密度为指标进行半定量分析.同时记录相应时点心电图波形,并对不同时点P波、T波振幅和ST段偏移量进行统计学分析.结果 免疫组化切片CAO后各时点心肌缺血区OFQ的水平较对照组显著升高(P<0.05),在CAO 3 h达高峰(0.663±0.021) (P<0.01).与对照组心电图相比, CAO组不同时点P波、T波振幅和ST段偏移量差别有统计学意义(P<0.05).结论 急性心肌缺血时OFQ表达显著增多,可能起到心肌保护作用.     

心肌梗死左室组织中ErbB受体mRNA表达的变化

目的：检测在心肌梗死的左室组织中ErbB受体mRNA表达的变化，探讨其可能机制。方法：用180g左右雄性SD大鼠3只，开胸结扎其前降支，造成前壁心肌梗死，然后关胸继续饲养。1个月后取出心肌梗死心脏的左室组织，对照组取出相同大小正常SD大鼠的左室组织，提取mRNA，做实时定量PCR。体外实验培养新生SD大鼠的心室肌细胞，培养5d后缺氧缺血清24h，分别提取正常心肌细胞和缺氧缺血清心肌细胞的mRNA，做实时定量PCR。结果：在心肌梗死的左室组织中，ErbB2和ErbB4的mRNA表达明显下调，而ErbB3的mRNA表达无显著变化。体外培养的心肌细胞在缺氧缺血清下，能使ErbB2和ErbB4的mRNA表达明显下调，但ErbB3的mRNA表达无变化。结论：在心肌梗死的左室组织中，ErbB2和ErbB4受体mRNA的表达下调，这可能与心肌细胞的缺氧、营养不足和缺乏某些细胞因子的作用有关。     

转导组织型纤溶酶原激活剂基因大鼠乳鼠心肌成纤维细胞的功能表达

组织型纤溶酶原激活剂（tissue-type plasminogen activator，tPA）是一种理想的溶栓药物，其基因已被成功转入血管内皮细胞、平滑肌细胞及血管组织，但将tPA基因转导大鼠乳鼠（简称乳鼠）心肌成纤维细胞后功能表达如何尚未见报道。本研究通过采用新型假型逆转录病毒载体，介导tPA基因转导乳鼠心肌成纤维细胞，旨在观察转基因后心肌成纤维细胞的功能表达，为心血管外科手术后抗血栓基因治疗的进一步研究提供实验依据。     

八氯代二苯并二噁英对小鼠睾丸组织基因表达谱的影响

目的探讨八氯代二苯并二噁英（OCDD）对雄性小鼠睾丸基因表达谱改变的影响。方法20只雄性CBL/6j小鼠,随机分
为对照组（玉米油）、OCDD低剂量组（1.25×10-6 g/mL）、中剂量组（1.25×10-5 g/mL）和高剂量组（1.25×10-4 g/mL）,每天灌胃1次,
连续灌胃30 d后睾丸取材,应用基因芯片技术比较不同浓度OCDD染毒组和对照组雄性小鼠睾丸基因表达差异。结果与对照
组相比,低剂量组和对照组差异基因总数1 133个,上调659个,下调474个;中剂量组和对照组差异基因数978个,上调487个,
下调491个;高剂量组和对照组的差异基因数895个,上调424个,下调471个。结论亚慢性OCDD暴露后对小鼠的睾丸相关基
因表达造成影响,提示睾丸可能是OCDD 毒性作用的靶器官。
     

1,6-二磷酸果糖对培养乳鼠心肌细胞膜缺氧-再给氧损伤的保护作用

用培养的原代乳鼠心肌细胞建立缺氧-再给氧方法，对缺氧60、120min及缺氧后再给氧30、60min时心肌细胞搏动、(51)~Cr释放率、苔盼蓝摄取率、扫描电镜观察及1，6-二磷酸果糖（FDP）对其影响进行了研究。结果显示：缺氧2h、再给氧1h可引起心肌细胞搏动频率减慢，(51)~Cr释放率和苔盼蓝摄取率增加，电镜显示心肌细胞膜受损。FDP增加缺氧-再给氧心肌细胞搏动频率，保持膜结构的正常，对心肌细胞具有保护作用     

胎盘四氯二苯二(噁)英表达在胰岛素样生长因子2诱导胎鼠发育异常中的作用

目的 研究四氯二苯二噁英（2，3，7，8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin，TCDD）对胎鼠生长发育的影响及与胰岛素样生长因子2（insulin-like growth factor2，IGF2）的关系。方法 经灌胃给予孕10d大鼠10μg／kg TCDD，20d剖宫取胎，比较实验组和对照组孕鼠妊娠结果，测量两组活胎的身长、体重及胎盘重；用逆转录-实时定量PCR和免疫组化方法检测两组活胎胎盘组织昭F2 mRNA及蛋白的表达水平，用甲基化敏感限制酶HpaⅡ酶切-PCR法检测两组胎盘组织IGF2基因DMR1的甲基化程度。结果 实验组死胎及吸收胎发生率为12．2％。致畸率为11．6％，活胎身长、体重及胎盘重明显低于对照组；实验组活胎胎盘组织IGF2mRNA及蛋白的表达明显高于对照组；两组IGF2基因DMRl的甲基化程度无差异。结论 孕10d给予大鼠10μg／kgTCDD灌胃可导致死胎、吸收胎、畸形胎和胎儿宫内发育迟缓（intrauterine growth retardation，I-UGR）。TCDD所致胎鼠发育异常可能与胎盘组织IGF2表达增高有关。     

缺氧致大鼠肺动脉平滑肌细胞Akt mRNA表达的变化

目的通过观察缺氧致大鼠肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cell,PASMC）3种丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶（Akt1、Akt2、AkG）mRNA的表达水平变化,初步探讨Akt信号途径在缺氧肺动脉高压（hypoxia pulmonary hypertension,HPH）血管重建中的作用。方法组织贴片法建立纯PASMC细胞系。采用半定量RT-PCR技术检测常氧组（N组）、低氧2、8、12、24组的Akt1、Akt2和AkG基因mRNA的表达水平。结果建立了纯PASMC细胞系。各组均检测出Akt1、Akt2和AkG基因的mRNA,图像定量分析光值显示各组表达的mRNA含量与缺氧时限存在一定的关系。结论Akt信号通路可能是大鼠缺氧肺动脉高压中PASMC增殖和分化的重要传导途径,其中Akt1可能起主要作用。     

心钠素基因T 2238C多态性与2型糖尿病肾病易感性的相关性研究

目的　观察心钠素 (ANF)基因第 3外显子上ScaI酶切位点T 2 2 38C多态性与 2型糖尿病肾病(DN)易感性的关系。方法　选择 96例无亲缘关系中国北方地区 2型糖尿病患者为研究组 ,其中正常清蛋白尿 (NA) 4 3例 ,糖尿病肾病组 5 3例。 4 0例无亲缘关系北方中国人为健康对照组 ,通过聚合酶链反应 -限制性内切酶长度多态性技术 (PCR -RFLP)检测ANF基因T 2 2 38C多态性。结果　ANF基因TC基因型分布在NA组高于DN组 (χ2 =5 349,P =0 0 2 1 ) ,等位基因C频率分布在NA组高于DN组 (χ2 =4 76 1 ,P <0 0 5 )。结论　心钠素 (ANF)基因第 3外显子上ScaI酶切位点 ,T 2 2 38C多态性与 2型糖尿病肾病 (DN)易感性相关。C等位基因可能是 2型糖尿病肾病发生发展的保护性因素 ,可减少 2型糖尿病肾病发生的风险     

持续高应激状态对心脏心钠素基因表达影响的研究

目的：研究持续高应激状态对大鼠心脏内分泌的影响。方法：利用 Ｄｏｔ ｂｌｏｔ 和 Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ 杂交技术检测心室及心房组织中 Ａ Ｎ Ｆ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 含量。结果：实验组大鼠心房 Ａ Ｎ Ｆ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 含量增加,在心室则减少。结论：高应激状态下,大鼠心脏心钠素基因表达在心房增强,在心室则减弱。     

氯胺酮致小鼠精神分裂样症状及其机制探讨

目的观察氯胺酮致小鼠精神分裂样症状,血清肌酸激酶（CK）、一氧化氮（NO）的改变,及对额叶MEK1 mRNA、ERK2 mRNA表达的影响。方法将40只昆明小鼠随机分为生理盐水组和氯胺酮小、中、大剂量4组。腹腔注射7d后观测行为学改变,用紫外分光光度法测定血清CK和NO水平,用RT-PCR方法检测额叶MEK1、ERK2的表达。结果与生理盐水组相比,给药组小鼠在行为学指标上有明显改变,以大、中剂量组显著,差异有高度统计学意义（P〈0.01）;各给药组小鼠血清CK活性均有不同程度增高,但仅大剂量组的差异有高度统计学意义（P〈0.01）,血清NO含量均显著增高,差异均有高度统计学意义（P〈0.01）;额叶MEK1的表达,中剂量组和大剂量组均明显下调,ERK2的表达在大剂量组明显下调,差异均有统计学意义（P〈0.05或〈0.01）。结论氯胺酮增加了小鼠血清CK活性和NO含量,抑制MEK1-ERK2信号转导通路的激活,使其产生精神分裂样症状,这可能也是精神分裂症的发病机制之一。     

ANF和ACTH对体外培养的人正常肾上腺组织分泌醛固酮的影响

将体外培养的人正常肾上腺组织,用不同浓度的心钠素(atrial natriuretic factor,ANF)和ACTH作用不同时间,观察其醛固酮分泌的变化。结果表明:ANF10~mol/L作用0.5h能刺激正常肾上腺组织分泌醛固酮,而作用24h则呈现抑制作用;同浓度ANF能抑制同时有ACTH10~(-8)mol/L参与作用的醛固酮分泌。ACTH10~(-8)moL/L单独作用不能刺激正常肾上腺组织分泌醛固酮,当浓度增加到3×10~(-8)或5×10~(-8)mol/L时才能使醛固酮分泌增加。以相同浓度的ANF和ACTH(3×10~(-8)或5×10~(-8)mol/L)同时作用于肾上腺组织,ANF不能完全抑制由ACTH引起的醛固酮分泌增加的作用。提示体外培养的正常肾上腺组织分泌醛固酮的反应与ANF和ACTH的剂量及作用时间有关。     

视黄酸对乳鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关因子表达的影响

目的探讨视黄酸对乳鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因、蛋白表达的影响。方法原代培养Balb/c乳鼠心肌细胞,并纯化获得心肌细胞。用不同浓度视黄酸(0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L)进行处理,24h后倒置显微镜下观察各组心肌细胞的形态、搏动情况;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率;RT-PCR检测凋亡相关基因———Fas,Fasl mRNA的表达。Western blot测定乳鼠心肌细胞Fas,Fasl蛋白的表达。结果不同浓度的视黄酸对心肌细胞的影响不同。与对照组相比,低浓度组(0.5、1.0μmol/L)对心肌细胞形态、搏动影响不明显,Fas、Fasl mRNA及蛋白表达增加,差异无统计学意义(P>0.05);当视黄酸的浓度大于2.0μmol/L时,心肌细胞损伤明显,搏动力减弱、凋亡增加,Fas、Fasl mRNA及蛋白表达均明显增高(P<0.05)。结论高浓度视黄酸对心肌细胞有明显的抑制及促凋亡作用,与Fas,Fasl介导的死亡受体信号转导途径密切相关。     

长期卡托普利干预对急性心肌梗死后心肌 Tie-2 mRNA表达的影响

目的观察长期应用卡托普利对急性心肌梗死(急性心梗)后心肌局部血管新生以及血管生成素受体Tie-2的mRNA表达的影响,探讨ACE-Ⅰ类药物对VEGF相关血管新生调控系统的作用。方法80只雄性SD大鼠,其中40只进行前降支(LAD)结扎,制作急性心梗模型。造模后分为模型组20只、卡托普利组20只(造模成功后以10.5mg/kg剂量的卡托普利溶液灌胃)、假手术组20只及未干预组20只饲养。造模成功大鼠随机于饲养2周和4周处死。用免疫组化法测量左室梗死边缘区显示有Ⅷ因子阳性染色的血管数目;用荧光定量PCR分析Tie-2的mRNA表达。以多因素方差分析比较不同干预措施应用后不同时间受体的变化,若总体比较有统计学意义,则进一步用单因素方差分析进行各组间差异比较。结果2周时,卡托普利组血管数目较假手术组和未干预组多(P<0.05),与模型组比较未见统计学显著差异;4周时卡托普利组血管数增加,较模型组多(P<0.05);Tie-2mRNA的表达结果,显示在2周和4周时均显示不同组别受体的拷贝数有统计学差异(F=2.787和F=8.021,P=0.039和P<0.001)。结论ACE-Ⅰ类药物卡托普利对急性心梗后心肌局部的血管新生没有明显的促进作用,而对血管新生的重要受体Tie-2mRNA的表达可能有一定的抑制作用。     

心钠素基因甲基化状态与表达调控

目的 :研究在大鼠老化过程中心钠素 ( ANF)基因的甲基化状态和该基因表达与调控的关系。方法 :采用限制性核酸内切酶 Hpa 和 Msp 消化大鼠基因组 DNA,用 [α- 3 2 P]d CTP进行ANF- c DNA标记探针 ,Southern blot杂交。结果 :老化过程中大鼠心房和心室 ANF基因内部至少存在一处未甲基化的序列。结论 :在老化过程中 ,大鼠心房和心室组织中的 ANF基因甲基化状态在转录水平上可能未参与该基因的表达调控 ,ANF基因表达调控的机制有待进一步研究