胰岛素样生长因子1对小鼠成骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

背景：胰岛素样生长因子1是骨形成的调节因子,具有促进有丝分裂、促进成骨等作用。由骨细胞所产生的胰岛素样生长因子1在调节成骨细胞和破骨细胞介导的骨骼重建中起着重要的作用。 目的：观察胰岛素样生长因子1作用后,小鼠成骨细胞的增殖和碱性磷酸酶的表达。 方法：在体外培养的小鼠成骨细胞中分别加入25,50,100及200 μg/L的胰岛素样生长因子1,于培养的第1,2,3,4,5天用Cell Counting Kit-8比色法检测细胞增殖率;用流式细胞仪检测细胞的增殖周期和凋亡率;于培养的第3,6,9天应用酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶活性。 结果与结论：胰岛素样生长因子1质量浓度在25~200 μg/L时,对小鼠成骨细胞的增殖率有明显的促进作用(P < 0.05),且呈明显的浓度依赖效应。当胰岛素样生长因子1质量浓度在200 μg/L时,能明显提高细胞S期所占的比例。说明胰岛素样生长因子1可加速细胞的增殖活动,以保证参与骨改建的成骨细胞数量而促进骨组织再生。同时,胰岛素样生长因子1在25~200 μg/L时,能显著提高细胞内碱性磷酸酶活性(P < 0.05),促进成骨细胞分化。     

小鼠成骨细胞Wnt信号通路相关因子表达与胰岛素样生长因子1的影响

背景：胰岛素样生长因子1可促进细胞增殖、分化,但其具体作用机制尚不清楚。 目的：观察胰岛素样生长因子1对小鼠成骨细胞增殖﹑分化的影响,及Wnt信号通路相关因子mRNA的表达。 方法：向体外培养的小鼠成骨细胞中加入25 μg/L的胰岛素样生长因子1,分别于培养的第1,2,3,4,5天用CCK-8比色法检测细胞增殖率;于培养的第3,6,9天应用酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶活性;细胞培养第3天提取总RNA,采用Real-time RT-PCR检测Wnt-3a,低密度脂蛋白受体相关蛋白5,β-catenin mRNA的表达。 结果与结论：25 μg/L胰岛素样生长因子1能够促进成骨细胞增殖,提高碱性磷酸酶活性,而且明显增加成骨细胞中Wnt-3a、低密度脂蛋白受体相关蛋白5、β-catenin mRNA的表达(P < 0.05)。说明胰岛素样生长因子1能够促进成骨细胞的增殖和分化,Wnt信号通路参与了该调控过程。     

重组人胰岛素样生长因子Ⅰ对成骨细胞的影响*

背景：人胰岛素样生长因子Ⅰ在成骨细胞中含量丰富,与骨密度有密切关系。 目的：观察重组人胰岛素样生长因子Ⅰ对体外培养大鼠成骨细胞的增殖、凋亡及碱性磷酸酶合成的影响。 方法：不同质量浓度重组人胰岛素样生长因子Ⅰ刺激体外培养的大鼠成骨细胞,噻唑蓝法测定活细胞数量;肿瘤坏死因子α单独或与重组人胰岛素样生长因子Ⅰ共同刺激成骨细胞,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,采用对硝基酚磷酸盐法测定细胞裂解液中碱性磷酸酶活性。 结果与结论：与对照组相比,一定剂量的重组人胰岛素样生长因子Ⅰ能明显增加大鼠成骨细胞数量(P < 0.05),在质量浓度为0.1~100 μg/L时,成骨细胞数量的增加与质量浓度呈正相关;肿瘤坏死因子α在0.1~100 μg/L范围内呈剂量依赖性地促进成骨细胞凋亡(P < 0.05),并使S期细胞减少(P < 0.05),而重组人胰岛素样生长因子Ⅰ能抑制肿瘤坏死因子α对成骨细胞的促凋亡作用(P < 0.05);与对照组相比,重组人胰岛素样生长因子Ⅰ刺激的成骨细胞碱性磷酸酶的活性明显增高(P < 0.05)。重组人胰岛素样生长因子Ⅰ对大鼠成骨细胞有明显的促增殖作用,且能明显抑制肿瘤坏死因子α诱导的大鼠成骨细胞凋亡,提示增加成骨细胞数量可能是重组人胰岛素样生长因子Ⅰ促进骨形成的机制之一;重组人胰岛素样生长因子Ⅰ能促进大鼠成骨细胞碱性磷酸酶的合成,提示重组人胰岛素样生长因子Ⅰ有可能促进骨基质的合成和钙化。     

模拟失重与骨组织的细胞凋亡★

背景：空间骨丢失主要表现为成骨细胞、骨细胞活性减弱，而包括Fas蛋白在内的诸多因素可调节成骨细胞、骨细胞的增殖和分化并最终调控骨形成。 目的：观察失重对骨组织中细胞凋亡的影响。 方法：5周龄SPF级雄性SD大鼠36只，随机分为尾吊模拟失重组及对照组。建立大鼠尾吊模拟失重模型，建模后7，14，21 d，使用自动生化仪检测大鼠血清中钙、磷、碱性磷酸酶含量，放射免疫分析法测定骨钙素含量，原位细胞凋亡检测技术检测骨组织中细胞凋亡，免疫组化方法检测骨组织中Fas蛋白含量。 结果与结论：尾吊模拟失重组大鼠血清中碱性磷酸酶、骨钙素含量均显著低于对照组(P < 0.05)，但血钙、磷浓度均较相应对照组升高，骨组织中成骨细胞、骨细胞及骨髓间充质细胞凋亡指数、骨组织中Fas抗原含量均高于相应对照组(P < 0.01)。说明尾部悬吊模拟失重增加骨组织中Fas蛋白表达，从而增加大鼠骨组织中成骨细胞、骨细胞及骨髓间充质细胞凋亡。 关键词：尾吊；模拟失重；生化；骨钙素；细胞凋亡；Fas蛋白     

胰岛素样生长因子1在糖尿病骨折大鼠骨痂组织中对成骨细胞增殖和骨钙素表达的影响☆

背景：有研究表明,糖尿病患者骨折愈合过程中局部骨痂组织胰岛素样生长因子1明显降低,成骨细胞增殖能力下降。 目的：观察以胰岛素样生长因子1治疗糖尿病大鼠骨折愈合过程中骨痂组织成骨细胞增殖和骨钙素表达,分析胰岛素样生长因子1在糖尿病大鼠骨折愈合过程中的作用。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-09/12在昆明医学院动物实验中心完成。 材料：40只SD雄性大鼠,30只腹腔内注射链脲佐菌素破坏胰岛细胞诱导为糖尿病大鼠后,随机分为胰岛素样生长因子1组、胰岛素组、模型对照组,10只为正常对照大鼠,腹腔内注射等容量生理盐水。 方法：4组大鼠右胫骨上段骨折后,胰岛素样生长因子1组用胰岛素样生长因子1治疗,30 μg/kg ,胰岛素组用胰岛素治疗,6~8 U,模型对照组及正常对照组未进行治疗。 主要观察指标：伤后第1,2,4,6周X射线片观察骨折愈合情况,光镜下观察骨痂内成骨细胞数量,免疫组织化学测定血清骨钙素表达。 结果：胰岛素样生长因子1组、胰岛素组X射线片显示骨痂生成量多,骨折愈合程度明显优于模型对照组(P < 0.05),胰岛素样生长因子1组、胰岛素组差异无显著性意义。光镜观察显示,胰岛素样生长因子1组、胰岛素组成骨细胞数量明显多于模型对照组,但低于正常对照组。各组血清骨钙素均呈上升趋势,在第2周达到峰值,第4周下降,至第6周进一步下降。模型对照组骨钙素升高幅度明显低于正常对照组(P < 0.01),并且低于胰岛素样生长因子1组、胰岛素组。胰岛素样生长因子1组、胰岛素组、正常对照组的骨钙素差异无显著性意义。 结论：糖尿病大鼠骨折愈合过程中,用胰岛素样生长因子1治疗可提高骨钙素水平,促进成骨细胞增殖,与胰岛素治疗效果相当。     

锶盐与模拟失重大鼠骨细胞的凋亡

摘要 背景：模拟失重促进成骨细胞、骨细胞凋亡,而锶能降低失重状态下骨组织中成骨细胞、骨细胞凋亡率,促进骨形成。 目的：观察锶盐对失重状态下骨组织中细胞凋亡的防治效应。 方法：5周龄SD大鼠建立失重动物模型,在悬吊前3 d或悬吊时开始以锶盐灌胃。建模后7 d,使用全自动生化仪检测大鼠血清中钙、磷、碱性磷酸酶水平,放射免疫分析法测定骨钙素质量浓度,原位细胞凋亡检测技术检测骨组织中细胞凋亡,免疫组化方法检测骨组织中Fas蛋白水平。 结果与结论：模型组大鼠血清中碱性磷酸酶、骨钙素水平均显著低于相应对照组(P < 0.05),但血钙,磷浓度均较相应对照组升高(P < 0.05),骨组织中成骨细胞、骨细胞及骨髓间充质细胞凋亡指数、骨组织中Fas抗原水平均高于相应对照组(P < 0.01)。悬吊前3 d始及悬吊时始锶盐灌胃组碱性磷酸酶,骨钙素水平均显著高于模型组(P < 0.05),而血钙、骨组织中成骨细胞、骨细胞及骨髓间充质细胞凋亡指数、骨组织中Fas抗原水平均显著低于模型组(P < 0.05)。说明尾部悬吊模拟失重增加骨组织中Fas蛋白表达,从而增加大鼠骨组织中成骨细胞、骨细胞及骨髓间充质细胞凋亡,而锶盐可降低失重状态下大鼠骨组织Fas蛋白表达,从而降低成骨细胞、骨细胞及骨髓间充质细胞凋亡。     

干细胞因子促进牙髓干细胞增殖与骨向分化能力★

背景：干细胞因子作为对干细胞的增殖分化具有一定促进作用的因子，是否影响牙髓干细胞的生物学特性从而在牙齿再生中发挥重要作用尚不清楚。 目的：观察干细胞因子对人牙髓干细胞增殖与骨向分化能力的影响。 方法：采用酶消化法培养因正畸需要拔出的健康人牙的牙髓组织，接种于培养板，加入含1，10 μmol/L干细胞因子的培养液，以正常培养液作为对照。MTT法检测细胞增殖，real-time PCR检测成骨相关基因骨唾液蛋白、骨钙素 mRNA的表达，碱性磷酸酶试剂盒检测碱性磷酸酶活性。 结果与结论：干细胞因子对牙髓干细胞的增殖具有促进作用，干细胞因子上调了骨唾液蛋白、骨钙素mRNA的表达，增强了牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性，且具有随浓度增加促进作用增强的趋势。提示干细胞因子可以促进人牙髓干细胞的增殖及骨向分化能力。     

胰岛素样生长因子Ⅰ和碱性成纤维细胞生长因子对人类牙乳头间充质细胞增殖和分化的影响**☆

背景：研究表明,胰岛素样生长因子Ⅰ和碱性成纤维细胞生长因子对细胞的增殖分化有重要作用,但对人类牙乳头间充质细胞生物学特性有何影响尚不清楚。 目的：观察胰岛素样生长因子Ⅰ和碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人类牙乳头间充质细胞增殖和分化能力的影响。 方法：在建立人类牙乳头间充质细胞培养模型的基础上,①分别用含体积分数为1%或10%胎牛血清的DMEM/F12培养基将两种生长因子配制成不同的实验终浓度,取第4代生长良好的人类牙乳头间充质细胞,分别加入含0,0.1,1,10,100 μg/L碱性成纤维细胞生长因子和0,25,50,75,100 μg/L胰岛素样生长因子Ⅰ的培养基(0 μg/L作对照),培养96 h后四甲基偶氮唑盐法测增殖活性。②设10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子组、100 μg/L胰岛素样生长因子Ⅰ组、碱性成纤维细胞生长因子+胰岛素样生长因子Ⅰ组和对照组。同上述方法每孔分别加含相应质量浓度生长因子的培养液,分别在培养1,3,5,7 d后,四甲基偶氮唑盐法测细胞增殖活性,改良酶动力学法测定细胞碱性磷酸酶活性。 结果与结论：在0~100 μg/L质量浓度范围时,两种生长因子对人类牙乳头间充质细胞增殖具有促进作用,碱性成纤维细胞生长因子的促增殖作用比胰岛素样生长因子Ⅰ大,联合作用时有协同促增殖作用。碱性成纤维细胞生长因子的最大有效质量浓度为10 μg/L,胰岛素样生长因子Ⅰ的最大作用质量浓度为100 μg/L。在0~7 d时,碱性成纤维细胞生长因子对人类牙乳头间充质细胞的碱性磷酸酶活性影响不明显,随时间的增加,胰岛素样生长因子Ⅰ对细胞碱性磷酸酶活性影响增加,与碱性成纤维细胞生长因子联用时,对增加碱性磷酸酶的活性有协同作用。     

雌激素和来曲唑对鸡胚额骨成骨细胞影响的差异比较

背景：雌激素对哺乳动物成骨细胞影响研究较多,但其对禽类成骨细胞的影响还未见报道;来曲唑对骨代谢的不良反应报道较多,但其对成骨细胞的影响还未见报道。 目的：实验创新性为通过观察雌激素、来曲唑对体外培养鸡胚成骨细胞增殖、周期及雌激素受体mRNA 表达和碱性磷酸酶活性的影响,以阐明蛋鸡髓质骨的代谢机制。 方法：取15日龄SPF鸡胚,酶消化法获取鸡胚额骨成骨细胞,分别采用不同质量浓度雌激素(0,5,10,20,100,200,400,800,2 000,20 000 ng/L)和来曲唑(0,5,10,25,50,100,250,500,1 000,5 000 μg /L)处理。以四甲基偶氮唑盐法测定细胞增殖率,以pNPP法测定碱性磷酸酶活性,以流式细胞术测定细胞周期情况,以用实时荧光定量PCR法测定雌激素受体mRNA的表达。 结果与结论：雌激素可促进鸡胚成骨细胞增殖,且具有浓度和时间依赖性,雌激素能诱导成骨细胞雌激素受体mRNA表达,推动细胞周期进程,提高鸡胚成骨细胞碱性磷酸酶活性。来曲唑可促进成骨细胞增殖,推动细胞周期进程,抑制成骨细胞雌激素受体mRNA表达,但来曲唑对碱性磷酸酶的合成与分泌没有明显影响。     

降钙素基因相关肽诱导脂肪干细胞向成骨细胞的分化

背景：已证实降钙素基因相关肽可促进成骨细胞的增殖与分化，并加速骨折的愈合、促进异位骨化的形成，但其是否具有促使脂肪干细胞向成骨细胞定向分化的作用作者未查到相关报道。 目的：探讨降钙素基因相关肽在体外定向诱导脂肪干细胞向成骨细胞增殖分化的可行性。 设计、时间及地点：细胞学体外观察，基因及蛋白质学检测，于2006-10/2007-08在武汉大学医学院中心实验室和三峡大学医学院病理实验室完成。 材料：清洁级4月龄健康新西兰大耳白兔2只。 方法：密度梯度离心+贴壁法体外分离培养兔脂肪干细胞，传至第3代分为2组：对照组加入含10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50 mg/L抗坏血酸、1×10-8 mol/L地塞米松、体积分数为0.15的胎牛血清的RPMI 1640骨诱导培养基，实验组在此基础上加入1 μg/L降钙素基因相关肽进行诱导培养。 主要观察指标：细胞形态学变化，免疫组织化学染色测定细胞碱性磷酸酶活性，四环素标记法检测矿化结节的形成，RT-PCR和Western blot法检测成骨细胞标志性蛋白I型胶原、骨钙素的表达。 结果：实验组脂肪干细胞经成骨诱导培养后，形态规则、多角型细胞增多，细胞倍增时间明显短于对照组。随诱导时间的延长，实验组细胞碱性磷酸酶活性呈增加趋势，诱导7，10，14 d细胞碱性磷酸酶活性均显著高于对照组(t=13.26，P < 0.01)。诱导21 d与对照组比较，实验组形成的金黄色圆形矿化结节数量增多，结节增大。诱导7 d，14 d实验组I型胶原及骨钙素mRNA、蛋白水平的表达均强于对照组。 结论：在体外降钙素基因相关肽能诱导并促进兔脂肪干细胞向成骨细胞方向分化。     

Substance P stimulates late-stage rat osteoblastic bone formation through neurokinin-1 receptors

Substance P (SP) is a widely distributed neuropeptide that works as a neurotransmitter and neuromodulator. Recently, SP receptors, particularly neurokinin-1 receptors (NK(1)-Rs) that have a high affinity for SP, have been observed not only in neuron and immune cells, but also in other peripheral cells, including bone cells. To identify the role of SP in bone formation, we investigated the expression of NK(1)-Rs in osteoblastic cells and the effects of SP on bone formation by rat calvarial osteoblastic cells. Rat calvarial osteoblastic cells were isolated and cultured for 3 weeks in alpha-MEM containing 10% serum, ascorbic acid, dexamethasone, and beta-glycerophosphate. We then investigated NK(1)-R expression, SP effects on osteoblastic bone formation, and osteocalcin mRNA expression in osteoblastic cells. RT-PCR and immunocytochemistry showed that NK(1)-R mRNA was expressed and NK(1)-R was present in 14-day, but not 7-day, cultured calvarial osteoblasts. Bone formation by cultured osteoblastic cells significantly increased after the addition of 10(-8)-10(-6)MSP. During 3 weeks of culture, the addition of SP in the first week did not significantly increase bone formation, whereas adding SP during the first and second week or all 3 weeks significantly increased calvarial osteoblastic bone formation. Furthermore, semi-quantitative RT-PCR indicated that SP stimulated osteocalcin mRNA expression in the osteoblasts at day 14 or day 21, whereas SP did not stimulated the runX2 or type I collagen mRNA expression at day 7 but stimulated them at day 14. These results indicate that SP stimulates bone formation by osteoblastic cells via NK(1)-Rs at late-stage bone formation. These effects were dependent on the expression of NK(1)-R in osteoblastic cells. Our findings suggest that SP secreted from sensory neurons may modulate bone formation after the expression of SP receptors.     

辛伐他汀体内给药对大鼠骨量和骨髓基质干细胞增殖分化的影响**

背景：辛伐他汀对正常大鼠骨代谢及骨髓基质干细胞增殖分化影响的报道目前不多。 目的：观察辛伐他汀体内给药对大鼠骨量和骨髓基质干细胞增殖、分化的影响,及其在此过程中Smad1,2,7 mRNA表达水平的变化。 方法：16只6周龄雌性SD大鼠按体质量随机均分成2组,对照组每天灌胃蒸馏水,实验组灌胃辛伐他汀20 mg/(kg•d),持续9周。于最后一次灌胃的第2天取左侧股骨行骨密度和骨组织形态计量学测定;取右侧股骨和胫骨骨髓基质细胞向成骨方向诱导培养,并采用CCK-8法检测定向成骨分化中的骨髓基质干细胞的增殖能力;细胞培养第16,28天检测碱性磷酸酶比活性、碱性磷酸酶染色阳性细胞比;细胞培养第21天,提取总RNA,采用Real-time RT-PCR检测Smad1,2,7的mRNA表达。 结果与结论：辛伐他汀体内给药干预9周后,大鼠骨量和骨密度无显著变化,体外培养骨髓基质干细胞所有检测基因mRNA水平、细胞增殖能力、细胞外基质矿化能力、碱性磷酸酶比活性、碱性磷酸酶染色阳性细胞比两组间差异均无显著性意义 (P > 0.05)。结果显示20 mg/(kg•d)辛伐他汀体内给药9周对大鼠骨量及骨髓基质干细胞的增殖和分化及Smad1,2,7的表达无显著作用。     

人成骨细胞增殖和分化与生长激素释放肽☆

背景：有研究表明生长激素释放肽对体外培养大鼠成骨细胞增殖有促进作用,但对人成骨细胞增殖和分化是否有影响却少有报道。 目的：探讨生长激素释放肽对人成骨细胞增殖和分化的影响。 方法：取正常成人髂前上棘松质骨,分离出成骨细胞并进行体外培养,应用RT-PCR法检测生长激素促分泌素受体的表达;3H-掺入法检测成骨细胞增殖;Westernblot检测与成骨细胞分化相关的Runx2蛋白表达;α-磷酸奈酚法和放射免疫法观察生长激素释放肽对人成骨细胞分化的影响。 结果与结论：人成骨细胞可表达生长激素促分泌素受体mRNA和生长激素促分泌素受体蛋白。生长激素释放肽促进人成骨细胞增殖(P < 0.05或P < 0.01),且呈剂量依赖性,而且可增加碱性磷酸酶的活性并促进骨钙素的分泌(P < 0.05或P < 0.01),但对人成骨细胞中Runx2蛋白的表达无影响。结果提示,生长激素释放肽能促进人成骨细胞增殖和分化。 关键词：生长激素释放肽;人成骨细胞;细胞增殖;细胞分化;组织构建     

假体磨损颗粒钴铬离子影响成骨细胞增殖及RANKL、骨保护素的表达

背景：金属-金属假体置入体内后可以发生腐蚀或磨损,释放镍、钴、铬、钛等金属离子,诱导局部炎性因子的释放。 目的：观察Co2+、Cr3+对小鼠成骨细胞增殖的影响,以及成骨细胞暴露在Co2+ 、Cr3+条件下RANKL、骨保护素基因的表达。 方法：体外培养成骨细胞,实验分两组,对照组给予生理盐水,离子组给予钴、铬离子干预。 结果与结论：显微镜直接计数法显示干预后1~6 d对照组随时间推移细胞数目显著增加,离子组则增加不明显。共培养24,48 h后,RT-PCR结果显示离子组RANKL、骨保护素基因表达较对照组均增加,以RANKL增加更显著(P < 0.05),RANKL/OPG mRNA的比率也明显增加。提示金属离子对成骨细胞的增殖有显著抑制作用,且可刺激成骨细胞RANKL、骨保护素mRNA的表达。     

脱钙牙基质与成骨细胞的生物相容性**

背景：目前研究最广泛的骨诱导材料为骨诱导蛋白及其载体,但来源有限,制备工艺复杂。脱钙牙基质是一种富含多种骨诱导蛋白及其载体的天然复合产物,被认为是应用前景很大的同种异体骨移植替代材料。 目的：实验将MC-3T3成骨细胞与脱钙牙基质进行联合培养,通过测定成骨细胞的增殖情况和碱性磷酸酶活力评估脱钙牙基质的生物相容性。 设计、时间及地点：随机分组设计,对比观察实验,于2007-11/2009-05在兰州大学口腔医学院和广州市荔湾区口腔医院完成。 材料：脱钙牙本质基质由深圳市创博生物制品发展有限公司提供;羟基磷灰石由南京埃普瑞纳米材料有限公司提供。 方法：将羟基磷灰石和脱钙牙基质粉末各0.1 g加入24孔板,每种样品平均3孔,加入对数生长期MC-3T3成骨细胞,培养2,4,6 d 后,采用MTT法计算细胞增殖数,采取酶联免疫法检测细胞碱性磷酸酶活性。 主要观察指标：脱钙牙基质对成骨细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响。 结果：脱钙牙基质组细胞增殖数明显高于羟基磷灰石组,随培养时间延长各组细胞碱性磷酸酶活性都有所增加,脱钙牙基质组碱性磷酸酶活性高于羟基磷灰石组,差异有显著性意义(P < 0.05)。 结论：脱钙牙基质能够提高成骨细胞的黏附和增殖能力,促进成骨细胞的生长,具有较好的生物相容性。 关键词：脱钙牙基质;羟基磷灰石;成骨细胞;骨诱导活性 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2009.47.020     

不同质量浓度神经肽培养正常人成骨细胞的增殖活性

背景：大量的研究表明神经因素可调节骨代谢,迄今为止已发现5种神经肽参与骨代谢过程。 目的：进一步验证神经肽类物质对培养的正常人成骨细胞主要生物学行为的影响。 方法：分别以0.02,0.1,1 mg/L 3种质量浓度的降钙素基因相关肽、血管活性肠肽、物质P、神经肽Y、去甲肾上腺素、骨形态发生蛋白作用于成骨细胞,通过噻唑蓝法比较不同因子的效应、同一因子不同质量浓度的作用以及骨形态发生蛋白与其他5种因子复合后的效应。 结果与结论：5种神经肽类物质及骨形态发生蛋白均能促进成骨细胞的增殖,其中神经肽Y效应最强。并且除了骨形态发生蛋白外,其余5种因子的效应均与剂量成反比。结果提示,5种神经肽类因子及骨形态发生蛋白均能不同程度地促进成骨细胞活性,这从一个侧面对某些肽类物质促进成骨的现象做出了解释。     

转染血管内皮生长因子基因的人成骨细胞增殖及其生物学功能

背景：传统的自体或异体骨移植治疗骨缺损都存在难以克服的缺点,基因治疗可能是一种新途径。 目的：观察转染外源性血管内皮生长因子基因的人成骨细胞体外生物学特性。 设计、时间及地点：对比观察，细胞学实验，实验于2005-05/2006-05在辽宁医学院科学实验中心完成。 材料：人髂骨骨块取自需髂骨植骨的颈椎病患者的植骨块修洁剩余部分的骨质，患者知情同意。质粒pCDI/VEGF121为北京大学人类疾病治疗中心马大龙教授惠赠；感受态大肠杆菌DH5a为辽宁医学院刘丹平教授惠赠。 方法：体外分离和培养人成骨细胞。实验分为血管内皮生长因子基因转染组与对照组。利用阳离子脂质体将pCDI-VEGF121真核表达质粒导入体外培养的人成骨细胞。 主要观察指标：传代后1，3，5，7 d观察血管内皮生长因子在人成骨细胞内的表达，及其对人成骨细胞增殖活力和细胞分泌骨钙素和碱性磷酸酶能力的影响。 结果：pCDI-VEGF121真核表达质粒转染人成骨细胞后第3，7天，以反转录聚合酶链反应方法检测到其中有血管内皮生长因子mRNA表达。转染组的细胞数在第1，3，5，7天均高于对照组(P < 0.05或P < 0.01)。培养3 d时转染组成骨细胞的碱性磷酸酶阳性率大于对照组(P < 0.01)；转染组的骨钙素含量高于对照组(P < 0.05或< 0.01)。 结论：血管内皮生长因子基因转染可以促进体外培养人成骨细胞的增殖能力和相应的生物学功能。     

胶原-纳米羟基磷灰石复合支架的细胞相容性

背景：观察成骨细胞在生物材料上的形态、增殖和分化等项目,可评估生物支架材料的生物相容性。 目的：观察复合支架材料纳米羟基磷灰石/胶原对成骨细胞增殖、分化的影响。 方法：取新生24 h内Wistar大鼠的颅盖骨,采用改良胶原酶消化法进行成骨细胞原代培养,取第3代细胞与纳米羟基磷灰石/胶原支架或普通羟基磷灰石材料体外复合培养。培养3,6,9 d后,观察材料周边的细胞形态及支架材料对细胞分化、增殖的影响。 结果与结论：纳米羟基磷灰石/胶原材料较普通的羟基磷灰石材料更有利于成骨细胞的黏附、生长、分化、增殖,证实其生物相容性更好,有望成为一种新型的骨组织工程支架材料。     

大鼠成骨细胞的原代培养和鉴定

背景：组织工程需要大量的种子细胞,成骨细胞已成为骨组织工程构建的重要种子细胞之一。但成骨细胞取材困难,获得的成骨细胞的纯度不一。 目的：建立大鼠新生乳鼠颅骨来源成骨细胞的分离培养纯化方法,观察颅骨来源成骨细胞生物学特点。 方法：采用二次酶消化法对SD大鼠乳鼠成骨细胞进行原代培养,扩增。通过差速贴壁法进行成骨细胞纯化。通过形态学、细胞碱性磷酸酶检测、茜素红染色、钙结节Von kossa法染色、超微结构以及细胞增殖曲线,确定其增殖与成骨活性。 结果与结论：二次酶消化法培养颅骨来源成骨细胞可获得原代细胞增殖,传代扩增细胞具有典型成骨细胞形态学和生物学活性。碱性磷酸酶、茜素红染色、钙结节Von kossa法染色均呈阳性结果。超微结构显示为高分化功能活跃成骨细胞,细胞增殖曲线显示细胞生长活跃。提示,新生SD大鼠颅骨来源成骨细胞具有良好的增殖与成骨活性,能连续传代增殖,纯度高,细胞生物学特征稳定,适用于做体外实验研究。     

脐带间充质干细胞向成骨细胞分化的潜能

背景：人脐带间充质干细胞含量丰富,较为原始,分化能力强,免疫原性低,是细胞治疗的理想靶细胞。 目的：体外分离培养脐带间充质干细胞并将其定向诱导为成骨细胞。 方法：无菌条件下培养脐带间充质干细胞,分为诱导组和对照组,诱导组用成骨诱导液处理、对照组为干细胞培养液处理。倒置光显微镜观察细胞形态,MTT法测细胞增殖,荧光双染法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞周期与细胞表面标记。诱导后：检测碱性磷酸酶,Von Kossa染色分析钙盐沉积,RT-PCR检测骨桥蛋白基因、碱性磷酸酶、骨唾液蛋白mRNA的表达。 结果与结论：传代细胞形态稳定、活力好,高标达CD44。诱导后von Kossa染色表现为阳性。碱性磷酸酶活性诱导组比对照组高(P < 0.05),不同时间点比较21 d最高(P < 0.05)。RT-PCR显示：诱导组21,28d 碱性磷酸酶mRNA表达均较与对照组增强(P < 0.05)。诱导组有骨唾液蛋白和骨桥蛋白基因mRNA表达。提示,人脐带间充质干细胞能够定向分化为成骨细胞。