跌打通痹膏对兔膝骨关节炎退变关节软骨细胞MMP-1、MMP-3表达的影响

目的观察跌打通痹膏对兔膝骨关节炎模型关节液中MMP-1、MMP-3表达的影响,研究跌打通痹膏治疗膝骨关节炎的作用机制,为跌打通痹膏临床应用的推广提供实验与理论依据。方法随机将61只月龄8月、体重1.5~2.5 kg健康新西兰大白兔分成空白组、假手术组、模型组、跌打通痹膏组、骨通贴组,每组12只,另1只为改良型Hulth造模法造模后的模型验证兔。空白组不做任何处理,模型组、跌打痛痹膏组、骨通贴组采用改良型Hulth造模法,假手术组打开关节腔后直接缝合。术后第5周造模验证成功后,进入实验处理部分。空白组、假手术组不予治疗,模型组用普通医用胶带固定,跌打通痹膏组用跌打通痹膏贴敷,骨通贴组用骨通贴膏贴敷。胶带、跌打通痹膏、骨通贴膏经计算后均裁剪为2 cm×4 cm大小,固定于右膝关节,按照使用说明每日1次,每日8 h后取掉,连续4周。第5周后观察实验兔行为变化、X线下关节软骨改变情况,检测关节软骨中MMP-1、MMP-3的表达。结果全部实验兔均成活至观察时间且无一出现过敏现象;右膝关节X线正侧位提示跌打通痹膏组、骨通贴组两组经治疗后较模型组改善。关节软骨观察:1肉眼观察评分:跌打通痹膏组、骨通贴组评分较模型组低(P0.05)。2光镜下关节软骨评分:跌打通痹膏组、骨通贴组评分较模型组低(P0.05)。MMP-1、MMP-3检测:模型组、跌打通痹膏组、骨通贴组与空白组比较,MMP-1、MMP-3表达显著提高(P0.01),跌打通痹膏组、骨通贴组与模型组比较,MMP-1、MMP-3表达降低(P0.01)。结论通过改良型Hulth造模法可成功复制兔KOA模型,跌打通痹膏和骨通贴对KOA均有治疗作用,可延缓KOA的病程,但不能治愈KOA。     

骨痹通方对骨关节炎大鼠基质金属蛋白酶-3和Ⅱ型胶原酶的影响

目的:以盐酸氨基葡萄糖为阳性对照组,研究骨痹通方调控Wnt/β-catenin信号通路影响大鼠膝骨关节炎基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、Ⅱ型胶原酶(COL-Ⅱ)的表达的机制。方法:将35只大鼠分为正常组、假手术组、模型组、阳性药物对照组、骨痹通组,每组7只。造模成功后,正常组、假手术组和模型组给予生理盐水灌胃,阳性药物对照组及骨痹通组分别给予盐酸氨基葡萄糖及骨痹通方灌胃治疗。采用Real-time PCR和western blot检测大鼠软骨中Wnt5a、β-catenin、MMP-3、COL-Ⅱ的基因和蛋白表达量。结果:骨痹通方组与模型组、阳性药物对照组相比能够显著抑制Wnt5a、β-catenin、MMP-3的基因及蛋白表达(P<0.05),减少COL-Ⅱ的降解(P<0.05)。模型组与正常组相比Wnt5a、β-catenin、MMP-3的基因及蛋白的表达显著增多(P<0.05),COL-Ⅱ的表达显著减少(P<0.05)。结论:骨痹通方能明显抑制Wnt5a、β-catenin的表达,从而减少MMP-3的产生、促进COL-II的表达,起到保护关节软骨的作用。     

益气化瘀补肾方对兔膝骨关节炎关节软骨细胞胶原和基质金属蛋白酶mRNA表达的影响

目的：探讨益气化瘀补肾方对兔膝骨关节炎（KOA）模型软骨细胞Ⅱ型前胶原基因（Col2A1）、X型胶原基因（ColX）及基质金属蛋白酶-13（MMP-13）mRNA表达的影响。方法：36只新西兰兔随机分为假手术组、模型组和益气化瘀补肾方组,每组12只。模型组和益气化瘀补。肾方组家兔采用改良Hulth方法复制KOA模型,假手术组仅切开膝关节表面的皮肤。益气化瘀补肾方组家兔于造模4周后连续用药1个月。观察各组软骨病理形态学变化及Col2A1、ColX和MMP-13mRNA变化。结果：模型组关节软骨结构破坏较严重,而益气化瘀补肾方组家兔关节软骨退变较模型组明显减轻。益气化瘀补。肾方组家兔膝关节软骨Col2A1mRNA表达明显高于模型组（P〈0．01）,ColX、MMP-13mRNA表达明显低于模型组（P〈0．05,P〈0．01）,但与假手术组比较仍有显著性差异（P〈0．05,P〈0．01）。结论：益气化瘀补肾方可通过促进软骨合成Col2A1和抑制MMP-13及ColX胶原以延缓KOA家兔关节软骨的退变。     

益气养血方抗兔膝骨关节炎模型软骨退变的作用及机制研究

目的探讨益气养血方对兔膝骨关节炎(KOA)模型软骨细胞凋亡及血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、Ⅱ型胶原蛋白(COL-Ⅱ)、人基质金属蛋白酶-13(MMP13)表达的影响,揭示其抗骨关节炎软骨退变的作用及机制。方法 40只日本大耳白兔随机分为4组,即假手术组、KOA模型组、阳性药(双醋瑞因)组、益气养血方组各10只。石蜡切片HE染色观察软骨退变情况,TUNEL法检测软骨细胞凋亡,免疫组化检测COL-Ⅱ、MMP13的表达。结果益气养血方对KOA模型兔膝关节软骨退变具有一定抑制作用,能下调血清促炎细胞因子TNF-α产生水平(P0.05),抑制软骨细胞凋亡;能下调软骨组织MMP-13蛋白的表达(P0.01),上调软骨组织COL-Ⅱ胶原的表达(P0.05),抑制软骨基质降解。结论益气养血方通过下调TNF-α、MMP-13蛋白表达,同时上调COL-Ⅱ胶原表达,抑制软骨细胞凋亡及细胞外基质降解,可能是益气养血方治疗骨关节炎的作用机制之一。     

益气化瘀方对膝骨关节炎大鼠关节软骨退变的防治作用

目的：研究益气化瘀方对膝骨关节炎大鼠模型关节软骨退变的防治作用及其机制。 方法：1月龄SD大鼠90只,随机分为正常对照组、模型组和益气化瘀方组,每组各30只。模型组,益气化瘀方组大鼠通过肩关节离断术＋直立位诱导法建立大鼠膝骨关节炎模型。益气化瘀方组大鼠分别于5、7、9月龄（即造模术后4、6、8月）开始用药,连续用药1个月。3组大鼠分别于6、8、10月龄（即造模术后5、7、9月）处死,每次10只。处死后取大鼠膝关节,行番红O／固绿染色观察关节形态学变化,实时荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测各组关节软骨内Ⅱ型胶原基因（type Ⅱ collagen gene,Col2A1）、聚集蛋白聚糖（aggrecan-1,Agc1）、基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13,MMP-13）以及金属蛋白酶组织抑制剂-1（tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1）mRNA表达的情况。 结果：模型组关节软骨结构破坏严重,而益气化瘀方组大鼠关节软骨退变较模型组明显减轻。实时荧光定量PCR结果显示,益气化瘀方组6和10月龄大鼠膝关节软骨Col2A1、Agc1以及TIMP-1 mRNA表达量高于模型组（P〈0．01,P〈0．05）,MMP-13 mRNA表达与模型组比较差异无统计学意义;益气化瘀方组8月龄大鼠Agcl mRNA表达明显高于模型组（P〈0。01）,MMP-13 mRNA表达明显低于模型组（P〈0．01）。 结论：益气化瘀方可通过促进软骨合成聚集蛋白聚糖与Ⅱ型胶原,延缓膝骨关节炎大鼠关节软骨的退变。     

抗骨增生片对兔膝骨关节炎软骨组织病理形态及MMP-1、TIMP-1的影响

目的：观察抗骨增生片对兔膝骨关节炎软骨组织病理形态、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）及其抑制剂（TIMP-1）的影响,探讨抗骨增生片是否能调节关节软骨MMP-1及TIMP-1的表达而起到对软骨的保护作用。方法：30只日本大耳白兔随机分为3组：正常对照组（A）,模型对照组（B）,抗骨增生片组（C）。用1.6%木瓜蛋白酶膝关节腔内注射,建立兔膝骨关节炎模型,C组灌胃给药4周后,观察软骨组织病理形态的变化及软骨中MMP-1、TIMP-1的表达。结果：C组软骨病理损害程度轻于B组（P〈0.05）,MMP-1表达明显低于B组（P〈0.01）,TIMP-1表达高于B组（P〈0.05）。结论：抗骨增生片能减轻膝骨关节炎关节软骨退行性改变,其对关节软骨的保护作用与调节MMP-1及TIMP-1的表达有关。     

六味骨痹汤对兔骨关节炎滑膜组织的影响及与软骨修复的相关性研究

【目的】通过观察六味骨痹汤对骨关节炎(OA)模型兔关节液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)含量,滑膜、关节软骨形态及软骨Ⅱ型胶原蛋白表达的影响,探讨其对OA滑膜组织的修复作用及与关节软骨修复的相关性。【方法】将32只新西兰兔随机分为正常组、模型组、六味骨痹汤组和硫酸氨基葡萄糖组,每组8只。采用木瓜蛋白酶关节注射法建立兔OA模型。成功造模后,前2组每日给予10 mL生理盐水灌胃,后2组每日分别对应给予六味骨痹汤(剂量为3.8 g·kg-1·d-1)及硫酸氨基葡萄糖胶囊(剂量为77.0 mg·kg-1·d-1)灌胃。给药6周后,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测各组实验兔关节液中TNF-α、IL-1β、MMP-13含量,按照Krenn标准及改良Mankin’s法分别对滑膜炎症程度及软骨损伤程度进行评分,并评价软骨标本中Ⅱ型胶原蛋白表达情况,最后分析关节滑膜炎症程度与软骨修复的相关性。【结果】六味骨痹汤组和硫酸氨基葡萄糖组关节液中TNF-α、IL-1β、MMP-13含量,滑膜炎症Krenn评分,关节软骨Mankin’s评分均较模型组显著降低(P0.01),Ⅱ型胶原蛋白表达评分显著升高(P0.05);2给药组组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。各组滑膜炎症的缓解与软骨的修复程度成较强的正相关性。【结论】六味骨痹汤对兔OA模型滑膜炎症有缓解作用,并且这种改变与Ⅱ型胶原蛋白高表达及OA软骨的修复程度相关。本研究明确了补肝肾、强筋骨类方药治疗OA滑膜炎的疗效及与软骨修复的相关性,也为中药治疗滑膜炎及软骨损伤性疾病提供数据支持及新的思路。     

百里醌对兔骨关节炎模型关节软骨的保护作用及机制

目的探索关节腔内注射百里醌对兔骨关节炎模型关节软骨的保护作用及机制。方法选用新西兰大白兔构建动物模型,分为百里醌组、骨关节炎组和假手术组各20只,观察并记录实验大白兔6min内步行距离。术后9周处死动物取左膝关节标本进行大体组织学Gross评分,切片行苏木精-伊红（HE）染色、番红染色后进行组织病理学Mankin评分,采用RT-PCR检测3组大白兔关节软骨中基底金属蛋白酶-13（MMP-13）、基底金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）、聚集蛋白聚糖（Aggrecan）和2型胶原（CollagenⅡ）等靶基因表达水平。结果百里醌组大白兔的行走距离明显大于骨关节炎组（P＜0.05）;而Gross评分、Mankin评分均低于骨关节炎组（均P＜0.05）。与骨关节炎组比较,百里醌组MMP-13mRNA表达水平明显下降（P＜0.05）,TIMP-1、Aggrecan和CollagenⅡmRNA表达水平明显上升（均P＜0.05）。结论百里醌对兔骨关节炎模型的关节软骨具有保护作用,可以减少疼痛,延缓骨关节炎的进展。百里醌可能通过下调MMP-13mRNA表达,上调TIMP-1、Aggrecan和CollagenⅡmRNA表达的分子机制实现保护作用。     

MMP-1、13 mRNA和DDR2表达与关节软骨退变的关系

目的探讨关节软骨基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMPs）-1、13mRNA及盘状结构域受体（discoidin domain receptor,DDR2）三者与关节软骨退变的关系。方法对58例关节软骨标本应用反转录-多聚酶链反应法（RT-PCR）测定MMP-1、13mRNA的表达,免疫组化法显色DDR2表达,进行图像分析研究。结果在轻度退变关节软骨中MMP-1、13呈低表达,在中重度退变软骨中MMP-1、13表达显著增高,在重度退变软骨中MMP-1,13有相对的下降,DDR2表达也呈现出与MMP-1、13相同的表达特点。结论MMP-1、13的过表达导致软骨Ⅱ型胶原的降解是软骨退变的重要原因,Ⅱ型胶原降解片段诱导DDR2表达增高进一步介导MMP-1、13的表达形成一个放大效应而加速了关节软骨退变。     

膝骨痹康胶囊对膝骨性关节炎大鼠IL-6、IL-9影响的实验研究

目的探讨膝骨痹康胶囊对大鼠膝骨性关节炎（KOA）模型关节软骨中白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素9（IL-9）水平的影响。方法选取60只清洁级SD大鼠,从中随机取10只作为空白对照组,其余采用单侧跟腱切除法制造大鼠KOA模型,将符合模型标准的大鼠随机分为五组：模型组,抗骨质增生胶囊组,膝骨痹康胶囊低、中、高剂量组。经药物干预30 d后,采用免疫组织化学方法观察膝关节软骨中IL-6和IL-9的表达。结果关节软骨中IL-6和IL-9的表达空白对照组与模型组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;膝骨痹康胶囊中剂量组能显著下调关节软骨中IL-6和IL-9的表达,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论膝骨痹康胶囊能够减轻KOA关节软骨破坏及关节病损,其可能的机制是通过减少炎症细胞因子IL-6和IL-9的破坏作用来实现。     

超微肿痛贴对兔膝骨关节炎模型的软骨中JNK/p38 MAPK信号通路的影响

目的 观察超微肿痛贴对兔膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型的JNK/p38 MAPK信号通路的mRNA及蛋白表达的影响.方法 将50只3月龄新西兰兔随机分为空白组、模型组、氟比洛芬凝胶贴膏组、超微肿痛贴组,每组各12只,除空白组外,其他3组均采用木瓜蛋白酶膝关节腔注射方式造模.造模成功后,...     

伤速康贴膏对兔膝骨性关节炎模型关节液中IL-1、IL-6及TNF-α水平的影响

目的探讨伤速康贴膏对兔膝骨性关节炎模型关节液中IL-1、IL-6及TNF-α水平的影响。方法选用日本大耳白兔30只随机分成模型组(A组)、伤速康贴膏组(B组)及骨通贴膏组(C组),B、C组采用改良Hulth造模法5周后成功复制出兔膝骨性关节炎模型,A组不做任何治疗,B、C组分别予伤速康贴膏和骨通贴膏右膝关节外敷4周,并于用药后第2周、4周2个时相点行右膝关节DR摄影并测定关节液中IL-1、IL-6及TNF-α含量。结果 2个时相点右膝关节DR摄影示B、C组关节退行性改变较A组轻。3组关节液中均可检测到IL-1、IL-6及TNF-α,B、C组在2个时相点含量均低于A组,差异有显著统计学意义(P<0.01),B、C组在2个时相点均无统计学差异(P>0.05)。结论伤速康贴膏可能通过降低关节液IL-1、IL-6及TNF-α的含量,对膝骨性关节炎具有防治作用。     

消瘀接骨散对兔膝骨关节炎模型关节液中MMP-1、MMP-3表达的影响

目的 观察消瘀接骨散对兔膝骨关节炎模型中关节软骨病理改变及关节液中基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-1、MMP-3表达的影响。 方法 将24只新西兰大耳白兔分为正常组、模型组、用药组,每组8只。采用膝关节石膏制动方法复制膝骨关节炎模型,模型复制成功后,正常饲养并驱赶1周,给予用药组家兔消瘀接骨散外敷,给予模型组和正常组家兔相同大小药棉、绷带、胶布固定。光镜下观察膝关节软骨退变情况,采用酶联免疫吸附法测定关节液中MMP-1、MMP-3表达水平。 结果 用药组家兔膝关节软骨损伤较模型组明显减轻,关节软骨表面较正常组粗糙,滑膜增厚、稍有肿胀,镜下可见细胞排列规律尚可,偶见少量细胞簇集现象,关节软骨细胞有轻度变性,潮线尚完整。用药组家兔膝关节软骨的Mankin评分及关节液中MMP-1、MMP-3表达水平明显低于模型组（P<0.05）。 结论 消瘀接骨散外敷治疗兔膝骨关节炎的机制与其降低关节液中MMP-1、MMP-3的表达水平有关。     

强力霉素对制动兔骨关节炎模型对侧膝关节早期退变的影响

目的：研究口服强力霉素对制动兔骨关节炎模型对侧膝关节早期退变的影响及作用机制。方法：36只新西兰大白兔随机分为空白对照组,模型对照4、8、12周组,给药8、12周组。模型组与给药组均给予石膏固定左下肢。石膏固定4周后,给药组给予强力霉素。分别在8周、12周处死动物,观察指标包括：软骨大体形态、软骨man—kin评分、软骨Ⅱ型胶原、uPA、MMP-13。结果：与模型对照组比较,给药组软骨面光滑,mankin评分较低,Ⅱ型胶原含量较高,uPA、MMP-13活性较低（P〈0．01）。结论：强力霉素对制动兔骨关节炎模型对侧膝关节软骨早期退变有缓解作用,作用机制与抑制MMP-13、uPA的表达有关。     

兔骨关节炎模型的建立以及关节炎软骨组织中MMP-1/-13的表达

目的评价家兔膝关节前交叉韧带切断（ACLT）及内侧半月板前1/3切除制作骨关节炎（OA）模型方法的可行性,同时探索关节炎发病的不同时期,关节软骨中基质金属蛋白酶（MMP）-1,MMP-13的基因表达、蛋白表达水平的变化情况。方法实验组家兔30只行ACLT及内侧半月板前1/3切除术造模,分别于术后4周、8周、12周处死10只,假手术对照组家兔10只于术后12周处死。进行股骨髁关节软骨退变的大体评分;取退变的软骨组织,用实时定量PCR（Real-time PCR）及Western blot印记杂交方法测定软骨组织中MMP-1和MMP-13的mRNA和蛋白表达水平。结果ACLT及内侧半月板前1/3切除术后4周即可见软骨退变,8周和12周时退变进一步加重,对照组无明显软骨退变,不同组动物关节软骨评分有统计学差异。MMP-1的mRNA表达和蛋白表达在正常对照组水平均较低,造模4周开始升高,到第8周及第12周持续升高,且mRNA表达和蛋白表达升高的趋势相同;MMP-13在造模4周时表达开始升高,mRNA表达和蛋白表达趋势相同,造模第8周时持续升高,但在造模第12周时MMP-13mRNA表达和蛋白表达下降。结论家兔膝关节ACLT及内侧半月板前1/3切除制作OA模型的方法简便可行,MMP-1和MMP-13在骨关节炎的发病过程中有不同程度的升高,可以作为OA研究的评价指标。本实验结果提示,在OA发展的过程中,MMP-1和MMP-13的表达不平行,二者调控通路可能存在差异。MMP-13的mRNA表达的变化趋势与其蛋白水平的变化趋势相符合,说明引起MMP-13在OA病程中晚期下降的调控发生在翻译前水平。     

关节腔注射三氧对兔膝骨性关节炎病理改变的影响

目的通过建立兔膝骨性关节炎的模型,了解膝关节腔注射三氧对骨性关节炎软骨病理改变的影响。方法成年新西兰兔40只随机分为5组,每组8只,即正常对照组（A组）,模型对照组（B组）,20μg／ml三氧治疗组（c组）,40μg／ml三氧治疗组（D组）,60μg／ml三氧治疗组（E组）。采用Videman法对B、c、D、E组家兔进行兔膝骨关节炎模型复制。造模6周后将空气1ml注入B组家兔左膝关节腔内作为对照,将20、40、60μg／ml浓度的三氧1ml分别注入C、D、E组兔左膝关节腔内,每3d1次,治疗2次后,处死动物,观察兔膝关节软骨形态学变化及进行病理积分统计。结果B组肉眼外观及病理显示关节软骨有明显破坏,病理积分较A组明显升高（P〈0．01）,C、D两组病理改变较B组显示关节软骨有所修复,病理积分较B组降低（P〈0．05）,E组与B组比较病理改变无明显变化,病理积分的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论20、40μg／ml浓度的三氧关节腔注射可促进早期兔膝骨性关节炎关节软骨的修复,有利于减轻及阻止骨性关节炎的发展;而60μg／ml浓度三氧关节腔内注射对已损伤的软骨无修复作用。     

富血小板血浆对兔骨关节炎软骨中基质金属蛋白酶-13表达的影响

目的 探讨富血小板血浆(platelet-rich plasm,PRP)抑制兔骨关节炎软骨表达基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)的表达而发挥软骨保护作用。方法 选取30只成年清洁级新西兰大白兔,采用数字表法随机分为对照组、关节炎组、PRP组,每组各10只。关节炎组和PRP组按Hulth法制备后肢左膝关节炎模型,对照组行假手术。造模后第1周开始,各组抽取耳缘静脉血制备PRP 0.2 mL,仅PRP组给予关节腔注射。至第6周处死实验动物,获取各组左膝关节,分别行软骨组织HE染色测量软骨厚度,免疫组织化学染色计数MMP-13阳性细胞数,免疫荧光及Western blotting法检测MMP-13表达量。结果 对照组显示关节软骨形态接近正常,关节炎组软骨破坏明显,而PRP干预组较关节炎组,关节厚度得以保留,MMP-13阳性细胞及其表达量明显受到抑制。结论 PRP可减少MMP-13软骨细胞的数量和抑制MMP-13表达而发挥软骨保护作用。