药用植物泰山四叶参DNA提取方法的研究

目的 探讨不同DNA 提取方法对泰山四叶参DNA 质量的影响.方法 对提取的DNA 进行紫外光谱分析、总DNA 电泳及RAPD 分析.结果 不同方法提取的DNA 质量及产率存在显著差异.结论 结果表明改良CTAB 法和改良SDS 法较好.     

石斛总DNA的提取及鉴定

目的 :探讨不同DNA提取方法对石斛属DNA质量及分子标记结果的影响。方法 :对提取的DNA进行紫外光谱分析、总DNA电泳及RAPD分析。结果 :不同方法提取的DNA质量及产率存在显著差异 ,对RAPD结果影响很大。结论 :石斛属植物在DNA提取前加入无CTAB缓冲液抽提多糖等杂质 ,可获得较高质量的DNA。     

何首乌基因组DNA提取及RAPD反应体系正交设计优化

目的 确定适合何首乌RAPD-PCR的基因组DNA提取方法及最适宜反应体系.方法 通过改良的CTAB法提取何首乌基因组DNA,研究其用于RAPD-PCR的可行性.利用正交设计方法L16 (45),针对Tag酶,引物,dNTP,镁离子,模板设计了5因素4水平的正交实验,优化RAPD-PCR反应体系.结果 正交设计结果表明,可以得到几种不同的有效扩增反应体系组合.根据实际需求,最适宜的RAPD-PCR反应体系为20 μl,其中1×PCR buffer, Tag酶 1U,引物 1 μmol/L,镁离子 2 mmol/L,dNTP 300 μmol/L,模板 40 ng.结论 改良的CTAB法和正交优化得到的反应体系适合用于何首乌RAPD遗传多样性分析.     

蒲公英总DNA的提取及其RAPD-PCR反应条件的优化

目的 建立并优化蒲公英样品总DNA提取方法及其RAPD-PCR反应体系.方法 采用改良的CTAB法提取基因组DNA,对蒲公英RAPD-PCR反应体系中各个主要影响因子进行了优化和筛选.结果 建立了多态性高、重复性好、可用于蒲公英RAPD分析的最佳反应体系.25 μl反应体系中含有:1×Taq Mix buffer,50 ng DNA模板,0.4 μmol/L 引物,1.5 mmol/L Mg2+,0.25 mmol/L dNTPs,1.25U Taq酶.扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,38℃复性1 min,72℃延伸2 min,共40个循环;72℃延伸10 min,反应结束后,4℃保存.结论 这一优化体系的建立为今后利用RAPD标记技术进行蒲公英鉴定及种质资源遗传多样性分析奠定了基础.     

连翘干叶片和鲜叶片DNA提取方法和质量比较研究

目的探讨三种DNA提取方法对连翘干叶片和鲜叶片DNA质量的影响,比较干叶片和鲜叶片DNA提取质量。方法采用常规CTAB法、高盐低pH法和新改良CTAB法提取连翘干叶片和鲜叶片DNA,进行A260/A280测定、琼脂糖凝胶电泳检测和RAPD扩增分析。结果新改良CTAB法提取的连翘干叶片和鲜叶片DNA的A260/A280比值在1.8～2.0之间,电泳条带清晰无拖尾,选用随机引物（S7）对上述DNA样品进行RAPD扩增,可获得具有一定多态性扩增谱带。对连翘干叶片和鲜叶片DNA样品综合比较,结果显示由干叶片获得的DNA质量高于鲜叶片。结论新改良CTAB法是一种分离高质量完整DNA的简便、快速方法,该方法得到的干叶片DNA质量较鲜叶片更适合下一步分子生物学研究。     

山茱萸药材鲜品与干品总DNA提取方法比较

目的:探讨山茱萸药材鲜品与干品总DNA的提取方法,比较鲜、干品总DNA质量,为以后的研究奠定基础。方法:采用改良CTAB法A,B和经典SDS法,提取山茱萸药材鲜品和干品总DNA,对其进行DNA含量测定和电泳检测。结果:改良CTAB法A提取山茱萸药材鲜品与干品总DNA的OD260/OD280比值在1.7~1.9之间,电泳条带清晰,无拖尾,对山茱萸药材鲜品与干品DNA进行综合比较,结果显示鲜品获得的DNA质量高于干品。结论:改良的CTAB法A是分离高质量完整DNA的方法简便、快速,该方法得到的DNA适合下一步分子生物学研究。     

珊瑚菜Gl4CL 基因克隆与生物信息学分析

目的：对动物药材DNA提取方法进行优化,利用优化方法提取市售动物药材DNA并进行DNA条形码鉴定。方法：基于SDS法DNA提取原理,比较裂解液中不同EDTA浓度（0.025、0.25、0.5 mol·L-1）、是否含NaCl和Triton X-100等因素对不同用药部位动物药材DNA提取质量的影响,筛选得到最佳裂解液配方;使用优化的裂解液配方提取121份市售动物药材DNA并进行基原物种鉴定。结果：裂解液配方为1 % SDS、0.03 mol·L-1 Tris-HCl、0.25 mol·L-1 EDTA、0.2 mol·L-1NaCl对不同用药部位动物药材DNA提取效果最佳,并可实现对蝉蜕等提取困难样本DNA的提取;利用优化裂解液提取的121份市售动物药材DNA满足中药材分子鉴定后续实验要求,所有市售动物药材均可准确鉴定到基原物种。结论：本研究优化的裂解液配方可用于除壳类、分泌物类、加工品外不同用药部位动物药材的DNA提取,为动物药材分子鉴定提供了技术支持。     

中药肉桂基因组DNA的提取

目的:为获得能用于中药肉桂RAPD分析及其它分子生物学研究的高质量DNA,研究和改进几种DNA提取法.方法:先将样品与PVP和VitC共研碎,然后用Tris-HCl缓冲液洗涤样品,沉淀用改进的CTAB法、高盐低pH法和尿素法来提取DNA.通过电泳、紫外吸收A260/A280和PCR扩增检测所得DNA的产量和质量.结果:改进的CTAB法和高盐低pH法都能获得高质量的DNA进行PCR扩增,其中以改进的CTAB法效果最好.     

沉香DNA的提取及其ITS2-PCR体系的优化

目的:建立沉香的总DNA提取方法及r DNA第二内转录间隔区序列(ITS2)聚合酶链式反应(PCR)扩增体系。方法:分别采用改良的CTAB法、改良的CTAB法联合DNA提取试剂盒法及DNA提取试剂盒法提取沉香总DNA,利用通用引物ITS2P1/ITS2P2扩增r DNA ITS2目的片段,通过正交试验优选沉香的PCR扩增条件并对目的片段进行测序。结果:改良的CTAB法联合DNA提取试剂盒法提取总DNA的A260 nm/A280 nm1.79,质量浓度350 mg·L-1,PCR扩增目的片段产率最高。不同因素水平对沉香ITS2-PCR反应的影响顺序为模板DNA引物Taq DNA聚合酶d NTP。最佳反应体系为20μL体系,DNA模板40 ng,引物0.2 mmol·L-1,d NTP 0.5 mmol·L-1,Taq DNA聚合酶1.5 U。测序获得的目前片段长度230 bp,与Gen Bank中瑞香科沉香属白木香序列相似性100%。结论:CTAB法联合DNA试剂盒法可简单、快速获得高质量沉香总DNA,正交试验可快速获得ITS2目的片段,为沉香的分子鉴定和系统发育分析提供参考。     

中药DNA条形码鉴定中的DNA提取方法研究

目的：建立一种直接从药材中提取DNA的方法以满足中药材DNA条形码研究的需要。方法: 以麦冬药材为实验对象,对比5种常用植物DNA提取方法,筛选出最优方法后,对不同部位入药的10种中药材进行DNA提取,采用琼脂糖凝胶电泳及PCR扩增效果进行检测。结果：改良的CTAB法较适合药材DNA提取,虽然所有样品DNA都出现降解,但基于ITS2序列引物PCR扩增成功率为90%。结论：通过增加药材的预处理、核分离液等步骤,并改良CTAB浓度等措施,CTAB法能够用于上述不同药用部位入药的9种药材DNA提取,可以为中药DNA条形码鉴定中的DNA提取提供参考。     

不同居属地半夏有效成分有机酸的比较研究

目的对全国不同居群半夏进行初步的质量评价,为半夏品种选育提供科学依据。方法收集不同居群的半夏,以其有效成分(总有机酸)含量为评价指标,进行品种质量评价,以遴选出优良半夏品种。总有机酸含量(以琥珀酸计)采用电位返滴定法测定。结果不同居群半夏药材的总有机酸含量存在显著差异,有机酸含量以四川绵阳半夏最高。结论我国半夏种质参差不齐,要培育出优质半夏,需要通过各种人工方法对品质优良的半夏进行品种选育。     

不同生境和加工方法对半夏质量的影响研究

目的　对不同生境和加工方法的半夏化学成分进行测定 ,比较其质量差异 ;方法　以三种化学成分为检测指标 ,分别采用比色法、薄层扫描法、高效液相色谱法对半夏样品进行比较分析 ;结果　栽培半夏和野生半夏的总生物碱含量差异较大 ;但 β-谷甾醇含量较为一致 ,以南充片区所产半夏为高 ;栽培半夏的鸟苷含量明显高于野生半夏。半夏皮中 3种化学成分含量均高于去皮和带皮的半夏 ,且硫熏会导致半夏中总生物碱含量明显降低。结论　不同生境的半夏化学成分有一定差异 ,而不同加工方法会对半夏质量产生明显影响     

我国不同地区半夏rDNA序列分析

目的：研究我国不同地区半夏核糖体 ITS 碱基序列差异及其与其地理分布和外部形态的相关性。方法：运用PCR法对半夏 ITS1-5.8S-ITS2序列扩增后直接测序,用软件CLUSTRAL 1.83和 MEGA 3.1分析测序结果。结果： 得到我国半夏主要的16个居群18个样本rDNA中的ITS和5.8S rDNA完全序列。ITS1,5.8S和ITS2序列长度分别为276,162,246 bp。ITS2碱基频率差异显著,ITS1较为保守。根据两者序列以邻接法建立分子系统发生树。结论：半夏rDNA变异与其地理分布相关,与其外部形态关系有待进一步研究。     

半夏种质资源的随机扩增多态性DNA技术分析

目的分析半夏种质资源在分子水平上的遗传多样性。方法应用随机扩增多态性DNA技术(RAPD)对21份半夏种质资源进行检测。结果29个引物共得到162条扩增DNA片段,其中123条(75.9%)的片段具多态性,揭示了半夏居群间较丰富的遗传多样性。利用UPGMA法进行聚类分析表明,所有材料可划分为3类,根据RAPD遗传相似系数划分的类群同地理分布有一定关系。结论半夏种质资源在分子水平上确实存在较大遗传差异。RAPD标记可作为构建半夏DNA指纹图谱的有效工具。     

南北方半夏居群相互引种的比较研究

 目的同时比较不同居群半夏在南、北方种植的质量,为半夏的选育和引种栽培提供理论依据。方法将采自不同产地的半夏分别随机种植在南方和北方基地,通过收获指数、含水量、总生物碱含量、综合指数等指标进行比较。结果在北方种植的不同居群的半夏在产量、干物质含量、生物碱含量上都好于南方;引自安岳、河北的半夏无论在北方还是南方收获指数和生物碱含量均较高,其次是潜江半夏。总体上,南方半夏引种至北方好于北方引种至南方。结论南方种源半夏引种至北方好于北方种源引种至南方。     

半夏与其伪品掌叶半夏的RAPD鉴别

目的建立半夏及其伪品掌叶半夏的快速简单的分子鉴定方法。方法 SDS法提取半夏和掌叶半夏的基因组DNA,20个10碱基随机引物(S1-S20,上海生工)用于RAPD-PCR分析。结果 20个引物中有7个有效稳定的引物在半夏和掌叶半夏之间能显示出多态性指纹图谱,其中S10和S17在半夏和掌叶半夏之间显示较大差异。结论利用引物S10和S17进行RAPD-PCR能有效鉴别半夏和掌叶半夏。     

南充与不同产地的半夏总生物碱含量比较

目的　比较南充与不同产地半夏总生物碱含量。方法　紫外分光光度法。结果　相同和不同产地野生与栽培半夏总生物碱含量都有一定差异。结论　这种差异在一定程度上反映了南充与不同产地半夏质量的优劣     

应用等位基因特异聚核酶链式反应鉴别半夏类药材

 目的建立能区分半夏正、伪品的分子鉴定方法。方法下载GenBank中半夏属、犁头尖属及天南星属相关序列,利用DNAMAN进行比对分析,根据ITS序列中半夏的SNP位点设计引物PtITS178F和PtITS555R,采用等位基因特异PCR进行扩增。结果对半夏5个产地的新鲜样品、10个产地的药材以及5批虎掌、水半夏样品进行PCR检测。引物PtITS178F和PtITS555R只对半夏类药材扩增395 bp片段,虎掌和水半夏均无扩增条带。结论等位基因特异PCR能准确检测半夏的SNP位点,达到准确鉴别半夏正伪品的目的,是一种有前途的中药材分子鉴定方法。     

基于气味指纹分析的半夏及其伪品鉴别研究

目的：根据半夏与半夏伪品的气味指纹特征快速鉴别半夏及其伪品。方法：搜集半夏常见掺伪样品水半夏与天南星,并制备半夏不同比例的混合掺伪样品。采用电子鼻技术获取半夏及其不同种类与比 例的掺伪样品气味指纹图谱,依据传感器响应特征值,利用方差分析（Analysis of Variance,ANOVA）、主成分分析（Principal Component Analysis,PCA）、判别因子分析（Discriminant Factor Analysis,DFA）等化学计量学方法对其响应值数据进行分析,并加以鉴别。结果：半夏及其伪品在气味特征上存在明显差异,PCA可明显区分半夏及其掺伪品,且随着半夏掺伪比例的增加其气味差异性越来越明显,其中水半夏掺伪品的电子鼻信息呈线性变化;DFA 模型累积方差总贡献率为100%,正确判别率不小于97%。结论：电子鼻技术可用于半夏及其伪品的快速鉴别,本研究可以为中药材的伪品鉴别提供新技术和新方法。