推拿疗法对骨骼肌纤维化大鼠MMP-1和TIMP-1表达的影响

[目的]观察推拿疗法对大鼠急性腓肠肌钝挫伤后纤维修复的影响,探讨其可能的作用机制。[方法]将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、推拿治疗组(n=10),运用自制砸伤装置复制经典骨骼肌钝挫伤模型。治疗组进行推拿治疗,每次干预10 min,每日1次,连续实施25 d。通过苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠腓肠肌纤维化程度;qPCR和蛋白印迹检测大鼠腓肠肌基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)蛋白的表达情况。[结果]HE染色镜下发现对照组大鼠骨骼肌纤维排列整齐,形态结构完整;模型组大鼠骨骼肌纤维排列紊乱,甚至断裂,肌成纤维细胞增多,细胞外基质ECM)增多且胶原纤维明显沉积;治疗组大鼠骨骼肌纤维排列较整齐、间距小,且大小均一,胶原纤维生成减少,仅有少量ECM生成,损伤基本恢复。qPCR和蛋白印迹结果显示模型组大鼠损伤腓肠肌MMP-1的mRNA和蛋白表达量及MMP-1/TIMP-1比值明显降低(P<0.01),而TIMP-1的mRNA和蛋白表达水平明显升高;给予推拿治疗后可明显提高损伤大鼠腓肠肌MMP-1的mRNA和蛋白水平及MMP-1/TIMP-1的比值(P<0.01,P<0.05),且降低TIMP-1的转录水平(P<0.01,P<0.05)。[结论]推拿治疗可有效减轻骨骼肌钝挫伤后纤维化程度,其作用可能与上调MMP-1/TIMP-1比值有关。     

IGF-1和黄芪丹参治疗骨骼肌钝挫伤的生物力学评价

目的观察胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和黄芪丹参的治疗对大鼠骨骼肌钝挫伤愈合的影响。方法72只雄性SD大鼠，制作成右侧腓肠肌钝挫伤动物模型，随机分成3组，即IGF-1组(注射外源性IGF-1)，中药组(注射黄芪丹参注射液)和自然愈合组。于伤后7、14、21、28、42、56d测双侧腓肠肌的最大颤搐强度、断裂强度和拉伸长度。结果(1)自然愈合组损伤骨骼肌力学指标在伤后8周仍明显低于正常；(2)IGF-1组和中药组改善的速度和程度均明显高于自然愈合组，以IGF-1组尤为显著；(3)IGF-1治疗组修复的损伤骨骼肌，其最大颤搐张力和断裂强度均明显高于健侧。结论(1)急性骨骼肌钝挫伤后，自然愈合组修复质量不佳；(2)IGF-1和黄芪丹参具有促进骨骼肌损伤修复的作用，其中以IGF-1的作用更为显著；(3)IGF-1可能有促进骨骼肌肥大的作用。     

活血止痛膏对兔骨骼肌急性钝挫伤后Ⅱb型MHC、Ⅰ型及Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的:观察活血止痛膏剂对兔骨骼肌钝挫伤后内源性IIb型肌球蛋白重链(MHC)、Ⅰ型及III型胶原mRNA表达的影响。方法:63只大白兔随机分为活血止痛膏高、中、低剂量组与青鹏膏对照组、外伤对照组,每组12只。另取3只为正常对照组。各实验组采用"重物自由落体打击法"制作大白兔骨骼肌急性钝挫伤模型。受伤第1天即于伤处贴敷相应药物。各组伤后3、10、20、27天各处死大白兔3只,取腓肠肌标本,共6个。RT-PCR技术检测内源性Ⅱb型MHC、Ⅰ型及Ⅲ型胶原mRNA。结果:①伤后第3、10、20天活血止痛膏高、中剂量组和青鹏膏组内源性Ⅱb型MHCmRNA表达量高于外伤组和低剂量组(P<0.05);第10、20天活血止痛膏高剂量组内源性IIb型MHCmRNA表达高于中剂量组(P<0.05);②内源性I型胶原mRNA表达量:第3天各组比较无统计学意义(P>0.05);第10、20天活血止痛膏高、中剂量组和青鹏膏组表达量低于外伤组、低剂量组(P<0.05);第10、20天中剂量组高于高剂量组(P<0.05)。③内源性Ⅲ型胶原mRNA表达量:第3、10、20天活血止痛膏高、中剂量组和青鹏膏组内源性Ⅲ型胶原mRNA表达低于外伤组和低剂量组(P<0.05);第3、10、20天高剂量组和青鹏膏组表达量明显少于中剂量组(P<0.05)。三个检测指标各个时间点青鹏膏组和高剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:活血止痛膏可有效促进骨骼肌急性钝挫伤后Ⅱb型MHCmRNA表达,减少Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达,其作用与青鹏膏相当。     

bFGF对骨骼肌肌卫星细胞增殖的影响--PCNA免疫组化法的实验研究

目的：试图用致中胚层来源细胞分裂剂—碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)使正常成熟骨骼肌肌卫星细胞从静止状态变成增殖活动。方法：用21只大白鼠腓肠肌为实验材料，随机分3组，每组各7只，A组肌肉内注入bFGF；B组肌肉内注入生理盐水；C组肌肉内不注任何物质。连注14d后，取各组腓肠肌制成HE染色和增殖细胞核抗原(prolifcrate cell nucleus antigen，PCNA)染色切片，最后光镜下观察和对观察相关资料做统计学处理。肌卫星细胞核，HE染色为蓝色，PCNA染色阳性为棕黄色。结果：细胞核数量，A组较B、C两组多；B组较C组多；C组肌肉内几乎未见有PCNA阳性细胞核存在。结论：bFGF可使骨骼肌的肌卫星细胞，由静止变成增殖状态，为解决成体干细胞快速增殖这一难题，提供参考依据。     

慢性阻塞性肺疾病大鼠骨骼肌肌纤维类型和运动终板的变化

目的研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠骨骼肌肌纤维分型和骨骼肌神经肌肉接头处运动终板的变化,从而了解COPD患者骨骼肌功能失调的原因。方法利用熏香烟法制造COPD大鼠模型并设置空白组。取大鼠胫骨前肌做冷冻切片,琥珀酸脱氢酶染色以及乙酰胆碱酯酶染色,比较两组大鼠骨骼肌横截面积,Ⅰ型、Ⅱa和Ⅱb型肌纤维的含量以及神经肌肉接头处运动终板的差异。结果两组大鼠Ⅰ型及Ⅱb型肌纤维含量间差异有统计学意义(P<0.05)。两组大鼠骨骼肌横截面积和单位横截面积内运动终板个数间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论COPD大鼠骨骼肌纤维含量改变,神经肌肉接头运动终板减少导致骨骼肌耐力下降以及肌肉萎缩可能是骨骼肌功能失调的原因之一。     

牙本质基质蛋白1糖基化修饰对小鼠骨骼肌损伤修复的影响

目的探讨牙本质基质蛋白1糖基化（DMP1-PG）在小鼠骨骼肌损伤修复中的作用及其机制。方法选取5周龄（年轻）和12月龄（老龄）野生型小鼠,通过免疫荧光染色和RT-qPCR确定DMP1-PG在小鼠骨骼肌中的表达。通过建立5周龄DMP1-S89G基因突变小鼠和野生型小鼠骨骼肌冰冻损伤模型,损伤后2、7、14d取损伤处骨骼肌,H-E染色观察骨骼肌愈合过程。通过RT-qPCR检测骨骼肌中损伤修复相关mRNA的表达变化。结果DMP1-PG在年轻小鼠骨骼肌肌纤维连接处大量表达,在老龄小鼠骨骼肌中表达显著下降（P<0.01）。在年轻小鼠腓肠肌损伤修复过程中DMP1-PG表达上调（P<0.01）,DMP1-PG缺失后,骨骼肌修复功能减弱,肌再生相关因子和血管再生因子表达减少（P<0.01）,小鼠腓肠肌损伤修复受到抑制。结论牙本质基质蛋白1糖基化修饰能够通过调节肌再生相关因子和血管再生因子的表达,影响年轻小鼠骨骼肌损伤修复。     

肉毒杆菌毒素A水凝胶对大鼠骨骼肌远期作用的形态学观察

目的 探讨肉毒杆菌毒素A(botulinum toxin A,BTXA)水凝胶对大鼠骨骼肌(腓肠肌)远期作用的形态学影响及其意义.方法 将BTXA行示踪标记配制125I-BTXA水凝胶与125I-BTXA水溶液,进行样品放射性强度测定.12只SD大鼠用随机数字表法分为A、B两组,每组6只,大鼠右侧腓肠肌注射BTXA水凝胶,左侧腓肠肌注射等体积生理盐水作对照,于注射后6个月(A组)、12个月(B组)切取腓肠肌标本,常规病理HE染色、1%氯化金染色,透射电子显微镜观察组织结构变化.结果 125I-BTXA水凝胶与125I-BTXA水溶液放射性强度比较无统计学差异(P＞0.05);光镜下大鼠腓肠肌组织形态无明显改变;透射电镜观察,注射后6个月,出现不可逆性肌纤维溶解,肌膜下线粒体嵴肿胀、空泡变,局部肌浆网增厚、扩张;注射后12个月,肌细胞损伤无明显改善.结论 BTXA在水凝胶中的浓度与在生理盐水中相当,BTXA水凝胶作用的骨骼肌远期超微结构形态不能恢复止常,其对骨骼肌在远期仍有影响.     

高脂饮食诱导的脂肪性肝纤维化大鼠肝组织TGFβ1和CTGF mRNA表达及其意义

及其意义。方法将20只sD大鼠随机分为正常对照组与模型组，模型组sD大鼠给予高脂饲料喂养，对照组大鼠予以普通饲料喂养，24周末处死，HE染色，光镜下观察各组大鼠肝组织的病理改变；以RT-PCR法检测大鼠肝组织中TGFβ1 mRNA和CTGF mRNA在肝脏的表达。结果 与正常组大鼠比较，模型组大鼠肝内TGFβ1 mRNA和CTGF mRNA表达均明显增强。模型组大鼠肝组织网状纤维染色、HE染色检查均支持肝纤维化改变。结论 高脂饮食诱导脂肪性肝纤维化大鼠肝内TGFβ1 和CTGF表达增强，提示TGFβ1和CTGF也参与了脂肪性肝纤维的发生发展。     

丹参注射液对大鼠骨骼肌急性钝挫伤后生物力学指标的影响

 目的 探讨丹参注射液在大鼠骨骼肌钝挫伤后修复过程中的作用。 方法 108只雄性SD大鼠,随机分为3组：丹参注射液组,自然愈合组,对照组。对丹参注射液组和自然愈合组大鼠采用打击装置造成其右侧胖肠肌钝挫伤,分别于伤后第14、21、28、35、42、56天取材,测试大鼠双侧胖肠肌的最大拉伸强度和最大拉伸率,并将每只大鼠的伤侧数值与健侧数值之比作为参数进行统计学分析,比较各组大鼠的统计结果。 结果 (1) 最大拉伸强度方面：自然愈合组至第56天基本达到正常水平,丹参注射液组明显早于自然愈合组,于第42天即达到正常水平。(2) 最大拉伸率方面:丹参注射液组和自然愈合组至第56天仍处于较低水平,自然愈合组明显低于丹参注射液组（P<0.05）。 结论 丹参注射液在促进骨骼肌钝挫伤愈合方面是有效的,不仅缩短了愈合时程,使骨骼肌在较短时间内达到一定的强度,而且能够有效地改善骨骼肌的愈合质量。     

显微修复肌内神经对断裂股直肌恢复的作用

目的:探讨显微修复肌内神经对损伤骨骼肌恢复的影响.方法:30只新西兰大白兔随机分为A、B 2组.2组均选取实验动物右侧股直肌作为实验侧,左侧股直肌作为空白对照侧.A组切断一侧股直肌后修复肌肉残端及肌内神经,B组仅修复肌肉.术后28周,测量股直肌湿重及力量,通过HE染色、Masson三色染色、肌球蛋白三磷酸腺苷酶(mATPase)染色及还原型辅酶Ⅰ四唑氮还原酶(NADH-TR)染色观测股直肌的形态学指标,通过t检验、ANOVA分析比较A、B2组自身及组间在各指标上的差异情况,从而判断显微修复肌内神经对损伤骨骼肌恢复的影响效果.结果:术后28周,与对照侧相比,肌内神经断伤组实验侧股直肌湿重、等长收缩力下降(P＜0.05),Ⅰ型、Ⅱa型、Ⅱb型肌纤维横断面面积均恢复较差(P＜0.05),肌肉萎缩、脂肪浸润及纤维变性明显,肌纤维再生状况欠佳,肌纤维直径变异较大.肌内神经修复组除Ⅱb型肌纤维恢复较差(P＜0.05),其余各项指标基本恢复正常.结论:通过显微技术修复肌内神经,能够促进损伤骨骼肌的肌纤维再生,减轻肌肉萎缩及纤维变性,恢复肌纤维的正常形态及组成方式,促进损伤骨骼肌的恢复.     

Muscle fatigue

Muscle fatigue is a common symptom but there are no universally accepted methods for quantitating the function of voluntary muscle. This paper describes three main methods of assessment: simple clinical tests of muscle function; thermal probe measurements of metabolic heat production during muscular contraction; needle biopsy studies of muscle structure and chemistry. These methods, though at a relatively early stage of development, have given promising results which suggest that they could be useful in assessing possible new forms of treatment in patients with neuromuscular disorders.     

Turning Marrow into Muscle

Ｉｎｕｎｅｘｐｅｃｔｅｄｔｅｓｔｉｍｏｎｙ2ｔｏｔｈｅｖｅｒｓａｔｉｌｉｔｙ3ｏｆｔｈｅｂｏｄｙ′ｓｃｅｌｌｓ,ｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓｈａｖｅｆｏｕｎｄｔｈｅｙｃａｎｍａｋｅｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｃｅｌｌｓｔｕｒｎｉｎｔｏｍｕｓｃｌｅ,ｃａｕｓｉｎｇｍｉｃｅｗｉｔｈｍｕｓｃｕｌａｒｄｙｓｔｒｏｐｈｙ4ｔｏｐｒｏｄｕｃｅｃｏｒｒｅｃｔｌｙｗｏｒｋｉｎｇｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓＴｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｕｇｇｅｓｔｓｔｈａｔａｆｏｒｍｏｆｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｔｒａｎｓｐｌａｎｔ--ａｗｅｌｌｅｓｔａｂｌｉｓ…