Annexin家族在抗磷脂综合征血栓形成中的作用

抗磷脂抗体-磷脂结合蛋白复合物可破坏Annexin A5在细胞膜上有序排列,或者抗体直接结合膜上An-nexin A5,从而暴露膜的磷脂表面,这是抗磷脂综合征血栓形成并导致习惯性流产的病理机制之一。Annexin A2可介导抗β2GPΙ抗体/β2GPΙ复合物与内皮细胞膜结合,并将其激活而分泌黏附活性分子等,促使血栓形成。此外,Annexin家族其他成员抗体也与抗磷脂综合征的病理机制有关。     

β2-糖蛋白Ⅰ及其抗体与抗磷脂综合征

抗磷脂综合征是一种非炎症性自身免疫疾病,以患者血栓形成和(或)病态妊娠、血中存在抗磷脂抗体为临床特征.β2糖蛋白Ⅰ是该病的主要自身抗原,它的独特的氨基酸序列、具有构想变化和氧化还原修饰等特性使得它在疾病发病机制中占重要作用.它与其自身抗体结合交联触发靶细胞外和胞内信号通路,引起血栓形成和病态妊娠.进一步明确β2糖蛋白Ⅰ与其抗体间相互作用、该抗原抗体复合物引起血液稳态失衡的具体机制有助于开发更有效的针对抗磷脂综合征发病机制的特异性治疗手段.     

不同亚型磷脂抗体在人群中的诊疗价值

目的 探讨不同亚型(IgG、IgM和IgA型)抗心磷脂抗体(aCL)和不同亚型(IgG、IgM和IgA型)抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2GP1抗体)在中国人群中的诊疗价值.方法 采用病例对照研究,选取2019年3月至2020年3月在北京顺义区医院就诊患者共900例(其中抗磷脂综合征45例),40例健康对照者.采用化学发光免疫测定法(CLIA),分别采用IgG、IgM和IgA单亚型试剂检测aCL和aβ2GP1抗体,在不同人群中的分布情况.正态分布数据的结果用均值标准差表示,两组间比较采用t检验,工作特征曲线(ROC)计算曲线下面积(AUC).采用Logistic回归分析确定APS患者aPL同型阳性与临床表现之间的关系.SPSS 24.0对数据进行统计分析.结果 总体aCL患病率为9.23％,其中IgG亚型aCL最常见为8.44％,IgM和IgA亚型aCL患病率仅为2.78％和2.33％.总体aβ2GP1抗体患病率为10.1％,其中IgM亚型aβ2GP1抗体患病率最高为7.56％,其次IgG亚型aβ2GP1抗体患病率为6.11％,最低IgA亚型aβ2GP1抗体患病率为2.11％.IgG、IgM和IgA亚型单独抗体阳性率分别为57.8％、19.2％和3.61％;在aβ2GP1抗体阳性的受试者中,IgM、IgG、IgA单独阳性率分别为51.6％、20.1％和2.19％.与健康对照组相比,APS患者的aPL亚型特异性抗体阳性率明显升高.不同亚型APS抗磷脂抗体结果显示,总体PAPS和SPAPS,aCL和aβ2GP1抗体患病率分别为55.6％和57.8％,与PAPS相比SAPS患者aCL的阳性检出率更高(χ2=16.42,P<0.001;χ2=7.812,P=0.005).结论 IgG、IgM型抗心磷脂抗体和aβ2GP1抗体在诊断及判断病情程度中的应用优于其他亚型,IgA型抗心磷脂抗体和IgA抗β2糖蛋白1抗体为临床的诊疗价值极低,无论在实验室还是在临床实践中,IgA aPL的存在并没有为中国人群的APS诊断提供附加价值.     

系统性红斑狼疮患者抗β2-糖蛋白Ⅰ抗体检测及其临床意义

目的 探求抗β2-糖蛋白Ⅰ(β2glyeoprotein Ⅰ,β2-GP Ⅰ抗体IgG、IgA、IgM在系统性红斑狼疮(SLE)临床的测定.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测100例SLE患者、39例疾病对照组(包括类风湿关节炎、硬化症、干燥综合征、自身免疫性肝病和混合性结缔组织病)和30例正常人群血清抗β2-GP 1抗体、抗心磷脂抗体(ACL)IgC、IgA、IgM等指标,分析其与临床特点(如血栓、流产)的关系.结果 SLE组抗β2-GP Ⅰ抗体(IgG、IgA、IgM)浓度高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.01),敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为17.2%、95.7%、85.0%、44.6%.β2-GPⅠ抗体(IgG、IgA、IgM)与ACL抗体(IgG、IgA、IgM)两者呈正相关(r值分别为0.418、0.624、0.518、0.583,P<0.01).以SLE DAI为因变量对β2-GPⅠ抗体、ACL抗体、dsDNA、u1-RNP、Sm、SSA、SSB、Sc1-70、Jo-1、P.蛋白、PT、APTT进行Logistic回归统计分析,入选的自变量有β2-GPⅠ·IgC和dsDNA.结论 抗β2GP Ⅰ抗体在SLE中具有一定敏感性和较高的特异性,与SLE的血栓形成相关,且抗β2-CPⅠ抗体IgG是SLE疾病活动性危险因素之一.检测抗β2-GPⅠ抗体在SLE中存在一定临床应用价值.     

抗磷脂抗体和产科疾病的关系

抗磷脂抗体(Antiphospholipid antibodies,APA)是一组自身免疫性抗体,主要由狼疮样抗凝物(LA)、抗心磷脂抗体(aCL)和抗β2糖蛋白Ⅰ抗体(anti-β2-     

抗β2GPI抗体与β2GPI在血栓形成中作用的研究进展

自身抗体在血栓性疾病的发病中的作用受到广泛关注。β2GPI又称载脂蛋白H（ApoH）,主要由肝脏合成。抗β2GPI抗体（anti—β2GPI）是以β2GPI为靶抗原的抗磷脂抗体,研究表明体内高滴度的anti—β2GPI在体内血栓形成过程中具有极其关键的作用。Anti-β2GPI与β2GPI结合后与细胞表面的磷脂、脂蛋白等多种带负电荷的蛋白作用可引起细胞活化,通过多种途径促使血栓形成。深入研究anti-β2GPI／β2GPI在血栓性疾病发病机制可为自身抗体引起的血栓性疾病的治疗提供新的治疗靶点。     

β_2糖蛋白1多肽抗体的制备与应用

目的利用人工合成β2糖蛋白1(β2GP1)多肽制备针对人源、鼠源β2GP1的多克隆抗体,并鉴定抗体的特异性及致病性。方法应用Fmoc法化学合成β2GP1 N端第35~51位氨基酸的多肽,将合成后的多肽与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联,免疫新西兰大白兔制备抗血清,蛋白G纯化得到抗β2GP1多肽抗体,利用ELISA和Western blot法鉴定其效价和特异性。体外实验使用抗β2GP1多肽抗体/β2GP1复合物刺激C3H/He N小鼠腹腔巨噬细胞一定时间,收集细胞总RNA和总蛋白,实时定量PCR、Western blot法分别检测细胞组织因子(TF)mRNA和蛋白表达;Western blot法检测细胞p38、磷酸化p38、核因子κB p65(NF-κB p65)及磷酸化NF-κB p65表达情况;体内实验采用C3H/He N小鼠腹腔注射抗β2GP1多肽抗体建立实验性抗磷脂综合征(EAPS)模型,检测小鼠外周血抗β2GP1抗体滴度及部分凝血活酶时间(APTT)。结果化学合成β2GP1多肽的纯度为94%,达到免疫用抗原标准。偶联KLH后免疫新西兰大白兔,其抗血清效价大于1∶32 000。Western blot结果显示抗β2GP1多肽抗体可特异性识别人源和鼠源β2GP1条带,双抗夹心ELISA检测表明该多肽抗体可与β2GP1隐蔽表位特异性结合。体外实验显示抗β2GP1多肽抗体/β2GP1复合物能够增强小鼠腹腔巨噬细胞p38、NF-κB p65磷酸化,诱导细胞TF mRNA及蛋白表达。体内实验成功建立EAPS小鼠模型,小鼠外周血抗β2GP1抗体滴度大于1∶3200,APTT明显缩短。结论所制备的抗β2GP1多肽抗体可识别人源和鼠源β2GP1分子,能与β2GP1隐蔽抗原特异性结合且具有致病效应。     

重组人β2糖蛋白1第一结构域对抗磷脂抗体综合征患者血清诱导人脐静脉内皮细胞产生ICAM-1、MCP-1的影响

目的：探讨重组人β2糖蛋白1第一结构域（hrβ2GPⅠDⅠ）对抗磷脂抗体综合征（APS）患者血清诱导人脐静脉内皮细胞产生细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的影响。方法：应用hrβ2GPⅠDⅠ二聚体处理前后的APS患者血清分别与人脐静脉内皮细胞（HUVEC）共孵育，细胞EL／SA和RT-PCR方法分析处理前后HUVEC表达ICAM-1、MCP-1的变化。结果：hrβ2GPⅠDⅠ二聚体处理后的APS患者血清较处理前相比，与其孵育的HUVEC表达ICAM-1、MCP-1在蛋白和mRNA水平均明显降低。结论：邮：GPⅠDⅠ可中和APS患者血清中的大部分致病性抗β2GPⅠ抗体（anti-β2 GPⅠ）。     

NF-κB在抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导THP-1细胞表达组织因子中的作用探讨

目的:探讨核因子κB(NF-κB)在抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的作用。方法:使用一定剂量的抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物处理THP-1细胞一定时间,收集细胞总RNA和总蛋白,实时定量PCR(RT-qPCR)检测细胞TF mRNA水平,TF活性试剂盒检测TF活性;Western blot检测细胞NF-κB p65、磷酸化-NF-κB p65及NF-κB抑制蛋白IκB-α的表达情况;进一步采用NF-κB抑制剂(PDTC)观察是否能干预抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对细胞的刺激效应,并利用上游信号分子MAPKs的抑制剂观察抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对NF-κB p65磷酸化的影响。结果:抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)能够诱导THP-1细胞表达TF mRNA及活性,与对照相比差异显著(P<0.05);能够增强细胞内NF-κB p65磷酸化(P<0.05 vs media),降低IκB-α水平(P<0.05 vs media);NF-κB抑制剂PDTC(20μmol/L)能够抑制抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)诱导THP-1细胞表达TF及NF-κB磷酸化的效应;MAPKs抑制剂均能影响抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)诱导THP-1细胞NF-κB p65磷酸化。结论:在抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,NF-κB被激活并发挥重要作用,MAPKs为NF-κB的关键上游分子。     

抗磷脂综合征患者脑脊液单纯疱疹1型病毒和巨细胞病毒抗体阳性病例分析

目的:报道4例与抗磷脂综合征(APS)患者脑脊液有关病毒抗体的阳性结果。方法:检测4例确诊APS患者脑脊液中单纯疱疹1型病毒(HSV-1)和巨细胞病毒(CMV)抗体,结合临床及影像学资料,分析其与APS发病的关系。结果:4例患者脑脊液HSV-1-IgG、CMV-IgG均为阳性,HSV-1-IgM、CMV-IgM均为阴性;例1、例2血清HSV-1-IgG、CMV-IgG阳性,例3、例4阴性;例1、2、3抗心磷脂抗体(aCL)血清水平12RU/ml;例4检出抗β2糖蛋白1(β2GP1)抗体。结论:初步提示HSV-1和CMV感染与APS可能存在相关性。     

抗磷脂抗体的共辅因子β_2GPI的研究进展

抗磷脂抗体的共辅因子β_2GPI是一分子量为50kD的糖蛋白,由326个氨基酸组成,可分为5个功能区,期磷脂结合部位于第五功能区.众多事实表明自身免疫性疾病中的抗磷脂抗体作用的抗原是磷脂与β_2GPI结合形成的复合抗原.β_2GPI的抗原表位及与磷脂的关系研究,对于提示抗磷脂抗体的产生,抗磷脂抗体综合征的血栓发生病理制的研究具有重要意义.     

抗IgG、IgM、IgA型心磷脂抗体和抗β_2糖蛋白1抗体在系统性红斑狼疮患者中的意义

目的探讨抗IgG、IgM、IgA型心磷脂抗体和抗β2糖蛋白1抗体在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者中的意义。方法分别采用化学发光免疫分析法和酶联免疫吸附法检测372例SLE患者、80例其他结缔组织病患者及60例健康体检者血清中抗IgG、IgM、IgA型心磷脂抗体和抗β2糖蛋白1抗体。同时分析这4个指标与SLE及其病情严重程度的相关性。结果在检测的372例SLE患者组中,抗IgG、IgM、IgA型心磷脂抗体和抗β2糖蛋白1抗体的阳性率分别为31.45%、14.52%、10.22%和29.03%,其表达水平分别为(90.39±35.43)U/ml、(41.25±23.16)U/ml、(32.27±15.77)U/ml、(61.42±21.69)U/ml,与SLEDAI积分呈正相关(P0.05)。在80例疾病对照组中,抗IgG、IgM、IgA型心磷脂抗体和抗β2糖蛋白1抗体的阳性率分别为7.50%、2.50%、0和1.25%。而在60例正常对照组中,4项检测结果均为阴性。抗IgG型心磷脂抗体阳性与血小板减少、白细胞减少、血栓形成、习惯性流产和肾脏病变有关;抗IgM型心磷脂抗体阳性与血小板减少、白细胞减少、血栓形成和肾脏病变有关;抗IgA型心磷脂抗体阳性与血小板减少、血栓形成和肾脏病变有关;抗β_2糖蛋白1抗体阳性与血小板减少、白细胞减少、溶血性贫血、血栓形成、习惯性流产和肾脏病变有关。结论抗IgG、IgM、IgA型心磷脂抗体和抗β_2糖蛋白1抗体在SLE的发病及病情发展中起到了非常重要的作用,定量和联合检测对SLE的诊断、病情严重程度的评价、判断预后及疗效观察等均有重要的临床意义。     

抗心磷脂抗体及抗β2糖蛋白抗体与自然流产的相关性研究

目的探讨抗心磷脂抗体及抗β2糖蛋白抗体与自然流产的相关性。方法选取2014年8月~2015年7月我院收治的79例反复自然性流产(RSA)患者作为观察组,与同期78例正常分娩者作为对照组进行对比,采用ELISA法对其血清抗心磷脂抗体(ACA)和抗β2糖蛋白抗体(aβ2-GPⅠ)进行检测对比,并采用logistic回归分析影响反复自然流产的因素。并对反复自然性流产患者进行治疗,观察治疗前后ACA和aβ2-GPⅠ情况及妊娠率。结果观察组体内ACA和aβ2-GPⅠ表达水平均显著高于对照组(P0.05);经logistic回归分析,ACA、aβ2-GPⅠ、用药史及家族史均为影响自然流产的危险因素,经过治疗后,RSA患者ACA和aβ2-GPⅠ水平均比治疗前明显下降(P0.05),随访1年后,其治疗成功率达到70.88%。结论血清抗心磷脂抗体和抗β2糖蛋白抗体的高表达可能会导致自然流产,是影响反复自然流产的独立危险因素。     

改良酶联免疫吸附试验检测抗磷脂抗体及其临床意义

应用改良的酶联免疫吸附试验拾测抗磷脂抗体。该法特异性强,经心磷脂抑制试验,其抑制率达67%,经心磷脂吸附纯化后,各类抗心磷脂抗体(ACL)与相应的抗人IgG、IgA、IgM均无反应,沉淀线消失。该法重复性好,三次重复实验附合率达87%。本文对111例系统性红斑狼疮(SLE)患者检测IgG、IgA、IgM三类抗心磷脂抗体及抗磷脂酰丝氨酸、抗磷脂酰肌醇、抗磷脂酰甘油、抗磷脂酸等五种负电性磷脂抗体,分析其阳性率及该抗体与疾病的相关性。本文发现各种抗磷脂抗体(APL)在SLE的阳性率十分接近,33～45%。但各类抗不同磷脂抗体的阳性率差异较大,5～32%。SLE患者的血栓形成与阳性抗磷脂抗体显著相关,分别是IgG-ACL(P=0.002),IgG-APA(P<0.05),IgG-APG(P<0.05)。抗磷脂抗体的升高还与SLE患者的血小板减少,中枢神经系统病变有关(P<0.05);但异常APL与自发性流产的关系尚无统计学意义。本文还发现抗ds-DNA(Farr试验)的升高和阳性直接Coomb′s试验与升高水平的APL显著相关(P<0.05)。抗心磷脂抗体较其他四种负电性磷脂抗体的阳性率高且敏感。因此ACL可作为临床血栓形成的危险标志性检测。     

APS IgG通过非Fc受体途径诱导血液单核细胞表达TF活性

目的：探讨抗磷脂综合征(Antiphospholipid Syndrome，APS)患者血清IgG体外诱导血液单核细胞表达组织因子(Tissue Factor，TF)活性的作用及其作用途径。方法：利用纯化的APS血清IgG及其F(ab‘)2片段，以及抗磷脂结合蛋白(如β2-glucoproteinI，β2 GPI)单克隆抗体RP-1分别刺激新鲜分离的外周血单核细胞，通过因子Xa的生成量，判断单核细胞TF活性的表达。结果：与健康人血清IgG比较，APS患者血清IgG以及RP-1显著增强单核细胞的TF活性；外源性β2GPI可加强APS IgG的这一诱导作用；从APS IgG中纯化出的F(ab)’2片段具有与完整IgG分子相同的刺激效应。结论：抗磷脂抗体，主要为抗β2GPI，以与抗原特异结合方式，通过非Fc受体途径诱导血液单核细胞表达TF活性，成为APS患者血栓形成的机理之一。     

氧化修饰的β2-糖蛋白-1诱导抗心磷脂抗体的产生

目的:探讨蛋白质的氧化修饰与体内抗磷脂抗体产生的关系.方法:首先,在体外以次黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶氧化系统氧化大鼠β2-GP1,然后以氧化的β2-GP1(oxβ2-GP1)免疫同种大鼠,最后以ELISA方法检测被免疫大鼠β2-GP1血清中的抗心磷脂抗体(ACA).结果:氧化的β2-GP1免疫的大鼠血清中产生高滴度的ACA.结论:β2-GP1的氧化修饰在ACA的产生上可能起十分重要的作用.     

β2GPI/抗 β2GPI抗体复合物激活THP-1细胞内TRIF途径

目的:观察β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能否激活单核细胞株THP-1的TRIF途径,以探讨TRIF依赖途径在抗磷脂综合征(APS)发病机制中的作用.方法:采用一定剂量β2GPI/抗β2GPI抗体复合物刺激THP-1细胞一定时间,收集细胞总RNA及总蛋白,荧光定量PCR (RT-PCR)检测细胞TRIF mRNA水平,Western blot检测细胞TRIF蛋白表达情况;进一步观察TLR4途径抑制剂-TAK-242是否干预β2GPI/抗β2 GPI抗体复合物对TRIF的诱导表达以及相关细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α的表达.结果:β2GPI/抗β2 GPI抗体复合物( 100 mg/L)能够诱导THP-1细胞表达TRIF(mRNA 及蛋白),并显示时间效应,分别于刺激1h和2h时TRIF mRNA及蛋白表达至高峰.TAK-242(5μmol/L)能够明显抑制β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对THP-1细胞TRIF的诱导表达,同时抑制IL-6、IL-8、TNF-α等炎症因子的表达.结论:TRIF依赖的TLR4途径参与了β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对THP-1细胞的激活,提示其在抗磷脂综合征的病理机制中发挥一定作用.     

抗心磷脂抗体与乙型病毒性肝炎相关性研究

抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody，ACA)是以心磷脂为靶抗原的自身抗体，它可导致体内未明原因的动静脉血栓形成。本研究旨在探讨ACA在乙型肝炎发病中的作用。     

抗β2GPI抗体对系统性红斑狼疮患者血栓形成的影响

目的:探讨抗β2GPI抗体对系统性红斑狼疮患者血栓形成的作用及对疾病诊断的临床意义.方法:选取系统性红斑狼疮(SLE)并发血栓患者20例,单纯SLE患者30例,正常对照23例,采用AggRAM-四通道血小板聚集仪检测血小板聚集率,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗β2GPI抗体.结果:SLE血栓组患者和SLE非血栓组患者抗β2GPI抗体滴度和抗体阳性率都显著高于正常对照组(P＜0.05),并且SLE血栓组患者抗β2GPI抗体滴度和抗体阳性率高于SLE非血栓组患者;SLE血栓组患者血小板聚集率比SLE非血栓组和正常对照组显著升高(P＜0.05),SLE非血栓组患者血小板聚集率和正常对照组没有统计学差异;所有SLE患者中抗β2GPI抗体阳性组比抗体阴性组血小板聚集率升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:抗β2GPI抗体和血小板聚集率升高可为SLE患者继发血栓性疾病提供辅助诊断;抗β2GPI抗体促进SLE患者血小板聚集率上升,加速SLE患者血栓形成.     

TLR4在anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导THP-1细胞表达TF中的作用探讨

目的:探讨TLR4及相关信号分子在anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的作用。方法:利用荧光定量PCR(Real-timePCR)检测anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ诱导THP-1细胞TFmRNA表达,采用试剂盒检测细胞TF活性;利用自制的β2GPⅠ胶联亲和层析柱(β2GPⅠ-Affi-Gel)分析β2GPⅠ与THP-1细胞表面相应受体结合情况;Real-timePCR及Western蛋白印迹检测anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导细胞表达TLR4、MyD88、MD-2情况;观察TLR4途径抑制物——紫杉醇是否干预anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对细胞的作用。结果:Anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)诱导THP-1细胞TF表达显著增加(P0.05);THP-1细胞表面的TLR4能够结合于β2GPⅠ-Affi-Gel柱;Anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)刺激THP-1细胞表达TLR4、MyD88、MD-2显著升高(P0.05);紫杉醇(1μmol/L)能够抑制anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对细胞的刺激效应。结论:TLR4及相关信号分子在anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导THP-1细胞表达TF中具有重要作用。