脑组织硫辛酰脱氨酶组化染色初探

一氧化氮是一新的信使分子，由一氧化氮合酶催化Ｌ－精氨酸形成。在脑组织，已证实ＮＯＳ就是依赖还原型辅酶Ⅱ的硫辛酰胺脱氢酶。因此在脑组织，经济、简单而又实用的ＮＤ组化染色可以替代昂贵、繁琐的ＮＯＳ免疫组化染色来间接知道ＮＯ的分布。本文对改进了的ＮＤ组化染色方法及其影响的几个关键问题作了介绍和探讨。     

大鼠阴茎组织中NOS表达及增龄的影响

目的：探讨大鼠阴茎组织中一氧化氮合成酶（Ｎｉｔｒｉｃ Ｏｘｉｄｅ Ｓｙｎｔｈａｓｅ,ＮＯＳ）分布及增龄对其的影响。方法：采用ＮＡＤＰＨｄ组化对不同月龄大鼠（２,８,１６,２４月）阴茎组织进行染色。结果：ＮＯＳ主要分布于阴茎组织中平滑肌细胞,内皮细胞、神经纤维含量较少;随龄增加,阴茎组织中ＮＯＳ逐渐减少,各月龄组间差别显著。结论：大鼠阴茎组织中ＮＯＳ主要分布于平滑肌细胞,增龄使ＮＯＳ明显减少,表明ＮＯＳ减少可能与勃起障碍的年龄依赖性相关。     

NO,SOD,MDA与缺血性脑血管病的关系研究

目的：探讨缺血性脑血管病患者不同时期血清一氧化氮（ＮＯ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、丙二醛（ＭＤＡ）的变化。方法：检测２４例短暂性脑缺血（ＴＩＡ）、５２例脑梗死、４５例脑动脉硬化患者不同时期血清ＮＯ,ＳＯＤ及ＭＤＡ含量变化并与２８例健康人作对照分析。结果：与健康对照组比较：急性期血清ＮＯ水平,ＴＩＡ组与脑梗死组明显升高（Ｐ〈０．０１）;脑动脉梗化明显降低（Ｐ〈０．０１）;各患者组ＳＯＤ活性明显降低     

缺血性脑血管患者血清NO水平变化及其临床意义的研究

目的：探讨缺血性脑血管疾病患者不同时期血清一氧化氮（ＮＯ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、丙二醛（ＭＤＡ）的变化。方法：检测２４例短暂性脑缺血（ＴＩＡ）、５２例脑梗塞、４５例脑动脉硬化患者不同时期血清ＮＯ、ＳＯＤ及ＭＤＡ含量变化并与２８例健康人对照分析。结果：与健康对照组比较：急性期：血清ＮＯ水平,ＴＩＡ组与脑梗塞组显著升高（Ｐ〈０．０１）;脑动脉硬化组显著降低（Ｐ〈０．０１）;各患者组ＳＯＤ活性显著     

一氧化氮与实验性急性胰腺炎关系的探讨

目的：探讨一氧化氮（ＮＯ）在急性胰腺炎（ＡＮＰ）中的作用。方法：采用胰管结扎及加压注射法建立大白兔急性胰腺炎模型，并采用还原型尼克酰胺嘌吟革酸脱氢酶（ＮＡＤＰＨ－ｄ）与四唑仑硝基兰（ＮＢＴ）组成的孵兔急性胰腺炎模型，并采用还原型尼克酰胺嘌呤二苷酸脱氢酶（ＮＡＤＰＨ－ｄ）与四唑仑硝基兰（ＮＢＴ）组成的孵育液对胰腺组织进行一氧化氦合酶（ＮＯＳ）的组化染色，以观察ＮＯ的变化。结果：经Ｗｉｎｓｌｏｗ氏法测     

急性肺损伤时大鼠肺组织一氧化氮及其合酶的变化

目的：研究急性肺损伤早期肺组织一氧化氮及其合酶的变化，初步探讨一氧化氮在急性肺损伤发病机制中的作用。方法：采用大鼠油酸肺损伤模型，测定伤后早期不同时相点肺组织ＮＯ２＾－／ＮＯ３＾－（亚硝酸盐）含量、ｉＮＯＳ（诱导型一氧化氮酶）和ｃＮＯＳ（结构型一氧化氮酶）活性、ＭＤＡ（丙二醛）、ＭＰＯ（髓过氧化物酶）活性，并研究了一氧化氮酶抑制剂ＬＮＮＡ（硝基左旋精氨酸）对以上指标的影响。结果：伤后早期ＮＯ２＾／     

大鼠脑干内一氧化氮合酶阳性神经元的分布

用ＮＡＤＰＨ黄递酶组织化学法观察了一氧化氮酶（ＮＯＳ）阳性神经元在大鼠脑干的分布。实验用Ｗｉｓｔｅｒ大鼠１０只，常规灌注固定处理，取脑作冰冻连续切片，片 ４０ｕｍ，间隔３张取１张。ＮＡＤＰＨ酶组织化学染色。结果表明：ＮＯＳ阳性神经元主要分布于中脑和脑桥上部，延髓分布极少。在上丘浅灰质层（ＳＵＧ）、中脑导水管周围灰质背外侧部（ＬＤＣＧ）、中缝背核（ＮＲＤ）、被盖背外侧核（ＬＤＴｇ）、桥脚被盖核最为密     

一氧化氮合酶在大鼠胃壁的分布

目的：了解一氧化氮合酶（ＮＯＳ）在大鼠胃壁的分布规律。方法：采用ＮＡＤＰＨ－黄递酶（ＮＤＰ）组化法和整装铺片技术对ＮＯＳ在大鼠胃壁的分布进行定量和定位研究。结果：ＮＯＳ广泛分布于大鼠胃壁内，主要定位于肌间神经丛，在粘膜下丛、胃粘膜表面、胃腺及血管壁等处亦有分布。胃肌丛中ＮＯＳ阳性神经元形态基本类似，以圆形和卵圆形为主，但在胃不同区域神经元的分布密度、胞体大小和染色强度存在较大差底部神经元胞体较大，     

大鼠实验性门脉高压循环动力状态及一氧化氮的改变

目的 探讨一氧化氮（ＮＯ）在肝硬化血流动力学改变及门脉高压性胃病中的作用。方法 用６０％四氯化碳皮下注射制造肝硬化门脉高压大鼠模型;应用＾５７Ｃｏ核素标记微球检测肝硬化大鼠血流动力学参数;应用还原的型铺酶Ⅱ－黄递梅（ＮＡＤＰＨ－ｄ）组化染色观察肝硬化大鼠胃壁一氧化氮合酶（ＮＯＳ）分布,应用荧光法测定血清ＮＯ含量。结果 肝硬化大鼠均伴门脉高高,且全部出现高动力循环状态;肝硬化大鼠胃粘膜ＮＯＳ呈阳性反     

不同病程糖尿病大鼠肾脏一氧化氮变化与氧自由基的关系

为探讨糖尿病（ＤＭ）大鼠肾脏一氧化氮（ＮＯ）变化与氧自由基的关系,测定链脲佐菌素（ＳＴＺ）诱导的ＤＭ大鼠及对照组（ＮＣ）于病程２,８,１６周时肾组织ＮＯ含量一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性,指质过氧化物（ＬＯＰ）水平及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、过氧化物酶（ＰＯＤ）和过氧化氢酶（ＣＡＴ）活生变化。结果表明：ＤＭ大鼠肾脏ＮＯ水平及ＮＯＳ活性随病程的延长由升高至下降;各病程ＤＭ大鼠肾脏ＬＰＯ水平均高于同批ＮＣ     

甲状腺功能亢进症患者体内一氧化氮合酶表达及一氧化氮生成的测定

目的 :通过对甲状腺功能亢进症患者血清中一氧化氮合酶 ( NOS)与一氧化氮 ( NO)含量的测定 ,分析一氧化氮在甲亢时的生成情况及意义。方法 :分别检测甲亢患者、甲亢治愈者及正常对照组血清中 NOS、NO的含量 ,并进行统计学分析。结果 :在甲亢组 NOS的表达及 NO的生成显著高于甲亢治愈组和正常对照组 ;甲亢治愈组和正常对照组之间无显著差异。结论 :甲亢患者 NOS表达增加、NO生成增高 ,可能与甲亢患者多系统功能紊乱有关     

首乌丹参滴丸对实验性动脉粥样硬化家兔ET／NO及NOS的影响

[目的]探讨首乌丹参滴丸(SWDS)对实验性动脉粥样硬化(AS)家兔血内皮素(ET)、血浆一氧化氮(NO)水平和一氧化氮合酶(NOS)的影响,并探讨其对动脉粥样硬化的治疗作用。[方法]取50只健康雄性日本大耳白家兔,随机取10只作为正常对照组,喂普通饲料,其余40只给予高脂饮食,喂养4周后,再随机分为4组,每组10只:模型组继续喂高脂饲料:小剂量治疗组喂以高脂饲料和首乌丹参滴丸生药,每只1.25g(/kg·d),大剂量治疗组每只5g(/kg·d):阳性药物对照组,喂以高脂饲料和辛伐他汀,每只2.35mg(/kg·d)。4周后,测定血脂、血清NO和血浆ET水平及血管壁组织NOS的含量。[结果]小剂量、大剂量治疗组及阳性药物对照组的血浆内皮素-1(ET-1)水平明显较模型组低(P<0.05),血清NO水平及血管壁NOS的表达呈相反变化(P<0.05)。[结论]首乌丹参滴丸可降低血脂和血浆ET-1水平,提高血清NO及动脉壁组织NOS的表达,具有抗动脉粥样硬化作用。     

一氧化氮合酶在结肠癌中的表达及其相关功能的初步分析

目的：分析3种一氧化氮合酶（ NOS）亚型在结肠癌中的表达差异,探讨神经元型一氧化氮合酶（ nNOS）对结肠癌细胞增殖和迁移功能的影响。方法利用流式细胞术、Western blot、免疫荧光、组化等技术,对6株结肠癌细胞（SW480,SW620,RKO,LOVO,HT29,M5）和10例组织样本中NOS的表达进行分析。而后分别以NOS抑制剂干预NOS的功能活性,分析NOS对结肠癌细胞功能的影响。结果3种NOS在结肠癌细胞和结肠癌组织中均有表达,以胞浆表达为主,部分核表达。流式细胞术和Western blot 定量显示nNOS在所有样本中表达最强（分别为239±4.7～693.3±38.0和0.263±0.05～0.696±0.098）,诱导型一氧化氮合酶（iNOS）居中（分别为42.7±13.6～236±34.0和0.079±0.04～0.291±0.006）,内皮型一氧化氮合酶（eNOS）微弱或不表达（分别为13±7.4～68±13.6和0.019±0.004～0.123±0.004）。增殖和迁移功能实验显示,同时抑制3种NOS亚型或选择性抑制nNOS,可显著下调结肠癌细胞株的增殖和迁移功能（与对照组比较,抑制增殖迁移能力中位百分数为42.5％,P＜0.05）,而选择性抑制iNOS效果微弱（仅抑制9.7％中位百分数的增殖迁移能力,P＞0.05）。结论nNOS对结肠癌增殖和迁移起着重要作用,针对nNOS表达干预治疗可能成为将来结肠癌临床治疗的手段之一。     

睫状,下颌下,蝶腭和耳神经节内的一氧化氮合酶神经元

观察大鼠睫状、下颌下、蝶腭和耳神经节内一氧化氮合酶阳性神经元的分布。ＮＡＤＰＨ－ｄ组化反应法。颅部各副交感神经节内都含有丰富的ＮＯＳ阳性神经元，均匀地分布于节内各处。但阳性神经元所占比例在各神经节不同。比例最高的是蝶腭神经节，其内９０％－９５％的神经元都含ＮＯＳ，细胞排列密集，在３０μｍ厚的切片，４ｍｍ＾２的面积内多达４６个。     

线粒体一氧化氮合酶及其生物学作用

近来,越来越多的证据表明存在线粒体一氧化氮合酶(mitochondrial nitric oxide synthase,mtNOS),它与线粒体内膜的基质面结合,通过钙敏感性途径产生一氧化氮(nitric oxide,NO).生理状态下,mtNOS催化产生的NO通过与细胞色素C氧化酶可逆性竞争来调节线粒体的氧耗和跨膜电位.NO与线粒体呼吸链产生的超氧阴离子反应,生成过氧亚硝酸,后者不可逆性调节线粒体内的敏感靶点,诱导氧化和(或)硝化应激.此外,也发现NO参与了细胞的程序化死亡.本文主要综述了目前关于mtNOS在线粒体功能调节中作用的认识.     

诊断级超声对人早孕绒毛组织中NO及NOS的影响

目的通过检测孕早期诊断级超声辐照后人绒毛组织中一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,NOS)活性及一氧化氮(nitricoxide,NO)含量的变化来评价孕期超声诊断的安全性.方法采用细胞培养技术,生化测定技术检测绒毛细胞培液中相关生化指标的变化.结果①NOS活性测定,实验组明显低于对照组(P＜0.01),10min组值更低;②NO含量测定同样是实验组明显低于对照组(P＜0.01),10min组与对照相比差异更显著.结论孕早期接受一定剂量的超声辐射可使胎盘组织细胞中的NO含量下降,NOS活性减弱.     

诊断超声对大鼠孕期胎盘组织中NO的阶段性影响

目的 通过检测大鼠孕早期超声辐照后其胎盘组织中一氧化氮合酶（nitric oxide synthetase,NOS）活性及一氧化氮（nitic oxide,NO）含量的阶段变化,旨在为临床孕早期超声诊断的安全性评价提供一定的实验依据。方法 将孕鼠分期采用生化技术检测其胎盘组织中相关生化指标的变化。结果 NOS活性与NO含量测定,孕早期实验组均明显低于对照组（P＜0．01）,中晚期与对照组相比已无显著性差异。结论 孕早期接受一定剂量的超声辐射可使NO含量和NOS活性下降。     

一氧化氮合酶在人子宫内膜和蜕膜的表达

为探讨一氧化氮(NO)在子宫内膜功能性活动中所发挥的作用,应用免疫组织化学技术检测人增生期、分泌期子宫内膜及早孕期蜕膜内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达模式.结果发现①增生期仅内膜血管内皮细胞表达eNOS,iNOS不表达于内膜的任何组份;②分泌期两种NOS都表达于子宫内膜的腺上皮和腔上皮.子宫内膜间质细胞未检测到NOS.③蜕膜组织蜕膜组织腺上皮和腔上皮eNOS和iNOS的表达明显增强,并且蜕膜间质细胞表达iNOS.分泌期子宫内膜和蜕膜组织表达eNOS和iNOS增加,表明此时NO的产量增多,而NO又可能通过其扩张血管、松弛平滑肌和促凋亡的作用参与胚胎着床的发生和月经的形成.     

化学发光法测定大鼠脑组织中一氧化氮合成酶的活性

利用化学发光分析技术建立一种新的一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）活性测定方法。Ｌ－精氨酸在多种辅助因子的参与下，经ＮＯＳ的催化生成一氧化氮（ＮＯ）。ＮＯ与过氧化氢反应生成过氧亚硝酸，后者能与鲁米诺产生强的发光反应，当ＮＯ浓度为０．１ｐｍｏｌ／Ｌ～１ｎｍｏｌ／Ｌ时，发光强度与ＮＯ浓度成正比；通过测量发光强度来确定ＮＯＳ的活性。用该方法重复测量１０只大鼠脑组织中的ＮＯＳ活性，其测定值为：（２８．３±６．９）ｐｍｏｌＮＯ／Ｌ／ｍｇ蛋白／ｍｉｎ；稳定性较好。此方法避免了同位素方法的繁琐及放射性污染，是一种简便易行的ＮＯＳ活性测定方法     

精氨酸类似物对一氧化氮合酶的影响

目的 研究新精氨酸类似物对一氧化氮及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的影响。方法 脂多糖刺激巨噬细胞,检测不同浓度新精氨酸类似物对诱导型iNOS的抑制程度;胰岛素刺激脐静脉内皮细胞,检测新精氨酸类似物对于内皮细胞的iNOS的抑制作用。结果 （1）新精氨酸类似物可显著抑制脂多糖刺激的巨噬细胞产生一氧化氮,并呈剂量依赖性。而对胰岛素刺激的内皮细胞一氧化氮产生无明显影响。（2）新精氨酸类似物可显著降低巨噬细胞iNOS的活性,对于巨噬细胞的结构型iNOS活性及内皮细胞的iNOS活性无明显影响。（3）新精氨酸类似物对于巨噬细胞iNOS的蛋白表达无明显影响。结论 新精氨酸类似物是一种具有高度选择性的iNOS抑制剂。