TaqMan探针实时荧光定量PCR检测聚集性细菌性腹泻病原的初步应用

目的 应用TaqMan探针实时荧光定量PCR,对聚集性细菌性腹泻便标本提取的DNA,进行多项病原初筛检测,结合常规培养以提高工作效率。方法 应用TaqMan探针实时荧光定量PCR对3起聚集性细菌性腹泻便标本提取的DNA进行多项病原检测,初筛阳性者再进行相应阳性病原的常规培养。结果 第1起疫情22件便标本,6件沙门菌核酸阳性中有5件检出鼠伤寒沙门菌;第2起疫情16件便标本,4件肠致泻性大肠杆菌核酸阳性中有1件检出肠致病性大肠杆菌O142∶K86(B)和产耐热肠毒素的肠产毒性大肠杆菌;第3起疫情2件便标本,2件产气荚膜梭状芽胞杆菌核酸阳性中有1件检出产气荚膜梭状芽胞杆菌。TaqMan探针实时荧光定量PCR阳性检出率为30.0%(12/40),常规培养法阳性检出率为17.5.0%(7/40)。结论 TaqMan探针实时荧光定量PCR检测聚集性细菌性腹泻病原,阳性检出率高于常规培养法,有初筛作用,为腹泻疫情的处置提供可靠的病原学检测数据。     

血球凝集技术测定蜡样芽胞杆菌的肠毒素

用血球凝集技术能查出食品和培养基中蜡样芽胞杆菌的肠毒素。用蜡样芽胞杆菌肠毒素皮下注射家兔所得的抗血清致敏红血球后,与蜡样芽胞杆菌的肠毒秦及培养物滤液进行凝集,其凝集价很高,纯毒素(1.5毫克/毫升)为1:262,000,培养物滤液为1:32,768。在同样条件下,用炭疽杆菌、巨大芽胞杆菌、马铃薯芽胞杆菌、枯草杆菌、蜡样芽胞杆菌变种蕈状芽胞杆菌、B.thuringiensis var. gallerae、痢疾志贺氏菌、大肠埃希氏菌、韦氏梭菌和霍乱弧菌等培养物滤液以及葡萄球菌A型和B型肠毒素作对照试验,其凝集价都很低(1:0～1:16)。将蜡样芽胞杆菌接种     

玉树地震受伤患者伤口感染梭状芽胞杆菌培养鉴定分析

目的了解玉树地震受伤患者伤口感染梭状芽胞杆菌情况,为临床诊治及突发公共卫生灾害细菌的感染救治提供参考依据。方法 3例伤口感染的地震受伤患者入院时立即采集伤口分泌物进行细菌厌氧和需氧培养,并采用ATB自动微生物分析仪进行细菌鉴定;鉴定出的梭状芽胞杆菌菌株经PCR扩增细菌16S rRNA基因,DNA测序分析,进一步确定细菌种类。结果 3份标本经自动微生物分析仪鉴定出1株产气荚膜梭菌、4株疑似梭状芽胞杆菌;PCR扩增显示5株菌均出现目的大小条带;测序证实5株菌有1株为产气荚膜梭菌,另4株为需氧芽胞杆菌属细菌。结论自动微生物分析仪鉴定和细菌16S rRNA基因测序分析联合应用可快速、准确为临床提供诊治和预防控制信息。     

梭状芽胞杆菌鉴定用荧光PCR方法的建立

目的建立梭状芽胞杆菌属水平和丁酸梭菌、产气荚膜梭菌2个种水平上的荧光PCR快速鉴定方法。方法针对梭状芽胞杆菌基因序列中属特异性和种特异性基因设计引物和探针,优化荧光PCR方法反应参数和条件,并用标准菌株、分离株和牛奶样品对方法准确性和灵敏度进行验证。结果建立的荧光PCR方法在梭状芽胞杆菌属和2个种水平鉴定时,准确性均可达100%;纯梭状芽胞杆菌菌种鉴定的灵敏度均为102 CFU/g(ml),牛奶样品经18~20 h增菌后梭状芽胞杆菌鉴定的灵敏度为102CFU/g(m L)。结论所建立的梭状芽胞杆菌鉴定用荧光PCR方法在属和种的鉴定上均有较好的准确性和灵敏度,能够实现纯菌种和样品中梭状芽胞杆菌的快速、准确鉴定。     

2013年-2015年温州市瓯海区食品中食源性致病菌监测结果分析

目的了解瓯海区食品中食源性致病菌的污染状况,为提高食源性疾病的预警和控制能力提供有力的技术依据。方法 2013年-2015年采集瓯海区市售食品1 713份,对沙门菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、创伤弧菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、阪崎肠杆菌、蜡样芽胞杆菌、铜绿假单胞菌9种致病菌进行监测分析。结果食源性致病菌总检出率为7.47%(128/1 713);14类食品中副溶血性弧菌检出71株,蜡样芽胞杆菌检出4株,金黄色葡萄球菌检出36株,阪崎肠杆菌检出1株,铜绿假单胞菌检出10株,创伤弧菌检出2株,霍乱弧菌检出1株,单增李斯特菌检出2株,沙门菌检出1株。结论瓯海区食品中存在不同程度食源性致病菌的污染,其中水产品及其制品、生肉类、焙烤食品、熟肉制品、餐饮食品、婴幼儿食品是主要受污染食品种类,副溶血性弧菌、蜡样芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、阪崎肠杆菌、铜绿假单胞菌为主要污染细菌,应加强监管力度,建立风险预警,采取干预措施,控制食源性疾病的发生。     

推断为产气荚膜杆菌引起的散发腹泻的细菌学探讨

以入院或门诊的散发腹泻患者88例为对象,检查粪便的产气荚膜杆菌,并应用反向被动血凝试验检查产气荚膜杆菌的肠毒素,对本菌引起的散发腹泻进行了调查。从3例腹泻患者粪便中以纯培养状态检出了产气荚膜杆菌,而且在粪便中证明了肠毒素,因此这3例被推断为产气荚膜杆菌性肠炎。粪便中的肠毒素量(反向被动血凝价)2例为1∶640,另1例为1∶5,120。这3例粪便中的产气荚膜杆菌数都是10~8个/g。分离菌株的血清型不符合Hobbs血清型,符合作者们的TW血清型23、47及57。用Duncan ＆ strong培养基及Tortora培养基探讨的结果是,TW血清型47和57两株在培养液中产生了肠毒素,可是TW血清型23在两培养基上,其芽胞形成情况显著不佳,肠毒素为阴性。从其他85例腹泻粪便中没有检出肠毒素。其中29例检出产气荚膜杆菌,其菌量与健康者相似,为10~5个/g以下。关于产气荚膜杆菌引起腹泻,只是对较易检出细菌的大规模集体食物中毒做过详细探讨;产气荚膜杆菌是健康人的肠道内常在细菌,从细菌检查结果弄不清其因果关系的散发性腹泻,几乎没被探讨过。作者们在前报报告了由产气荚膜杆菌引起的集体食物中毒的细菌学诊断,历来的细菌检查结合患者粪便的肠毒素检查是极为有效的方法。应用这个方法,以入院或门诊的散发腹泻患者为对象检查粪便中的肠毒素及分离菌株的肠毒素的产生状况,得以弄清系产气荚膜杆菌引起的散发病例,所以将其结果报告于下。     

河南邮检口岸入境截获德国小蠊携带病原菌分析

目的对河南口岸韩国入境邮件中截获的一批蜚蠊进行病原学检测,为国境口岸虫媒传染病的预防和控制提供依据。方法采用荧光PCR法检测蜚蠊样本中的大肠杆菌O157:H7(E.coli O157:H7)、霍乱弧菌(Vibrio Cholera)、沙门菌(Salmonella)、蜡样芽胞杆菌(Bacillus Cereus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus Aureus)、副溶血杆菌(Vibrio Parahaemolyticus)、痢疾杆菌(Shigella)。对阳性样本进一步进行细菌分离培养和生化鉴定。结果该批蜚蠊检出蜡样芽胞杆菌(HBL毒素型),未检出大肠杆菌O157:H7、霍乱弧菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、副溶血杆菌、痢疾杆菌。结论应加强河南口岸输入性蜚蠊的防控工作。     

厌氧菌感染的药物治疗

磺胺类在梭状芽胞杆菌属中,以产气荚膜杆菌对磺胺类最为敏感,腐败梭状芽胞杆菌次之,诺维氏梭状芽胞杆菌(Clostridium Novyi)则相对耐药。有人报道磺胺类对放线菌有一定疗效,但对厌氧性固紫阴性杆菌感染则疗效不肯定,近年来很重视TMP和SMZ联合治疗厌含菌感染,但各个实验室     

拉丁美洲市售食品微生物污染及销售商和消费者的社会经济特征

在拉丁美洲的La Paz(波利维亚)、Santafede Bogota(哥伦比亚)、Quito(厄瓜多尔)、Lima(秘鲁)、Santo Domingo(多米尼加)、墨西哥城和库里加(墨西哥)等城市抽取2433份消费者喜好,尚未被食用的食品进行微生物分析,检测污染量大 临床症状明显的霍乱弧菌(V.cholerae)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、蜡样芽胞杆菌(B.cereus)、产气荚膜梭状芽胞杆菌(C.perfringens)等细菌。同时     

婴儿人群及婴儿配方粉中梭状芽胞杆菌分离鉴定及污染状况

目的对婴儿配方粉、婴儿生物样品中梭状芽孢杆菌鉴定分析,获得梭状芽胞杆菌的污染水平数据,对婴儿膳食及环境暴露重要梭状芽孢杆菌对其健康影响风险评估研究提供数据支持。方法通过分离菌株的生长特性、革兰染色、普通显微镜下形态特征等表现特征,结合生化鉴定结果、16S rRNA基因测序对分离菌株进行综合鉴定。结果 200份样品中,共检出34株梭状芽胞杆菌。其中120份婴儿粪便中检出12株生胞梭菌(10.00%)、5株第三梭菌(4.17.%)、5株丁酸梭菌(4.17%)、2株索氏梭菌(1.67%);60份婴儿日常食用配方粉中检出5株生胞梭菌(5/60)、3株丁酸梭菌(3/60);20份市售婴儿配方奶粉检出2株生胞梭菌(2/20)。结论人工喂养的婴儿粪便中分离得到梭状芽孢杆菌,而母乳喂养婴儿粪便未分离出梭菌,二者差异具有统计学意义(χ~2=30.00,P0.05);市售婴儿配方粉存在梭状芽孢菌污染,母乳喂养为最佳方式,可降低婴儿体内梭状芽胞杆菌的污染风险。     

大肠杆菌不耐热肠毒素中和试验

产肠毒素大肠株菌是引起急性腹泻病的主要病原苗，目前已引起全球许多国家的重视。为了探讨我省分离产肠毒素大肠杆菌（ETEC）其不耐热肠毒素（LT）与抗毒血清的中和状况。近年来，我们对一些苗杆的LT与抗毒血清进行中和试验。现将结果报告如下。一、材料与方法1．菌株来源：ETEC菌株是从我省霍乱样腹泻病人分离的：吕乱邓首569BN株是中国预防医学科学院流行病防治研究所赠送的。2．肠毒素液的制备：产生肠毒素菌株接种于pH7．6的3％脉际水20～30ml中，大肠杆菌于37”C孵育4天；吕乱弧菌569BN株孵育1天。其培养液加人1／万硫柳汞后…     

粗壮女贞提取物的体外抑菌作用研究

目的 研究粗壮女贞提取物对10种常见细菌的体外抑菌效果.方法 采用纸片扩散法和96孔板微量肉汤稀释法,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌、沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、蜡样芽孢杆菌、产气荚膜梭菌、小肠结肠炎耶尔森菌和铜绿假单胞菌进行体外抑菌实验,测定其抑菌环直径、最小抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC).结果 实验菌株对粗壮女贞提取物呈不同程度的敏感,MIC和MBC分别为:产气荚膜梭菌0.20 mg/ml和0.20mg/ml,金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌均为3.13 mg/ml和3.13 mg/ml,副溶血性弧菌6.25 mg/ml和6.25 mg/ml,白色念珠菌MIC为1.56 mg/ml,其他细菌MIC均大于25 mg/ml.结论 粗壮女贞提取物对上述10种细菌均有不同程度的抑菌作用,值得进一步开发利用.     

类志贺毗邻单胞菌与传染性腹泻

细菌性传染性腹泻可由多种致病菌引起。志贺氏菌、沙门氏菌、致病性大肠杆菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、金黄色葡萄球菌和产气荚膜杆菌等,都是早经公认的传染性腹泻致病因素。近十余年来,由于细菌分离鉴定技术的改进和广谱抗生素的大量使     

噬菌蛭弧菌对医院污水分离细菌捕食作用研究

目的研究医院污水细菌分布情况及噬菌蛭弧菌对分离细菌的捕食作用。方法采用定量接种法对温州地区两家综合性医院污水出水口样本进行菌量计数,并采用VITEK 2 Compact细菌鉴定仪对分离细菌进行鉴定;将噬菌蛭弧菌与分离菌进行共培养,根据每隔12 h培养后菌落数的变化,判断噬菌蛭弧菌对分离菌的作用。结果两家医院污水中菌量分别为2.8×10~5cfu/ml和1.5×10~5cfu/ml,主要分离菌为肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、蜡样芽胞杆菌、弧菌属细菌、普通变形杆菌等;噬菌蛭弧菌对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和弧菌属细菌具有一定的捕食作用,经过72 h的共培养,大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和弧菌属的菌量均发生约3 log10降低;对变形杆菌及蜡样芽胞杆菌未出现捕食作用。结论噬菌蛭弧菌可捕食部分革兰阴性菌,提示其可作为一种生物消毒剂应用于医院污水处理。     

发酵罐中培养的蜡样芽胞杆菌肠毒素合成的限定条件

作者试图通过确定蜡样芽胞杆菌肠毒素实验性培养合成的最适条件,以阐明食品中肠毒素产生的条件。把蜡样芽胞杆菌纯培养液以不同的接种量(1%、5%和10%)接种于不同葡萄糖含量(0、1%、5%和25%)和不同pH(5.0,5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0和8.5)的CA液体培养基中,在不同温度(20、25、32、37和42℃)下,用不同的振速(200、400、600和800转/分)和通入不同流速(0、20、50、100、300和944 ml/分)的空气,培养4～9小时后,分别以5ml培养液置于离心机中,高速离心10分钟,     

烟台市食品行业从业人员肠道致病菌的检测及意义

目的:对烟台市从事食品行业人员的肠道致病菌进行检测,为当地食品安全的危险性评估提供依据。方法:检测2009年-2011年烟台市25600名从事食品行业的服务人员的肠道致病菌;检测方法按照国家标准GB/T4789-2003《食品卫生检验方法微生物学部分》的规定;检测菌群范围包括:沙门菌、志贺菌、豚鼠气单胞菌、致泻性大肠杆菌、溶藻弧菌、嗜水气单胞菌、霍利斯弧菌、非O1群霍乱弧菌、副溶血弧菌。结果:(1)根据生化鉴定结果表明其生化谱线符合率为93.8%～99.9%;(2)检出肠道细菌254份,阳性率为0.99%,其中弧菌科细菌为144株(含117株副溶血弧菌,12株溶藻弧菌,6株温和气单胞菌,5株非O1群霍乱弧菌,2株豚鼠气单胞菌,1株嗜水气单胞菌,1株霍利斯弧菌),占检出肠道细菌的56.69%;肠道杆菌细菌为110株(含76株沙门菌6,株志贺菌,9株致病性大肠杆菌,14株侵袭性大肠杆菌,5株产毒性大肠杆菌,占检出肠道细菌的43.30%。肠道致病菌的阳性率呈现出逐年下降的趋势,差异有显著的统计学意义;(3)检出的肠道致病菌中,以副溶血弧菌(46.06%)和沙门菌(29.90%)阳性率为最高。结论:食品行业服务人员病原菌携带的肠道致病菌以肠道弧菌为主要的病原菌。对该人群进行健康携带病原细菌调查,有利于找出微生物引起食源性疾病的关键控制点,从而采取针对性措施来规范相关人员健康检查的工作以保障食品卫生安全。     

霍乱弧菌引起的急性无胆石性胆囊炎

已知无胆石性胆囊炎可由单核细胞增多性李司忒氏菌、巨细胞病毒、隐孢子虫、大肠杆菌、梭状芽胞杆菌及伤寒沙门氏菌的原发性感染引起,而本文报道的1例急性无胆石性胆囊炎患者是由霍乱弧菌所致。 患者为57岁女性,1993年4月2日因呕吐、腹泻(48小时内40次)、弥漫性腹痛、少尿及右腿痉挛性疼痛2天入院。体温37℃,脉率104次/分,血压130/60mmHg,红细胞压积0.41,血色素147g/L,白细胞10.3×10~9/L(中性87％),血糖8.4mmol/L,肌酸酐123μmol/L,血清钠141mmol/L,钾2.38mmol/L。粪便镜检与培养均检     

食品中大肠菌群检验方法的探讨

大肠菌群主要包括大肠杆菌和产气肠细菌等肠道内细菌 ,这群细菌是需氧及兼性厌氧的革兰阴性无芽胞杆菌 ,在37℃能分解乳糖产酸产气。大肠菌群来源于人和温血动物的粪便 ,在自然界广泛存在。食品中若检出大肠菌群 ,则表明该食品已被人或动物的粪便污染 ,有可能存在肠道致病菌或寄生虫等病原体侵害的危险。所以大肠菌群是评定食品卫生质量的重要指标菌。其检验方法按ＧＢ4 789.3- 94食品卫生微生物检验方法 ,通过乳糖发酵试验、平板分离培养和复发酵证实试验三个步骤来完成对一个阳性样品的鉴定。按照标准规定 ,乳糖发酵试验后 ,所有乳糖胆盐…     

应用DNA探针技术快速检测食品中产气荚膜梭菌产肠毒素基因的研究

产气荚膜梭菌是引起食物中毒的病原菌,其为G-厌氧菌。有芽胞,常存在于自然界、健康人和动物肠道内。产气荚膜梭菌食物中毒的起因物质是该菌在形成芽胞时产生的A型肠毒素。因此,检测产气荚膜梭菌的产肠毒素株是非常必要的。本实验建立一种基因探针方法,能快速准确地检出产气荚膜梭菌的产毒株。我们于1999年5月～10月间,共检测样品180份,结果报告如下。     

蜡样芽胞杆菌在米饭炒饭中的残存和繁殖与食物中毒发生的关系

近年来蜡样芽胞杆菌在米饭中引起食物中毒事件已有了很多报告。作者对该菌的芽胞在水悬液的耐热力,在4～55℃贮藏的米饭中的繁殖力和烹调与贮藏对煮饭及炒饭中该菌繁殖的影响做了各种实验观察。蜡样芽胞杆菌通常存在于泥土及蔬菜中,也曾在食物常规检验时检出,例如在瑞典,于3,888个食物检样中的检出率达47.8%。其在煮饭、炒饭或再加热过程中的耐热力是重要的。资料表明,蜡样芽胞杆菌,也许其芽胞,在烹调过程中可继续生存和可能繁殖。从该菌芽胞悬液接种的米饭中的繁殖实验表明,细菌的最适生长温度为30°和