热休克蛋白90α(HSP90α)在大肠杆菌中的表达

目的 :探讨热休克蛋白 90α的生物学功能 ,获得高质量及充足的HSP90α蛋白。方法 :采用PCR的方法扩增HSP90αcDNA5’端 42 4bp片段 ,在起始密码子位置制造一个NcoI酶切位点 ,将PCR产物克隆到中间载体 ,再通过合适的酶切位点将其余片段连接到此载体 ,形成一个带有NcoI突变位点的HSP90αcDNA全长克隆。最终将HSP90α全部编码cDNA插入到pET 16b表达载体中。结果 :经诱导表达 ,SDS PAGE凝胶电泳分离显示在分子量大约 83kD处有一诱导蛋白带。WesternBlot证明表达产物与抗HSP90α抗血清有特异的免疫反应。结论 :构建成了T7启动子控制下的HSP90α表达质粒。     

热休克蛋白90α的cDNA克隆

本文从构建ｃＤＮＡ有限文库中分离出含有全部编码区＋４／＋２８３０ｂｐ的Ｈｓｐ９０αｃＤＮＡ，经ＤＮａｓｅＩ有限酶解片段的定向亚克隆和序列测定，获得了含有人Ｈｓｐ９０α的ｃＤＮＡ全序列克隆。     

人hsp90α基因5‘上游顺式元件的研究

利用人ｈｓｐ９０α基因酸谱，成功地获得ｈｓｐ９０α基因５’旁侧１４７６ｂｐ片段，在国际上首次测定了该区的全部核苷酸序列，发现新的ＨＳＥ，Ｓｐｌ，ＳＲＥ和ＣＡＡＴ等顺式元件，为进一步研究ｈｓｐ９０α基因的转录调控机制奠定的基础。     

热休克蛋白90α荧光免疫层析检测方法的建立

目的:建立人血清中热休克蛋白90α(HSP90α)的荧光免疫层析定量检测方法。方法:采用荧光免疫层析技术,对荧光微球制备、最佳反应时间、线性范围、精密性、回收率、临床检测等方面进行系统研究。结果:确定了各反应条件,最佳反应时间为5 min。线性范围0.39 ~100 ng/ ml。精密性质控品高值(30 ng/ ml)CV=8.14%;低值(10 ng/ ml)CV=9.26%,高、中、低值血清的回收率为100.56%、99.76%、94.1%;与国外试剂盒(ELISA 检测方法)平行检测40 份临床血清,结果显示两者相关系数为0.968 5。结论:初步建立的方法具有良好的精密性和线性,临床符合率能满足临床检测技术要求,有望完善后报批用于临床。     

胃癌组织中CTSD、HSP90α、EGFR的表达及临床意义

目的检测组织蛋白酶D(Cathepsin D,CTSD)、热休克蛋白90α(heat shock protein 90α,HSP90α)、表皮生长因子受体(epidemal growth factor receptor,EGFR)蛋白及其mRNA在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理特征的关系,初步探讨CTSD、HSP90α、EGFR在胃癌发生、发展及浸润转移过程中的作用。方法采用免疫组化及原位杂交(in situ hybridization,ISH)法检测110例正常胃黏膜组织、83例癌旁异型增生组织、110例胃癌组织及78例胃癌淋巴结转移组织中CTSD、HSP90α、EGFR蛋白及其mRNA的表达。结果 (1)CTSD、HSP90α、EGFR蛋白在110例正常胃黏膜组织、83例癌旁异型增生组织、110例胃癌组织及78例胃癌淋巴结转移组织中的阳性率分别为0、18.07%、80.91%、92.31%;0.9%、15.66%、75.45%、89.74%;0、12.05%、69.09%、84.62%。(2)相关分析结果显示,CTSD、HSP90α、EGFR在胃癌组织中的表达呈两两正相关(r_s=0.853,P0.05;r_s=0.639,P0.05;r_s=0.734,P0.05)。(3)CTSD、HSP90α、EGFR在胃癌中的表达均与胃癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期相关(P0.05);与患者年龄、性别、肿瘤大小无显著相关性(P0.05)。结论 CTSD、HSP90α与EGFR可能与胃癌发生、发展以及侵袭转移等恶性生物学行为密切相关。     

姜黄素抑制STAT3磷酸化对乳腺癌细胞增殖及Hsp90α表达的影响

目的探讨姜黄素对乳腺癌细胞增殖和Hsp90α表达的影响及其可能机制。方法以乳腺癌细胞株MCF-7为材料,分别用不同浓度的姜黄素(0、5、10、15、20μmol/L)处理细胞36 h,或以10μmol/L姜黄素分别处理细胞12、24、36、48 h,用MTT法检测细胞生长抑制率,分别采用实时定量PCR和Western blot法检测Hsp90αmRNA、Hsp90α及磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白的表达。结果姜黄素处理MCF-7细胞后,总STAT3蛋白的表达无明显差异,p-STAT3表达明显下调;同时,姜黄素处理组MCF-7细胞代谢MTT的能力降低,细胞生长的抑制率明显上升,Hsp90αmRNA和蛋白质的表达下调,且该效应呈浓度和时间依赖性(P0.05)。结论姜黄素可能通过STAT3信号途径,调控Hsp90α的表达,进而干预乳腺癌细胞的增殖。     

Hsp90抑制TNFα诱导的细胞凋亡及线粒体细胞色素c的释放

目的应用热休克蛋白90(Hsp90)过表达系统探讨Hsp90是否抑制肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的细胞凋亡及线粒体细胞色素c的释放。方法采用电穿孔技术建立稳定过表达Hsp90的细胞克隆,应用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪观察TNFα和放线菌酮(CHX)诱导的细胞凋亡。应用W estern b lotting方法检测细胞色素c的变化。结果相差显微镜观察Hsp90过表达细胞与对照细胞相比悬浮细胞较少(分别为18%和41%),PBS冲洗后剩余黏附细胞较多。应用共聚焦显微镜进行TUNEL测定结果显示大部分对照细胞发生凋亡,相对较少的Hsp90细胞发生凋亡。W estern b lotting检测Hsp90细胞中细胞色素c的表达与对照组相比明显减少。结论Hsp90过表达抑制TNFα诱导的细胞凋亡及线粒体细胞色素c释放,提示其在凋亡信号传导通路线粒体水平发挥抑制作用。     

90Sr-90Y敷贴器治疗寻常疣

我科于2001年1月～2004年10月用90Sr-90Y敷贴器治疗寻常疣患者,取得了满意疗效,现报道如下.     

血清肿瘤标志物CEA、NSE联合HSP90α检测诊断肺癌患者的效果分析

目的:探讨血清肿瘤标志物癌胚抗原(Carcinoembryonic Antigen,CEA)、神经特异性烯醇化酶(Neuron Specific Enolase,NSE)联合热休克蛋白90α(Heat Shock Protein 90α,HSP90α)检测诊断肺癌(Lung Cancer,LC)患者的效果.方法:选择我院2018年9月至2020年10月期间收治的103例患者为研究对象,根据疾病类型进行分组,LC患者52例作为观察组,肺部良性肿瘤患者51例作为对照组,两组均接受CEA、NSE联合HSP90α检测.观察两组患者血清肿瘤标志物、HSP90α阳性率、血清肿瘤标志物、HSP90α水平、CEA、NSE、HSP90α单独及联合检测诊断LC的价值.结果:观察组CEA、NSE、HSP90α阳性率均高于对照组(P<0.05);观察组CEA、NSE、HSP90α水平均高于对照组(P<0.05);CEA、NSE、HSP90α联合检测敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均高于单独检测(P<0.05).结论:CEA、NSE、HSP90α水平在LC患者中高表达,联合检测可提高诊断价值.     

α

研究了α     

HSP90α与MMP-2相互作用对甲状腺未分化癌细胞生长和转移的影响

目的探讨HSP90α对甲状腺未分化癌TAK细胞生长和转移的影响及相关信号分子的调控机制。方法通过HSP90α的非渗透特异性抑制剂17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素(17-allyl-amino-17-demethoxygeldanamycin, 17-AAG)处理TAK细胞,分别给予不同浓度(0.001～10μmol/L)和不同作用时间(24 h和48 h),采用MTT实验、平板克隆形成实验和Transwell实验观察细胞生长和转移情况。Western blot法检测细胞内和细胞外HSP90α和MMP-2蛋白表达和分泌水平。明胶酶谱实验检测细胞外MMP-2蛋白的活性。结果与未处理组细胞相比,经0.001～10μmol/L的17-AAG作用24 h和48 h的TAK细胞活力降低,且呈明显的时间和剂量依赖性(P0.05);与未处理的细胞相比,经0.1μmol/L和1.0μmol/L的17-AAG作用24 h的TAK细胞平板克隆形成[(86.43±1.01)%vs(46.13±1.25)%、(26.73±1.44)%,P0.05]、迁移能力[(76.47±2.05)%vs(51.01±1.75)%、(25.01±1.97)%),P0.05]和侵袭能力[(52.47±1.05)%vs(39.01±2.45)%、(17.07±1.67)%,P0.05]均明显降低,同时细胞内HSP90α蛋白表达增加,细胞外HSP90α和MMP-2蛋白表达明显降低,细胞外MMP-2蛋白活性明显降低。结论分泌型HSP90α与细胞外MMP-2蛋白协同作用促进甲状腺未分化癌细胞的增殖、迁移和侵袭,导致细胞恶性生长。     

90Sr-90Y治疗前列腺增生的护理探讨

对90Sr-90Y经直肠治疗前列腺增生的护理进行探讨,报道90例的治疗和护理体会.护士在治疗前向患者讲解治疗方法和原理,提高患者对该项治疗的信任,完成疗程;治疗过程中严格执行放射性防护原则和操作规程,做好患者的生活、饮食护理.结果:治疗总有效率96.7%,患者的下尿路梗阻症状显著改善,生活质量显著提高,疗效显著.经临床系统观察证实:90Sr-90Y治疗前列腺增生是一种剂量安全、方法简便、无创性、无痛苦、疗效显著的新方法,而护理对治疗的成败起着重要的作用.     

右归丸对膝骨关节炎模型鼠软骨组织显微结构及热休克蛋白90α蛋白表达的影响

目的:观察右归丸对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型大鼠软骨组织显微结构和热休克蛋白90α(heat shock protein 90α,Hsp90α)蛋白表达的影响,进一步揭示右归丸防治KOA的机制。方法:将大鼠随机分为假手术对照组、KOA模型组、硫酸氨基葡萄糖组和右归丸(高、中、低剂量)组,每组10只。采用改良Hulth法制备大鼠KOA模型,分别予相应药物灌胃8周。HE染色法观察软骨组织的形态学变化,并进行Makin评分;应用免疫组化法检测各组大鼠软骨组织Hsp90α、纤连蛋白(fibronectin,Fn)和Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,COL-Ⅱ)的表达;RT-qPCR法检测各组大鼠软骨组织Hsp90α、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)和MMP-13的mRNA表达水平,应用Western blot法检测各组大鼠软骨组织Hsp90α和COL-Ⅱ的表达。结果:与假手术组比较,KOA模型组大鼠软骨组织Makin评分明显升高,软骨组织Hsp90α的蛋白表达显著升高,IL-1β、MMP-3和MMP-13的mRNA表达明显升高,COL-Ⅱ和Fn的蛋白表达明显降低(P<0.01),关节软骨边缘严重破坏,软骨细胞排列紊乱。与KOA模型组相比,右归丸高剂量干预组大鼠软骨组织Makin评分和Hsp90α的蛋白表达均明显降低,Fn的蛋白表达明显升高,右归丸中、高剂量组COL-Ⅱ的蛋白表达明显升高,右归丸各干预组IL-1β、MMP-3和MMP-13的mRNA表达均明显降低(P<0.05或P<0.01),软骨结构趋于正常,软骨细胞分布仅偶见不均,关节软骨表面欠光滑。结论:右归丸通过下调Hsp90α的蛋白表达并上调Fn的蛋白表达来减缓炎症因子的分泌和细胞外基质的降解,从而有效保护KOA模型大鼠关节软骨,延缓关节软骨退变。     

90Sr-90Y敷贴治疗56例腋臭疗效观察

应用9oSr-90Y敷贴治疗腋臭,评价其疗效及优势.于2009年5月至2011年5月应用90Sr-90Y敷贴治疗腋臭患者56例,通过分析临床疗效、预后、不良反应等,评价此方法.结果显示:经1～3个疗程治疗后,44人痊愈,总治愈率78.6%,有效率100%.治愈后随访,未发现复发患者.结论:与手术治疗腋臭比较,该治疗具有...     

核素90Sr/90Y外照射治疗带状疱疹临床疗效评价

目的 评价90Sr/90Y外照射治疗带状疱疹的临床疗效及不良反应.方法 将129例带状疱疹患者分为外照射和药物治疗两组.外照射治疗组(69例)按常规敷贴治疗,每日一次,3～5天为一个疗程,总剂量为1600 ～ 3600 cGy/野.药物治疗组(60例)口服阿昔洛韦片0.2g/次,每日5次,外用阿昔洛韦软膏,每日2次,7天为一个疗程.1个疗程后观察两组患者的临床疗效和不良反应.结果 90Sr/90Y外照射治疗组痊愈55例,显效10例,总有效率94.20％;阿昔洛韦对照组痊愈25例,显效17例,总有效率70.00％.x2检验得两组总有效率的差异有统计学意义(x2=13.290,P＜0.001).不良反应比较,两组不良反应发生率分别为18.84％、21.67％,差异无统计学意义(x2=o.159,P＞0.05).结论 90Sr/90Y外照射治疗带状疱疹是一种安全、简便、治愈率高、痛苦少的有效方法.     

90Sr-90Y敷贴器在跖疣治疗中的应用

我科采用90Sr-90Y敷贴器对跖疣进行局部照射治疗,取得了较好的效果,现报告如下.     

^90Sr-^90Y敷贴治疗瘢痕疙瘩的疗效观察

瘢痕疙瘩是皮肤在创伤后,由于大量结缔组织增殖和透明变性而形成的瘢痕过度增长,超出原有皮损范围的一种皮肤良性肿瘤。患者多有瘢痕体质,甚至微小创伤如蚊叮即可引起瘢痕,瘢痕形成后常有瘙痒或疼痛。     

抗meso-四(α,α,α,α-o-苯乙酰苯)卟啉的单克隆抗体制备

抗体酶是将抗体赋予酶的活力。自1986年，Schulz〔1〕和Lerner〔2〕首先报道具有水解酯键的抗体酶以来，抗体酶已成为酶工程研究领域新的生长点。近年来，国际上对抗体酶的研究已取得较大的进展。     

将90后进行到底

作家董桥说,中年是一个最尴尬的年纪,中年是下午茶。这顿下午茶,是揽一杯往事、切一块乡愁、榨几滴希望的下午。中年尴尬自是在所难免,但作为一名生于公元1990年的＂90后＂,我也没觉得轻松到哪里去。