急性髓系白血病细胞侵袭能力与粘附分子表达关系探讨

目的：探讨白血病细胞浸润及转移与粘附分子表达的关系。方法：用免疫组织化学ＡＰＡＡＰ、免疫印迹方法研究５０例急性髓系白血病（ＡＭＬ）骨髓和（或）外周血白血病细胞粘附分子ＶＬＡ４（ＣＤ４９ｄ）、ＬＦＡ１（ＣＤ１１ａ）的表达。结果：发现ＡＭＬ浸润组ＣＤ４９ｄ、ＣＤ１１ａ表达较非浸润组显著增高（Ｐ＜０．００５）。结论：ＡＭＬ白血病细胞可能通过ＣＤ４９ｄ／ＶＣＡＭ－１，ＣＤ１１ａ／ＩＣＡＭ－１粘附机制与血管内皮细胞粘附而浸润组织。外周血白血病细胞与骨髓白血病细胞ＣＤ４９ｄ、ＣＤ１１ａ表达无显著差别，说明骨髓白血病细胞ＣＤ４９ｄ、ＣＤ１１ａ表达高低不是其从骨髓释出的唯一因素。     

急性髓系白血病细胞侵袭能力与粘附分子表达产在系探讨

探讨白血病的细胞浸润及转移与粘附分子表达的关系。胜免疫组织化学ＡＰＡＡＰ、免疫印迹方法研究５０例急性髓系白血病骨髓和外周血白血病细胞粘附分子ＶＬＡ４（ＣＤ４９ｄ）、ＬＦＡ１（ＣＤＤ１１ａ）的表表达。结果发现ＡＭＬ浸润组ＣＤ４９ｄ、ＣＤ１１ａ表达较非浸润组显著增高。     

川芎嗪改善免疫诱导再生障碍性贫血小鼠骨髓微环境作用的研究

目的：探讨川芎嗪对再生障碍性贫血（再障）骨髓微环境的作用及其机制。方法：建立免疫介导的再障小鼠模型，胃饲川芎嗪注射液每次４ｍｇ，１天２次，第１０天用氧分压传感针测定活体尺骨中段骨髓氧分压（ＰｂＯ２），再观察其骨髓切片组织学，体外成纤维细胞集落形成单位（ＣＦＵ－Ｆ），培养基质细胞层的粘附能力。结果：川芎嗪组ＰｂＯ２为１０．３２±１．２７ｋＰａ，显著高于再障组（４．３２±２．８６ｋＰａ），Ｐ＜０．００１。再障组骨髓微血管扩张、断裂、瘀血，造血组织容量百分率为２４．９％±９．６％，ＣＦＵ－Ｆ为１２．５±７．３／２×１０６骨髓有核细胞（ＢＭＮＣ）。川芎嗪组骨髓微血管较清楚、完整，无断裂及瘀血，造血组织容量百分率为５２．８％±１５．６％，ＣＦＵ－Ｆ为３１．５±１０．６／２×１０６ＢＭＮＣ。川芎嗪组体外培养基质细胞粘附正常小鼠骨髓有核细胞的能力为７２．７％±７．８％，与正常组（７３．４％±３．４％）无差异，明显高于再障组（５６．２％±９．８％），Ｐ＜０．０１。结论：川芎嗪能促进再障小鼠骨髓微血管的修复，增加对骨髓的供氧，促进骨髓基质细胞生长及其粘附功能。川芎嗪通过改善骨髓微环境而使骨髓造血细胞增生。     

骨髓增生异常综合征免疫表型的研究

目的评价免疫表型测定在骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）诊断及预后判断中的价值。方法应用一组单克隆抗体采用免疫荧光法对３２例ＭＤＳ患者骨髓单个核细胞（ＭＮＣ）进行免疫表型检测。结果ＭＤＳ患者髓系抗原表达明显增高,淋巴细胞抗原表达相对减少,而且随ＭＤＳ恶化,ＦＡＢ亚型的抗原表达出现规律性变化,随ＲＡ／ＲＡＳ向ＲＡＥＢ再向ＲＡＢＥｔ转化,较早期的髓系抗原（如ＣＤ１３、ＣＤ３３）逐渐增加,较晚期出现的髓系抗原逐渐减少,同时伴有Ｔ淋巴细胞抗原表达减少;ＲＡ／ＲＡＳ阶段骨髓ＣＤ３４＋细胞与正常组相比无显著增高,ＲＡＥＢ和ＲＡＥＢｔ阶段ＣＤ３４＋细胞数明显增高;较早期骨髓细胞（即祖细胞）表面抗原ＣＤ３８、ＨＬＡＤＲ、ＣＤ９９Ｒ、ＣＤ９在ＭＤＳ表达明显增加。ＣＤ３４和其它早期抗原表达增高者,预后较差,易于转化为白血病。结论ＭＤＳ患者骨髓ＭＮＣ表面标记的检测有利于ＭＤＳ的诊断,也可协助预后判断。     

B7/CD28分子激发T细胞抗多发性骨髓瘤细胞的作用

目的探讨Ｂ７／ＣＤ２８分子激发Ｔ淋巴细胞抗多发性骨髓瘤（ＭＭ）作用和提高ＭＭ细胞抗原性的机制。方法采用人Ｂ７１基因对人ＭＭ细胞的转导、ＣＤ２８激发型单克隆抗体（单抗）的激发、同种异体混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）、免疫表型分析和白细胞介素２（ＩＬ２）ＥＬＩＳＡ法定量检测。结果ＸＧ细胞转染Ｂ７１ｃＤＮＡ后,能稳定高表达Ｂ７１,转染Ｂ７１ｃＤＮＡ前后细胞表达ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８、ＣＤ４０、ＣＤ５４、ＣＤ５６、ＣＤ５８、Ｂ７２（ＣＤ８６）、ＣＤ４０Ｌ、ＨＬＡⅠ和ＨＬＡⅡ抗原均无明显变化,转染Ｂ７基因后可使肿瘤细胞的抗原性明显增加,在ＭＬＲ中,ＸＧ７１转基因细胞较ＸＧ细胞更能显著介导ＣＤ８＋Ｔ细胞的活化、增殖和ＩＬ２的分泌。ＣＤ２８激发型单抗与Ｂ７１分子相似,能显著介导同种异体Ｔ细胞的混合淋巴细胞反应。结论人ＭＭ细胞不能有效地激发Ｔ细胞抗肿瘤的主要原因之一为其不表达Ｂ７１分子,转染Ｂ７１分子或者加入ＣＤ２８激发型单抗均能有效地提高肿瘤细胞的抗原性和对Ｔ细胞的激发作用,ＣＤ２８激发型单抗临床治疗ＭＭ更具有可行性。     

组胺H2受体阻滞剂对免疫介导小鼠再生障碍性贫血发生的？…

目的 探讨组胺Ｈ２受体阻滞剂对免疫介导小鼠再生障碍性贫血（再障）的发生有无阻断作用。方法 通过给全身亚致死量照射的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠转输Ｈ－２相同、ＭＬＳ不同的ＤＢＡ／２小鼠胸腺、淋巴结混合细胞诱导小鼠再障发生,实验组每天腹腔注射１次甲氰咪胍,共８次,于照射后第１４天,观察股骨骨髓增生程度。结果 腹腔注射０．５０,１．００,２．００ｍｇ．（１０ｇ体重）＾－１,ｄ＾ －１甲氰咪胍的小鼠的股骨平均骨髓造     

川芎嗪改善免疫诱导再障不鼠骨髓微环境的作用研究

目的：探讨川芎唪对再生障碍性贫血（再障）骨髓微环境的可能作用及其机制．方法：建立免疫介导的再障小鼠模型，胃饲川芎嗪注射液４ｍｇ／次，１天２次，第１０天用氧分压传感针测定活体尺骨骨髓氧分压（ＰｂＯ２ ），再观察其骨髓切片组织学，体外成纤维细胞集落形成单位（ＣＦＵ－Ｆ），培养基质细胞层的粘附能力．结果：川芎唪治疗组尺骨中段ＰｈＯ２１０．３２±１．２７ＫＰａ较正常组（１２．３５±１．０５Ｋｐａ）低，Ｐ＜０．０１；而显著高于对照的再障组（４．３２±２．８６ＫＰａ）Ｐ＜０．００１．再障组骨髓微血甲扩张、断裂、淤血，造血组织容量百分率２４．９±９．６％．川芎嗪组微血管较清楚、完整、无断裂及淤血，造血组织容量百分率为５２．８±１５．６％．再障胡ＣＦＵ－Ｆ１２．５±７．３明显低于川芎嗪组（３１．５±１０．６），ｐ＜０．０１．川芎嗪组体外培养基质细胞层粘附正常小鼠骨髓有核细胞的能力为７２．７±７．８％，与正常组（７３．４±３．４％）无差异，明显高于再障组（５６．２±９．８％），Ｐ＜０．０１．结论：川芎嗪能促进再障小鼠骨髓微血管的修复，增加微环境供氧，促进基质细胞生长及其粘附功能．川芎嗪通过改善骨髓微环境而使骨髓造血细胞增生．     

淋巴因子激活的骨髓细胞或脾细胞对小鼠移植物抗宿主病的预…

根据淋巴因子激活的骨髓细胞（ＬＡＢＭＣ）或脾细胞（ＬＡＳＣ）具有介导否决（Ｖｅｔｏ）效应和自然抑制（ＮＳ）效应的特性，实验分别以新生小鼠和亚致死剂量照射的成年小鼠为受鼠，腹腔注射同种脾细胞制备移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ）模型，实验组同时注射ＬＡＢＭＣ或ＬＡＳＣ。结果显示：与受鼠带相同Ｈ－２单型的ＬＡＢＭＣ可明显减轻新生小鼠ＧＶＨＤ（Ｐ＜０．００１）；与受鼠带相同Ｈ－２单型的ＬＡＳＣ可有效预防致死性Ｇ     

急性非淋巴细胞白血病与HLA-DR抗原表达关系的研究

应用免疫酶标染色法检测了５７例急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）患者的ＨＬＡ－ＤＲ和其它细胞免疫类型，其中３８例（６６７％）表达ＨＬＡ－ＤＲ抗原，表达ＨＬＡ－ＤＲ抗原的ＡＮＬＬ常伴有ＣＤ７的表达，而较成熟的髓系细胞表面标记ＣＤ１５则不表达，ＨＬＡ－ＤＲ＋的ＡＮＬＬ与ＦＡＢ亚型Ｍ１、Ｍ５ａ有密切关系。ＨＬＡ－ＤＲ－组缓解机会大于ＨＬＡ－ＤＲ＋组（Ｐ＜００５），检测ＨＬＡ－ＤＲ抗原不仅有利于ＡＮＬＬ的诊断而且有助于判断预后。     

大肠杆菌CD自杀基因与GM-CSF基因联合转移对小鼠红白血病的治疗作用

目的：观察自杀基因与细胞因子基因联合转移的抗肿瘤作用与免疫机制。方法：将表达大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶（ＣＤ）的重组腺病毒（ＡｄＣＤ）及表达小鼠粒巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）基因的重组腺病毒（ＡｄＧＭＣＳＦ）直接进行体内注射，合并应用５氟胞嘧啶（５ＦＣ）对红白血病皮下荷瘤小鼠模型进行治疗。结果：联合基因治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤的生长，并明显延长其生存期（Ｐ＜０．０５）；免疫功能检测表明，联合基因治疗组小鼠ＣＴＬ杀伤活性明显高于单用ＡｄＣＤ／５ＦＣ、ＡｄＧＭＣＳＦ、对照病毒ＡｄＬａｃＺ／５ＦＣ或ＰＢＳ治疗组；病理分析显示，联合基因治疗组肿瘤细胞发生明显坏死，瘤内及瘤周有大量的炎性细胞浸润。结论：应用自杀基因与细胞因子基因联合转染可更有效地抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长，且可诱导抗肿瘤免疫应答     

丹参素、川芎嗪对小鼠外周血造血干细胞动员作用的研究

目的探讨丹参素、川芎嗪对小鼠外周血造血干细胞的动员作用及其对小鼠外周血细胞和骨髓基质细胞粘附分子的影响。方法40只BALB／c小鼠，随机分为4组：丹参素组[300mg／（kg·d）]、川芎嗪组E50mg／（kg·d）]、rhG-CSF组[250μg／（kg·d）]、生理盐水组，腹腔注射d1～7，1次／d，第8天，采用外周血WBC、MNC计数、流式细胞术、造血祖细胞体外培养、免疫细胞化学等检测各组给药后对外周血WBC、MNC、CD34^＋细胞、CD49d阳性胞、CFU-GM、CFU-MK、CFU-E的产率及小鼠骨髓基质细胞VCAM-1阳性细胞百分率的影响。结果丹参素组给药第7天外周血WBC、MNC数量达到高峰，分别为给药前的3倍和3．4倍；丹参素组外周血CD34^＋、CD49d阳性细胞及骨髓基质细胞VCAM-1阳性细胞百分率分别为（1．03±0．24）％、（12．59±2．64）％和（50．86±8．77）％，均明显高于生理盐水组（P〈0．05）；其CFU-GM、CFU-MK和CFU-E产率分别为（14．90±2．88）％、（12．50±4．06）％和（16．10±6．36）％，均明显高于生理盐水组（P〈0．01）；川芎嗪组给药第7天外周血WBC、MNC数量达到高峰，分别为给药前的3．2倍和3．9倍；川芎嗪组外周血CD34^＋、CD49d阳性细胞及骨髓基质细胞VCAM-1阳性细胞百分率分别为（O．86±0．42）％、（12．91±2．84）％和（48．47±7．87）％，均明显高于生理盐水组（P〈0．05）；川芎嗪组CFU-GM、CFU-MK和CFU-E产率分别为（53．10±9．63）％、（20．40±5．36）％和624．50±5．35）％，均明显高于生理盐水组（P〈0．01）。结论丹参素、川芎嗪对小鼠外周血造血干细胞有一定的动员作用，且这一作用可能与其上调小鼠外周血细胞和骨髓基质细胞粘附分子的表达有关。     

川芎嗪对同基因骨髓移植小鼠骨髓中VCAM-1/VLA-4表达的影响

为了探讨同基因骨髓移植 (BMT)小鼠骨髓细胞表面黏附分子VCAM 1 VLA 4 (CD4 9d)的表达及川芎嗪对其影响 ,取健康BALB c小鼠 ,随机分为 3组 :正常组 (不做处理 ) ,骨髓移植对照组 (简称BMT组 )和骨髓移植 川芎嗪治疗组 (简称川芎嗪组 )。BMT组和川芎嗪组分别胃饲生理盐水 0 .2ml 只和川芎嗪注射液每次 2mg 只 ,2次 天。在BMT后第 7、14、2 1、2 8天处死小鼠 ,采用免疫组织化学方法检测骨髓基质细胞VCAM 1蛋白表达水平 ,用RT PCR检测骨髓基质细胞VCAM 1mRNA表达水平 ;用流式细胞术检测骨髓有核细胞表面VLA 4的表达水平。结果发现 :BMT后第 7、14、2 1、2 8天川芎嗪组VCAM 1 VLA 4的表达水平、骨髓有核细胞计数均高于BMT组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 :川芎嗪能提高BMT小鼠骨髓造血细胞和基质细胞黏附分子的表达 ,促进造血干 祖细胞的归巢 ,加速移植后骨髓的造血重建。     

丹参素对小鼠外周血造血干细胞动员作用的研究

目的:探讨丹参素对小鼠外周血造血干细胞的动员作用及其对小鼠外周血细胞和骨髓基质细胞黏附分子的影响。方法:30只BALB/c小鼠随机分为三组:丹参素组、G-CSF组、生理盐水组,腹腔注射d1～d7,每日1次,第2～8天,采用外周血WBC和MNC计数、流式细胞术、造血祖细胞体外培养、免疫细胞化学等检测各组给药后对外周血WBC、MNC、CD34+细胞、CD49d阳性细胞、CFU-GM、CFU-MK、CFU-E的产率及小鼠骨髓基质细胞VCAM-1阳性细胞百分率的影响。结果:丹参素组给药第7天外周血WBC、MNC数量达到高峰,分别为给药前的3倍和3.5倍;丹参素组外周血CD34+、CD49d阳性细胞及骨髓基质细胞VCAM-1阳性细胞百分率分别为(1.03±0.24)%、(12.59±2.64)%和(50.86±8.77)%,均明显高于生理盐水组(P<0.05);其CFU-GM、CFU-MK和CFU-E产率分别为(14.90±2.88)%、(12.50±4.06)%和(16.10±6.36)%,均明显高于生理盐水组(P<0.01)。结论:丹参素对小鼠外周血造血干细胞有一定的动员作用,且这一作用可能与其上调小鼠外周血细胞和骨髓基质细胞黏附分子的表达有关。     

川芎嗪对同基因骨髓移植小鼠骨髓细胞PECAM-1/CD31分子表达与造血重建的作用

本研究通过观察骨髓移植后小鼠骨髓中血小板内皮细胞间黏附分子 (PECAM 1/CD31)的表达水平变化及川芎嗪对其表达的调节作用 ,进一步探讨川芎嗪促进骨髓造血微环境修复、改善造血重建的作用机制。将BALB/c小鼠随机分为正常对照组 ,单纯BMT对照组和川芎嗪治疗组 (骨髓移植 川芎嗪 ) ,接受 7.5Gy60 Coγ射线一次性全身均匀照射 ,照射后进行同基因小鼠骨髓移植 ,并分别胃饲等量生理盐水与川芎嗪注射液 ,2次 /天。骨髓移植后第 7,14 ,2 1天 ,采用流式细胞术检测小鼠骨髓有核细胞表面CD31分子表达水平 ,计数外周血白细胞、血小板及骨髓有核细胞数 ,并做骨髓组织学检查。结果表明 :骨髓移植后第 7,14 ,2 1天川芎嗪治疗组的CD31表达水平 ,外周血白细胞、血小板和骨髓有核细胞计数以及骨髓细胞增生程度均高于骨髓移植对照组 (P <0 .0 1或P<0 .0 5 )。结论 :川芎嗪可以明显促进骨髓移植后骨髓有核细胞表面黏附分子CD31的表达水平 ,这可能是其促进造血重建的作用机制之一。     

川芎嗪对骨髓移植小鼠CD44表达的作用研究

为探讨川芎嗪对骨髓移植小鼠早期造血重建过程中黏附分子CD44表达水平的影响，将BALB／c小鼠随机分为3组：正常对照组，骨髓移植对照组(简称对照组)和骨髓移植 川芎嗪治疗组(简称川芎嗪组)，对照组和川芎嗪组每天分别胃饲生理盐水和川芎嗪。于骨髓移植(BMT)后第7，14，21，28天处死小鼠，计数外周血细胞、骨髓有核细胞，分析骨髓中造血组织面积及成熟红细胞容量，用流式细胞术和免疫组织化学检测骨髓细胞上CD44的表达水平．并于第10天取小鼠脾脏，计数脾集落形成单位。结果显示，骨髓移植后第7，14，21，28天川芎嗪组外周血白细胞、血小板、骨髓有核细胞计数、骨髓中造血组织面积均显著高于移植对照组，外周血红细胞计数在第7，14，21天也较对照组为高；同时．川芎嗪组CFU-S计数明显高于同期移植对照组，骨髓中成熟红细胞容量则显著低于对照组，川芎嗪组C44的表达在第7，14，21，28天明显高于对照组。结论：川芎嗪可提高骨髓移植小鼠骨髓细胞表面CD44的表达水平，促进造血干／祖细胞的归巢，加速移植后骨髓的造血重建。     

川芎嗪对骨髓移植后小鼠LFA-1和ICAM-1表达的影响

本研究探讨川芎嗪对骨髓移植 (BMT)后小鼠骨髓中LFA 1和ICAM 1表达水平的影响及其促进骨髓造血重建的机制。 15 0只BALB/c小鼠随机分为正常组、生理盐水组和川芎嗪组。正常组未作任何处理 ,生理盐水组和川芎嗪组在BMT后分别喂饲相同剂量的生理盐水 ( 0 .2毫升 /只 ,每天 2次 )和川芎嗪 ( 2毫克 /只 ,每天 2次 ) ,并分别于BMT后第 7,14 ,2 1,2 8天统计存活率 ,计数脾集落形成单位 (CFU S)、外周血细胞、骨髓单个核细胞 (BMM NC) ,分析骨髓组织学变化及LFA 1和ICAM 1表达水平。结果表明 :川芎嗪组小鼠在BMT后第 10天CFU S计数和BMT后第 7,14 ,2 1,2 8天存活率、外周血白细胞、血小板、BMMNC计数、骨髓造血组织容量以及LFA 1表达水平均显著高于生理盐水组 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ,成熟红细胞容量和ICAM 1表达水平均明显低于生理盐水组 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 )。川芎嗪组小鼠脂肪组织容量在BMT后第 7、14天明显高于生理盐水组 (P <0 .0 1) ,在第 2 1,2 8天明显低于生理盐水组 (P <0 .0 1)。结论 :川芎嗪改善骨髓微环境 ,促进造血重建。     

川芎嗪对BMT后小鼠骨髓基质细胞bFGF表达水平的影响

本研究探讨川芎嗪对骨髓移植（BMT）后小鼠骨髓基质细胞bFGF表达水平的影响及其促进骨髓造血重建的机制。取健康BALB／c小鼠，随机分为3组：正常组（不做处理），BMT＋生理盐水组（简称生理盐水组）和BMT＋川芎嗪治疗组（简称川芎嗪组）。生理盐水组和川芎嗪组分别胃饲生理盐水0．2毫升／只和川芎嗪注射液每次2毫克／只，2次／天，直至处死为止。在BMT后第7、14、21、28天处死小鼠，用RT—PCR和Western blot方法检测骨髓基质细胞bFGF mRNA及其蛋白表达水平。结果表明：BMT后第7、14、21天川芎嗪组和生理盐水组骨髓基质细胞bFGF mRNA及其蛋白的表达均明显低于正常组（P〈0．01或P〈0．05），但川芎嗪组明显高于生理盐水组（P〈0．01或P〈0．05），到第28天，川芎嗪组bFGF mRNA及其蛋白的表达已恢复正常，而生理盐水组仍未恢复正常，两组之间有显著性差异（P〈0．01）。结论：川芎嗪可能通过增加bFGF的表达水平而促进骨髓微环境的修复，加速BMT后骨髓的造血重建。     

血小板第4因子对脐血CD34+细胞黏附功能的影响

目的研究血小板第4因子(PF4)对新鲜脐血CD34+细胞及扩增后脐血CD34+细胞黏附功能的影响;PF4对脐血CD34+细胞上的黏附分子CD49d及基质细胞趋化因子(SDF-1)受体CXCR4的作用.方法采用免疫磁珠法(MACS)分选CD34+细胞,结晶紫染色测定细胞总黏附性,免疫荧光标记流式细胞仪测定CD49d及CXCR4的表达.结果①PF4 可使新鲜脐血CD34+细胞总黏附性提高,且与剂量相关.②SDF-1 100 ng/ml可使脐血CD34+细胞总黏附性提高.③脐血CD34+细胞扩增10 d后未加PF4刺激的自发以及经SDF-1诱导的黏附功能开始下降,在扩增脐血CD34+细胞不同时间段加入100ng/ml PF4,脐血CD34+细胞对基质层的黏附能力始终保持较高水平,以0天时脐血CD34+细胞黏附性为100%,扩增14 d时脐血CD34+细胞黏附性PF4组为(262.04±64.81)%,同期对照组为(64.35±8.29)%,经SDF-1诱导下扩增14 d的CD34+细胞的总黏附性PF4组为(138.31±32.39)%,同期对照组为(67.66±12.44)%.④PF4 100 ng/ml作用于CD34+细胞时,CD49d表达增长13.02%,CXCR4表达增长17.33%.结论 PF4可使新鲜及扩增后的脐血CD34+细胞黏附功能增强,并促进CD49d及CXCR4的表达,提示PF4可能有助于脐血干细胞的归巢.