大定风珠治疗脑出血恢复期阴虚动风证证效关系的蛋白质组学研究

目的 通过鉴定并分析脑出血（intracerebral hemorrhage,ICH）恢复期阴虚动风证患者大定风珠对证、镇肝熄风汤非对证治疗与健康对照组比较外周血单个核细胞（peripheralblood mononuclear cells,PBMCs）差异表达的蛋白质,从方证对应的角度寻找脑出血恢复期阴虚动风证的证效关系蛋白质,并探讨脑出血恢复期阴虚动风证的本质内涵.方法 分离对照组、脑出血恢复期阴虚动风组、脑出血恢复期阴虚动风对证治疗及非对证治疗组外周血单个核细胞,利用双向凝胶电泳技术建立各组的PBMCs 蛋白双向凝胶电泳图谱,经PDQuest8.0 软件分析,选取差异表达的蛋白质点,应用MALDI-TOF-MS 质谱仪获得肽质量指纹图谱,用Mascot 软件搜索数据库鉴定部分差异表达蛋白质.结果 经双向凝胶电泳和图像分析,筛选出的24 个差异表达蛋白质点中共有12 个得到鉴定,其中脑出血恢复期阴虚风动证组与健康对照组比较,5 个蛋白表达上调,4 个蛋白表达下调,1 个蛋白表达缺失;脑出血恢复期阴虚风动证大定风珠对证治疗组与健康对照组比较,7 个蛋白表达无明显差异,2 个蛋白表达下调,2 个蛋白表达上调,1 个蛋白表达缺失;脑出血恢复期阴虚风动证镇肝熄风汤非对证治疗组与健康对照组比较,6 个蛋白表达下调,3 个蛋白表达上调,1 个蛋白表达缺失.结论 初步鉴定了脑出血恢复期阴虚动风证对证与非对证治疗方证效应的相关蛋白,这些蛋白功能涉及应激、细胞代谢、细胞迁移、信号转导、细胞骨架等;大定风珠对证治疗则能有效地调节多个异常表达的蛋白,非对证治疗则使蛋白表达明显异常,体现了中医辨证论治、方证相应的科学性.     

大黄蒽醌抗猴免疫缺陷病毒作用靶点与转导信号通路研究

目的:探索大黄蒽醌化合物抗猴免疫缺陷病毒可能的作用靶点与转导信号通路。方法:大黄蒽醌化合物干预48 h后,提取两组细胞的总蛋白,利用iTRAQ技术对表达差异的蛋白进行筛选后,使用GO数据库、KEGG数据库进行分析,确定差异蛋白涉及的生物学过程、细胞组件及分子功能,分析目标蛋白质参与的主要疾病和信号转导途径。结果:两组共筛选出235个差异蛋白,其中可能与艾滋病相关的差异蛋白18个,7个蛋白表达上调,11个蛋白表达下调。差异蛋白主要涉及免疫反应、白细胞介素-1的合成与应答、病毒感染等8种生物学过程;参与蛋白结合、DNA结合、RNA结合等11个方面的细胞功能;涉及胞外区、细胞质、质膜、细胞核等11个方面的细胞组件;并主要参与系统性红斑狼疮、金黄色葡萄球菌感染、吞噬作用等9条信号转导通路。结论:利用iTRAQ技术筛选、鉴定差异蛋白表达,诠释大黄蒽醌化合物抗猴免疫缺陷病毒可能的作用靶点与转导信号通路,为临床治疗提供新的研究思路。     

肾阴虚证血浆蛋白质谱的差异表达

【目的】寻找肾阴虚证差异表达的血浆蛋白质,并筛选其特异性表达蛋白,为建立中医肾虚证证候客观化标准提供指标。【方法】选取典型肾阴虚证患者5例、正常健康志愿者6例,对2组血浆进行抗体芯片表达谱比较研究。【结果】正常对照组与肾阴虚证组间的差异表达蛋白有25条。其中,表达上调的蛋白有2条,表达下调的蛋白有23条。【结论】肾阴虚证差异表达的蛋白主要涉及到免疫紊乱、蛋白质生物合成、新陈代谢、氧化应激、细胞凋亡、细胞信号传导等相关方面。     

冠心病血瘀证客观化指标高通量研究结果的系统评价

文章从报道的冠心病血瘀证的高通量研究出发,分析各研究结果的差异性.基因表达谱研究文献共获得3篇,只有2篇文献具有相同的上调差异表达基因IL-8.8篇蛋白质组学研究文献中,根据采用的不同技术分类,其中3篇文献结果一致的为表达上调的结合珠蛋白β链蛋白和表达下调的载脂蛋白.另外3篇文献采用团队内和团队间两种比较方式：其中团队内的2篇研究结果一致的为上调蛋白α1抗胰蛋白酶等和下调蛋白载脂蛋白AIV等;两个团队间没有相同的差异蛋白.剩余的2篇文献相同的上调蛋白为血清淀粉样蛋白等,下调蛋白为α1-β糖蛋白等.冠心病血瘀证的高通量研究结果表明团队内的不同研究结果存在一定的异质性,不同团队间异质性尤为明显.这种异质性的出现是否与证的异质性直接相关,还是受研究技术的影响,还需进行广泛深入的探讨.     

应用iTRAQ技术对支原体肺炎患儿血清差异蛋白的定量分析

【摘要】 目的 应用同位素相对标记与绝对定量技术（iTRAQ）分析支原体肺炎患儿血清蛋白,筛选出差异蛋白并行其功能分析。方法 采用强阳离子交换色谱分析法对8种不同同位素标记的iTRAQ和液相色谱法以及串联质谱分析支原体肺炎组（MPP组）和健康对照组血清蛋白并通过Mascot软件分析和GO分析表达差异的蛋白。 结果 与对照组相比,MPP组中共鉴定出有定量信息的蛋白质66个,包括52个上调蛋白和14个下调蛋白。生物信息学分析显示差异表达的蛋白主要参与急性期反应、急性炎症反应、氧气输送、空气运输、过氧化氢分解过程、细胞氧化解毒、凝血、及细胞解毒等过程,这些表达差异的蛋白中选择6个显著表达差异作为候选蛋白,分别是上调蛋白SAA、CRP、HBB、APOM和下调蛋白APOC3、GPX3。 结论 本研究发现这6种蛋白在小儿支原体肺炎过程中发挥重要作用,可能作为该病潜在的临床筛查生物标志物。     

气滞血瘀证大鼠舌部基因表达谱变化初探

目的采用基因芯片技术研究气滞血瘀证模型大鼠舌部全基因表达谱的变化以及差异基因涉及的生物过程和通路,以期为研究血瘀证相关理论和药物治疗提供科学依据。方法采用高脂饲料复合慢性不可预知刺激复制气滞血瘀动物模型,利用基因芯片技术分析正常大鼠与模型大鼠舌中全基因表达谱的变化以及所涉及通路。结果气滞血瘀证大鼠与正常大鼠比较,结果显示差异表达基因有277个,其中上调基因68个,下调基因209个。GO和Pathway分析结果显示气滞血瘀证分别与炎症、脂代谢、免疫反应等生物过程以及补体与凝血级联通路、PPAR信号通路、细胞色素P450异物代谢通路等7条通路的改变有关。结论 CYP450以及补体与凝血级联通路、PPAR信号通路中的差异基因可能涉及血瘀证的发病机制,为血瘀证以及相关药物的研究提供依据。     

天麻钩藤饮对甲亢肝阳上亢证大鼠下丘脑蛋白质表达的影响

目的观察天麻钩藤饮对甲亢肝阳上亢证大鼠下丘脑蛋白质表达的影响,以期寻找差异表达的蛋白质。方法将30只大鼠随机分为3组,用灌服附子汤及L-T4的方法造成甲亢肝阳上亢证的模型,采用2D电泳分别分离各组下丘脑的总蛋白质,经考马斯亮兰染色,PDQuest 7.0软件分析发现差异蛋白,结合生物信息学对其进行质谱鉴定。结果模型组及治疗组与正常组相比,T3、T4明显增高(P<0.05)。3组蛋白斑点总体分布相似,主要分布在等电点pI3～8,分子量Mr14.4～75 kD,与正常组比较,模型组中蛋白质点表达上调的有18个,下调的点有24个;在模型组中上调的18个点中,与治疗组相比,其中有8个点表达下降,而模型组中下调的24个点中,与治疗组相比,其中有20个点表达上调。结合生物信息学进行质谱鉴定,发现其中6个蛋白质分别为硫氧还蛋白、血小板活化因子乙酰基水解酶IB-r亚单位、NSFL1辅助因子、延伸因子1亚型、微管蛋白β-5和NAD依赖脱乙酰基酶。结论天麻钩藤饮能调节下丘脑蛋白质的表达,提示天麻钩藤饮可能是通过对甲亢肝阳上亢证大鼠下丘脑蛋白质的影响而起到改善症状的作用。     

高血压脑出血急性期肝阳化风证与恢复期阴虚风动证的蛋白质组学比较研究

目的 动态观察高血压脑出血患者急性期肝阳化风证(简称肝阳化风证)、恢复期阴虚风动证(简称阴虚风动证)外周血单个核细胞的蛋白质差异表达变化,分析脑出血不同发病阶段不同中医证型的蛋白质表达规律,探讨脑出血肝阳化风证、阴虚风动证的本质内涵.方法 双向凝胶电泳(2-DE)分离脑出血急性期肝阳化风证(发病3d)、恢复期阴虚风动证(发病3月)、健康对照组(简称对照组)外周血单个核细胞蛋白质,采用考马斯亮蓝染色,PDQuest软件对三组2-DE图谱进行差异分析,选取差异蛋白质点进行MALDI-TOF-MS质谱分析,Mascot软件搜索数据库初步鉴定蛋白质.结果 获得了重复性较好的高血压脑出血肝阳化风证、阴虚风动证2-DE图谱;质谱初步鉴定出3个差异表达蛋白,分别为肌动蛋白、假想蛋白、纤维蛋白原α链前体,其中肌动蛋白在脑出血肝阳化风证组、阴虚风动证均较对照组表达下调,而阴虚风动证组又较肝阳化风证组表达下调;纤维蛋白原α链前体在脑出血肝阳化风证组表达上调,而阴虚风动组表达下调.结论 高血压脑出血急性期肝阳化风证与恢复期阴虚风动证存在差异蛋白的表达,其中肌动蛋白与纤维蛋白原α链前体可能与脑出血肝阳化风证、阴虚风证动的发展密切相关..     

平肝潜阳药物对甲亢肝阳上亢证大鼠下丘脑蛋白质表达的影响

目的:观察平肝潜阳药物对甲亢肝阳上亢证大鼠下丘脑蛋白质表达的影响,为进一步探讨平肝潜阳药物治疗甲亢肝阳上亢证作用机制提供依据.方法:左旋甲状腺素(L-T4)腹腔注射和附子汤灌胃以建立甲亢肝阳上亢证模型,应用蛋白质组学技术比较正常组、甲亢肝阳上亢证组及平肝潜阳药物治疗组中下丘脑的差异蛋白质.结果:3组蛋白质斑点总体分布相似,主要分布在等电点pI 3～10,分子质量为13.8～98.8 kD.与正常组比较,甲亢肝阳上亢证模型组中蛋白质点表达上调的有6个点,下调的有10个点;在模型组中上调的6个点在治疗后均较治疗前有下降;而模型组中下调的10个点在治疗后均较治疗前有上调.结合生物信息学进行质谱鉴定,发现其中9个蛋白质分别为prohibitin,硫氧还蛋白过氧化物酶6,组氨酸三聚体核苷结合蛋白1,蛋白酪氨酸磷酸酶,假定蛋白,肌动蛋白抑制蛋白2,硫氧还蛋白过氧化物酶-Ⅱ,热休克蛋白-27,膜联蛋白-A1.结论:平肝潜阳药物治疗后的甲亢肝阳上亢证大鼠下丘脑蛋白质的表达具有差异,所鉴定的这9个蛋白质可能与平肝潜阳药物的作用机制有关.     

原发性闭角型青光眼房水蛋白质组学研究

目的 分析原发性闭角型青光眼（PACG）患者房水蛋白质组表达,探寻PACG潜在生物标志物、分子机制与治疗靶点,为临床诊疗提供思路。方法 采用病例对照回顾性研究策略,纳入2020年6—12月在电子科技大学附属医院·四川省人民医院进行手术治疗的10例PACG合并白内障患者和10例单纯白内障患者进入研究。抽取患者术中房水,基于高分辨质谱非数据依赖型采集（DIA）模式分析并鉴定PACG合并白内障组与白内障组房水中蛋白质组,比较两组间房水蛋白质组差异表达,并通过基因本体富集（GO富集）、京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集方法进一步分析差异蛋白质的功能。结果 在PACG合并白内障组与白内障组房水样本中,共鉴定出449个蛋白质,其中53个蛋白质差异有统计学意义（P<0.05）,包含49个下调蛋白质及4个上调蛋白质。GO富集结果发现,差异蛋白主要来自中间丝细胞骨架、中间丝、聚合细胞骨架纤维等部位;差异蛋白的分子功能主要集中在细胞骨架组成及结构分子活性;主要参与了细胞角化、角质细胞分化、表皮细胞分化和表皮细胞发育等生物过程。使用KEGG富集方法将差异蛋白富集到了包括补体及凝血级联、过氧化物酶...     

血瘀证患者差异基因表达谱研究

目的：应用寡核苷酸基因芯片技术，研究血瘀证患者差异基因表达谱。 方法：16例血瘀证患者经冠状动脉造影诊断后，分为冠心病血瘀证组和非冠心病血瘀证组，每组8例；并选年龄和性别相匹配的8名健康人为健康对照组。抽取静脉血，分离白细胞，抽提RNA，质控芯片（Test3 芯片）对样本质量进行检测，然后与Affymetrix U133 Plus 2．0芯片进行杂交，通过扫描和软件分析，比较冠心病血瘀证组、非冠心病血瘀证组与健康对照组的基因表达谱，筛选血瘀证相关差异基因，并进一步进行基因本体（Gene Ontology，GO）和通路分析．使用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法对目标基因进行验证。 结果：通过差异基因筛选，与血瘀证相关的差异基因共有48个，其中上调基因26个，下调基因22个；通过GO分析．其中与炎症免疫相关的基因有5个，占10．4％；通路分析结果显示，有意义的10条通路中有5个涉及炎症和免疫反应。经实时荧光定量逆转录聚合酶链反应验证了基因芯片准确可靠。 结论：血瘀证基因表达谱研究显示了炎症和免疫相关基因的比例和显著性优势，说明炎症和免疫反应在一定程度上介导了血瘀证的发生发展。     

Relation of coronary heart disease based on traditional Chinese medicine syndrome differentiation and prostaglandin, blood platelet function, and protein C]

The relationship between 68 cases of thromboxane B2(TXB2), 6-keto-prostaglandin F1 alpha (6-K-PGF1 alpha), beta-thromboglobulin (beta TG), platelet factor 4 (PF4), protein C antigen (PC:Ag), total-proteins (T-Ps) with coronary heart disease (CHD) based on TCM syndrome differentiation were studied. 45 cases of male, 23 cases of female, they were divided into 30 cases of blood stasis group and 38 cases of Qi syndrome group. 39 healthy subjects of same age and sex were chosen as the control group. The results were as follows: The TXB2, beta TG, PF4 in CHD were higher than those of control. 6-K-PGF1 alpha was lower (P less than 0.05, P less than 0.01) respectively. The TXB2 in blood stasis was significantly higher than that of Qi syndrome while the 6-K-PGF1 alpha in Qi Syndrome was significantly lower than that of blood stasis syndrome (P less than 0.01). The PC:Ag, T-Ps in CHD were higher than those of the control. The PC:Ag in blood stasis was lower and was higher in Qi syndrome (P less than 0.01). It showed that microthrombosis formed in blood stasis group caused blood flow slowly, while coronary-pathy and/or coronary spasm were the major pathologic change in Qi syndrome. Elevated PC:Ag, T-Ps in Qi syndrome showed that there were complementary action to hypercoagulation in Qi syndrome to eliminate coagulation factor to prevent coagulation happening and stimulation of fibrinolysin activator, promoting fibrinogenolysis.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

基于冠心病血瘀证心肌细胞能量代谢网络模型的流平衡分析

目的 探讨冠心病(coronary artery heart disease, CHD)急、慢性血瘀证心肌细胞能量代谢的变化特点.方法 (1)运用FluxExplorer软件平台构建起的CHD血瘀证心肌细胞能量代谢网络模型;(2)应用GC-MS技术和血气自动分析仪从健康对照、CHD慢性血瘀证、CHD急性血瘀证三组大鼠模型中取冠状动脉血检测葡萄糖、脂肪酸及血氧含量;(3)检测结果代入网络模型,通过流平衡分析CHD急、慢性血瘀证状态下参数的特点. 结果 (1)三组的糖酵解、脂代谢和三羧酸循环均已被激活,但网络运算后各组代谢物的数值则有明显差别,均呈现出健康对照组>CHD慢瘀证组>CHD急瘀证组的趋势.(2)三组心肌细胞能量代谢的血糖、脂肪酸和血氧含量及ATP的产量均呈递减的趋势,这与三组中糖酵解的关键酶(HK、pfk、PK)、三羧酸循环的关键酶(Cs、Icdh、Od)的浓度呈一致性变化. 结论 CHD急性血瘀和慢性血瘀不同证候的形成可能与机体内心肌细胞能量代谢的水平密切相关.     

Study on Syndrome Element Characteristics and Its Correlation with Coronary Angiography in 324 Patients with Coronary Heart Disease

Objective： Recently, a new traditional Chinese medicine differentiation theory ＂Syndrome Element（SE）＂ has been raised. In this study, the main syndrome element types and their correlations with the results of coronary angiography （CAG） in patients with coronary heart disease （CHD） were investigated. Methods： Epidemiology cross-sectional study method was employed and 324 patients with CHD were enrolled, and their syndrome element types as well as the CAG results were analyzed. The correlations among syndrome element types, Gensini score, and the number of abnormal branches were also analyzed based on the distribution characteristics of syndrome element and coronary angiography results in the 324 cases. Results：According to their occurrence frequency in 324 CHD patients, the top eight major heart syndrome elements were Xin （心） blood stasis （85.8%）, Xin qi deficiency （79.6%）, Xin heat blockage （41.1%）, Xin phlegm with turbid fluid （38.0%）, Xin qi stagnation （24.7%）, Xin yang deficiency （18.9%）, Xin yin deficiency （17.5%） and Xin cold coagulation （4.4%）, respectively, which suggested that Xin blood stasis and Xin qi deficiency were the two most common syndrome elements. Also, as coronary artery Gensini score increased, the changing trend of the syndrome element was ＂Xin yang deficiency with blood stasis＂ to ＂Xin phlegm obstruction with heat blockage＂ to ＂Xin yin deficiency with blood stasis＂ to ＂Xin qi deficiency with blood stasis＂ to ＂Xin cold coagulation with phlegm and turbid fluid, ＂Xin cold coagulation with blood stasis＂ to ＂Xin deficiency of qi, yin and yang＂. As the number of abnormal branches increased, the syndrome element changing trend was simultaneous occurrence of cold and heat syndrome＂ to ＂Xin qi and yang deficiency with blood stasis＂ to ＂Xin retention of phlegm with turbid fluid＂ to ＂Xin cold coagulation in the heart meridian＂, ＂Xin deficiency of both qi and yin＂. The result of this study shows that     

冠心病辨证与血凝纤溶系统关系的临床研究

目的：探讨凝血纤溶系统的变化与冠心病（CHD）辨证的关系。方法：在对269例冠心病人临床辨证的基础上,检测分析CHD各证型病人及健康对照组的抗凝血酶Ⅲ（ATⅢ）、血小板仅颗粒膜蛋白（GPM-140）、纤溶酶原激活物抑制物（PAI-1）、组织型纤溶酶原激活物（t—PA）等血凝纤溶系统指标。结果：较之健康对照组,冠心病的各证型组的异常均有显著性意义（均P〈0．01）。各证型组之间比较,心血瘀阻证和痰阻心脉证的5项指标异常的程度最明显,尤以心血瘀阻证为著。结论：①抗凝血指标（AT11I）的变化与冠心病临床辨证具有一定的相关性。②GMP-140显著升高可作为冠心病监测和血栓前状态评价的有效指标。③冠心病各证型均存在纤溶活性（t—PA与PAI—1）低下状态,心血瘀阻和痰阻心脉证尤为显著。     

Differential gene expression profiles in coronary heart disease patients of blood stasis syndrome in traditional Chinese medicine and clinical role of target gene

Objective:To investigate the differential gene expression profiles in coronary heart disease(CHD) patients of blood-stasis syndrome(BSS) by oligonucleotide microarray technique,and the clinical significance of target gene.Methods:Subjects were assigned to CHD patients with BSS(n=8),CHD patients without BSS (n=8),and BSS patients without CHD(n=8) based on coronary angiography and the diagnostic criteria of BSS. The sex- and age-matched healthy volunteers(n=8) were enrolled as the control group.Venous bloo...     

丹蒌方干预冠心病稳定性心绞痛痰瘀互结证的临床生化基础研究

[目的]通过多中心、精细化的临床研究,旨在通过对比丹蒌方干预冠心病稳定性心绞痛痰瘀互结证患者和健康人的临床生化指标,探究其临床生化基础。[方法]从全国7家临床研究中心共入组受试者82例,脱失4例,最终入组冠心病痰瘀互结证患者38例,在西医常规治疗的基础上加服中药丹蒌片治疗,健康人40例不予干预。分别检测内皮细胞损伤、脂质代谢、黏附分子、炎症介质、金属蛋白酶、同型半胱氨酸和凝血功能共7类28项指标,冠心病患者分别检测0、8、12周水平,健康人检测第0周水平。[结果]冠心病痰瘀互结证与高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、基质金属蛋白酶9（MMP9）、活化部分凝血活酶时间（APTT）相关性较大,通过丹蒌方的治疗可降低患者炎症因子水平,改善血管内皮损伤情况。[结论]丹蒌方干预冠心病稳定性心绞痛痰瘀互结证的机制与调节内皮损伤、脂质代谢、炎症因子、凝血功能、金属蛋白酶有关,可为下一步研究提供参考依据。     

冠心病稳定性心绞痛痰瘀互结证多中心、小样本、精细化临床研究方案

冠状动脉粥样硬化是冠心病血管狭窄的发病基础,在中国有研究调查发现冠心病血瘀、痰浊等标实证候要素所占比例在逐年增加,冠心病痰瘀互结证成为当今冠心病的主要证候类型之一。依托国家973计划项目,选取中国7家临床单位的冠心病痰瘀互结证患者为观察人群,冠心病气阴两虚证患者为疾病对照人群,以健康人为空白对照人群,开展多中心、小样本、精细化的临床对照试验研究,检测脂质代谢、炎症介质、内皮细胞损伤、凝血功能等评价病证关系的生化指标,检测血尿代谢组学、全基因表达谱芯片,揭示冠心病痰瘀互结证的生物学基础。该方案进行了严格的入组筛选,严谨的样本采集、运输及统一检测,从量表到临床生化指标再到蛋白组学、基因组学、代谢组学的多组学分析,全面诠释了冠心病痰瘀互结证的临床生物学基础,是冠心病证候学研究的典型范例。