用PCR技术评价微量残留白血病细胞体外净化的效果

应用系列稀释法ＰＣＲ技术检测含５％携带ＰＣＲγ基因重排的ＣＣＲＦ－ＣＥＭ株细胞的模拟缓解期白血病骨髓的微量残留白血病细胞，敏感性为１０＾－＾５－１０＾－＾６水平。经ＶＰＬ加ＡＤＭ，Ｖｐ１６，ＶＣＲ联合体外净化１小时，结果显示有３个对数级的杀伤作用。用体外克隆形成培养法观察该联合方案对急性期白血病患者白病祖细胞集落，（ＣＦＵ－Ｌ）及正常骨髓造血干细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ）的抑制作用，ＣＦＵ－ＧＭ存活率     

干扰素－a对慢性粒细胞白血病细胞作用的体外研究

作者通过体外骨髓半固体和长期液体培养（ＬＴＢＭＣ），研究了干扰素－ａ（ＩＦＮ－ａ）对慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）细胞的作用。在半固体琼脂培养体系中，ＩＦＮ－ａ能抑制正常对照和ＣＭＬ患者７天和１０天ＣＦＵ－ＧＭ，而不抑制１４天及其后的ＣＦＵ－ＧＭ。在ＬＴＢＭＣ中，于培养开始只加一次ＩＦＮ－ａ（１０￣２Ｕ／ｍｌ，１０￣３Ｕ／ｍｌ，１０￣４Ｕ／ｍｌ），对非贴壁层细胞数和基质细胞层的形成均无明显影响，但大剂量ＩＦＮ－ａ（１０￣３Ｕ／ｍｌ和１０￣４Ｕ／ｍｌ组）对非贴壁层的ＣＦＵ－ＧＭ抑制明显；每周连续加用ＩＦＮ－ａ（１０Ｕ／ｍｌ，１０￣２Ｕ／ｍｌ，１０￣３Ｕ／ｍｌ），对非贴壁层细胞数和ＣＦＵ－ＧＭ均有抑制作用，而且ＩＦＮ－ａ浓度愈高，贴壁层的形成愈少。上述结果表明：ＩＦＮ－ａ优先抑制晚期ＣＦＵ－ＧＭ，对基质细胞也有一定抑制作用。     

血小板第4因子及四肽AcSDKP的造血保护作用研究

目的了解血小板第４因子（ＰＦ４）和四肽Ｎ乙酰丝天赖脯（ＡｃＳＤＫＰ）对５氟尿嘧啶（５ＦＵ）处理后小鼠体内造血的作用。方法实验鼠用ＰＦ４（４０μｇ／ｋｇ）或ＡｃＳＤＫＰ（４μｇ／ｋｇ）注射２次,间隔６小时,第２次注射后２０小时再注射５ＦＵ（１５０ｍｇ／ｋｇ）。第６,８和１３天时,检查高增殖潜能的集落形成细胞（ＨＰＰＣＦＣ）、红系爆式集落形成单位（ＢＦＵＥ）、粒巨噬系集落形成单位（ＣＦＵＧＭ）、巨核系集落形成单位（ＣＦＵＭＫ）及巨核细胞（ＭＫ）。结果ＰＦ４或ＡｃＳＤＫＰ可促使６～８天的ＨＰＰＣＦＣ以及８天的ＢＦＵＥ和ＣＦＵＧＭ明显增加;ＰＦ４还能促进８天的ＣＦＵＭＫ和ＭＫ增加,但ＡｃＳＤＫＰ则无此作用。结论ＰＦ４和ＡｃＳＤＫＰ虽然对巨核祖细胞的作用不同,但它们均能加速体内ＨＰＰＣＦＣ、ＣＦＵＧＭ和ＢＦＵＥ的恢复,这两种分子有可能具有保护造血细胞抵抗化疗药物杀伤的作用。     

脐血CD_(34)~ CD_(19)~－细胞与体外培养集落的相关性分析

用两种单克隆抗体（单抗）标记脐血造血祖细胞表面抗原（ＨＰＣＡ，ＣＤ＿（３４））用流式细胞仪分析，并比较两种单抗标记的细胞与体外培养的粒单细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ），红系爆式集落形成单位（ＢＦＵ－Ｅ）和混合集落形成单位的相关性，结果表明脐血有核细胞中，抗ＨＰＣＡ－２－ＦＩＴＣ阳性的细胞占１．０５１０．７２％，Ｔｕｋ３（纯抗体）阳性细胞占２．０６±１．２５％，差别显著（Ｐ＜０．０５），每μｌ脐血两种单抗标记的细胞分别为９６．５６±５６．６４和２３１．４０±１６３．９３（Ｐ＜０．０５），变异系数依次为５８．４７％和６８．４３％。尽管抗ＨＰＣＡ－２－ＦＩＴＣ阳性细胞与阳性细胞数量呈显著正相关，但前者与ＣＦＵ－ＧＭ，ＢＦＵ－Ｅ，ＣＦＵ－Ｍｉｘ以及ＣＦＵｓ（ＣＦＵ－ＧＭ＋ＢＦＵ－Ｅ＋ＣＦＵ－Ｍｉｘ）均呈正相关，而后者仅与ＣＦＵ－ＧＭ，ＣＦＵｓ呈正相关。研究结果提示在检测造血祖细胞时，用抗ＨＰＣＡ－２－ＦＩＴＣ代替可降低假阳性，获得较好的细胞与ＣＦＵ间的线性关系。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者T淋巴细胞对造血祖细胞的影响

目的：研究阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者的Ｔ淋巴细胞对造血祖细胞的影响。方法：将ＰＮＨ患者外周血制备的植物血凝素刺激的Ｔ淋巴细胞条件培养液（ＰＨＡＴＣＭ）加入造血祖细胞的培养基中，用于ＰＮＨ患者和正常人骨髓的粒巨噬细胞系集落形成单位（ＣＦＵＧＭ）和红系爆式集落形成单位（ＢＦＵＥ）的培养。结果：在含有初发ＰＮＨ患者的ＰＨＡＴＣＭ培养条件下，ＰＮＨ患者和正常人骨髓ＣＦＵＧＭ和ＢＦＵＥ数明显低于含有正常人ＰＨＡＴＣＭ培养条件下的集落数；在含有好转和治愈的ＰＮＨ患者的ＰＨＡＴＣＭ培养条件下，正常人骨髓ＣＦＵＧＭ和ＢＦＵＥ数增加和恢复到正常范围。结论：初发ＰＮＨ患者的Ｔ淋巴细胞对造血祖细胞的支持作用减弱，治愈的ＰＮＨ患者的Ｔ淋巴细胞对造血祖细胞的支持作用恢复正常     

获得性单纯无巨核细胞性血小板减少性紫癜发病机制的研究

目的研究获得性单纯无巨核细胞性血小板减少性紫癜（ＡＰＡＴＰ）的发病机制。方法患者骨髓单个核细胞（ＭＮＣ）以甲基纤维素培养法测定其ＣＦＵＧＭ,ＣＦＵＥ和ＣＦＵＭＫ。观察去除骨髓中Ｔ细胞和粘附细胞对ＣＦＵＭＫ的影响。患者血清或ＩｇＧ在培养前与正常或自身ＭＮＣ孵育,检测对ＣＦＵＭＫ的体液抑制作用。结果１５例（５３．６％）的发病由于ＣＦＵＭＫ的内在缺陷。３例去Ｔ细胞,２例去单核巨噬细胞后,骨髓巨核细胞集落形成明显增加。６例（２１．４％）血清抑制ＣＦＵＭＫ,此种抑制物来自ＩｇＧ,选择性地针对巨核细胞。２例发病机制未定。结论巨核祖细胞的内在缺陷是ＡＰＡＴＰ的主要发病机制。部分患者可因异常免疫引起。ＭＫＣＳＡ生成的失代偿可能也是一个重要病因。     

HLA相合同胞脐血移植治疗急性髓系白血病成功——国内首例报告

目的 研究脐血移植（ ＵＣＢＴ） 对恶性血液病的根治性治疗; 观察其长期造血重建和移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ） 及移植并发症发生情况。方法 给１ 例急性粒细胞白血病完全缓解期的１１ 岁男性患儿移植ＨＬＡ 配型相合的同胞脐血。预处理选用ＢＵ／ＣＹ 方案（ 马利兰４ ｍ ｇ ·ｋｇ －１ ·ｄ － １ ×４ ,环磷酰胺６０ ｍｇ ·ｋｇ － １ ·ｄ － １ ×２） 。ＧＶＨＤ 预防用环孢霉素Ａ（ＣｓＡ） 。移植有核细胞为０ ．３５ ×１０８／ｋｇ ,ＣＦＵＧＭ １ ．８２ ×１０４／ｋｇ ,ＣＤ３４ ＋ 细胞２ ．０４ ×１０５／ｋｇ 。结果 ＋ １４ 天骨髓显示造血重建;＋ ２１ 天中性粒细胞（ＡＮＣ） ＞ １ ．０ ×１０９／Ｌ;＋ ６０ 天ＤＮＡ 位点检测显示移植物植入成功;＋ １００ 天受者血型由Ｏ 型转为供者血型Ｂ 型。随访３３０ 天,患者情况正常,未发生急、慢性ＧＶＨＤ。结论本例为国内首例异基因脐血移植治疗急性粒细胞白血病获得成功;开展同胞ＨＬＡ 相合脐血移植安全、有效,适合中国国情,值得深入研究。     

基因重组干扰素γ体外对骨髓增生异常综合征患者造血祖细胞的作用

对基因重组干扰素γ（ＩＦＮ－γ）体外对３２例骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）患者造血祖细胞的作用进行了研究，结果如下：①ＭＤＳ患者ＣＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ明显低于对照组，ＣＦＵ－Ｅ减低者占３０／３２例，ＣＦＵ－ＧＭ减低者占３１／３２例。②ＩＦＮ－γ体外可促进ＣＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ数增加，其作用为剂量依赖型，在ＩＦＮ－γ浓度为１００Ｕ／ｍｌ时达最大值。③ＩＦＮ－γ对ＭＤＳ患者ＣＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ的促增殖作用与患者自身集落数有关，在自身集落数正常和稍减低者这种作用最明显，在明显减低者这种作用小甚至为０．④上海和日本二种干扰素作用相似，无显著差异。以上结果提示ＩＦＮ－γ对ＭＤＳ治疗可望产生良好效果。     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒

目的用荧光定量聚合酶链反应（ＦＱＰＣＲ）方法准确地定量检测血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的数量和免疫指标,以指导临床。方法设计合成了ＨＢＶＦＱＰＣＲ诊断试剂盒,以一种完全闭管式的ＰＣＲ和荧光探针杂交技术相结合所产生的实时检测定量ＰＣＲ方法,检测了５３２份临床血清标本。结果经ＦＱＰＣＲ检测,１５８份ＨＢＶ的ｓ抗原、ｅ抗原、ｃ抗体（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ）都阳性的标本,其血清标本ＨＢＶＤＮＡ也全部阳性,平均ＨＢＶＤＮＡ拷贝数为１．１×１０８／ｍｌ;９８例ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ都阳性的标本,其阳性率为７３％（７１例）,平均拷贝数为８．６×１０５／ｍｌ,而常规ＰＣＲ只有３３％的阳性率;６７例ＨＢｓＡｂ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ都阳性标本的平均拷贝数为２．３×１０５／ｍｌ。结论能够避免ＰＣＲ后处理导致的假阳性污染,并实现准确定量。ＦＱＰＣＲ可以检测ＨＢＶ的真实感染和复制情况,对于乙型肝炎的临床诊断,治疗方案的选择和疗效考察有较大的指导意义。     

巨细胞病毒即刻早期基因mRNA检测方法的建立

目的建立快速简便的逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）方法检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）即刻早期（ＩＥ）基因ｍＲＮＡ。方法设计合成跨越ＨＣＭＶＩＥ基因内含子区的一对引物，分别用ＲＴＰＣＲ和ＰＣＲ技术扩增ＨＣＭＶｍＲＮＡ和ＤＮＡ，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定阳性产物。结果ＨＣＭＶＩＥ基因ｍＲＮＡ表达在感染后６小时即可出现，并持续到感染后至少９６小时，ＲＴＰＣＲ检测的最低敏感性为１００ｆｇ总ＲＮＡ，其他病毒和细胞ＲＮＡ不能被扩增。结论ＲＴＰＣＲ技术检测ＨＣＭＶｍＲＮＡ敏感、特异，有望应用于临床作为ＨＣＭＶ活动性感染的早期诊断方法     

人巨细胞病毒感染巨核祖细胞及反义寡核苷酸抗病毒感染作用的研究

目的探讨人巨细胞病毒 (HCMV)对人巨核细胞及其前体细胞的抑制作用及其机制 ,并观察HCMV反义寡核苷酸 (ASON)的抗病毒感染作用。方法在半固体培养基上定向诱导CD34 细胞向巨核细胞分化。用HCMVAD16 9病毒株感染培养的巨核细胞和经ASON预处理的CD34 细胞 ,观察CFU MK形成率的变化 ,分别用PCR、RT PCR法检测CFU MK细胞中HCMV即刻早期蛋白 (IEP)基因DNA和mRNA、即刻早期基因 (UL36 )mRNA表达。用MTT法测定ASON的细胞毒性。结果CD34 细胞在半固体培养基中定向分化为巨核祖细胞。HCMVAD16 9株能明显抑制巨核细胞的体外增殖 ,与灭活病毒组比较 ,三个不同病毒滴度感染组的CFU MK分别减少了 2 1.6 %、33.8%、4 6 .3% ,显示抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系 ;HCMV感染的CFU MK细胞中可检出HCMVIEP基因DNA、IEP基因mRNA和UL36mRNA。 0 .0 8μmol/L的UL36ASON (UL36Anti)能使HCMV感染细胞CFU MK形成率恢复正常 ,与 10 0 0 0TCID50 HCMV感染组比较 (分别为 5 8.2 4± 7.4 2和 31.17± 4 .4 5 ) ,差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,RT PCR未能检出UL36mRNA。而改变UL36Anti中 1个碱基的ASON(MM1) ,浓度只有达到 0 .4 0 μmol/L才能对抗HCMV的作用。MTT结果表明UL36Anti显著影响细胞生长的浓度为 90 .0 0 μmol/L。结     

人巨细胞病毒抑制人巨核系祖细胞增殖的体外研究

目的 探讨人巨细胞病毒（HCMV）对人巨核系祖细胞增殖的影响。方法 收集20份脐血标本,采用巨核系祖细胞体外半固体培养技术,观察HCMV AD169株对巨核细胞集落形成单位（CFU－MK）生长的影响,分别用原位聚合酶链反应（IS－PCR）和RT－PCR检测集落细胞中的HCMV DNA与抑刻早期抗原（IEA）mRNA。结果 HCMV AD169株在体外能明显抑制CFU－MK生长,抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系,经IS－PCR检测发现病毒感染组CFU－MK细胞中有HCMV DNA存在;RT－PCR检测发现病毒感染组CFU－MK细胞中有IEAmRNA的表达。结论 HCMV AD169株可直接感染巨核系祖细胞,并抑制其增殖与分化;HCMV对巨核系祖细胞的直接抑制作用可能是该病毒感染后引起血小板减少的原因之一。     

Selective inhibition of human cytomegalovirus replication by a novel nucleoside, oxetanocin G.

A novel nucleoside with an oxetanosyl-N-glycoside has been recently isolated from a culture filtrate from Bacillus megaterium and named oxetanocin A (N. Shimada, S. Hasegawa, T. Harada, T. Tomisawa, A. Fujii, and T. Takita, J. Antibiot. 39:1623-1625, 1986). In this study, we evaluated the antiherpesvirus activity of oxetanocin A and its derivatives and found that 9-(2-deoxy-2-hydroxymethyl-beta-D-erythro-oxetanosyl)guanine (OXT-G) was very potent and selective in inhibiting the replication of human cytomegalovirus (HCMV) in vitro. The median effective concentration for HCMV strain AD169 was 1.0 microgram/ml, and that for herpes simplex virus type 2 strain 186 was 3.5 micrograms/ml. The selectivity index, based on the ratio of the median inhibitory concentration for cell growth of human diploid fibroblasts to the median effective concentration for HCMV plaque formation, was more than 300. The synthesis of HCMV-induced late polypeptides such as the 150,000-molecular-weight capsid and the 68,000-molecular-weight major matrix proteins was strongly suppressed when OXT-G (5 micrograms/ml) was added to the cultures at the beginning of infection. At this concentration of OXT-G, the amount of HCMV DNA detected in the drug-treated infected cells was less than 1/10 of that detected in the infected control cells. The results suggest that the mode of action of OXT-G is inhibition of viral replication by impairing the viral DNA synthesis.     

人巨细胞病毒感染致造血祖细胞增殖抑制与更昔洛韦的影响

背景:临床研究显示,骨髓移植后人巨细胞病毒感染可阻碍血小板植入、出现表型异常的外周血白细胞,导致骨髓移植失败,这可能是由于人巨细胞病毒感染直接影响了造血祖细胞所致.目的:观察更昔洛韦对人巨细胞病毒感染所致脐血粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞及巨核系祖细胞体外增殖抑制的影响及更昔洛韦对此的保护作用. 设计:对比观察性实验.单位:泸州医学院附属医院分子生物学实验室.对象:正常足月顺产新生儿脐血标本20例,每份10 mL,由泸州医学院附属医院妇产科提供,产妇对本实验知情同意.实验经医院伦理委员会批准.方法:实验于2004-06/2006-12在泸州医学院附属医院分子生物学实验室完成.采用脐血标本造血祖细胞培养技术,观察、计数100 TCID50人巨细胞病毒-AD169感染粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞及巨核系祖细胞后各祖细胞集落数,记录集落维持时间.用PCR和荧光定量PCR技术检测集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA.将7.5 mg/L更昔洛韦作用于人巨细胞病毒感染的造血祖细胞,再分别计集落数、集落维持时间及集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA.设正常培养的造血祖细胞为空白对照组,设与含灭活性人巨细胞病毒的正常造血祖细胞培养系统为灭活对照组.主要观察指标:①祖细胞集落数、祖细胞集落维持时间.②祖细胞集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA. 结果:①集落数和集落维持时间:人巨细胞病毒感染的祖细胞集落数较对照组明显减少(P < 0.01),集落维持时间较对照组明显缩短(P < 0.01).在人巨细胞病毒感染的集落细胞内检测到人巨细胞病毒-DNA的存在;更昔洛韦作用于人巨细胞病毒感染的祖细胞后,与人巨细胞病毒感染的祖细胞比较集落数明显提高,差异有非常显著性意义(P < 0.01) ,集落维持时间明显延长,差异有非常显著性意义(P < 0.05).②集落增殖提高率: 粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞、巨核系祖细胞分别为37.4%,74.2%,40.1%,67.4%,38.9%.③集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA:荧光定量PCR显示更昔洛韦作用于人巨细胞病毒感染的祖细胞后核酸载量较人巨细胞病毒感染的祖细胞降低,差异有非常显著性意义(P < 0.01).结论:人巨细胞病毒-AD169株在体外能明显抑制粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞及巨核系祖细胞集落细胞的增殖;在体外更昔洛韦有抗人巨细胞病毒的活性,能促进人巨细胞病毒感染的造血祖细胞增殖.     

经人巨细胞病毒感染人脐血造血干细胞向粒-巨噬系和红系祖细胞增殖过程中HOXB6-mRNA及其基因表达

背景:造血祖细胞被人巨细胞病毒(HCMV)感染后增殖和分化能力受到抑制是否与受染细胞增殖的基因异常表达有关联?目的:观察经人类巨细胞病毒感染的人类造血干祖细胞向粒-巨噬系、红系祖细胞增殖过程中HOXB6mRNA表达.设计:观察对比实验.单位:泸州医学院附属医院分子生物学实验室.材料:所有脐血标本由泸州医学院附属医院产科提供,取自正常足月顺产新生儿断脐后的胎盘段脐血.所有新生儿母亲HBSAg阴性,常规ELISA检测抗HCMV-IgM及PCR检测HCMV-DNA均为阴性,且对本实验知情同意,实验经过医院伦理委员会批准.HCMV-AD169株由中国预防医学科学院病毒研究所提供.全反式维甲酸(ATRA)为重庆华邦制药股份有限公司产品,批号为20010126.方法:实验于2006-04/2007-04在泸州医学院附属医院分子生物学实验室完成.分离脐血单个核细胞,进行造血祖细胞培养.根据实验干预方式不同将细胞分为4组:[1]对照组:与HCMV组等量的IMDM培养液进行细胞培养.[2]HCMV组:HCMV-AD169滴度为105pfu,以0.1mL感染培养体系.[3]ATRA组:在培养体系分组中加入12μL ATRA,终浓度为60μmol/L.[4]HCMV ATRA组:在HCMV感染组中加入ATRA,终浓度同ATRA组.主要观察指标:分别于培养后3,7,12天收获各组细胞,采用实时荧光定量PCR技术分别检测脐血粒-巨噬系祖细胞和脐血红系祖细胞HOXB6 mRNA表达水平.结果:[1]对照组红系祖细胞和粒-巨噬系祖细胞均表达HOXB6-mRNA,随着时间推移,表达水平增加,其中,脐血红系祖细胞表达HOXB6-mRNA于第12天达高峰,脐血粒-巨噬系祖细胞HOXB6-mRNA于第7天达高峰.[2]HCMV组脐血粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞感染人巨细胞病毒后各时间点HOXB6基因表达均低于对照组,差异有显著性意义(P<0.05).[3]ATRA组各时间点脐血粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞HOXB6-mRNA表达均高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05).[4]HCMV ATRA组各时间点红系祖细胞及粒-巨噬系祖细胞的HOXB6-mRNA表达均高于人巨细胞病毒组,差异有显著性意义(P<0.05~0.01).结论:[1]人类造血干祖细胞向粒单系和红系祖细胞增殖分化过程中,HOXB6-mRNA呈现持续稳定的表达.[2]人巨细胞病毒能使HOXB6基因表达下调.[3]ATRA能上调HOXB6基因的表达.     

New evaluations of circulating granulocyte and macrophage stem cells in healthy adults using conditioned media and recombinant human growth factors

Peripheral human blood contains granulo-monocyte (CFU-GM) and eosinophil (CFU-Eo) progenitors. In vitro, the number of colony forming units is thought to range from 0.1-14 per 2 x 10(5) plated cells. We show that the number of CFU-GM, Eo depends on culture methods. By modifying the usual assay method (using human umbilical cord plasma and the association of 2 stimulating conditioned media: activated lymphocyte conditioned medium and bone marrow fibroblast conditioned medium), we found different circulating CFU-GM, Eo numbers. The mean number of circulating CFU-GM, Eo in 107 healthy adults was 22.4 per 2 x 10(5) plated cells (range: 1-84). There was a slight difference between males (mean number: 23.6) and females (mean number: 20.4). The mean number of CFU-GM, Eo harvested on Percoll gradient was 123/ml of peripheral blood (range: 7-513). These results are far over those commonly reported in literature. This suggests that these latter results were probably underestimated. The use of recombinant human interleukin 3 and recombinant human GM (granulocyte-monocyte) colony-stimulating factors shows that CFU-GM, Eo numbers are found to be comparatively increased compared to that obtained with our modified method (using rhIL-3 alone), or that the size of those colonies is notably increased (using rhIL-3 + rhGM-CSF).     

组胺H2受体阻滞剂阻断再生障碍性贫血患者CD8＋细胞抑制正常…

目的：探讨再生障碍性贫血（再障）患者ＣＤ８＋细胞的组胺Ｈ２受体在造血抑制中的作用。方法：在１７例正常人粒－巨噬细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ）培养体系中分别加入１７例再障患者外周血ＣＤ８＋细胞，再患者外周血ＣＤ８＋细胞＋甲氰咪胍和单加甲氰咪胍。结果：再障患者外周血ＣＤ８＋体外能抑制正常人骨髓细胞ＣＦＵ－ＧＭ的生长，０．５×１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ和１．０×１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ的甲氰咪胍有解除帝种抑制作用。１．     

核黄素光化学法灭活单采血小板中巨细胞病毒的效果评价

目的探讨核黄素光化学法灭活单采血小板中巨细胞病毒的效果及血小板一部分生化和生理学指标的改变。方法将14ml浓度为500μmol／L核黄素加到125ml的单采血小板悬液中,再将一定滴度约6log TCID50／ml的人类巨细胞病毒标准株（HCMV AD169）分别注入上述混悬液中,经265～370nm广谱紫外光（6．2J／m1）照射8～10min后,分别加至人胚肺成纤维细胞（HELF）单层中培养,与对照细胞比较观察细胞病变情况（CPE）,测定其滴度,并观察血小板一部分体外参数的变化情况。结果经浓度50μmol／L的核黄素结合强度为6．2J／ml紫外光照射8～10min,可将滴度为6logTCID50／ml模型病毒的组织培养半数感染量（TCID50）下降至FDA规定的灭活效果标准的下限值（〈0．43logTCID50／ml）。结论核黄素结合紫外光照射可以有效灭活人类巨细胞病毒,而单采血小板的各项生化、生理学指标和阴性对照比较差异均无统计学意义。     

新的人趋化素样因子对骨髓造血干/祖细胞的体外刺激作用

目的　探讨新克隆的人趋化素样因子 (chemokine likefactor 1,CKLF1)对人造血干 /祖细胞的体外刺激作用。方法　分离正常人骨髓单个核细胞 ,进行液体和半固体集落培养 ,研究CKLF1对CFU GM和CFU Mix的作用。结果　加入转染CKLF1质粒上清组的CFU GM集落数明显增多 ,平均值为每 10 5细胞 2 34.81± 98.71,为对照组的 2 .4 2倍 (P <0 .0 5 ) ;CFU Mix平均集落数在正常对照、CKLF1、PHA和GM CSF组分别为每 10 5细胞 82 .0 0± 2 0 .2 5 ,10 5 .76± 36 .70 ,14 6 .6 3± 2 7.0 9和 14 3.33± 6 0 2 3,CKLF1的集落数多且较大 ,但统计学上差异无显著性 ;流式细胞术检测CD3 4 + 细胞百分率 ,正常对照、CKLF1、PHA、GM CSF组分别为 (0 .75± 0 .6 2 ) % ,(1.32± 0 .87) % ,(0 .15± 0 .0 2 ) % ,(0 .2 9± 0 .2 3) % ,与对照组相比 ,各组间差异无显著性。结论　新发现的具有CC家族结构的人趋化素样因子CKLF1对骨髓CFU GM集落的形成具有促增殖作用 ,提示CKLF1对人骨髓造血祖细胞的增殖和集落形成具有促进作用     

应用半巢式核酸荧光定量技术检测肾移植术后人巨细胞病毒感染

目的：建立一种新的用于肾移植术后人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染的快速定量诊断方法,方法：采用半巢式酸荧光寂量技术（ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ）检测已知含量的ＨＣＭＶ－Ａ在６９标准病毒株,无关病毒,无关细菌及临床血标本的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ和质粒标准品,以确定该方法的敏感性,特异性和定量的准确性。结果：对已知含量的标准病毒株的定量检测结果与其已知含量基本一致;无关病毒包括单纯疱疹病毒１型（ＨＳＶ－１）