银杏叶提取物对大鼠肺成纤维细胞表达CTGF和α-SMA的影响

目的观察银杏叶提取物(GBE)对大鼠肺成纤维细胞表达CTGF和α-SMA的影响。方法大鼠气管内一次性滴注博来霉素制备肺纤维化模型,原代培养大鼠肺成纤维细胞,分为4组:对照组、GBE 25,50,100 mg/L组,共培养24 h,采用免疫细胞化学法和流式细胞技术检测GBE对各组细胞表达CTGF和α-SMA的影响。结果与对照组比较,50,100 mg/L组细胞表达CTGF和α-SMA依次降低,各组间比较有统计学意义(P<0.05)。结论银杏叶提取物能部分抑制大鼠肺成纤维细胞的表型转化。     

银杏叶提取物对糖尿病模型大鼠肾脏ET-1、TGF-β_1的影响

目的:研究银杏叶提取物(EGb)对糖尿病模型大鼠肾组织中内皮素-1(ET-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)水平变化的影响。方法:SD大鼠24只随机分为3组,即正常对照、糖尿病模型和EGb组,经相应处理后8周,观察大鼠血糖、胰岛素、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、肌酐清除率(Ccr)、尿白蛋白排泄率(UAE)、尿β2微球蛋白排泄率(β2-MG)等水平变化;以放射免疫法检测血浆、尿液及肾组织中ET-1水平;以ELISA法检测血清、尿液中TGF-β1水平。结果:糖尿病大鼠的血糖、胰岛素、TC和TG升高;经EGb治疗后,血糖、血胰岛素、TC和TG显著降低。糖尿病模型组血、尿中ET-1、TGF-β1及肾组织中ET-1水平均显著高于正常对照组;EGb可显著降低血、尿中ET-1、TGF-β1和肾组织中ET-1水平及Ccr、UAE、β2-MG。结论:EGb对糖尿病大鼠的肾脏具有保护作用,而抑制糖尿病大鼠ET-1、TGF-β1水平可能是其重要作用机制。     

银杏叶提取物对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠ET-1、TGF-β_1的影响

目的:研究银杏叶提取物(EGb)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠中内皮素-1(ET-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法:实验分为3组,即正常对照、COPD模型、EGb组。采用熏吸香烟并经气管内注入脂多糖(LPS)法复制COPD大鼠模型,EGb组于COPD模型开始复制后第8天起每天igEGb200mg·kg-1,至第28天。对各组大鼠肺脏行病理学检测和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数、中性粒细胞(PMN)数、ET-1、TGF-β1的测定。结果:EGb组大鼠肺组织形态学改变较COPD模型组减轻;定量指标肺平均内衬间隔(MLI)较COPD模型组显著降低(P<0.05)。EGb组BALF中白细胞总数、PMN数和ET-1、TGF-β1浓度较COPD模型组显著下降(P<0.05)。结论:EGb对COPD模型大鼠的肺脏具有保护作用,而抑制COPD大鼠ET-1、TGF-β1水平可能是其重要作用机制。     

TGF—β1对人牙周膜成纤维细胞合成胶原的影响

目的：观察不同浓度的转化生长因子β1对体外培养的人牙周膜成纤维细胞合成胶原的影响。方法：采用组织块培养技术进行人牙周膜成纤维细胞的体外培养,采用羟脯氨酸试剂盒来观察细胞合成胶原的情况。结果：0．1、1．0、10．0、50．0ng／ml的转化生成因子β1可以促进牙周膜成纤维细胞合成胶原,其中10ng／ml的TGF—β1在48h促胶原合成作用最明显,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：转化生长因子β1有促进人牙周膜成纤维细胞合成胶原的作用。     

丹酚酸B对转化生长因子β_1诱导心肌成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨丹酚酸B对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导心肌成纤维细胞增殖的影响。方法:培养原代心肌成纤维细胞;采用波形蛋白、肌动蛋白及纤维连接蛋白免疫组化染色鉴定心肌成纤维细胞,计算阳性细胞率;加入TGF-β1,使其终质量浓度为5、10、20、40 ng/ml,以MTT法测定细胞增殖活性;加入丹酚酸B 100μl,使其终浓度为10、30、100μmol/L,1 h后加100μl TGF-β1,使其终质量浓度为20 ng/ml,以MTT法测定细胞增殖活性。结果:倒置显微镜下观察细胞呈梭形,排列较紧密,有的重叠交叉生长;免疫组化染色鉴定该细胞为心肌成纤维细胞,纯度>99%;10⁴0 ng/ml的TGF-β1均可显著诱导心肌成纤维细胞增殖,1040 ng/ml的TGF-β1均可显著诱导心肌成纤维细胞增殖,10¹00μmol/L的丹酚酸B均可显著抑制TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞增殖。结论:丹酚酸B对TGF-β1诱导心肌成纤维细胞增殖具有抑制作用。     

丹参萃取液对肌成纤维细胞表达TGF-β1、α-SMA蛋白的影响

目的 进一步探讨丹参萃取液在预防良性胆管狭窄中的作用.方法 制作犬胆管损伤修复模型,采用免疫组化SP法对在胆道愈合过程不同时期组织中的转化生长因子-β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)、α平滑肌肌动蛋白(αsmooth muscle actin,α-SMA)表达和分布进行研究;通过原代肌成纤维细胞(MFB)的分离及培养,丹参萃取液干预MFB 24 h后,Western blot检测TGF-β1、α-SMA在纤维细胞中的表达变化.结果 犬胆管损伤修复模型高表达TGF-β1、α-SMA;丹参萃取液作用于MFB后,TGF-β1、α-SMA表达下降.结论 丹参萃取液作用于MFB后,TGF-β1、α-SMA等炎症因子分泌减少,胆道瘢痕形成减少,其对预防良性胆管狭窄有一定作用.     

丹酚酸B对转化生长因子β1诱导人肺成纤维细胞增殖和分化的影响

目的：观察丹酚酸B（Sal B）对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的人肺成纤维细胞增殖及分化的影响。方法：将人胚肺成纤维细胞（MRC-5）随机分为6组：对照组（未加入TGF-β1或Sal B）;1μmol/L Sal B组;10μmol/L Sal B组;10ng/mL TGF-β1组;TGF-β1（10ng/mL）＋1μmol/L Sal B组;TGF-β1（10ng/mL）＋10μmol/L Sal B组。采用MTT法观察各组细胞增殖情况;RT-PCR和Western blot方法分别检测各组细胞α-SMA mRNA和蛋白的表达情况;免疫荧光方法检测细胞内纤维形肌动蛋白（Factin,Fibrous Actin）重组及观察细胞形态变化。结果：与对照组比较,TGF-β1组细胞增殖率、α-SMA mRNA和蛋白的表达水平均明显增加,细胞形态发生明显改变,胞内可见大量F-actin聚合形成的应力纤维（stress fiber）（P〈0.01）;与对照组比较,单纯加入Sal B对细胞增殖、α-SMA表达、细胞形态和F-actin重组均未产生影响（P〉0.05）;与单纯TGF-β1组比较,TGF-β1＋Sal B两组细胞增殖率、α-SMA mRNA和蛋白表达水平均下降,发生形态改变的细胞减少,胞内F-actin聚合形成的stress fibers减少（P〈0.05）,且10μmol/L Sal B对TGF-β1抑制效应优于1μmol/L Sal B,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：Sal B体外能够抑制TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞增殖和向肌纤维母细胞分化。     

丹皮酚体外抑制TGF-β诱导的成纤维细胞增殖的研究

目的:观察丹皮酚影响下离体成纤维细胞的增殖情况,为预防因成纤维细胞增殖引起的一系列病理过程提供理论依据。方法:取10只健康Wistar大鼠用于培养成纤维细胞,将离体大鼠腹膜成纤维细胞平均分为4组,分别加入细胞培养液RPMI-1640,RPMI-1640 TGF-β,RPMI-1640 丹皮酚,RPMI-1640 TGF-β 丹皮酚。测定各培养液中成纤维细胞增殖情况,并进行比较。结果:单独使用丹皮酚不影响成纤维细胞的增殖(P>0.05),单独使用TGF-β可以刺激成纤维细胞活化进入增殖状态(P<0.01),加入丹皮酚的干预后成纤维细胞的增殖率明显下降(P<0.01)。结论:TGF-β可以促进成纤维细胞活化,丹皮酚有抑制活化的成纤维细胞增殖的作用,应用丹皮酚可能在一定程度上减轻病理状态下成纤维细胞对人体的损害。     

氟伐他汀对体外人眼Tenon''''s囊成纤维细胞增殖的抑制作用

目的观察氟伐他汀对体外培养的人Tenon’s囊成纤维细胞增殖的影响,探讨该药作为眼部抗增殖药物的可行性。方法体外培养人Tenon’s囊成纤维细胞,分别给予含1.0×10-9,1.0×10-8,1.0×10-7,1.0×10-6,5.0×10-6,1.0×10-5,2.0×10-5mol.L-1氟伐他汀的10%新生牛血清的DMEM培养基培养24,48,72 h后,应用MTT比色法检测不同作用时间及不同浓度药物对细胞增殖的抑制作用。结果培养细胞的吸光度值随着氟伐他汀浓度的增加及作用时间的延长而降低。作用24 h后,氟伐他汀浓度≥5.0×10-6mol.L-1的各实验组的吸光度值与空白对照组比较均差异有极显著性(均P<0.01);作用48 h后,氟伐他汀浓度≥1.0×10-6mol.L-1的各实验组细胞的吸光度值与对照组比较,均差异有显著性(均P<0.05);作用72 h后,氟伐他汀浓度≥1.0×10-7mol.L-1的各实验组细胞的吸光度值均小于对照组,且均差异有显著性(均P<0.05)。结论氟伐他汀能抑制体外培养的人眼Tenon’s囊成纤维细胞的增殖,且该作用呈剂量和时间依赖性。氟伐他汀有望成为治疗成纤维细胞增殖性眼病的新型药物。     

苦参素对成纤维细胞增殖、形态学及转化生长因子β_1的影响

目的 :研究苦参素对成纤维细胞增殖、形态学及转化生长因子β1(TGF β1)表达的影响 ,阐明其抗肝纤维化的作用机制。方法 :用甲基噻唑基四唑MTT(methylthiazolyltetrazolium)比色法、HE染色及免疫细胞化学技术分别检测小鼠皮肤成纤维细胞(NIH3T3)增殖、形态学及TGF β1的表达。结果 :苦参素能明显抑制成纤维细胞增殖及TGF β1的表达 ,并呈剂量依赖性。结论 :苦参素可通过抑制成纤维细胞增殖及TGF β1的表达而起到抗肝纤维化作用。     

银杏叶提取物对自发性高血压大鼠血管外膜成纤维细胞表型转化的影响

目的观察银杏叶提取物(GBE)对自发性高血压大鼠(SHR)血管外膜成纤维细胞表型转化的影响。方法体外组织块法培养SHR胸主动脉外膜成纤维细胞,先给予血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)10-6mol/L刺激30 min,再分别加入终浓度为0(对照组),25,50,100 mg/L的GBE共培养24 h,采用RT-PCR检测各组细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达,流式细胞术检测各组细胞α-SMA蛋白表达。结果与对照组比较,25,50,100 mg/L GBE组成纤维细胞表达α-SMA mRNA和α-SMA均明显减少,且与浓度成反比,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GBE能抑制SHR血管外膜成纤维细胞的表型转化。     

银杏叶提取物对肝星状细胞TGF-β_1,CTGF及细胞外基质表达的影响

目的:研究银杏叶提取物对肝星状细胞增殖及转化生长因子(TCF)-β1、结缔组织生长因子(CTCF) mRNA表达及细胞外基质分泌的影响。方法:用不同浓度(0,1,10,100,500 mg·L-1)的银杏叶提取物处理 HSC-T6 24 h及48 h后,用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)法检测各组细胞及空白对照组中TGF—β1,CTGF mRNA的表达;放射免疫法分析上清液中Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、透明质酸和层粘连蛋白的含量;MTT及流式细胞仪检测其对肝星状细胞增殖及细胞周期的影响。结果:银杏叶提取物10,100,500 mg·L-1能明显抑制 TGF-β1和CTGF mRNA的表达,降低上清液中Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、透明质酸和层粘连蛋白的含量 (P<0．01或P<0．05),在一定范围内呈随剂量增加及时间的延长,抑制效率增加;并可抑制肝星状细胞的增殖,影响HSC-T6的细胞周期,使细胞周期阻滞于G1期。结论:银杏叶提取物可明显抑制HSC-T6的增殖,降低其细胞因子基因表达及细胞外基质的分泌。     

羊膜对成纤维细胞增殖及TGF-β1分泌含量影响的实验研究

目的 观察羊膜对体外培养成纤维细胞的增殖及TGF-β1分泌含量的影响.方法 体外培养的成纤维细胞随机分为3组,2组分别与羊膜、塑料片共同培养,1组设为空白对照.培养后通过细胞计数,流式细胞术及TGF-β1ELISA试剂盒进行检测.结果 (1)细胞计数检测:3组均表现出有限细胞生长过程.细胞群体倍增时间羊膜组为68.5 h,塑料片组为62.5 h,空白对照组为64 h.(2)流式细胞仪检测:羊膜组S期细胞数量比空白对照组少5.1%,比塑料片组少8.7%.(3)ELISA检测TGF-β1含量:培养24 h细胞TGF-β1含量羊膜组为95.625 pg/ml,空白对照组为123.25 pg/ml,塑料片组为500.25 pg/ml,48 h细胞TGF-β1含量羊膜组为166.825 pg/ml,空白对照组为478.125 pg/ml,塑料片组为1 020 pg/ml.结论 (1)羊膜对体外培养成纤维细胞的增殖有抑制作用.(2)羊膜对体外培养的成纤维细胞TGF-β1分泌含量有显著下调作用.(3)羊膜可能为一种较理想的防止椎管内及肌腱等术后黏连的移植材料.     

PDGF-BB和CTGF在体外对人皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的探讨重组人血小板衍生生长因子（rhPDGF-BB）和重组人结缔组织生长因子（rhCTGF）单独或联合应用对体外培养的人皮肤成纤维细胞（human skin fibroblast,HSF）增殖的影响,为寻求快速扩增HSF的方法提供参考依据。方法取手术中切除的正常皮肤,以常规组织块法体外获得皮肤成纤维细胞。取生长良好的第4~7代细胞种入96孔板,分实验组和对照组,分别加入不同浓度的rhPDGF-BB、rhCTGF或rhPDGF-BB＋rhCTGF作用。于第1、3、6、9d采用四唑盐（MTT）法分别测定各组吸光度A值,观察上述两种生长因子对细胞的增殖作用。结果 rhPDGF-BB能明显促进体外培养的HSF增殖,在1~9d,0.1ng/ml~100ng/ml范围内呈浓度时间依赖关系。rhCTGF也能明显促进HSF增殖,除第1d最大效应浓度为50ng/ml,其余时间点在10ng/ml~100ng/ml范围内呈浓度时间依赖关系。而rhCTGF150ng/ml组的增殖效果相对100ng/ml组略成下降趋势。rhPDGF-BB与rhCTGF最大与最小效应联用组亦成浓度时间依赖关系。最大效应联用组的增殖效果与以上两种生长因子单独应用比较均具有统计学意义（P〈0.05）。最小效应联用组与rhCTGF10ng/ml组比较有统计学意义（P〈0.05）,而与rhPDGF-BB0.1ng/ml组比较无统计学意义（P〉0.05）。另外,最大效应浓度的两生长因子单独应用时,rhPDGF-BB促增殖效果优于rhCTGF（P〈0.05）。结论 rh-PDGF-BB和rhCTGF均可促进体外培养的HSF增殖,在一定范围内呈浓度时间依赖关系,而且前者优于后者。两者联合应用对HSF增殖具有协同效应。     

脂多糖对正常人皮肤成纤维细胞增殖及转化生长因子-β1、γ-干扰素分泌的诱导作用

目的:阐明细菌内毒索的主要致病成分脂多糖(LPS)对体外培养人真皮成纤维细胞增殖及转化生长因子-β1(TGF-β1)、γ-干扰素(IFN-γ)分泌的影响.方法:取正常及瘢痕皮肤行成纤维细胞培养后分为2个对照组及6个实验组.实验组分别与终浓度为0.005、0.01、0.05、0.1、0.5和1μg/mL大肠杆菌LPS(E.coli055:B5)培养,对照组为DMEM培养,并对刺激后细胞进行传代至表犁稳定(第8代).应用MTT比色分析法检测细胞增殖率的变化.分别于接种后8、24及48 h收集培养细胞上清液,应用酶联免疫吸附测定分析法测定培养细胞上清TGF-β1、IFN- γ分泌量的变化.结果:①0.005～0.1μg/mL LPS组成纤维细胞增殖及TGF-β1的分泌增加、IFN-γ的分泌降低,随浓度增加作用增强,均在0.1μg/mL浓度点作用达高峰;②0.5及1μg/mL LPS组成纤维细胞增殖及TGF·β1的分泌下降,IFN-γ的分泌开始增加.③0.1μg/mL LPS组成纤维细胞增殖及TGF-β1、IFN-γ的分泌与阳性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论:一定浓度的LPS可能与增生性瘢痕形成有关.     

脂多糖对正常人皮肤成纤维细胞增殖及转化生长因子-β1、γ-干扰素分泌的诱导作用

目的:阐明细菌内毒索的主要致病成分脂多糖(LPS)对体外培养人真皮成纤维细胞增殖及转化生长因子-β1(TGF-β1)、γ-干扰素(IFN-γ)分泌的影响.方法:取正常及瘢痕皮肤行成纤维细胞培养后分为2个对照组及6个实验组.实验组分别与终浓度为0.005、0.01、0.05、0.1、0.5和1μg/mL大肠杆菌LPS(E.coli055:B5)培养,对照组为DMEM培养,并对刺激后细胞进行传代至表犁稳定(第8代).应用MTT比色分析法检测细胞增殖率的变化.分别于接种后8、24及48 h收集培养细胞上清液,应用酶联免疫吸附测定分析法测定培养细胞上清TGF-β1、IFN- γ分泌量的变化.结果:①0.005～0.1μg/mL LPS组成纤维细胞增殖及TGF-β1的分泌增加、IFN-γ的分泌降低,随浓度增加作用增强,均在0.1μg/mL浓度点作用达高峰;②0.5及1μg/mL LPS组成纤维细胞增殖及TGF·β1的分泌下降,IFN-γ的分泌开始增加.③0.1μg/mL LPS组成纤维细胞增殖及TGF-β1、IFN-γ的分泌与阳性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论:一定浓度的LPS可能与增生性瘢痕形成有关.     

蓝萼甲素下调GSK3β/β-catenin信号通路抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞转化

本研究探讨了蓝萼甲素抑制转化生长因子-β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的肺成纤维细胞向肺肌成纤维细胞转化的作用及其分子机制.应用Western blot法、细胞免疫荧光法、胶原胶收缩法等检测蓝萼甲素抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞转化指标的变化情况;应用Weste...     

三七总苷对尿毒血清诱导的人肾小管上皮细胞TGF-β_1、CTGF基因表达和蛋白分泌的影响

目的探讨三七总苷(PNS)对尿毒血清诱导的人肾小管上皮细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)基因表达和蛋白分泌的影响,为临床上应用PNS延缓肾衰竭的进展提供理论依据。方法无菌条件下收集40份尿毒症病人血清和20例正常人血清。应用相差显微镜、扫描电镜结合细胞角蛋白18(CK-18)免疫组化鉴定人肾小管上皮细胞株(HK-2)。应用ELISA方法检测HK-2细胞培养上清液TGF-β1蛋白分泌量;W estern B lot方法检测CTGF的蛋白表达;RT-PCR方法检测TGF-β1、CTGFmRNA表达。结果10%尿毒血清组与正常对照组相比,TGF-β1、CTGF基因表达和蛋白分泌量均增高(P<0.01),而PNS 400~800mg.L-1可恢复尿毒血清所诱导的TGF-β1基因表达(P<0.01),200~800 mg.L-1可恢复尿毒血清诱导的TGF-β1蛋白分泌(P<0.01);200~800 mg.L-1可恢复尿毒血清所诱导的CTGF基因表达和蛋白分泌(P<0.01)。结论在体外实验中,PNS可在一定程度上降低尿毒血清诱导的HK-2细胞TGF-β1、CTGF基因表达和蛋白分泌量,减少细胞外基质聚集,从而延缓人肾小管-间质纤维化的进展,有望成为一种能有效延缓肾纤维化进展的中药。     

芦荟多糖对人成纤维细胞体外分泌转化生长因子-β1的影响

目的观察芦荟多糖对体外培养成纤维细胞分泌转化生长因子β1（TGF-β1）的影响。方法不同浓度（25,50,100,100,400mg·L-1）芦荟多糖作用于人成纤维细胞,采用ELISA法测定细胞培养上清液中TGF-β1水平。并以等体积的细胞培养液处理为对照组。结果经芦荟多糖作用后人成纤维细胞培养液中TGF-β1水平与对照组比较明显升高（P〈0．05～0．01）,且呈一定的量效关系。结论芦荟多糖具有促进人成纤维细胞分泌TGF-β1作用。