塞来昔布对急性白血病原代细胞凋亡的影响

目的:探讨塞来昔布对急性白血病原代细胞的增殖抑制与诱导凋亡的作用。方法:采用MTT法检测塞来昔布对急性白血病原代细胞的增殖抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:塞来昔布能显著抑制急性白血病原代细胞的增殖,且呈时间和剂量具有依赖性(P0.05);流式细胞仪结果分析发现,实验组与对照组的凋亡率有显著差异,且实验组的凋亡率明显升高,呈剂量依赖性(P0.01)。结论:塞来昔布能有效抑制急性白血病原代细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制有待进一步研究。     

塞来昔布对食管癌EC109细胞凋亡及机制的影响

目的利用分析各种浓度环氧化酶-2 (COX-2)特异度抑制剂塞来昔布对食管癌EC109细胞系的作用,进而对COX-2蛋白表达的影响及对细胞凋亡能力的作用,进一步探讨塞来昔布对食管癌细胞凋亡的作用及机制。方法使用0μmol/L、20μmol/L、60μmol/L、100μmol/L四个浓度的塞来昔布处理EC109细胞24 h,酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法测定COX-2蛋白表达;流式细胞仪测定EC109细胞凋亡情况。结果与0μmol/L塞来昔布组比较,20μmol/L、60μmol/L、100μmol/L塞来昔布组EC109细胞内COX-2蛋白表达不断降低(1. 581±0. 116; 1. 226±0. 089,0. 846±0. 076,0. 521±0. 082)(P <0. 05);而细胞凋亡率逐步上升(1. 700±0. 557,13. 400±1. 735,18. 766±1. 301,28. 100±1. 997)(P <0. 05)药物浓度依赖于梯度。结论塞来昔布是一种COX-2抑制剂,可能以浓度梯度的形式抑制COX-2蛋白的表达,从而促进EC109细胞的...     

塞来昔布对人肺腺癌增殖及凋亡的影响

目的探讨选择性环氧合酶-2抑制剂塞来昔布在人肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡中的作用及其机制。方法应用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法分析1、5和10μmol·L-1塞来昔布对A549细胞分别处理0、12、24、48和72 h后的增殖能力,分光光度法检测Caspase-3和Caspase-9活性,用免疫荧光法检测凋亡标志分子Annexin V的表达。结果塞来昔布处理组细胞的增殖能力明显低于未处理对照组细胞,差异有统计学意义（P〈0.05）,且抑制作用呈时间和剂量依赖性;处理组癌细胞Caspase-3、Caspase-9和Annexin V的表达水平显著高于未处理对照组（P〈0.05）。结论塞来昔布可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖并诱导凋亡,可作为肺癌患者靶向性预防和治疗药物。     

塞来昔布对大鼠骨组织的影响

目的探讨塞来昔布对大鼠骨组织的影响。方法 16只3月龄雌性SD大鼠随机分为两组：正常对照组和塞来昔布给药组,每组8只。塞来昔布组大鼠每天灌胃给予塞来昔布50 mg·kg^-1,正常对照组给予等量生理盐水。给药时间为8周,每周记录大鼠体重。实验结束时取大鼠左侧股骨用双能X线骨密度仪（DXA）测定骨密度,用三点弯曲法测定股骨生物力学特性,然后再用离子发射光谱仪测定股骨中的Ca、P、Mg的含量。另取大鼠胫骨中段皮质骨做不脱钙骨磨片测定骨形态计量学参数。结果塞来昔布50 mg·kg^-1用药8周与对照组相比,明显降低大鼠股骨骨密度,但是对皮质骨骨量、骨形成率、矿化沉积率、股骨最大载荷和断裂载荷等均未产生显著性损害,也并未降低股骨中Ca、P、Mg的含量。结论塞来昔布用药8周明显降低股骨骨密度,但并未进一步损害皮质骨骨量、骨形成、骨矿无机质含量和骨生物力学特性。     

塞来昔布对体外宫颈癌细胞株Hela和Siha的抑制作用

目的：探讨环氧化酶抑制剂塞来昔布对Hela和Siha细胞株细胞周期及凋亡的影响。方法：采用细胞培养技术及流式细胞术检测环氧化酶抑制剂塞来昔布对人宫颈癌细胞株（Hela和Siha）细胞周期及凋亡的影响。结果：经流式细胞术分析显示，随着塞来昔布浓度的增加，Hela和Siha细胞周期中G0／G1期细胞增多，S期细胞减少，G2-M期细胞比例无明显改变。与塞来昔布（≥25μmol／L）共同孵育72h后，与空白对照组相比PI指数减小（P〈0．05），凋亡率增高（P〈0．05）。流式分析图中可见亚二倍体凋亡峰。结论：环氧化酶抑制剂塞来昔布可抑制体外人宫颈癌细胞株Hela和Siha的增殖、促进细胞凋亡。     

塞来昔布对人鼻咽癌细胞凋亡的促进作用

目的 研究塞来昔布对人鼻咽癌CNE细胞凋亡的促进作用.方法 以人鼻咽癌细胞株CNE为研究对象,设实验组（加入塞来昔布20mmol/L）及对照组,培养48h后,制备成超薄切片透射电镜观察塞来昔布对细胞凋亡的影响.取不同浓度塞来昔布（0 ×10-5mol/L、1.0 ×10-5mol/L、2.0 ×10-5mol/L、4.0 ×10-5mol/L）处理细胞,用流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡.TUNEL（DNA末端原位标记染色法）荧光染色法检测CNE细胞凋亡,计算凋亡率%=凋亡阳性细胞数/100个CNE细胞.结果 给予塞来昔布48 h后,透射电镜下CNE细胞染色质固缩边集,细胞器肿胀,胞浆内可见凋亡小体形成.流式细胞学结果显示塞来昔布对CNE细胞周期分布的影响S期细胞减少,G1期细胞增加,经浓度分别10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L塞来昔布处理48h,随浓度增大,凋亡率增加.TUNEL结果显示：实验组凋亡细胞明显增多,CNE细胞凋亡百分比（4.3±2.21）%,明显高于对照组（0.9±0.99）%,差异有统计学意义（P〈0.01）.结论 本实验将塞来昔布作用于人鼻咽癌细胞株CNE细胞后,运用电镜观察到凋亡细胞增加.不同浓度的塞来昔布作用于人鼻咽癌细胞株CNE细胞后,流式细胞术、TUNEL荧光染色均证明环氧合酶-2抑制剂塞来昔布对凋亡有促进作用,塞来昔布（特异性环氧合酶-2抑制剂）已被认为肿瘤治疗新靶标,可为临床的肿瘤治疗提供新的方法.     

塞来昔布诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的实验研究

目的探讨环氧化酶-2特异抑制剂-塞来昔布对喉癌Hep-2细胞增殖抑制和凋亡诱导作用及可能机制。方法以不同浓度的塞来昔布处理喉癌Hep-2细胞,以四甲基偶氮唑盐（Mar）法检测对细胞增殖的影响,Hoechst33342染色荧光显微镜下观察细胞核的形态改变,以Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡率,Western blot检测Bcl-2、Bax及COX-2的表达,Western blot分析Caspase-3裂解激活。结果MTT结果表明塞来昔布抑制Hep-2细胞的增殖呈时间和浓度依赖;Hoechst33342荧光染色见随塞来昔布处理时间延长,细胞核逐渐出现凝集、碎裂等凋亡表现;流式细胞术检测细胞凋亡率见塞来昔布处理细胞24h,70、100μmol/L组凋亡率分男q为（28．9±2．74）％、（32．7±3．96）％;Western blot分析蛋白表达,见随药物处理浓度增加,COX-2、Bcl-2表达降低,Bax表达增加,随药物处理时间延长Caspase-3出现裂解片段。结论塞来昔布能够有效地抑制Hep-2细胞增殖和诱导Hep-2细胞凋亡。其诱导凋亡作用机制可能与Bax/Bcl-2比值升高,Caspase-3蛋白裂解激活有关。     

塞来昔布衍生物SY3—1抗炎活性的初步研究

COX-2特异性抑制剂塞来昔布临床广泛应用于类风湿性关节炎和骨关节病，该药物既具备了其它非甾体类抗炎药（NSAIDs）的药理作用，同时不良反应相对较轻。但随着近年来对昔布类药物临床研究，塞来昔布类不良反应也逐渐引起人们的注意。虽然如此，作为选择性的COX-2抑制剂，仍有其治疗学上的价值，开发新一代的COX-2抑制剂有重要意义。本研究对塞来昔布衍生物SY3—1进行了初步的抗炎作用研究，为开发该类药物提供实验依据。     

塞来昔布在心血管领域的研究

2002年,有学者曾感叹:“COX-2被发现至今已经超过10年,然而其对于心血管系统的作用在很大程度上仍是一个谜”。事实上,人们已经进行了不懈的研究探索,下文将初步揭示COX-2在心血管疾病中的作用机制及COX-2抑制剂在该领域中的发展前景。     

卡维地洛对兔心肌梗死后胞外基质重构及基质金属蛋白酶的影响

目的:探讨第三代β受体阻滞剂卡维地洛对兔心肌梗死(MI)后胞外基质重构的作用及机制. 方法:将36只新西兰大耳白兔随机分为MI组、MI 卡维地洛组、假手术组,每组12只. 采用结扎冠状动脉左室支建立MI模型,另以开胸后在相应部位挂线不结扎为假手术组. 4 wk后行血流动力学检查; 测量体质量(BW)、左、右心室质量(LVW,RVW); 苦味酸-酸性品红染色检测非梗死区的胶原容积分数(CVF); 免疫组化检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达,酶谱法测定二者的活性. 结果: MI后4 wk存活动物为MI组8只,MI 卡维地洛组9只,假手术组10只. MI组RVW, LVW/BW, 左室舒张末压(LVEDP)、非梗死区CVF均显著升高,MMP-2, MMP-9的表达及其活性亦明显升高(P均＜0.01);MI 卡维地洛组与MI组比较,RVW/BW, LVEDP, CVF显著降低(P＜0.05～0.01). MMP-2, MMP-9表达及活性显著减弱(P＜0.05～0.01). 结论:卡维地洛缓解了MI后心肌细胞外基质的重构,其机制可能与对MMPs的表达和活性调节有关.     

基质金属蛋白酶在心肌肥厚大鼠细胞外基质重塑中的作用及氯沙坦干预

目的 :探讨基质金属蛋白酶 (MMP 9)及其生理性抑制剂TIMP 1和转化生长因子β1(TGF β1)在心肌肥厚大鼠细胞外基质重塑中的作用及氯沙坦干预的效果 .方法 :雄性SD大鼠随机分为 3组 :①对照组 ;②去甲肾上腺素 (nore pinephrine,NE)组 (1.0 6mg·kg-1·d-1× 15d) ;③NE +氯沙坦组 (10mg·kg-1·d-1× 15d) .NE腹腔注射 ,2次·d-1,连续15d ,建立心肌肥厚的模型 .应用超声心动图及病理学方法评价整体心肌肥厚和组织胶原的表达 .用逆转录 聚合酶链反应法 (RT PCR)及免疫组化方法检测MMP 9,TIMP 1和TGF β1mRNA和蛋白表达情况 .结果 :大鼠腹腔注射NE后发生左心室肥厚及纤维化 ,胶原的含量及MMP 9,TIMP 1和TGF β1的蛋白、mRNA的表达显著高于健康对照组 (P <0 .0 1) .氯沙坦能降低室间隔的厚度 ,减少左室心肌中总体胶原、I型、III型胶原的合成及MMP 9,TGF β1的表达 (P <0 .0 1) .结论 :MMP 9,TIMP 1和TGF β1与NE诱导的心肌细胞外基质重塑有关 .氯沙坦能有效的防治心肌肥厚及细胞外基质重塑 ,这一效应与其降低心肌中高表达的MMP 9和TGF β1有关 .     

Experimental bladder defect in rabbit repaired with homologous bladder extracellular matrix graft

Approximately 400 million people worldwide suffer from bladder disease such as congenital abnormalities, cancer, trauma, infection, iatrogenic injuries or other conditions which may lead to painful bladder damage or loss, so eventual bladder augmentation or substitution should be required. Gastrointestinal segments are commonly used as tissues for bladder replacement or repair, but have been associated with multiple complications such as infection, metabolic disturbances, increased mucus production, and malignancy.1 Because of the problems encountered with the use of gastrointestinal segments, several bladder substitutes have been attempted with both organic materials (skin, dura mater, peritoneum or fascia) and synthetics (such as poly vinyl, sponge, silicone). These attempts have usually failed due to mechanical, structural or biocompatibility problems. Permanent synthetic materials succumb to mechanical failure and urinary stone formation. Degradable materials lead to fibroblast deposition, scarring, and a reduced reservoir volume.2,3 It is evident that bladder tissue cannot be replaced easily due to its elastic properties and urothelial permeability function.     

Experimental bladder defect in rabbit repaired with homologous bladder extracellular matrix graft

Approximately 400 million people worldwide suffer from bladder disease such as congenital abnormalities, cancer, trauma, infection, iatrogenic injuries or other conditions which may lead to painful bladder damage or loss, so eventual bladder augmentation or substitution should be required.Gastrointestinal segments are commonly used as tissues for bladder replacement or repair, but have been associated with multiple complications such as infection, metabolic disturbances, increased mucus production, and malignancy.     

法舒地尔对软骨细胞基质降解的影响及其机制

目的：研究法舒地尔对大鼠软骨细胞的基质降解的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：用CCK-8检测法舒地尔是否具有毒性并确定合适的药物浓度。分别按空白组、法舒地尔组（10 μmol/L）、IL-1β组（10 ng/mL）和IL-1β（10 ng/mL）+法舒地尔组（10 μmol/L）对细胞进行分组处理。使用硝酸还原酶法测定NO水平;Western blot检测COX-2、iNOS、MMP-13、p-MYPT、ROCK1、ROCK2、p-Erk/Erk、p-JNK/JNK与p-p38/p38水平;qRT-PCR测定MMP-13和二型胶原（Collagen-II）mRNA表达;细胞免疫荧光检测MMP-13的表达水平。结果：与IL-1β组比,IL-1β+法舒地尔组ROCK1、ROCK2和p-MYPT受到抑制（P＜0.05）;与IL-1β组比,IL-1β+法舒地尔组的COX-2、NO、iNOS和MMP-13的表达受到显著抑制（P＜0.05）;IL-1β组比,IL-1β+法舒地尔组的p-Erk、p-JNK、p-p38表达降低,并且Erk、JNK与p38磷酸化水平降低（P＜0.05）;与IL-1β组比,IL-1β+法舒地尔组二型胶原（Collagen-II）表达得到上调（P＜0.05）。结论：法舒地尔可抑制IL-1β诱导的软骨细胞基质降解,该作用可能通过抑制MAPK信号通路来实现。     

反义TIMP1基因转染Ito细胞后对其ECM代谢的影响

目的　探讨反义TIMP1基因对Ito细胞 (贮脂细胞 )金属蛋白酶的表达和细胞外基质 (ECM )降解的影响。方法　将大鼠全长TIMP1cDNA反向插入哺乳表达载体pCI neo中 ,构建反义TIMP1基因真核表达载体 ,用脂质体介导的方法 ,将反义TIMP1基因导入Ito细胞株CFSC 2G中 ,选择稳定转染的Ito细胞株培养 ,采用RT PCR、原位杂交、免疫组化及RIA等方法 ,观察TIMP1mRNA和蛋白、MMP1mRNA和蛋白、α1(Ⅲ )mRNA、FN蛋白表达及细胞培养上清中PCI、PCⅢ、HA、LN水平的变化。结果　反义TIMP1基因能明显地抑制Ito细胞中TIMP1mRNA和蛋白的高表达 (P <0 0 1)。转基因细胞中α1(Ⅲ )mRNA、MMP1mRNA、FN蛋白的表达与未转基因细胞比较无明显变化 (P >0 0 5 )。转基因后Ito细胞培养上清中PCI、PCⅢ、HA、LN水平明显低于未转基因细胞 (P <0 0 1)。结论　反义TIMP1基因可以抑制贮脂细胞内源性TIMP1产生 ,但未影响MMP1的表达 ,从而促进了细胞外基质的降解     

ERK通路抑制剂对PDGF-BB诱导的大鼠系膜细胞细胞外基质合成的影响

目的:探讨ERK通路在血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质(ECM)合成中的作用.方法:将体外培养大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)分为7组:对照组;PDGF-BB刺激组(终浓度分别为10、25和50 ng/ml);PDGF-BB和ERK通路抑制剂UO126共刺激组(PDGF-BB 25ng/ml UO126 5 μmol/ml,PDGF-BB 25 ng/ml UO126 10 μmol/ml);UO126 10 μmol/ml刺激组.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)和纤连蛋白(FN)mRNA的相对表达量.结果:PDGF-BB能剂量依赖性的上调 PAI-1和FN mRNA的表达(P＜0.05),同时下调MMP-2 mRNA的表达(P＜0.05).U0126则呈剂量依赖性地抑制PDGF-BB诱导的肾小球系膜细胞PAI-1和FN mRNA的表达(P＜0.05),促进MMP-2 mRNA的表达(P＜0.05).结论:PDGF-BB可能通过ERK通路作用于大鼠肾小球系膜细胞,抑制细胞外基质的降解,促进其FN的合成,从而参与肾小球硬化的过程.     

普伐他汀与阿托伐他汀对大鼠心梗后胞外基质重构及基质金属蛋白酶的影响

目的探讨他汀类药物对大鼠心肌梗死(MI)后胞外基质重构的作用机制,以及普伐他汀与阿托伐他汀对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和心室重构的影响。方法将雄性大鼠50只随机分为MI组、MI 普伐他汀组、MI 阿托伐他汀组和伪手术组。结扎冠状动脉前降支建立心肌梗死(MI)模型,在相应部位挂线不结扎作为伪手术组。8周后血流动力学检查,测量体质量(BW)、左、右心室质量(LVW,RVW);苦味酸-酸性品红染色检测非梗死区的胶原容积分数(CVF),ELISA法检测血清基质金属蛋白酶2(MMP-2)水平。结果MI组RVW/BW,LVW/BW,左室舒张末压(LVEDP)、非梗死区CVF均显著升高,MMP-2的水平亦明显升高(P均<0.05);与MI组比较,MI 他汀组的RVW/BW,LVW/BW,LVEDP,CVF显著降低,血清MMP-2水平显著减弱(P均<0.05)。两用药组间上述指标差异均无显著性(P>0.05)。结论他汀类药物缓解了MI后心肌细胞外基质的重构,其机制可能与基质金属蛋白酶(MMPs)的表达和活性调节有关。而普伐他汀与阿托伐他汀两组药物在心肌重构中差异无显著性。     

细胞外基质对内皮细胞粘附功能的影响及意义

目的：促进内皮细胞在聚氨酯材料上粘附，为实现人工心血管内皮细胞化探索条件和方法。方法：用荧光法观察细胞外基质成分对内皮细胞在聚氨酯材料上粘附的影响。结果：用胶原Ｉ，胶原Ⅳ，纤维粘连蛋白（ＦＮ）玻璃粘连蛋白（ＶＮ）等细胞外基质成分及对照组牛血清白蛋白（ＢＳＡ）分别预衬聚氨酯５０ｍｇ／Ｌ浓度组，内皮细胞与材料接触１５ｍｉｎ后，粘附率分别为３２．３１％，５４．４３％，４２．３４％，６３．７７％和２７．７     

S型凝集素影响肿瘤细胞在细胞外基质上的粘着

目的：探讨肿瘤细胞表面Ｓ型凝集素在肿瘤细胞粘着于基膜中的作用。方法：测定乳糖等对小鼠黑色素瘤Ｂ１６细胞粘着于细胞外基质的影响。结果：小鼠黑色素瘤凝集素（ＭＭＡ）促进细胞粘着；抗ＭＭＡ抗体及乳糖明显抑制Ｂ１６细胞粘着于细胞外基质及层粘连蛋白；然而，ＭＭＡ等不影响Ｂ１６细胞粘着于纤粘连蛋白及ＩＶ型胶原蛋白。结论：肿瘤细胞表面Ｓ型凝集素参与肿瘤细胞粘着于基膜。