白血病患儿骨髓中两群不同幼稚细胞的免疫表型分析

目的　探讨少数白血病患儿骨髓中两群不同幼稚细胞的免疫表型特点及其性质。方法　采用多参数流式细胞术(multiparameterflowcytometry ,MCF)及CD4 5 /SSC双对数散点图设门技术分析 10例白血病患儿骨髓样本中各群细胞的抗原表达情况。结果　 10例样本中均检测到两群幼稚细胞群体 ,一群构成比较高 (优势群体 ,8.5 %～ 76 .9% ) ,其中有 7例样本存在抗原的异常表达 ,包括早期、晚期抗原的非同步性表达、错位表达及抗原的缺失 ;另一群构成比较低 (0 .7%～ 13.9% ) ,所有样本均表达B淋巴细胞抗原 ,为正常的幼稚B淋巴细胞 ,其中有 3例存在抗原的非同步性表达。有 7例样本流式细胞术检测的白血病细胞 (优势群体 )构成比低于形态学结果 (P <0 .0 1)。结论　少数白血病患儿的骨髓除存在白血病细胞之外也可存在数量不等的正常幼稚B淋巴细胞 ,有时可伴有抗原的异常表达 ,需与混合白血病相鉴别。在白血病免疫分型中 ,流式细胞术对幼稚细胞的定性分析比定量分析更具有临床意义。     

急性B淋巴细胞白血病抗原异常表达与微小残留病检测（附17例报告）

多参数流式细胞术（FCM）免疫表型分析已成为白血病分型诊断的重要工具。近年来主张用CD45／SSC双参数散点图设门的方法进行多色分析，容易将恶性克隆细胞与正常细胞群相区别，使白血病分型更为准确，并可用于微小残留病的检测。作应用FCM对70例初诊为急性B淋巴细胞性白血病（B—ALL）患进行免疫分型，发现多种抗原异常表达，并试用不同的抗体组合对其中18例缓解后的患进行微小残留病（MRD）的追踪检测。报告如下。     

儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病的流式细胞术分析

目的 根据白血病细胞的异常免疫表达,建立流式细胞术检测儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)微小残留病(minimal residual disease,MRD)的方法 ,探讨流式细胞术检测MRD在儿童ALL个体化治疗中的意义.方法 用流式细胞术以多种四色荧光抗体组合对健康儿童骨髓进行检测,建立健康儿童骨髓细胞双参数点图分析模板.对75例ALL初诊患儿的骨髓细胞进行MRD筛选,找出在双参数点图上的位置明显区别于正常骨髓细胞的免疫表型组合作为MRD监测的有效免疫表型组合,对其中60例患儿诱导治疗结束及后续治疗中的骨髓标本用这些有效免疫表型组合进行MRD监测.同步进行细胞形态学检测和PCR检测29种融合基因、IgH/T淋巴细胞受体(TCR)基因重排.结果流式细胞术检出69例(92.0%)可用于MRD监测的有效免疫表型组合,PCR检出21例(28.0%)可用于MRD监测的融合基因或IgH/TCR基因重排;诱导治疗结束后及后续治疗中有25份骨髓标本细胞形态学未检出白血病残留细胞,流式细胞术检测仍有0.021%～4.130%的白血病残留细胞.结论 流式细胞术检测儿童ALL MRD能较好地评估临床缓解期间ALL患儿体内残留白血病细胞的数量,其覆盖面和速度优于PCR检测方法 ,敏感性高于形态学检测方法 .     

儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病的流式细胞术分析

目的 根据白血病细胞的异常免疫表达,建立流式细胞术检测儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)微小残留病(minimal residual disease,MRD)的方法 ,探讨流式细胞术检测MRD在儿童ALL个体化治疗中的意义.方法 用流式细胞术以多种四色荧光抗体组合对健康儿童骨髓进行检测,建立健康儿童骨髓细胞双参数点图分析模板.对75例ALL初诊患儿的骨髓细胞进行MRD筛选,找出在双参数点图上的位置明显区别于正常骨髓细胞的免疫表型组合作为MRD监测的有效免疫表型组合,对其中60例患儿诱导治疗结束及后续治疗中的骨髓标本用这些有效免疫表型组合进行MRD监测.同步进行细胞形态学检测和PCR检测29种融合基因、IgH/T淋巴细胞受体(TCR)基因重排.结果流式细胞术检出69例(92.0%)可用于MRD监测的有效免疫表型组合,PCR检出21例(28.0%)可用于MRD监测的融合基因或IgH/TCR基因重排;诱导治疗结束后及后续治疗中有25份骨髓标本细胞形态学未检出白血病残留细胞,流式细胞术检测仍有0.021%～4.130%的白血病残留细胞.结论 流式细胞术检测儿童ALL MRD能较好地评估临床缓解期间ALL患儿体内残留白血病细胞的数量,其覆盖面和速度优于PCR检测方法 ,敏感性高于形态学检测方法 .     

儿童急性B淋巴细胞白血病微小残留病检测及其预后意义

摘要：目的：建立检测急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）微小残留病（MRD）的流式细胞术,评估监测MRD对于判断B ALL预后的价值。 方法：用四色荧光抗体组合流式细胞术对33例确诊并接受SCMC-ALL-2005方案治疗的B-ALL患儿进行MRD检测,并随访5年,分析监测结果、复发率、5年无事件生存率。 结果：建立了正常骨髓细胞分布的分析模板;流式细胞术检测结果表明,18例MRD阳性患儿的白血病复发率为55. 6%(10/18)、15例MRD阴性患儿复发率为13.3%(2/15),差异有统计学意义（P＜0.05）。其5年无事件生存率分别为44%和93%,差异有统计学意义（χ²=6.37,P＜0.05）。 结论: 监测MRD对于B-ALL患儿预后评估有重要意义,并为治疗方案的选择提供依据。     

四色流式细胞术检测急性B淋巴细胞白血病残留细胞

目的探讨利用多参数流式细胞术检测急性B淋巴细胞白血病(BALL)残留细胞的方法和意义。方法采用四色流式细胞术,以4～6组四色抗体组合检测213例BALL患者免疫分型;以CD34、CD10、CD45、CD19为主的2种四色荧光标记抗体组合监测50例297份BALL患者骨髓标本微量残留白血病细胞,同时检测分析26份化疗后处于再生期骨髓标本中B祖细胞的免疫表型特点,并以相对定量方法比较了再生期B祖细胞与B系白血病细胞CD10、CD19和CD34表达量的差异。结果213例BALL患者中,71.8%患者存在CD45、CD34、CD19、CD10表达量的异常,只存在CD38弱阳性及髓系标志患者占8.1%。微量残留白血病细胞监测的50例患者中,12例患者存在0.06%～7.73%的白血病细胞,其中11例残留白血病细胞以CD45、CD34、CD19、CD10异常表达为主。50例患者中5例临床复发,4例在复发前7～17周微量残留病(MRD)检测阳性,且均>0.1%,1例MRD检测阴性。再生期B祖细胞依据CD45、CD34、CD19、CD10、CD22和CD20表达不同可分为3期。结论多参数流式细胞术检测MRD具有快速、敏感可定量的优势,对白血病复发有更强的预测性。     

多色流式细胞术测定急性白血病免疫表型的特征及意义

目的 探讨多色流式细胞术测定急性白血病（AL）免疫表型的特征及意义。方法 采用CD45／N散射（SSC）双参数散点图设门法进行三色或四色流式细胞术的细胞表面及胞浆内分化抗原的检测。结果 按免疫表型的特征可将AL分为4类：未分化型急性白血病（AUL）（2．7％）、单表型急性白血病（63.1％）、表达某一系列抗原为主的AL（28．9％）、急性混合性白血病（HAL）（5．3％）。急性髓细胞白血病（AML）患者主要表达CD13（96．2％）、CD33（92．3％）、MPO（80．8％），急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）主要表达cCD79a（100％）、CD19（87．5％）、CD10（75％）。2例T淋巴细胞白血病（T—ALL），全部表达cCD3、CD7。结论 多色流式细胞术进行AL免疫表型分析，对白血病的准确诊断、治疗和预后均有重要意义。     

急性淋巴细胞白血病流式细胞术免疫分型中抗原异常表达的意义

目的研究急性淋巴细胞白血病免疫分型中抗原的异常表达。方法用多参数流式细胞仪对76例初诊的急性淋巴细胞性白血病(ALL)患者进行免疫分型。结果76例ALL中B系ALL70例占92.1%,T-ALL占6例。70例B系ALL中CD45-或CD45±表达占75.5%,显示该白血病细胞具有异质性;CD38弱表达占60%,CD10强表达占40%;B系ALL表达髓系抗原以CD33最高达25.7%,CD13次之达24.2%,CD15和CD11b较少见,分别占5.7%和1.4%。结论急性淋巴细胞白血病流式细胞术免疫分型中抗原异常表达,不但在初诊时有助于白血病克隆的识别、门的设定、白血病细胞数的定量,而且能在形态学缓解后作MRD检测,为白血病复发监测提供重要手段。     

急性淋巴细胞白血病流式细胞术免疫分型中抗原异常表达的意义

目的研究急性淋巴细胞白血病免疫分型中抗原的异常表达.方法用多参数流式细胞仪对76例初诊的急性淋巴细胞性白血病(ALL)患者进行免疫分型.结果76例ALL中B系ALL70例占92.1%,T-ALL占6例.70例B系ALL中CD45-或CD45±表达占75.5%,显示该白血病细胞具有异质性;CD38弱表达占60%,CD10强表达占40%;B系ALL表达髓系抗原以CD33最高达25.7%,CD13次之达24.2%,CD15和CD11b较少见,分别占5.7%和1.4%.结论急性淋巴细胞白血病流式细胞术免疫分型中抗原异常表达,不但在初诊时有助于白血病克隆的识别、门的设定、白血病细胞数的定量,而且能在形态学缓解后作MRD检测,为白血病复发监测提供重要手段.     

流式细胞术在白血病免疫分型中影响因素探讨

目的：探讨应用流式细胞术（ＦＣＭ）在白血病免疫分型中的影响因素。方法：淋巴细胞分离液收集单个核层及血浆层细胞分别分析其表面抗原的表达量。结果：常规吸取单个核层细胞分析时细胞表面抗原的表达量与形态学及细胞化学染色结果明显不符，改用血浆层细胞测定即得到正确的表达。结论：幼稚单核细胞因比重较大可浮在血浆层中，所以如遇血浆层浑浊时应取血浆层细胞，作免疫分型。     

三染色-流式细胞术检测急性B淋巴细胞白血病微量残留病的研究

目的 建立三染色－流式细胞术检测微量残留白血病细胞。方法 利用三染色－流式细胞仪检测急性B淋巴细胞白血病患独骨髓中的CD10^ CD22^ CD45^-或dim表现型白血病细胞。结果 在23例急性B淋巴细胞白血病患儿骨髓中均可检测到CD10^ CD22^ CD45^-或dim表现型细胞,检测敏感度约为10^－4。正常人骨髓、化疗后再和髓和长期完全缓解的白血病患儿的未检测到CD10^ CD22^ CD45^-或dim表现型细胞。该法可在化疗后50d内监测到白血病细胞的变化,并且在骨髓细胞形态学确认复发之前即可检测到白血病细胞逐渐增加。结论 利用三染色－流式细胞仪检测骨髓中的CD10^ CD22^_CD45^-或dim表现型白血病细胞可以敏感地监测到急性B淋巴细胞白血病患儿微量残留病的变化。     

急性淋巴细胞白血病微小残留病与中枢神经系统白血病的关系

目的探讨急性淋巴细胞白血病患儿外周血和脑脊液微小残留病（MRD）与中枢神经系统自血病（CNSL）的关系。方法对2003年1月～2007年8月在我院确诊的50例急性淋巴细胞白血病患儿采集外周血和脑脊液,利用单克隆抗体直接免疫荧光标记法和流式细胞仪多参数分析技术进行微小残留病的检测,并动态随访。结果50例患儿中发生CNSL的共有12例,12例中脑脊液MRD和脑脊液形态学同时阳性仅4例。其中初诊时伴CNSL者2例,脑脊液微小白血病（MRD）和脑脊液形态学检查均阳性。缓解期复发的10例CNSL中,脑脊液形态学检查阳性的仅2例;10例患儿外周血和脑脊液MRD同时阳性4例。缓解期CNSL复发的10例患儿中,完全诱导缓解第33天测血MRD和脑脊液MRD均阳性,但脑脊液细胞数正常,脑脊液涂片显示幼稚细胞阴性,临床不符合CNSL的诊断,故未按CNSL治疗,分别于6个月内出现CNSL复发1例、6～18月有2例、18月后有2例复发,复发率为50％（5／10）。结论流式细胞术检测脑脊液MRD较脑脊液形态学更加敏感,可较早预知CNSL状况,以提前实行针对性治疗,可早期阻止CNSL的发生。     

流式细胞术检测白血病微小残留病的研究进展

流式细胞术（flow cytometry，FCM）具有高度的精密性，测定数据可靠，既可分析单个细胞，也可区分群体细胞，利用白血病免疫表型标志与正常细胞的不同，通过多参数分析，可从以正常细胞中区分白血病细胞，具有快速、简便、定量和灵敏度高等优点，为白血病微小残留病（MRD）的检测提供了一种新颖可靠的手段，从而给白血病治疗策略的制定提供了依据。     

多参数流式细胞术分析415例成人和儿童B-ALL白血病相关免疫表型

为了探讨FCM在微量残留病（MRD）检测中的意义，利用4—6组4色抗体组合，以CD45／SSC设门法对273例成人和142例儿童B系急性淋巴细胞白血病（B—ALL）患者进行了多参数流式细胞术（FCM）免疫分型检测和白血病相关免疫表型（leukemia associated immunophenotyping，LAIP）分析。结果表明：根据CD34和CD10的表达特点，可将B—ALL患者分为Ⅰ型（CD34^＋CD10^-）；Ⅱ型（CD34^＋CD10^＋）；Ⅲ型（CD34-CD10^＋）；Ⅳ型（CD34^-CD10^-）。Ⅰ型和Ⅱ型患者LAIP的阳性比例分别为100％和92％，但Ⅲ型患者LAIP阳性率只有79．2％，显著低于Ⅰ型和Ⅱ型患者。总体B—ALL患者LAIP的检出率为90％，成人与儿童组无明显差异。而利用CD34／CD10／CD19／CD45一组抗体，LAIP检出率达到77．6％。结论：90％成人和儿童B-ALL白血病患者具有LAIP，因此对这类患者适宜用多参数流式细胞术进行MRD监测。     

儿童急性白血病细胞视网膜母细胞瘤蛋白的表达及临床意义

本研究检测视网膜母细胞瘤蛋白（retinoblastoma protein，pRb）在不同类型儿童急性白血病细胞中的表达，并探讨其表达水平与细胞周期、危险度、微小残留病（minimal residual disease，MRD）监测、预后等临床诊断治疗监测指标的关系。对89例初发小儿急性白血病患者（包括25例AML，10例T-ALL，54例B-ALL）及7例正常对照骨髓标本，采用流式细胞术（FCM）分别检测治疗前后视网膜母细胞瘤蛋白的表达情况．并对部分病例进行细胞周期分析。结果表明：①流式细胞术检测pRb的表达准确直观；②在各种类型的急性白血病中pRb的高水平表达具有普遍性，同一患儿白血病细胞pRb的表达明显高于非白血病细胞，在不同类型的急性白血病中pRb均有缺失表达；③pRb的表达水平与白血病细胞的细胞循环周期可能存在一定的相关性，pRb表达阳性的B-ALL中处于G1期的白血病细胞数显著高于pRb表达阴性的病例（92％ vs 77％）；④B-ALL中，MRD阳性组pRb的表达量明显低于阴性组，且差值有统计学意义（P〈0．05），并且治疗前后非白血病细胞的pRb表达水平是稳定的；⑤pRb的表达量与B—ALL早期治疗预后之间存在一定相关性，B-ALL预后不良组pRb的表达量低于预后良好组（P〈0．05）。结论：pRb在儿童急性白血病细胞中存在高水平表达或缺失等异常形式的表达差异，pRb的表达与白血病细胞的细胞周期、MRD监测、早期治疗反应的预后评价等存在相关性，对于B-ALL的治疗监测及预后评估具有指导意义。     

流式细胞术检测急性白血病微小残留病的研究进展

近年来,随着新的化疗药物的出现,急性白血病在治疗上取得很大进展,患者的完全缓解率达50％-80％。尽管如此,从诊断开始的3—5年内仍有部分患者复发,目前认为其主要原因与微小残留病（MRD）的存在相关。多参数流式细胞术（FCM）是目前检测MRD的有效方法之一。它通过多参数分析白血病细胞与正常细胞表面不同的免疫表型,将两种细胞区分,具有快速、灵敏度高、定量准确的优点。通过FCM对急性白血病MRD的监测．不仅有助于判断疗效、指导个体化治疗,对预测疾病复发也具有重大意义。本文将对FCM检测急性白血病MRD的优势、面临的挑战、临床意义及应用前景进行综述。     

流式细胞术对1例白血病病例的免疫表型分析

目的 探讨白血病免疫分型在临床诊断、治疗中的作用。方法 采用免疫荧光标记的方法，用流式细胞仪分析患者血细胞表面各种抗原标记物的表达情况。结果 形态学最初诊断为再生障碍性贫血（AA）的这例病例，经流式细胞术检测出有异常幼稚细胞群体的存在，两次的免疫表型分析显示异常细胞群体由最初的两群细胞克隆演变为一个克隆群体，并带有B细胞系列的抗原标记，临床最终诊断为急性淋巴细胞白血病。目前采用针对B系的化疗方案，疗效较显著。结论 流式细胞术的免疫表型分析对临床的诊断、治疗方案具有重要的参考价值。     

白血病干细胞相关抗原在急性白血病细胞中的表达

目的 探讨白血病干细胞(leukemia stem cell,LSC)相关抗原在不同亚型急性白血病细胞中的表达规律.方法 采用流式细胞术检测LSC相关抗原CD96,CD90,CD123,CD71等在50例不同亚型急性白血病细胞中的表达,包括急性粒细胞白血病未分化型(M1)、急性粒细胞白血病部分分化型(M2)、急性早幼粒细胞白血病(Ms)、急性粒-单核细胞白血病(M4)和急性B淋巴细胞白血病.结果 CD96在M.的表达率(90.00％)明显高于M2(18.18％)和急性B淋巴细胞白血病(20.00％)(P＜0.05);各亚型急性白血病均表达CD123,但差异无统计学意义(P＞0.05) ;CD71在急性髓细胞白血病各亚型中(M1、M2、M3和M4)阳性表达率分别为80.00％、72.73％、90.00％和100.00％,明显高于急性B淋巴细胞白血病(P＜0.05);CD90在急性B淋巴细胞白血病中阳性表达率为13.33％,高于急性髓细胞白血病(P＞0.05).结论 CD71与CD96的表达有亚型特异性,CD96可能具有指示系列分化和细胞分化程度的作用,CD71可用于区分急性淋巴细胞白血病和急性髓细胞白血病.     

CD+4 Foxp3+调节性T淋巴细胞在儿童急性白血病中的表达及其与微小残留病的关系

目的 研究调节性T淋巴细胞(regulatory T cell,Treg)在白血病患者体内的表达情况,探讨Treg的增高与白血病疗效监测与白血病微小残留病(minimal residual disease,MRD)预后指标之间的关系.方法 建立Foxp3-FITC/CD-25PE/CD4-PerCP/CD3-APC四色流式细胞术检测Treg的方法 ;比较10例正常骨髓标本以及33例白血病初发患者[急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)17例,急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)9例,急性髓细胞白血病(AML)7例]骨髓标本中Treg的数量;结合56例临床缓解患者MRD监测结果 ,评估Treg作为白血病患者预后判断评价指标的价值.结果 正常骨髓组Treg占CD+4T淋巴细胞的比例中位数(M)为8.09%,初发自血病组M为12.77%,两者差异有统计学意义(U=3.41,P<0.01);而在B-ALL、T-ALL和AML组的差异无统计学意义(H=1.22,P>0.05).Treg数量与临床病理学参数无显著相关性.此外,Treg数量在MRD阳性组(M=14.74%)与MRD持续阴性组(M=11.3%)中的差异有统计学意义(t=252.5,P<0.05).结论 白血病初发患儿体内的Treg数量显著增高,且患儿中Treg表达水平与MRD有关联.高水平Treg预示白血病患儿预后较差,存在复发的可能.     

多参数流式细胞术与实时定量PCR技术检测Ph阳性急性B淋巴细胞白血病异基因造血干细胞移植前微小残留病的预后意义比较

目的:探讨多参数流式细胞术（MFC）与实时定量聚合酶链反应技术（RQ-PCR）两种方法检测费城染色体阳性（Ph +）急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）患者异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）前微小残留病（MRD）的预后意义。 方法:回顾性分析2014年7月至2018年2月在北京大学血液病研究...