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相似文献
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1.
目的 探讨结核分枝杆菌耐链霉素(SM)和利福平(RFP)的耐药分子机制,采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)同时检测rpsL基因、rpoB基因突变在结核分枝杆菌耐链霉素(SM)和利福平(RFP)耐药性测定中的应用价值。方法 采用PCR-SSCP技术对122株结核分枝杆菌临床分离株rpsL基因、rpoB基因突变同时进行检测,即首先用PCR方法同时扩增RFP、SM的rpoB基因和rpsL基因,然后进行SSCP分析。结果 以结核分枝杆菌H37RV为对照,48株药物敏感株的rpsL基因、rpoB基因均未见SSCP图谱异常。特异性为100.0%,74株同时耐链霉素和利福平的耐药株中,59株(79.7%)有rpsL基因图谱异常;69株(93.2%)有ropB基因图谱异常。结论 ropB基因突变和rpsL基因突变分别是结核分枝杆菌耐利福平和链霉素的主要分子机制。应用PCR-SSCP技术可同时快速检测结核分枝杆菌链霉素和利福平耐药性。  相似文献   

2.
黄宾  刘方成 《实用医技杂志》2008,15(20):2636-2638
目的:探讨耐多药结核病(MDR-TB)临床分离株rPOB、KatG和rpsL基因突变在耐药性检测中的应用价值。方法:采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术分析了同时54株耐异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)的多耐药临床分离株和45株药物敏感株的rPOB、KatG、rpsL基因突变。结果:以结核分支杆菌H37RV为对照,45株药物敏感株的rPOB、rpsL基因SSCP图谱正常,其特异性为100%;KatG基因有2株图谱异常,特异性为96.3%。89株结核分支杆菌临床分离株均未发现rPOB、KatG、rpsL基因缺失,其PCR扩增产物SSCP分析结果表明:54株多耐药临床分离株中,49株rPOB基因图谱异常;32株KatG基因图谱异常;40株rpsL基因图谱异常。其敏感性分别为rPOB(90.7%)、KatG(59.3%),rpsL(74.1%)。结论:结核分枝杆菌耐RFP、INH、SM耐药性的产生主要是由于rPOB、KatG和rpsL基因突变所致。PCR-SSCP技术有望成为结核分枝杆菌耐药性检测的方法之一。  相似文献   

3.
目的:探讨耐多药结核病(MDR-TB)临床分离株rpoB,KatG,rpsL基因突变在耐药性检测中的应用价值。方法:采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术分析了同时耐异烟肼(INH),利福平(RFP),链霉素(SM)的多耐药临床分离株和35株药敏感株的rpoB,KatG,rpsL基因突变,结果:以结核分支杆菌H37RV为对照,35株药物敏感株的rpoB,rpsL基因SSCP图谱正常,其特异性为100%,KatG基因有2株图谱异常,特异性为94%,71株结核分支杆菌临床分离株均未发现rpoB,KatG,rps基因缺失,其PCR扩增产物SSCP分析结果表明,36株多耐药临床分离株中,32株rpoB基因图谱异常,21株KatG基因图谱异常,26株rpsL基因图谱异常,其敏感性分别为rpoB(89%),KatG(58%),rpsL(72%),结论:结核分支杆菌耐RFP,INH,SM耐药性的产生主要是由于rpoB,KatG,rpsL基因突变所致,PCR-SSCP技术有望成为结核分支杆菌耐药性检测的方法之一。  相似文献   

4.
PCR-SSCP检测耐多药结核菌基因与细菌培养结果对比分析   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的应用PCR-SSCP检测常规及BACTEC培养耐INH、RFP、SM的耐多药结核分枝杆菌临床分离株KatG、rpoB、rpsL基因突变,分析其敏感性和特异性,评价其在检测结核分枝杆菌耐药性方面的价值和临床实用性。方法22株常规培养和8株BACTEC培养检出的高浓度及低浓度耐INH、RFP、SM耐多药结核分枝杆菌分离株,分别用PCR-SSCP检测KatG、rpoB、rpsL基因,观察其电泳条带,并与结核菌标准株H37RV对比。结果22株常规培养耐INH、RFP、SM的耐多药结核分枝杆菌分离株中,KatG、rpoB、rpsLPCR扩增产物,用SSCP分别检出KatG基因16株(72.7%)、rpoB基因19株(86.4%)和rpsL基因14株(63.6%)。8株BACTEC培养耐INH、RFP、SM的耐多药结核分枝杆菌分离株中分别检出KatG基因5株(62.5%),rpoB基因6株(75%)、rpsL基因5株(62.5%)。综合两者KatG、rpoB和rpsL基因检出率分别为70.0%(21/30)、83.3%(25/30)和63.3%(19/30)。高浓度耐药与低浓度耐药分离株中的检出率有显著差异(P<0.05),常规培养与BACTEC培养分离株中的检出率无显著差异(P>0.05),与结核菌标准株H37RV电泳条带对比,特异性为100%,敏感性97%。结论PCR-SSCP敏感、特异,可快速检测结核分枝杆菌的KatG、rpoB和rpsL基因,可用于耐多药结核分枝杆菌的临床检测。  相似文献   

5.
PCR-SSCP快速检测耐多药结核分枝杆菌   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:了解本地区结核病耐药基因突变情况,探讨PCR-SSCP作为新的分子药敏试验方法在临床的应用价值。方法:通过提取耐INH、RFP、SM的肺结核患者痰中结核分枝杆菌DNA,进行PCR-SSCP分析,检测结核分枝杆菌rpoB、katG、rpsL基因是否存在突变,并与传统L-J药敏实验对照。结果:30株耐多药株中,耐RPF、INH、SM基因突变阳性率为90%(27/30)、63%(19/30)、53%(16/30)。3个基因联合突变共8株(26.7%),2个基因联合突变共18株(60%),即26株(86.7%)。单基因突变共2株,2株无基因突变。结论:通过PCR-SSCP方法可检测出绝大部分耐多药结核病的耐药基因,rpoB、katG、rpsL基因突变与本地区结核杆菌对RFP、INH、SM耐药性有关。与传统L-J药敏实验对比,PCR-SSCP是一种敏感、快速的指导临床用药的先进检测方法。  相似文献   

6.
目的探讨耐多药结核病(MDR-TB)临床分离株rPOB、KatG和rpsL基因突变在耐药性检测中的应用价值。方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术分析了54株同时耐异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)的多耐药临床分离株和45株药物敏感株的rPOB、KatG、rpsL基因突变。结果以结核分支杆菌H37RV为对照,45株药物敏感株的rPOB、rpsL基因SSCP图谱正常,其特异性为100%;KatG基因有2株图谱异常,特异性为95.6%。89株结核分支杆菌临床分离株均未发现rPOB、KatG、rpsL基因缺失,其PCR扩增产物SSCP分析结果表明:54株多耐药临床分离株中,49株rPOB基因图谱异常;32株KatG基因图谱异常;40株rpsL基因图谱异常。其敏感性分别为rPOB(90.7%)、KatG(59.3%),rpsL(74.1%)。结论结核分支杆菌耐肿、INH、SM耐药性的产生主要是由于rPOB、KatG和rpsL基因突变所致。PCR-SSCP技术有望成为结核分支杆菌耐药性检测的方法之一。  相似文献   

7.
目的:用PCR-SSCP技术检测肺结核患者痰及分离株结核分支杆菌rpoB,KatG,rpsL基因突变,了解耐药分子机制及探索痰标本结核分支杆菌耐RFP,INH,SM直接检测的可行性,方法:对32例耐INH,RFP,SM肺结核患者临床痰标本及30株耐INH,RFP,SM结核分支杆菌临床分离株行PCR-SSCP方法检测rpoB,KatC,rpsL基因突变,结果:32份耐多药临床痰标本中rpoB,KatG,rpsL基因扩增产物SSCP其电泳条带与结核分支杆菌标准株H37Rv电泳条带相比,基因突变阳性分别为28/32,19/32,23/32,30例结核分支杆菌临床分离株rpoB,KatG,rpsL基因突变阳性为28/30,18/30,22/30,结论:PCR-SSCP方法敏感,特异,可快速检测结核分支杆菌rpoB,KatG,rpsL基因突变,适合于临床肺结构患者痰标本耐药性的快速检测。  相似文献   

8.
目的:采用PCR-SSCP技术检测结核分枝杆茵rpoB基因突变,并探讨其在结核分枝杆菌对RFP耐药性测定方面的临床价值.方法:应用聚合酶链反应-单链构象多态性技术分别检测48株RFP药物敏感和耐药结核分支杆茵临床分离株,先用PCR扩增rpoB基因,随后用SSCP方法鉴定其扩增产物有无突变,并与药敏结果做对照分析.结果:48株结核临床分离株中11株RFP敏感株SSCP带谱均与对照相同,37株砌RFP耐药株中有3株带谱与对照相同,另34株SSCP带谱与对照有不同程度的差异.48株临床分离株的L-J药敏法与SSCP的平行分析结果对比,PCR-SSCP方法检测RFP耐药结核菌的敏感性为91.90%,特异性为90.90%.结论:PCR-SSCP技术可快速准确检测结核分枝杆菌rpoB基因突变,此技术可用于临床结核分枝杆菌RFP药物敏感性的直接快速检测,以及时指导临床合理选用敏感抗结核药物.  相似文献   

9.
耐多药结核分支杆菌耐药分子机制的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 研究耐多药结核病 (MDR TB)临床分离株rPOB、KatG和rpsL基因突变在耐药性检测中的应用价值及鉴定是否含有质粒。方法 采用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)技术分析了 4 6株同时耐异烟肼 (INH)、利福平 (RFP)、链霉素 (SM)的多耐药临床分离株和 6 2株药物敏感株的rPOB、KatG、rpsL基因突变。同时对 78株结核分支杆菌临床分离株按碱性溶菌法抽提分离并鉴定是否含有质粒。结果 以结核分支杆菌H37RV为对照 ,6 2株药物敏感株的rPOB、rpsL基因SSCP图谱正常 ,其特异性为 10 0 %。KatG基因有 2株图谱异常 ,特异性为 96 8%。rPOB、KatG、rpsL基因突变率分别为 91 3%、6 0 9%、71 7%。结核分支杆菌 30株药物敏感株和 37株同时INH、RFP、SM的多耐药临床分离株均未提取分离与鉴定含有质粒。结论 结核分支杆菌耐RFP、INH、SM耐药性的产生主要是由于rPOB、KatG和rpsL基因突变所致。未发现结核分支杆菌含有质粒及由质粒介导的耐药机制。  相似文献   

10.
目的:探讨结核分支杆菌对异烟肼、利福平耐药的分子机制,建立快速检测耐药分支杆菌基因型的分子生物学方法。方法:采用聚合酶链反应一单链构象多态性(PCR—SSCP)同时检测结核分支杆菌敏感株和耐异烟肼、利福平耐药株的KayG基因、rpoB基因突变。结果:78株结核分支杆菌临床分离株均未发现KatG、rpoB基因缺失。以结核分支杆菌H37RV为对照,36株药物敏感株的KarG、rpoB基因SSCP图谱均正常。42株同时耐异烟肼和利福平的多耐药株中,KatG和rpoB基因突变率分别为66.7%(28/42),90.5%(38/42)。结论:结核分支杆菌耐异烟肼、利福平耐药性的产生是由于KatG基因和rpoB基因突变所致。应用PCR-SSCP技术可同时快速检测结核分支杆菌异烟肼、利福平耐药性。  相似文献   

11.
目的:了解结核分支杆菌链霉素耐药基因突变情况,建立快速检测耐药突变株的方法。方法:通过PCR-SSCP、PCR-RFLP和巢氏PCR-RFLP分析40株结核分支杆菌临床分离株和15例临床标本的rpsL基因突变的部位和性质。结果:10株药物敏感株的rpsL双链泳动正常、并可被MboⅡ消化;30株耐SM分离株中,25株双链泳动异常,24株不被消化;15例临床标本中,常规PCR扩增7例rpsL阳性,巢氏PCR15例均阳性,4例rpsL双链泳动异常、并不被MboⅡ消化。结论:通过常规PCR-SSCP和PCR-RFLP可快速检测结核分支杆菌耐SM分离株43位密码子点突变,而通过巢氏PCR-RFLP可直接检测大多数临床标本中结核分支杆菌SM耐药基因型。  相似文献   

12.
结核分支杆菌耐利福平耐药基因检测研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的评价应用DNA序列分析方法和聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术检测rPOB基因突变在结核分支杆菌耐利福平(RFP)耐药性测定中的应用价值.方法采用DNA序列分析法和PCR-SSCP法对80株结核分支杆菌临床分离株(其中药物敏感株32株,耐RFP或含耐RFP耐多药株48株)rpoB基因核心区域的突变情况进行检测.结果以结核分支杆菌H37RV为对照,所有32株药物敏感株的rPOB基因均无突变.用DNA序列分析方法检测48株耐药株中44株发生突变,敏感性为91.7%(44/48),其中最常见的突变位点是531位丝氨酸和526位组氨酸.PCR-SSCP检测48株耐RFP分离株中,45株rPOB基因SSCP图谱异常,其敏感性为93.1%(45/48).结论DNA序列分析可指导临床用药,PCR-SSCP可快速检测结核分支杆菌RFP耐药性.  相似文献   

13.
目的:研究耐多药结核分支杆菌耐药分子机制,建立快速检测耐药基因型的分子药敏试验方法,方法:通过16S rRNA聚合酶链反应单链的构象多态性(polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)方法对30株耐多药分离株和20株药物敏感株进行初步分子菌种鉴定。通过PCR-SSCP分析30株耐多药结核病临床分离株的rpoB,katG,rpsL基因。结果:经16S rRNA PCR-SSCP菌种鉴定,所分析菌株均为结核分支杆菌;30株耐多药分离株经SSCP分析,56.7%存在rpoB基因突变,43.3%有katG基因突变,91.3%有rpsL基因突变,结论:rpoB,rpsL,katG基因突变分别是结核分支杆菌耐利福平,链霉素,异烟肼的分子机制,耐多药结核病是药物靶基因突变所致。通过PCR-SSCP可简便,快速地检测大部分耐多药结核病的耐药基因。  相似文献   

14.
ObjectiveTostudythemolecularmechanismsofdrugresistanceinMycobacterium(M)tuberculosis,toevaluatethevalueoftheβsubunitofRNApol...  相似文献   

15.
Objective: To study the relationship between drug resistant genetic mutation and drug resistance in Mycobacterium tuberculosis L-form, discuss the internal relationship between drug resistances and drug-resistant related genes and explore the value of PCR- SSCP to clinical application. Methods: A total of 52 clinically isolated strains of tuberculosis L-form were collected among 97 pneumoconiosis patients complicated with tuberculosis. The gene mutations of katG, rpoB and rpsL were detected by PCR-SSCP, and the results were compared with those analyzed by traditional antimicrobial susceptibility test(AST). Results: The gene muta- tion rates of katG, rpoB and rpsL by PCR-SSCP were respectively 57.70% (30/52), 65.38% (32/52) and 40.38% (21/52). The rate of reversion was 78.85%(41/52) and the result of drag-resistant genes was invariable. The results of AST showed that there were 40 (76.92%) multi-drug resistant strains in 52 clinically isolated strains. The number for three-drug resistant strain was 21 (40.38%) and that of two-drug resistant was 19(36.54%), but only 12(23.08%) strains were one drug resistant. The rate of total drug-resistance was 100%, but there were 15 strains of allied mutation of three genes, 16 of two mutations and 6 of only one by PCR-SSCP. The coincidences were respectively 71.43%, 84.12% and 50.00%. Then there was no significant difference between the allied mutations of multi-drug resistant gene and the mutations of only one drug resistant gene (P 〉 0.05). Conclusion: PCR-SSCP technique has a higher sensibility and specificity to detect the genes of katG, rpoB and rpsL in tuberculosis L-form among pneumoconiosis complicated with tuberculosis,and the detecting rate of two drug resistant strains and three drug resistant strains was higher. The combined application of PCR-SSCP and AST has advantages at earlier diagnosis and guidance of clinical medications.  相似文献   

16.
结核分支杆菌rpoB基因突变和耐利福平的相关性研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
研究结核分支杆菌rpoB基因突变及其与利福平(RFP)耐药性的关系,建立快速检测耐药基因型的分子药敏试验方法。用PCR—SSCP分析结核分支杆菌rpoB基因。结果显示PCR扩增rpoB基因为属特异性。81株结核分支杆菌的PCR-SSCP图谱与H37Rv为对照,35株敏感菌仅有一株位置有区别;46株耐药菌有42株有明显区别;检测阳性率为91.3%;特异性97.1%。证明rpoB基因突变是结核分支杆菌耐利福平的主要机理,PCR—SSCP可简便快速地检出rpoB基因的突变,有助于结核分支杆菌耐药性的快速检测和研究。  相似文献   

17.
目的分析百色地区结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药相关基因rpoB的突变特征。方法收集128例结核病患者痰液标本,采用改良罗氏培养基分离培养结核分枝杆菌,绝对浓度法检测利福平耐药性,PCR技术检测耐药结核分枝杆菌rpoB基因序列并测序分析利福平耐药相关基因rpoB的突变特征。结果分离培养获得98例MTB,98例MTB出现36株利福平耐药,耐药率为36.73%,36株耐利福平菌株中有27株rpoB基因发生突变,基因突变率为75.00%,其中516位点突变率为3.70%(1/27),531位点突变率为59.26%(16/27),526位点突变率为29.63%(8/27),533位点突变率为7.41%(2/27)。突变热点依次为rpoB531、rpoB526和rpoB533。结论百色地区耐利福平结核分枝杆菌耐药性产生的主要分子机制是因为rpoB的基因发生突变。  相似文献   

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