三种方法在检测Leber‘s视神经萎缩mt—DNA突变的比较

比较ＭＳＰ－ＰＣＲ、ＳＳＣＰ、ＲＦＬＰ在检测Ｌｅｒｂｅｒ’ｓ视神经萎缩（ＬＨＯＮ）线粒体ＤＮＡ（ｍｔ－ＤＮＡ）１１７７８突变中的优缺点。７７例受试者，分别用ＭＳＰ－ＰＣＲ、ＳＳＣＰ、ＲＦＬＰ法检测ｍｔ－ＤＮＡ１１７７８突变。被ＭＳＰ－ＰＣＲ检出的４８例阳性者同时也被ＳＳＣＰ检出，另外ＳＳＣＰ还检出６例杂合性突变；ＭＳＰ－ＰＣＲ和ＳＳＣＰ检测阳性的９例患者，再用ＲＦＬＰ（ＭａｅⅢ）检测也得出一致结果     

非同位素方法检测卵巢癌组织p53基因的改变

为解决常规ＤＮＡ单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）使用放射性同位素及操作繁杂等问题，应用溴化乙锭（ＥＢ）染色的非同位素检测方法对１６例卵巢癌及５例正常胎盘组织中ｐ５３基因的第５、６外显子（Ｅｘｏｎ５、６）的聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物进行了分析，并结合ＤＮＡ测序技术进行验证。正常组织未发现异常，１６例卵巢癌ＳＳＣＰ分析显示３例异常，ＤＮＡ测序证实其中２例为核苷酸突变，１例为核苷酸插入。采用ＥＢ染色的非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ，方法简便、省时、准确，具有良好的实用性和广泛的使用价值。     

冠心病,糖尿病和系统性红斑狼疮患者的可溶性血管内皮细？…

目的：检测冠心病（ＣＨＤ）、糖尿病（ＤＭ）、系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患血浆中的可溶性血管内皮细胞蛋白Ｃ受体（ｓＥＰＣＲ）水平,以探讨ｓＥＰＣＲ在不同疾病患血浆中表达水平及其临床意义。方法采用酶联免疫双抗体夹心法检测３４例ＣＨＤ、４２例ＤＭ、６３例ＳＬＥ患及２０名正常人（ＮＣ）血浆中的ｓＥＰＣＲ水平。结果ｓＰＥＣＲ在ＤＭ患血浆中的表达水平明显高于正常对照血浆（Ｐ〈０．０５）;ＳＬＥ合并血栓及     

混合淋巴细胞培养在骨髓移植供体选择中的作用

混合淋巴细胞培养（ＭＬＣ）是传统的配型骨髓移植（ＢＭＴ）供受体主要组织相容性复合（ＭＨＣ）的重要方法。但近年来，随着分子生物学和ＰＣＲ技术发展，出现了许多新的配型ＨＬＡ的基因学方法。利用这些方法，学者们对ＭＬＣ配型ＨＬＡ及选择ＢＭＴ供体的作用进行了研究。认为ＭＬＣ在有血缘关系的同胞间ＢＭＴ供体选择中尚有一定的作用，耐 在无关供体的选择时，ＭＬＣ可被省略而为ＰＣＲ－ＳＳＣＰ、ＰＣＲ－Ｆ等方法代替。     

非同位素方法检测卵巢癌组织p53基因的改变

为解决常规ＤＮＡ单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）使用放射性同位素及操作繁杂等问题，应用溴化乙锭（ＥＢ）染色的非同位素检测方法对１６例卵巢癌及５例正常胎盘组织中ｐ５３基因的第５、６外显子（Ｅｘｏｎ５、６）的聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物进行了分析，并结合ＤＮＡ测序技术进行验证。正常组织未发现异常，１６例卵巢癌ＳＳＣＰ分析显示３例异常，ＤＮＡ测序证实其中２例为核苷酸突变，１例为核苷酸插入。采用ＥＢ染色的     

结直肠癌p53基因点突变和蛋白表达的研究

目的了解中国人结直肠癌ｐ５３基因的突变谱，探讨聚合酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术用于研究结直肠癌中ｐ５３基因突变的可行性。方法应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测４１例结直肠癌ｐ５３基因突变，以ＡＢＣ免疫组织化学染色检测结直肠癌Ｐ５３蛋白的表达。结果３４％（１４／４１）的病例显示有ｐ５３基因突变，其中外显子５，６，７和８各有４，１，５和４例突变。２０例有Ｐ５３蛋白异常表达，阳性率为４９％。结论导致Ｐ５３蛋白异常堆积的ｐ５３基因突变是结直肠癌的一种常见的分子结构改变，可能在结直肠癌的发生和发展中起着重要的作用。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术是一简便、快速、有效的检测基因点突变的方法     

抗磷脂血栓综合征与获得性抗活化的影响C现象

了解抗磷脂抗体（ＡＰＡ）,抗活性化的蛋白Ｃ（ＡＰＣＲ）与抗磷脂血栓综合征（ＡＰＬ－Ｔ）的关系,进一步探讨ＡＰＬ－Ｔ血栓发生机制。方法以ＥＬＩＳＡ检测ＡＣＡ（ＩｇＭ,ＩｇＡ）;ＡＰＴＴ检测ＬＡ;ＡＰＴＴ＋／－ＡＰＣ检测ＡＰＣＲ。结果２０例患者符合ＡＰＬ－Ｔ诊断。根据病因分类,１００例ＳＬＥ患者中１４例为继发性ＡＰＬ－６：１６例“原因不明”血栓与习惯性流产患者中６例为原发性ＡＰＬ－Ｔ。根据抗体分类,２     

恶性血液病中的P15^INK4B基因甲基化

目的 探索特定基因操纵区ＣｐＧ岛高甲基化对人类造血系统恶性肿瘤的作用。方法 利用甲基化特异性聚合酶链反应（ＭＳＰ）的方法,用亚硫酸氢钠修饰后的ＤＮＡ为模板进行甲基化特异性聚合酶链反应（ＰＣＲ）,测定了２５例急性髓系白血病（ＡＭＬ）,１５例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）,１６例骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）和１２例多发性骨髓瘤（ＭＭ）患Ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因在操纵区５′－ＣｐＧ岛异常甲基化的发生率。结果 Ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因异常甲基化的发生率：ＡＭＬ为８４％,ＣＭＬ为０,ＭＤＳ为５０％,ＭＭ为７５％。高危型的ＭＤＳ较低危型更易发生甲基化,在ＭＭ中,Ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ甲基化一般发生在早期,与骨髓象的幼稚程度关系密切。结论 调节细胞生长和分化的Ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因高甲基化是使Ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因失活的主要原因之一,     

骨髓移植供受者HLA—DRB的单链构型多态性配型

用ＰＣＲ和单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）法检查供受的ＨＬＡ－ＤＲＢ－１基因座的多态性的一致性，以此做ＤＲＢ的基因配型。１６例同胞供受对的ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型，有６对相合（６／１６），１０对不合（１０／１６）。此基因配型结果与其它配型结果比较，说明ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型在区分同胞供受对Ⅱ类抗原多态性上有较高的灵敏度，同时表现此类配型在应用于骨髓移植前检查同胞供的意义     

羧甲基茯苓多糖在人IL—2生物技术实验与临床研究中的应用

用健康人外周血淋巴细胞，经羧甲基茯苓多糖促诱生处理，并经特殊工艺制备而成的高效价临床级ＩＬ－２、不仅可用于肌肉注射，珂用于静脉滴注或动脉插管输注，与ＬＡＫ细胞和化疗４４例晚期肿瘤，ＣＲ＋ＰＲ１３例（２９．３％），ＣＲ＋ＰＲ＋ＭＲ为２２例（５０％０，ＳＲ１６例，无效死亡６例，总有效率为８６．４％（ＣＰ＋ＰＲ＋ＭＰ＋ＳＲ）《     

压力控制通气治疗创伤性急性呼吸窘迫综合征的应用探讨

目的：探讨压力控制通气（ＰＣＶ）用于治疗创伤性急性呼吸窘迫综合征（ＡＲＤＳ）的临床应用价值。方法：观察创伤性ＡＲＤＳ患者ＰＣＶ组和容量控制通气（ＶＣＶ）治疗后６和１２小时气道峰压（ＰＩＰ），平均气道压（ＭＰａｗ）和呼气末正压（ＰＥＥＰ）的大小，并比较ＰＣＶ治疗对血气、血压和心率的影响。结果：ＰＣＶ组治疗后６和１２小时ＰＩＰ均显著低于ＶＣＶ组（Ｐ均〈０．０１），６小时ＭＰａｗ和ＰＥＥＰ与ＶＣＶ比较无     

骨髓移植供受者HLA－DRB的单链构型多态性配型

用ＰＣＲ和单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）法检查供受者的ＨＬＡ－ＤＲＢ－１基因座的多态性的一致性，以此做ＤＲＢ的基因配型。１６例同胞供受者对的ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型，有６对相合（６／１６），１０对不合（１０／１６）。此基因配型结果与其它配型结果比较，说明ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型在区分同胞供受者对的Ⅱ类抗原多态性上有较高的灵敏度，同时表明此类配型在应用于骨髓移植前检查同胞供者的意义。     

１ 个脆性 Ｘ 综合征家系的 ＦＭＲ１ 基因 ＣＧＧ 重复及甲基 化状态分析

摘要：目的 应用 ＰＣＲ 微流控芯片毛细管电泳联合 ＭＳ ＭＬＰＡ 技术对 １ 个脆性 Ｘ 综合征家系进行 ＣＧＧ 重复序列和甲基化状 态分析，探讨 ＦＭＲ１ 基因甲基化程度和临床表型的关系。方法 应用 ＰＣＲ 微流控芯片毛细管电泳法对该家系 ２２ 个成员进行 ＦＭＲ１ 基因 ＣＧＧ 重复数检测，采用甲基化特异性多重连接依赖探针扩增（ＭＳ ＭＬＰＡ）技术检测 ＦＭＲ１ 基因启动子区域 ＣｐＧ 岛 的甲基化情况，并用 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 印迹杂交技术对全突变患者进行验证。结果 ２２ 个家系成员中检出前突变携带者 ８ 例，全突变 女性携带者 １ 例，脆性 Ｘ 综合征男性患者 ４ 例。ＭＳ ＭＬＰＡ 分析发现女性正常型和前突变携带者的甲基化比值分别为 ０．２５ ～ ０．４８（中位数 ０．３３）和 ０．３３～ ０．４６（中位数 ０．３８），两组间差异无统计学意义（ｔ ＝ ０．０９５，Ｐ＞０．０５），１ 例女性全突变携带者甲基化比 值为 ０．５２，高于正常型和前突变携带者，４ 例男性全突变患者甲基化比值均＞０．６４，中度智力障碍组和重度智力障碍组之间甲 基化比值差异无统计学意义（ｔ ＝ ０．５８，Ｐ＞０．０５）。结论 ＣＧＧ 重复数检测和甲基化分析可为脆性 Ｘ 综合征家系成员提供准确 全面的分子诊断；男性患者临床表型和甲基化程度相关。     

多聚酶链反应－单链构象多态分析检测骨髓增生异常综合征N－ras癌基因突变

为探讨Ｎ－ｒａｓ基因突变在骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）病变过程中的意义，采用多聚酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析法检测２０例ＭＤＳ患者Ｎ－ｒａｓ癌基因，其中５例出现Ｎ－ｒａｓ基因突变，占２５％，其中３例随访半年内转变为急性髓细胞白血病（ＡＭＬ），且对化疗不敏感。提示Ｎ－ｒａｓ基因突变可促进ＭＤＳ恶性克隆过度增生。初步表明Ｎ－ｒａｓ基因突变的检测可作为一种分子生物学标志，用于监测ＭＤＳ向ＡＭＬ转化     

PCR直接测序法分析结核分枝杆菌katG基因突变

为了了解我国结核分枝杆菌耐异烟肼（ＩＮＨ）分离株ｋａｔＧ基因突变情况，研究其临床意义。本研究通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）、ＰＣＲ－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ直测序法分析９２株结核分枝杆菌临床分离株的ｋａｔＧ基因。以Ｈ３７Ｒｖ标准株为对照，２３株药物敏感体中，２１株ｋａｔＧ基因ＳＳＣＰ分析正常，２株异常。３６株耐非ＩＮＨ药物的分离株中，２０株ｋａｔＧ基因ＳＳＣ正常，１６株异常。３３株耐ＩＮＨ分     

急性白血病患者p16及p15基因纯合子缺失及甲基化研究

目的　探讨血液系统恶性肿瘤患者ｐ１６ 及ｐ１５ 基因失活的发生率及其临床意义。方法　用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 方法扩增ｐ１６ 及ｐ１５ 基因外显子１ 及外显子２ ,检测等位基因纯合子缺失;再用限制性内切酶 Ｐ Ｃ Ｒ 方法检测ｐ１６ 及ｐ１５ 基因甲基化; 然后用 Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ 法（ Ｔｄ Ｔｍｅｄｉａｔｅｄ ｄ Ｕ Ｔ Ｐｄｉｇｏｘｙｇｅｎｉｎ ｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇ） 检测细胞凋亡。结果　５６ 例患者中有ｐ１６ 和（ 或）ｐ１５ 基因失活者共３３ 例,其中急性淋巴细胞白血病（ Ａ Ｌ Ｌ）３８ 例中２３ 例（ 占６０ ．５ ％ , Ｔ Ａ Ｌ Ｌ１２ 例, Ｂ Ａ Ｌ Ｌ１１ 例） , Ａ Ｎ Ｌ Ｌ１８ 例中１０ 例（ 占５５５ ％ ） 。 Ａ Ｌ Ｌ 患者ｐ１６ 及ｐ１５ 基因均以甲基化失活为主。 Ｔ Ａ Ｌ Ｌ 失活的频率比 Ｂ Ａ Ｌ Ｌ 高。有ｐ１６ 和（ 或）ｐ１５ 基因失活者, 细胞的凋亡比例明显减少,病情进展迅速,治疗效果差,缓解率低, 缓解期明显缩短。结论　ｐ１６ 及ｐ１５ 基因失活的检测对于探讨急性白血病的发病机制,判断疾病进程有重要意义。     

抑癌基因p16在子宫颈癌中的检测研究

本文通过检测宫颈癌组织中的ｐ１６抑癌基因的突变，来探讨ｐ１６抑癌基因在宫颈癌发生、发展中的作用。选取２０例正常宫颈组织、２０例慢性宫炎组织、３０例宫颈癌组织，其中宫颈癌Ⅰ期７例、Ⅱ期１１例、Ⅲ期８例、Ⅳ期４例，在细胞分化程度上Ⅰ级６例，Ⅱ级１３例，Ⅲ级１１例，应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测抑癌基因ｐ１６外显因子α的突变。研究结果：正常宫颈组织和慢性宫颈炎组织均无ｐ１６基因突变，３０例原发宫颈癌组织有２例ｐ１６基因突变，分别为Ⅲ期１例，Ⅳ期１例，且细胞分化程度均为Ⅲ级。在宫颈癌中ｐ１６基因突变发生率为６．７％（２／３０），提示ｐ１６基因突变率可能随着宫颈癌的进展而增高与细胞分化程度呈负相关，说明Ｐ１６抑癌基因失活在宫颈癌发展中起着一定的作用。     

p16、CyclinD1及nm23在非小细胞肺癌中的表达

目的 研究非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）组织中ｐ１６、Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１及ｎｍ２３基因蛋白的表达和意义。方法 应用免疫组化ＳＰ方法检测６４例ＮＳＣＬＣ中ｐ１６、Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１及ｎｍ２３蛋白的表达。结果 ｐ１６、Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１及ｎｍ２３在ＮＳＣＬＣ中的表达率分别为４２．２％、６５．６％、５３．１％;ｐ１６蛋白阳性表达率与ＮＳＣＬＣ的分化程度和患者术后生存期呈正相关（Ｐ〈０．０５）;ｐ１６、ｎｍ２     

非同位素银染单链构象多态性技术筛查葡萄糖激酶基因突变

目的 建立银染单链构象多态性（ＳＳＣＰ）技术筛查葡萄糖激酶基因点突变，方法 收集１０个ＮＩＤＤＭ家系的１１２例基因组（ＤＮＡ），经多聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增葡萄糖激酶基因第２～１０号外显子，ＳＳＣＰ电泳，硝酸银染色筛查点突变，结果 发现３个家系，９例受试者第５，６号外显子出现异常ＤＮＡ片段条带，经顺序分析证实为第５号内含子１２位碱基Ｃ→Ｇ突变，结论 非同位素ＳＳＣＰ技术是一种简便，经济，快速，准     

全反式维甲酸引起包皮溃疡二例

全反式维甲酸引起包皮溃疡二例臧爱民，赵永强，沈悌例１，男，２９岁，因急性非淋巴细胞白血病Ｍ，型于１９９２年１１月２０日入院。查Ｈｂ９３ｇ／Ｌ，ＲＢＣ２．５６×１０￣（１２）／Ｌ，ＷＢＣ０．６×１０￣９／Ｌ，分类示原粒０．０２，早幼粒０．４７，ＢＰＣ５...