白藜芦醇通过抑制HMGB1调控卵巢癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨白藜芦醇对卵巢癌细胞凋亡的影响及其分子机制, 为治疗卵巢癌寻找潜在的新靶点。方法将卵巢癌SKOV-3细胞分为对照组和白藜芦醇组。用MTT法检测白藜芦醇处理后卵巢癌SKOV-3细胞的活力。白藜芦醇干预SKOV-3细胞24 h后, Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、HMGB1、TLR4和NF-?B的表达情况。将si-NC、si-HMGB1、Rb1+pcDNA3.1或Rb1+pcDNA3.1-HMGB1转染卵巢癌SKOV-3细胞, MTT法检测细胞对白藜芦醇敏感性的变化。白藜芦醇处理转染细胞, 流式细胞术检测细胞凋亡的变化。结果白藜芦醇能抑制卵巢癌SKOV-3细胞生长, 且白藜芦醇浓度越高抑制效果越显著。对照细胞和实验组细胞HMGB1表达量分别为1.24±0.15和0.86±0.11, 25μM白藜芦醇能抑制HMGB1的蛋白水平;HMGB1下调后对白藜芦醇的敏感性增加, 且促进SKOV-3细胞凋亡;HMGB1过表达后对白藜芦醇的抗性增加, 且抑制SKOV-3细胞凋亡。对照组和白藜芦醇组TLR4表达量分别为0.98±0.12和0.63±0.08, NF...     

梯度降解三维支架材料与肌腱细胞复合培养的实验研究

目的　探讨梯度降解肌腱支架材料 (GDBM)与肌腱细胞的生物相容性及肌腱细胞在三维支架上培养的生物学行为。　方法　将肌腱细胞与梯度降解肌腱支架材料体外复合培养 ,单纯培养为对照组。在 8h、2 4h、72h、7d、2个月进行倒置相差显微镜及扫描电镜形态学观察。 1、2、3、4、5、6、7、8d检测细胞增殖 (MTT法 )。流式细胞仪检测细胞周期、细胞DNA指数及肌腱细胞凋亡。通过3 H Proline掺入实验探讨支架材料对肌腱细胞胶原合成的影响。　结果　肌腱细胞在支架材料上呈梭形复层生长 ,GDBM组肌腱细胞第 2天进入对数增长期 ,倍增时间为 3 .2 5d ,而单纯培养对照组倍增时间为 3 75d。GDBM组与单纯培养对照组比较3 H Proline掺入值差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,说明细胞功能未受影响。与支架材料复合培养的肌腱细胞DNA指数为 0 96,增殖指数比对照组高 2 1% ,提示肌腱细胞在三维支架上生长速度快 ,增殖能力强。　结论　梯度降解肌腱支架材料具有良好的生物相容性 ,可作为肌腱细胞的有效载体应用于组织工程化肌腱的构建。     

不同压力CO2气腹对胃癌细胞增殖凋亡的影响

目的通过体外模拟气腹环境,观察CO2在不同压力下对胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡的影响。方法以CO2为气体介质,在气腹机作用下维持密闭培养箱内压力为0、5、10、15mmHg,作用时间为4h。于处理后用血气分析仪检测培养液pH值;MTT法检测细胞增殖情况;通过流式细胞仪观察细胞凋亡指数变化;采用AnnexinV-FITC/PI双标染色、流式细胞仪测定凋亡细胞比例。结果处理结束后即刻检测,CO2组细胞培养液呈酸性,但在恢复正常培养后6h即恢复正常。MTT法检测细胞增殖变化,CO2组0、5、10mmHg压力下处理组与对照组比较无明显差异(P>0.05),而在15mmHg压力下处理组与对照组比较OD490值在前3d无明显差异(P>0.05),在4～7dOD490值下降非常显著(P<0.01)。在CO2环境下,0mmHg组细胞凋亡指数和凋亡比例与对照组相比无明显差异(P>0.05),而5、10、15mmHg组明显大于正常对照组(P<0.05)。结论在较低压力范围内(≤10mmHg)CO2对胃癌细胞增殖、凋亡影响不大,而在15mmHg压力下,CO2可抑制MKN-45细胞增殖,促进其凋亡。     

体外模拟二氧化碳气腹对人胃癌细胞迁移运动的影响

目的探讨通过体外模拟气腹环境，观察不同压力二氧化碳（CO2）和氦气（He）对胃癌细胞MKN-45迁移运动的影响。方法将MKN-45细胞置于充满CO2或He的密闭培养箱中，按模拟气腹种类不同分为对照组、CO2气腹组和He气腹组，模拟气腹压力分别12mm Hg和15mm Hg，作用时间均为4h。于处理后用血气分析仪检测培养液pH值；用Transwell法观察细胞迁移运动变化。结果处理结束后即刻检测，CO2组细胞培养液呈酸性，He组细胞培养液呈碱性。CO2组和He组在12mm Hg压力下MKN-45细胞穿过滤膜的数量较对照组差异无明显统计学（P〉0．05），CO2 15mm Hg组细胞穿过滤膜的数量较对照组明显减少（P〈0．01）；He 15mm Hg组与对照组差异无明显统计学（P〉0．05）。结论在临床常用气腹压力下（12mm Hg）CO2对胃癌细胞迁移运动无明显影响。     

辛伐他汀对成骨样细胞MC3T3-E1增殖功能的影响

目的 从细胞、蛋白及基因水平探讨辛伐他汀对成骨样细胞MC3T3-E1增殖的影响.方法 辛伐他汀选取10-6、10-7、10-8和10-9mol/L4个浓度组,同时设溶剂对照组.含血清细胞培养条件下,连续细胞计数8 d,描绘生长曲线;无血清培养条件下,分别于24、48及72 h进行细胞计数、四唑盐比色试验(MTY)、蛋白质含量测定和DNA含量荧光测定.结果 含血清细胞培养条件下,辛伐他汀各浓度组与溶剂对照组的生长曲线相比较,无明显差异;无血清培养条件下,辛伐他汀各浓度组与溶剂对照组24、48及72 h时细胞计数、MTY比色试验及DNA含量荧光测定各组间未见明显差异;蛋白质含量测定24及72 h时各组问无明显差异,然而48 h时10-6mol/L辛伐他汀组蛋白含量明显高于对照组并差异有显著性(P＜0.05).结论 辛伐他汀促进了成骨样细胞MC3T3-E1细胞的蛋白合成功能,但对其增殖无明显影响.     

三维培养状态下肌腱细胞骨架对细胞生物学行为的影响

目的 探讨肌腱细胞在三维支架上培养方式下细胞骨架的结构分布对细胞生物学行为的影响。方法将肌腱细胞与梯度降解肌腱支架材料(GDBM)体外复合三维培养，进行细胞骨架形态学观察、细胞增殖、细胞周期、细胞DNA倍体水平及肌腱细胞凋亡检测。结果GDBM组细胞第2天进入对数增长期，倍增时间为3．25d，而单纯培养对照组倍增时间为3．75d。与支架材料复合培养的肌腱细胞DNA指数为0．96，增殖指数比对照组高2．1％，其细凋亡率明显低于二维培养。提示肌腱细胞在三维支架上生长速度快，增殖能力强。结论三维培养状态下肌腱细胞在梯度降解肌腱支架材料上生长良好，梯度降解肌腱支架材料具有良好的生物相容性，可作为肌腱细胞的有效载体应用于组织工程化肌腱的构建。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导前列腺癌细胞凋亡的研究

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对前列腺癌细胞的凋亡诱导作用。方法 10μg/L-100μg/L的TRAIL处理培养的PC-3M细胞4～24h后，采用Annexin-V荧光染色、透射电镜、原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡；流式细胞术和MTT比色检测凋亡率、细胞生长抑制率与TRAIL的时间、浓度依赖关系。结果10μg/L～100μg/L TRAIL作用4～24h，肿瘤细胞出现典型的凋亡形态学改变，随着TRAIL浓度的增加或药物作用时间的延长，肿瘤细胞凋亡率也增加，为13．8％～79．6％，同时细胞生长抑制率出现明显增加，药物作用8h为7．5％～37．9％，12h为16．7％～87．9％，24h为39．7％～97．6％。结论 TRAIL能够迅速和显著地诱导PC-3M细胞凋亡，可能成为晚期前列腺癌治疗的新方法。     

体外模拟气腹环境对胃癌细胞增殖凋亡的影响

目的通过体外模拟气腹环境,观察二氧化碳(CO2)和氦气(He)在不同压力下对胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡的影响。方法实验分为对照组、CO2组和He组,其中CO2组和He组又按照压力不同分为0、5、10、15mmHg组(作用时间均为4h)。细胞在密闭培养箱内经不同压力CO2或He作用4h后用血气分析仪检测培养液pH值;MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪观察细胞凋亡指数变化;AnnexinV-FITC/PI双标染色、流式细胞仪测定凋亡细胞比例。结果处理结束后即刻检测,CO2组细胞培养液呈弱酸性,He组细胞培养液呈弱碱性。MTT法检测细胞增殖变化,CO2组0、5、10mmHg组OD值与对照组比较无明显差异(P>0.05),15mmHg组OD值与对照组比较在前3天无明显差异(P>0.05),在4~7天OD值明显低于对照组(P<0.01)。而在He组,不同压力组细胞增殖活性与对照组比较无明显差异(P>0.05)。在CO2环境下,0、5mmHg组细胞凋亡指数与对照组比较无明显差异(P>0.05),而10、15mmHg组明显大于正常对照组(P<0.01)。0、5mmHg组细胞凋亡比例与对照组比较无显著差异(P>0.05...     

模拟CO2气腹对胃癌细胞黏附分子表达的影响

目的研究体外模拟不同压力CO2气腹环境对人胃癌MKN,45细胞表面黏附分子表达的影响。方法体外建立模拟CO2气腹环境,实验组分为3个亚组,气腹压力分别为1．2、1．6和2．0kPa,作用时间均为4h。实验组经气腹处理后第0、24、48、72和96h,对照组普通细胞培养4h,用流式细胞仪检测胃癌MKN-45细胞表面黏附分子CD44v6、细胞间黏附分子1（ICAM-1）和上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）表达。结果胃癌MKN-45细胞经1．2、1．6kPaCO2气腹作用后CD44v6和ICAM-1表达呈现先升高后回落,24h时与对照组的差异有统计学意义（P〈0．01）,48h时达到高峰,然后逐渐下降,72h时与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）,96h恢复至对照组水平：E-cadherin表达变化为先降低后回升,处理后即较对照组明显下降（P〈0．01）,然后开始回升,48h时与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）,96h恢复至对照组水平。2．0kPa组CD44v6、ICAM-1和E-cadherin表达变化均更为显著．CD44v6和ICAM-1在处理后即显著高于对照组（P〈0．05）．E-cadherin表达在48h仍然明显低于对照组（P〈0．05）。结论模拟临床常用的CO2气腹压力对胃癌MKN．45细胞表面黏附分子表达可产生一过性影响．但均能在较短时间内恢复。     

不同压力二氧化碳气腹对胃癌细胞增殖运动的影响

目的 通过体外模拟气腹环境,观察不同压力CO2对胃癌细胞MKN-45增殖、运动的影响.方法 将MKN-45细胞置于充满CO2的密闭培养箱中,按CO2压力不同分为对照组、0、5、10和15mm Hg组(1 mm Hg=0.133 kPa),作用时间均为4 h.用血气分析仪检测培养液pH值;MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪观察细胞周期变化;Transwell法观察细胞迁移运动变化.结果 0、5、10和15 mm Hg组细胞培养液在0 h呈酸性.MTF法检测细胞增殖发现0、5、10 mm Hg组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),15 mm Hg组与对照组比较吸光度(OD)值在1～3 d差异无统计学意义(t=0.625,-0.537,0.137.P＞0.05),在4～7 d差异有统计学意义(t=26.622,13.376,18.839,7.595,P＜0.01).0、5、10mm Hg组细胞增殖指数和细胞穿过滤膜的数量与对照组比较差异无统计学意义(t=1.134,-0.538,-0.829:t=0.330,0.794,0.508,P＞0.05),15 mm Hg组与对照组比较差异有统计学意义(t=11.225,8.775,P＜0.01).结论 在15 mm Hg压力下,CO2对MKN-45细胞增殖、运动起抑制作用.     

Short-Term Exposure of Cancer Cells to Micromolar Doses of Paclitaxel,with or without Hyperthermia,Induces Long-Term Inhibition of Cell Proliferation and Cell Death In Vitro

BACKGROUND: During intraoperative hyperthermic intraperitoneal chemotherapy for primary or secondary peritoneal malignancies, tumor cells are exposed to high drug concentrations for a relatively short period of time. We investigated in vitro the effect of paclitaxel and hyperthermia on cell proliferation, cell cycle kinetics and cell death under conditions resembling those during intraoperative hyperthermic intraperitoneal chemotherapy. METHODS: Human breast MCF-7, ovarian SKOV-3 and hepatocarcinoma HEpG2 cells were exposed to 10 and 20 microM paclitaxel at 37, 41.5 or 43 degrees C for 2 h. Cell proliferation, cell cycle kinetics, necrosis and apoptosis were evaluated. RESULTS: Hyperthermia exerted a cytostatic effect to all cell lines and at 43 degrees C a cytotoxic effect on MCF-7 cells. MCF-7 and SKOV-3 cells treated under normothermic conditions with paclitaxel were arrested at G2/M or M phase for at least 3 days. Most of MCF-7 cells and approximately half of SKOV-3 cells were in interphase and became multinucleated without properly completing cytokinesis. Hyperthermia at 41.5 degrees C altered cell cycle distribution and affected the paclitaxel-related effect on cell cycle kinetics of MCF-7 and SKOV-3 cells. Analysis of the mode of cell death showed that cell necrosis prevailed over apoptosis. Hyperthermia at 43 degrees C increased paclitaxel-mediated cytotoxicity in MCF-7 cells and to a lesser extent in SKOV-3 and HEpG2 cells. CONCLUSIONS: Short-time treatment of carcinoma cells with high (micromolar) concentrations of paclitaxel in normothermic and hyperthermic conditions is highly efficient for cell growth arrest and could be of clinical relevance in locoregional chemotherapy.     

In vitro study of influence of raloxifene on the growth of human ovarian cancer cell line Skov 3

<正>Objective: To study the effects of raloxifene on the growth of the human ovarian cancer cell line Skov3 and on the expression of cell proliferative antigen Ki-67 in vitro. Methods: The proliferative capacity of the ovarian cancer cell line Skov3 in the culture medium with raloxifene was evaluated by the microculture tetrazolium assay (MTT) and the expression of cell proliferation was appraised by the immunohistochemical staining of ki-67. Results: The growth of ovarian cancer cell line Skov3 was inhibited by raloxifene at high concentrations, while a trend of growth promotion at initial then followed by growth inhibition was found when raloxifene was at low concentrations. Raloxifene at high concentrations not only significantly reduced the expression of Ki-67 but also destroyed the cell structure. Conclusion : Raloxifene does not stimulate the growth of human ovarian cancer cell line Skov3 significantly.     

Survivin siRNA纳米载体的制备及其对胰腺癌细胞生物学特性的影响

目的：利用纳米技术和基因干扰技术设计并合成携载survivin siRNA的纳米载体,探讨survivins iRNA纳米微粒对人胰腺癌细胞BXPC-3增殖和凋亡的影响。方法：体外培养人胰腺癌BXPC-3细胞,将BXPC-3细胞随机分为4组：生理盐水组、不含基因的纳米微粒组、survivin siRNA组和s urvivins iRNA纳米微粒组。RT-PCR检测survivin mRNA的表达;Wes tern blot法检测s urvivin蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;MTT法检测细胞增殖情况。结果：细胞培养72 h后,survivin siRNA纳米微粒组细胞的survivin mRNA和蛋白表达均低于其他3组（P〈0.05）。survivin siRNA纳米微粒组细胞增殖明显受抑制,生长缓慢,而细胞凋亡率高于其他3组（P〈0.05）。结论：survivin siRNA纳米微粒能够有效减少胰腺癌BXPC-3细胞survivin mRNA和蛋白的表达,提高肿瘤细胞的凋亡,显著抑制BX-PC-3细胞的增殖。     

雷诺昔芬对人卵巢癌细胞株SKOV3体外生长的影响

目的　探讨雷诺昔芬对人卵巢癌细胞株体外生长和细胞增殖抗原Ki 67表达的影响。　方法　四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法观察卵巢癌细胞株SKOV3在加入不同浓度的雷诺昔芬培养液后细胞的生长情况 ;免疫组织化学方法测定癌细胞在加入雷诺昔芬后细胞增殖抗原Ki 67的表达情况。　结果　高浓度雷诺昔芬对卵巢癌细胞株呈抑制作用 ,而低浓度则初期促进细胞生长 ,随之呈抑制细胞生长的趋势 ;高浓度雷诺昔芬不仅降低Ki 67抗原的表达 ,还破坏细胞结构。　结论　雷诺昔芬对人卵巢癌细胞株SKOV3无明显的刺激生长作用     

生长激素在体外对人胃癌细胞的作用

目的　研究重组人生长激素 (rhGH)在体外对人胃癌细胞生长的影响。方法　实验分组 :对照组、rhGH组、奥沙利铂 (L OHP)组和rhGH L OHP组 ,利用体外细胞培养、MTT比色技术及流式细胞仪等方法 ,测定不同浓度的rhGH对人胃癌细胞株BGC82 3生长曲线、细胞抑制率、细胞周期和增殖指数 (PI)的影响。结果　rhGH在体外无明显促进BGC82 3细胞分裂增殖 ,rhGH组与对照组、rhGH L OHP组与L OHP组比较差异均无显著性 (P >0 .0 5 ) ,且生长曲线没有升高 ;rhGH L OHP组与对照组比较或rhGH L OHP组与对应的rhGH组配对比较 ,细胞抑制率增加 ,阻滞于G0 ～G1期的细胞数增加 ,S期细胞明显减少 ,PI明显降低 (P <0 .0 1)。rhGH L OHP组与L OHP组比较 ,细胞抑制率呈现升高趋势 ,而PI呈下降趋势 ,提示rhGH与抗肿瘤药合用可以增强抗肿瘤药对肿瘤细胞的杀伤作用。结论　rhGH在体外无明显促进胃癌细胞的分裂增殖 ,与抗肿瘤药合用可提高抗肿瘤药的疗效。     

青蒿素联合全转铁蛋白对肝癌的选择性抑制作用

目的 观察青蒿素联合全转铁蛋白在体外对人肝癌SMMC-7721细胞的选择性抑制作用.方法 采用嚷唑蓝(MTT)着色细胞计数及锥虫蓝染色计数检测青蒿素联合全转铁蛋白对人肝癌SMMC-7721细胞的细胞生长、增殖和细胞活力的影响.结果 青蒿素在各种浓度显著地抑制SMMC-7721细胞的生长、集落形成以及细胞活力(P<0.05).青蒿素导致所有实验细胞株的肿瘤细胞死亡,但是敏感性有所变化,在加入全转铁蛋白后,青蒿素对人肝癌SMMC-7721细胞的选择性毒性作用明显增强(P<0.01).结论 青蒿素联合全转铁蛋白能有效地抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长、细胞增殖和细胞活力.     

三氧化二砷白蛋白微球抑制人膀胱癌细胞生长的实验研究

目的：研究三氧化二砷白蛋白微球(AsO3—HAS—NS)对人膀胱癌细胞生长的抑制作用。方法：用交联固化的方法制备As2O3—HAS—NS，用原子吸光光度法测量微球中的砷浓度，采用显微镜观察和MTT法研究As2O3—HAS—NS对细胞生长的抑制作用，用^3氢—胸腺嘧啶核苷(^3H—TDR)掺人法测定其体外杀伤活性。用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡。结果：显微镜观察及MTT法显示As2O3—HAS—NS对人膀胱癌EJ细胞体外生长有明显抑制作用，呈现出时间及剂量依赖性。^3H—TDR掺人法测得As2O3—HAS—NS作用的EJ细胞存活率开始较高，但随着时间的延长，较As2O3降低快。流式细胞分析显示As2O3—HAS—NS有明显地促进EJ细胞凋亡的作用，Gn／G1期百分比明显减少，而G2／M期百分比明显增多，至24h达57．1％。24h Sub—G1期细胞占9．4％。结论：As2O3—HAS—NS对EJ细胞的作用优于单纯As2O3，可能成为实体肿瘤治疗的更优剂型。     

p15、p16对人胆管癌细胞增殖影响的实验研究

目的 研究抑癌基因p15、p16对人胆管癌细胞的生长抑制作用。方法 将抑癌基因p15、p16的cDNA构建到真核表达的质粒载体pcDNA3-neo中形成p15真核表达质粒pcDNA3 p15及p16真核表达质粒pcDNA3 p16。通过脂质体法将重组质粒pcDNA3 p15,pcDNA3 p16质粒分别转染人胆管癌细胞系QBC939，获得稳定高表达p15或p16的人胆管癌细胞模型。用MTT法测定细胞生长曲线，流式细胞光度术测定细胞生长周期。结果 p15、p16高表达的人胆管癌细胞QBC939的增殖受到抑制，p15、p16均明显阻遏细胞由G1期向S期的转换。结论 抑癌基因p15、p16均参与了细胞周期的阻抑作用。     

姜黄素抑制人肾癌细胞769-P增殖及促凋亡的实验研究

【摘要】 目的 分析不同浓度姜黄素（curcumin，分子式C₂₁H₂₀O₆）对人肾癌细胞769-P的生物学作用及其调控机制。方法 体外培养人肾癌细胞769-P，用不同浓度姜黄素处理24 h后，采用MTT比色法测定姜黄素对细胞的增殖抑制作用，利用倒置显微镜观察细胞的显微形态结构，采用细胞划痕法观察细胞的迁移情况；Western Blot 法检测细胞内Caspase-3、 AIF蛋白质的表达情况；用反转录PCR法检测AIF、Bax mRNA的表达水平。结果 MTT法检测显示姜黄素能显著抑制人肾癌细胞系769-P的增殖，呈现浓度和时间效应关系；倒置显微镜结果显示姜黄素能够使肾癌细胞系的形态学发生改变，呈现出典型凋亡特征如核皱缩、核破裂、核肿胀等形态；细胞划痕实验显示，姜黄素抑制了肾癌细胞系的迁移；RT-PCR实验显示，姜黄素促进了BAX mRNA和AIF mRNA的表达；蛋白杂交实验显示，姜黄素促进了Caspase-3和AIF蛋白的活化，从而促进了凋亡。结论 姜黄素能显著抑制人肾癌细胞的增殖并促进其凋亡，这种生物学效应可能与激活Bax和AIF表达，活化Caspase-3的信号通路有关。     

塞来昔布(celecoxib)通过前列腺素E2途径影响胆管癌细胞株生长和凋亡

目的：研究塞来昔布（celecoxib)对环氧合酶－2（COX－2）高表达人胆管癌细胞系QBC939和COX－2低表达人胆管癌细胞系SK－Cha-1生长和凋亡的影响及其作用机制。方法：采用四唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖，光镜和电镜形态学观察，末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位酶标记法（TUNEL）计数细胞凋亡，流式细胞仪测定细胞周期，酶联免疫吸附测定（ELISA）检测前列腺素E2（PGE2）含量。结果：塞来昔布抑制QBC939生长和诱导调亡，这种抗增殖作用能被PGE2拮抗；塞来昔布对结构性低表达COX－2胆管癌细胞SK－Cha-1无显著性作用。结论：塞来昔布通过PGE2途径抑制人胆管癌细胞生长和诱导凋亡。针对COX－2结构性高表达肿瘤塞来昔布可能是一种有效的化学治疗和化学预防药物。