基因治疗血友病B的研究进展

血友病Ｂ为凝血因子Ⅸ (ＦⅨ )基因缺陷导致缺乏凝血因子的Ｘ连锁的出血性疾病。目前治疗血友病以补充ＦⅨ为主。随着科学技术的发展 ,利用病毒载体携带正常的ＦⅨ基因以及适合的启动子和增强子元件到ＦⅨ基因缺陷的患者细胞内 ,使修饰后的细胞能够长期表达有生物功能的ＦⅨ ,从而维持患者循环血液中一定的凝血因子水平 ,最终达到治疗血友病Ｂ的目的 ,这就是目前最有希望治疗血友病Ｂ的基因治疗法。由于血友病Ｂ具有靶细胞的选择范围广、治疗因子适用的表达水平广、具有现成的动物模型及可直接检测治疗效率等优势 ,目前基因治疗已经成为研究…     

血友病B携带者及产前诊断

血友病Ｂ(ＨａｅｍｏｐｈｉｌｉａＢ)又称ｃｈｒｉｓｔｍａｓ病或ＰＴＣ缺乏症 ,是凝血因子Ⅸ (ＦⅨ )缺陷所致的一种严重的遗传性出血性疾病 ,呈Ｘ连锁隐性遗传。其年发病率为三万分之一[1] ,发病原因为编码ＦⅨ基因缺陷 ,导致ＦⅨ含量缺乏或结构异常 ,凝血活性降低 ,从而形成凝血功能障碍。临床以出血为主要表现 ,关节腔和肌肉出血是严重病例的特征性表现。由于目前基因治疗尚处于探索阶段 ,携带者及产前诊断对于提高人口素质 ,减轻家庭、社会负担有重要意义。虽然目前国内外对于血友病Ｂ携带者及产前诊断尚未形成完整体系 ,但随着分子生…     

血友病

１引言血友病（hemophilia）是一组遗传性凝血因子缺乏所致的出血性疾病。血友病A（因子Ⅷ缺乏症）占８０％,血友病B（因子Ⅸ缺乏症）占１５％至２０％,因子Ⅺ缺乏症（血友病）最少见。共同特征为引起活性凝血活酶生成障碍而致出血。２发病机制血友病是遗传性疾病,血友病A、血友病B是X连锁性染色体隐性遗传,如因子Ⅷ经克隆及序列分析,占X染色体长度的０．１,７０％患者有家族史。当X染色体的因子Ⅷ、因子Ⅸ基因发生缺乏、插入等突变,致使因子Ⅷ、因子Ⅸ结构异常或含量减少以至缺乏。约１／３患者无肯定的家族史,可能是X基因自发…     

一期法测定正常人和甲型血友病病人血浆及冷沉淀中FⅧ：C结果分析

一期法测定正常人和甲型血友病病人血浆及冷沉淀中ＦⅧ：Ｃ结果分析１６１００５齐齐哈尔市红十字中心血站孙维萍，陈月，张立建ＦⅧ：Ｃ促凝血活性缺乏可引起甲型血友病［１］。临床上，诊断血友病、监测血友病病人治疗效果及检测凝血因子Ⅷ制剂（如冷沉淀）都需要测定Ｆ...     

缺血性心脏病患者FⅦ基因多态性及其血浆水平研究

１９８０年和１９８５年,Ｍｅａｄｅ等［１］研究证实血浆因子Ⅶ促凝活性（ＦⅦ∶Ｃ）和纤维蛋白原（ＦＩＢ）水平增高是缺血性心脏病（ＩＨＤ）的两个危险因素。１９９１年,Ｇｒｅｅｎ等［２］报道因子Ⅶ（ＦⅦ）基因限制性内切酶ＭｓｐⅠ酶切多态性能够影响血浆ＦⅦ凝...     

变性梯度凝胶电泳检测到四例新的FⅨ基因突变

目的：研究凝血因子Ⅸ的基因突变。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）筛选技术，分析了１２例血友病Ｂ患者ＦⅨ基因的全部８个外显子，剪接区及３′，５′端部分非编码区，并对ＤＧＧＥ行为异常片段进行双脱氧链终止法ＤＮＡ序列分析。结果：发现４例新的基因突变，分别位于ＦⅨ基因第１号外显子Ｔ（ＴＧＴ）１１１Ｇ（ＧＧＴ），导致Ｃｙｓ－１９Ｇｌｙ；第３号内含子剪接位点Ｃ１０３８０Ｔ和第８号外显子Ａ（ＴＡＣ）３０９１８Ｇ（ＴＧＣ），导致Ｔｙｒ２６６Ｃｙｓ；第８号外显子Ａ（ＡＣＧ）３１００７Ｃ（ＣＣＧ），导致Ｔｈｒ２９９Ｐｒｏ。结论：阐明血友病Ｂ的点突变有助于进一步了解ＦⅨ蛋白各功能域的精细功能，并为血友病Ｂ家系携带者检测和产前诊断提供了一个重要的遗传信息。     

凝血因子Ⅸ的研究进展

本文综述了凝血因子Ⅸ的结构与激活，基因多态性和突变，ＦⅨ抗原和活性检测，ＦⅨ基因突变检测以及血友病Ｂ基因治疗的研究进展。     

中晚期胃癌患者中的抗活化蛋白C现象

１９９３年,Ｄａｈｌｂａｃｋ［１］首先发现部分凝血活酶时间（ＡＰＴＴ）不因加入活化蛋白Ｃ（ＡＰＣ）而延长的现象,并称之为抗活化蛋白Ｃ现象（ＡＰＣＲ）。ＡＰＣＲ的主要分子生物学基础是ＦＶ基因点突变（ＦＶＬｅｉｄｅｎ）,致ＰＣ作用位点消失,导致高凝状态［...     

肝细胞癌遗传特性的研究现况

肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,由于早期诊断和基因治疗的需要,研究人员对其遗传的改变作了深人的研究,其遗传背景逐渐得到揭示。在肝癌生成的过程中,许多基因发生了改变,如 ｐ５３基因［１］,甘露糖－６－磷酸／胰岛素样因子２受体（Ｍ６Ｐ／ＩＧＦ２Ｒ）［２］,Ｂ－ｃａｔｅｎｉｎ［３］,视网膜母细胞瘤基因（ＲＢＩ）［４］,编码细胞周期因子依赖性激酶４的１６ ＫＤ抑制因子的基因（ｐ１６ＩＮＫ４Ａ）［５］,腺瘤样息肉病基因（ＡＰＣ）［６］,乳腺癌易感基因２ （Ｂｒｃａ２）［７］,周期因子Ａ基因（ｃｙｃｌｉｎＡ）［８…     

新型凝血酶原复合物中抗A、抗B凝集素效价的分析

新型凝血酶原复合物中抗Ａ、抗Ｂ凝集素效价的分析６１００８１中国医学科学院中国协和医科大学输血研究所余蓉宋宁赵青蓉凝血酶复合物制品（ＰＣＣ）在临床上广泛用于治疗乙型血友病和由肝脏疾患而继发的依赖维生素Ｋ凝血因子（ＦⅡ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ等）的缺乏症，国外对ＰＣ...     

测定凝血因子Ⅷ促凝活性的实验条件优化

凝血因子Ⅷ（ＦⅧ）促凝活性（ＦⅧ∶Ｃ）测定是确诊甲型血友病的主要方法，也是ＦⅧ制品（如冷沉淀、中纯ＦⅧ等）研制、开发和质控不可缺少的手段之一。但ＦⅧ∶Ｃ测定是一个受多种因素影响的实验。笔者参考文献［１，２］的测定方法，并以凝血实验的温育曲线稳定性为指...     

应用多聚酶链反应和双链DNA循环测序对FIX基因点突变的研究

应用多聚酶链反应扩增因子ＩＸ（ＦＩＸ）基因外显子８的４８１ｂｐＤＮＡ片段，并利用双链ＤＮＡ循环测序，对两例血友病乙ＦＩＸ基因缺陷进行了研究。发现这两例都发生在３１１１９位的碱基替换，Ｇ（ＣＧＡ）→Ａ（ＣＡＡ）。该突变为ＦＩＸ基因ＣＧ双核苷酸突变热点，改变了正常ＦＩＸ的结构和凝血功能，因而导致血友病乙。重复点突变的发现，对血友病乙分子缺陷的发病机制研究十分重要。     

多重PCR-SSCP快速检测因子Ⅸ基因突变

遗传性因子Ⅸ (ＦⅨ )缺乏症 ,又称血友病Ｂ是一种Ｘ连锁的隐性遗传病 ,发病率为 1.0 / 10万～ 1.5 / 10万 ,大多数患者主要表现为出血倾向。其发病原因是因为ＦⅨ基因结构发生异常 ,从而导致ＦⅨ质或量发生改变。对血友病Ｂ进行基因诊断 ,不仅可以从分子水平上阐明其发病机制 ,而且有利于产前诊断 ,减少患儿的出血 ,提高人民的健康水平。ＦⅨ基因位于Ｘｑ 2 6 .3～ 2 7.1,全长 34ｋｂ ,由 8个外显子 ,7个内含子以及侧翼序列组成。除了ＰｏｌｙＡ以外 ,已知的基因部位内都能检测到突变 ,且其突变具有多态性[1] 。我们应用多重ＰＣＲ ＳＳＣ…     

云南省三民族人FⅧ基因XbaⅠ限制性片段长度多态性研究

血友病甲是由于凝血因子Ⅷ（ＦⅧ）基因缺陷所致的Ｘ染色体连锁隐性遗传性疾病［１］，ＦⅧ基因定位于Ｘ染色体长臂末端２区８带（Ｘｑ２８）全长约１８６ｋｂ，包括２６个外显子和２５个内含子。目前多利用ＤＮＡ限制性内切酶片段长度多态性（ＲＦＬＰｓ）［２］和可变数...     

C-erbB-2表达、SPF与乳腺癌的预后关系

ｃｅｒｂＢ２又称ｎｅｕ或ＨＥＲ２基因,在１０％～４０％的乳腺癌病人中有扩增［１～３］,其编码为１８５ｋＤａ,具有酪氨酸激酶活性的糖蛋白,位于１７号染色体ｑ２１区带上［４］。有报道ｃｅｒｂＢ２蛋白的过度表达同乳腺癌病人较短期的无复发生存有关,尤其是对腋淋巴结阳性者［２,５,６］。在乳腺癌良性病变及正常乳腺组织中无ｃｅｒｂＢ２基因蛋白表达［７］。由于其与表皮生长因子受体（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＥＧＦＲ）近似（１７０ｋＤａ）［８,９］,人们推断它的过…     

缺凝血因子Ⅸ血浆的质量考察

缺凝血因子Ⅸ血浆＊的质量考察６１００８１中国医学科学院中国协和医科大学输血研究所肖小璞于李和丁卫闻欣周宇赵建阳周红１王海龄过去我国不能普遍开展凝血因子Ⅸ促凝活性（ＦⅨ∶Ｃ）检测的主要原因是，从重症乙型血友病人体内采集血浆非常不易，故难以获得缺凝血因...     

人凝血因子Ⅸ∶Ag酶联免疫测定法的建立

采用抗人凝血因子Ⅸ单克隆和多克隆两种抗体，建立了人凝血因子Ⅸ抗原（ＦⅨ∶Ａｇ）酶联免疫测定法（ＥＬＩＳＡ）。标准曲线相关系数为０．９９３（Ｐ＝０．００１，ｎ＝５），测定范围（６．２５～１００）Ｕ／Ｌ，最低检测量１．５Ｕ／Ｌ；批内及批间变异系数分别为７．２５％和４．７３％，回收率９９．７％；与人血浆中其它蛋白质未见交叉反应。测得２０人份正常人血浆中ＦⅨ∶Ａｇ为（１０２７±１７２）Ｕ／Ｌ，与ＦⅨ促凝活性（ＦⅨ∶Ｃ）测得值比较，差异无显著性（Ｐ＞０．５）。重症乙型血友病人血浆ＦⅨ∶Ａｇ测得值与临床诊断相符。     

斑点金免疫法检测HBsAg

斑点金免疫法检测ＨＢｓＡｇ吴海裘，潘明宽（宁海县人民医院，浙江宁海３１５６００）关键词斑点金免疫法，乙型肝炎表面抗原快速斑点免疫渗滤试验（ＤＩＧＦＡ）是近年来发展起来的一种新技术［１］），１９８９年有人在此技术中用胶体金代替酶制备标记物［２］。国内已...     

IL-6对单核细胞表达组织因子的影响

白介素６（ＩＬ－６）是一种多功能的细胞因子,除涉及感染、炎症等急性期反应外,对Ｔ、Ｂ细胞的发育、骨髓造血细胞增殖均有很重要的作用［１］。自多发性骨髓瘤患者血浆ＩＬ－６水平增高被发现后,又发现ＩＬ－６血浆水平增高还见于弥散性血管内凝血（ＤＩＣ）,并且与ＤＩＣ的严重程度、治疗反应和ＤＩＣ是否伴有脏器损伤有关［２］。由于证实单核细胞表面可表达白介素６受体（ＩＬ－６Ｒ）,而单核细胞又可分泌组织因子（ＴＦ）,ＴＦ在ＤＩＣ和其他血栓形成病变中具有重要作用［３］。本文就ＩＬ－６对外周血单核细胞体外培养中ＴＦ表…     

人源载体pHrnF9介导的凝血因子Ⅸ基因在肠上皮sw480细胞中的表达

本研究探索肠上皮细胞和人源载体pHrnFⅨ用于血友病B基因治疗的可能性。用含人凝血因子Ⅸ（human coagulation factorⅨ，hFⅨ）基因的人源载体质粒pHrnF9转染肠上皮细胞sw480，用RT-PCR检测mRNA的转录，荧光显微镜观察转染效率，ELISA和一期法检测蛋白表达及凝血活性。结果表明：转染后的细胞中有hFⅨmRNA的转录；荧光显微镜观察到48小时转染效率最高；ELISA法测得转染后24小时细胞上清中的hFⅨ蛋白量为（11．34±0．23）ng／（10^6cells·24h），第48小时hFⅨ蛋白量最高，达（29．34±1．00）ng／（10^6cells·24h），转染后72小时降为（12．45±0．15）ng）／（10^6cells·24h）。一期法结果显示转染pHrnF9的sw480细胞分泌的FⅨ有凝血活性，48小时达峰值（6．07±0、17）％／10^6cells，第72小时降至（1．81±0．06）％／10^6cells。结论：肠上皮细胞sw480转染pHrnF9质粒后可表达有凝血活性的hFⅨ，肠上皮细胞有望成为血友病B基因治疗的靶细胞。