抗HRP多种系性PAP复合物制备与鉴定的进一步研究

为进一步克服PAP 复合物在应用中的种系限制,我室根据其分子结构特点研制出一种新的多种系性PAP 复合物、现报道如下。材料与方法辣根过氧化物酶(HRP)为中国科学院上海生化研究所生产、羊抗HRP、兔抗HRP、鼠抗HRP 单克     

大鼠抗HRP单克隆抗体及其与HRP复合物保存条件的研究

本文以实验室制备的大鼠抗辣根过氧化物酶(HRP)单克隆抗体(McAb)及其与HRP的复合物(PAP)为研究对象,寻求McAb的最适保存条件,观察抗体活性的保存时限,为大鼠抗HRP McAb及其PAP质控鉴定提供可靠的技术资料,并为促进大鼠杂交瘤技术     

抗辣根过氧化物酶杂交瘤细胞系的建立与初步应用

单克隆抗体已被广泛地用于免疫组织化学研究,但是要充分发挥单克隆抗体的优势,就必须认真地选择最佳的免疫组织化学方法。非标记抗体技术由于敏感性高,非特异性显色浅,而受到多数学者的推荐。随着单克隆抗体和非标记抗体技术应用的增多,对鼠源性辣根过氧化物酶-抗辣根过氧化物酶(PAP)复合物的需求也逐渐增加。为此,我们进行了抗辣根过氧化物酶(HRP)单克隆抗体及鼠源性PAP的研制与初步应用。 通过用HRP常规免疫的BALB/c小鼠进行两次融合(融合率为100％)。和采     

大鼠杂交瘤技术的特点及应用的研究

作者成功地引建了大鼠杂交瘤技术体系,以此技术获得分泌大鼠抗辣根过氧化物酶(HRP)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤株。并制备了HRP-大鼠抗HRP(PAP)复合物,在细胞及组织切片上染色效果良好,背景清晰。为促进这一技术体系的推广应用提供有利条件。     

大鼠杂交瘤技术的特点及应用的研究

作者成功地引建了大鼠杂交瘤技术体系．以此技术获得分泌大鼠抗辣根过氧化物酶(HRP)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤株，并制备了HRP-大鼠抗HRP(PAP)复合物，在细胞及组织切片上染色效果良好．背景清晰，为促进这一技术体系的推广应用提供有利条件。     

人肿瘤细胞与正常细胞内微管的PAP免疫酶细胞化学观察

我们利用兔抗微管蛋白抗体和兔抗辣根过氧化物酶(HRP)抗血清制备的HRP—抗HRP(PAP)复合物,建立了微管的PAP免疫酶细胞化学方法。应用此法观察到人食管癌ECa 109、胃癌SGC 7901,乳腺癌MCF 7和成骨肉瘤OS 732细胞间期胞质微管减少或消失,只有大量弥散分布的微管蛋白棕色反应产物,在微管组织中心(MTOC)附近十分密集,而正常成纤维细胞和胎儿胃粘膜上皮细胞间期,都有发达的胞质微管结构(CMTC)。在分裂期,这些肿瘤细胞都显示纺锤体微管,与正常细胞比较无明显差异。本研究应用PAP方法进一步证明,以前用免疫荧光细胞化学方法观察到的人肿瘤细胞间期胞质微管缺陷的特征。除去低温(4℃)或秋水仙酰胺处理后,解聚的CMTC又可恢复,表明本方法与免疫荧光染色法,同样具有很高的特异性。本工作在细胞固定及免疫反应的某些步骤上有所改进。     

辣根过氧化物酶法用于追溯周围神经联系的体会

辣根过氧化物酶(HRP)是70年代神经解剖学的新方法,尤其是在我国,用HRP法研究神经联系的历史就更短,只有5—6年的历程,但是由于我国神经解剖学的研究者们努力而勤奋,在这短短的五、六年时间内做出了许多成绩。今年(81年)11月2日中国解剖学会在西安第四军医大学召开了辣根过氧化物酶及放射自显影技术经验及成果交流会,这次会议开得     

免疫组化方法简介(光镜与电镜结合的PAP法)

<正> 免疫组化技术是现代形态学科的重要研究工具之一。虽然40年代初出现了荧光抗体技术,但其标本不能用电镜观察。后来建立了酶标抗体法,特别是Sternberger(1979)的非酶标记抗体法(PAP),才使免疫电镜技术得到长足的发展。酶标抗体法是把酶(常用辣根过氧化物酶,简称HRP)标记在第一抗体(直接法)或第二抗体(间接法)上,     

逆行荧光物标记神经元技术及其应用

近年来,辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase)追踪神经联系法(HRP法)在国内已得到广泛应用。很明显,这个技术的应用对我国神经形态学研究的发展有所促进。几年前,Kuypers和他的共同工作者又报导了一种新的追踪神经通路的方法——逆行荧光物标记法     

麦芽凝集素辣根过氧化物酶、类霍乱原结合辣根过氧化物酶及辣根过氧化物酶—四甲基联苯胺法成色脑切片的保存时间探讨

目前,辣根过氧化物酶(HRP)法已被推广和改进,在HRP束路追踪技术中,四甲基联苯胺(TMB)因其灵敏度高又无致癌作用而被广泛采用.一般认为TMB反应产物易受高pH、酒精、温度、紫外线照射等因素影响而退色.TMB呈色时加钼酸铵再稳定,有利于切片的保存.能保存多久.其消退程度如何,采用麦芽凝集素辣根过氧化物酶(WGA-HRP)、类霍乱原结合辣根过氧化物酶(CB-HRP)及HRP(Sigma VI)法制作的切片,保存时间上有无明显差别是本文研究的目的所在.     

以葡萄球菌A蛋白代替羊抗兔IgG应用于免疫组化显示大白鼠垂体的促黄体生成激素细胞

利用人的绒毛膜促性腺激素(HCG)与大白鼠的促黄体素(LH)有交叉反应,我们曾报道过用辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG抗血清作第二抗体,显示大白鼠垂体的促黄体生成激素细胞。为了探讨与其他动物的IgG分子结合,免去制备特异抗体,因此提取了葡萄球菌A蛋白SPA,利用SPA的广谱的第二抗体的特性,在原有工作的基础上试用酶联葡萄球菌A蛋白(HRP-SPA)和单纯的SPA分别代替免疫酶标组织化学间接法中HRP单抗兔     

辣根过氧化物酶结合物的质量鉴定

辣根过氧化物酶(HRP)和抗HBs(山羊IgG)按戊二醛二步法、苯醌法和改良过碘酸盐法交联反应分别制成酶结合物,用琼脂扩散、二氨基联苯胺染色法对酶结合物定性,并测定其HRP浓度和活性、羊IgG浓度和抗HBs免疫活性,阐明标记率(A403nm/A280nm)的含义,通过ELISA检测表明标记率可作为评价酶结合物质量的指标,且其计算简便。     

猫内脏大神经一级传入纤维在脊髓灰质和薄束核中的分布

内脏神经(splanchnic nerves)中的传入纤维,携带许多内脏信息入中枢神经,但这些传入纤维在中枢内的分布,未见有详细报道。辣根过氧化物酶(HRP)的跨神经节传递和敏感的TMB法的应用,为显示一级传入纤维带来便利。我们将HRP注入猫的一侧内脏大神经,HRP标记纤维的分布呈现:内脏大神经内的一级传入纤维进入中枢后分两路,一路经Li-     

迷走神经背核尾侧部内神经降压肽样免疫反应终末联系的电镜研究

用辣根过氧化物酶逆行标记法结合免疫细胞化学法(PAP法)对大鼠迷走神经背核尾侧部内神经降压肽样免疫反应终末的核内联系进行了电镜下的研究.发现少量神经降压肽样免疫反应轴突终末与HRP逆行标记的副交感节前神经元的树突构成非对称性突触;大多数神经降压肽样免疫反应轴突终末与未标记中间神经元的胞体和树突构成对称性或非对称性突触,以轴-树突触为主;未标记的轴突终末也可同HRP逆行标记的副交感节前神经元的胞体和树突构成对称性或非对称性突触.由此认为核内神经降压肽样免疫反应终末可通过直接或间接联系(后者为主)作用于副交感节前神经元,从而参与对内脏、心血管活动的调节.     

蓝藻抗病毒蛋白-N的制备、生物活性鉴定及其多克隆抗体的制备和修饰

目的:纯化CVN重组蛋白,检测其抗病毒活性,制备CVN多克隆抗体,并对其进行纯化和修饰。方法:利用两步Ni-NTA亲和层析和一步SUMO酶切制备CVN抗原,CPE法观察其抗病毒活性,活性抗原免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,ELISA及Western blot鉴定其效价和特异性,抗血清经硫酸铵初步沉淀和DEAE离子交换层析获得纯化抗体,纯化抗体通过辣根过氧化物酶(HRP)标记获得修饰抗体。结果:纯化获得纯度达95%以上且具有明显抗流感病毒作用的非融合CVN,利用所得CVN抗原成功制备CVN多克隆抗体,酶联免疫分析显示其效价达到1∶16 000以上,Western blot分析表明其具明显特异性。抗血清经盐析和DEAE离子柱层析后获得效价为1∶6 400高纯度纯化抗体,经HRP修饰后获得具有较高生物活性的标记抗体。结论:获得高纯度,高效价兔抗CVN多克隆抗体,以及HRP标记的兔抗CVN多克隆抗体,为后续研究奠定了基础。     

家兔喉返神经运动神经元的位置及其性质

本文用辣根过氧化物酶(HRP)、胆碱脂酶(AchE)和脑啡呔(ENK)免疫组化法研究家免喉返神经运动神经元在中枢的位置及其性质。发现:HRP标记细胞主要分布在注射侧的疑核、迷走神经背核。在C_(1,2)节段的背内侧核、面后核以及C_1节段的副神经脊髓核内有少量标记细胞。疑核、迷走神经背核和背内核中有少量AchE—HRP双标记神经元,疑核和背内侧核内可见到ENK—HRP双阳性神经元。这表明家兔喉返神经运动神经元有些是胆碱能神经元和ENK样免疫组化反应阳性神经元。本文对喉返神经运动纤维的周围分布及机能意义进行了讨论。     

一种新的HRP—AChE双重染色法—TMB—ST法结合Karnovsky和Roots法联合反应

乙酰胆硷酯酶(AChE)和辣根过氧化物酶(HRP)联合反应是追踪胆硷能神经通路的常用方法之一.但目前所用的方法仍存在HRP的反应灵敏度不高、有较多背景沉淀的缺点.为此,本文试验了以显示HRP的高灵敏度的四甲基联苯胺(TMB)-钨酸钠(ST)和AChE显色法联合反应的程序,以期得到一种较理想的HRP-AChE联合反应方法.     

骨骼肌纤维内联苯胺阳性反应物质的横纹状分布

联苯胺、二氨基联苯眩(DAB)和四甲基联苯胺(TMB)等都可以用来显示给予体内的外源性过氧化物酶,如辣根过氧化物酶(HRP)等。此外体内也含有一些内源性过氧化物酶或具有过氧化物酶活性的物质,这些内源性过氧化物酶活性物质已在脑和其它许多器官组织中为DAB 法所证实。但是对骨骼肌纤维的     

抗辣根过氧化物酶和乙肝表面抗原的双特异单克隆抗体的研制

以HBsAg 免疫的Balb/c 小鼠脾细胞与HGPRT 缺陷型的分泌抗辣根过氧化物酶(HRP)单克隆抗体的杂交瘤细胞融合,获得二株分泌双特异单克隆抗体的三杂交瘤,抗体的一个结合部位与HB-sAg 反应,另一个结合部位与HRP 反应。     

补体溶解免疫复合物活性的测定——介绍一种以PO作抗原的检测方法

<正> 我们参照日本学者天野哲基等的报道,以辣根过氧化物酶(PO)作抗原,PO与抗-PO(AP)制备不溶性免疫复合物(PAP),以新鲜血清与PAP在同一试管内放置一定时间,使充分反应。血清中的补体使PAP解离,加缓冲液,将解离的PAP溶解于缓冲液中,