高钾离子引起PC12细胞内游离Ca2+浓度升高的机制

目的：分析高钾离子（Ｋ＾＋）引起ＰＣ１２细胞内游离钙离子浓度（［Ｃａ＾２＋］ｉ）升高的可能机制。方法：利用ＭｉｒａＣａｌ Ｉｍｉａｇｅ Ｓｙｓｔｅｍ检测［Ｃａ＾２＋］ｉ，Ｃａ＾２＋荧光探针为Ｆｕｒａ－２／ＡＭ。结果：（１）ＫＣ１浓度为３０￣１００ｍｍｏｌ／Ｌ时，可剂量依赖性地诱导ＰＣ１２细胞［Ｃａ＾２＋］ｉ升高；（２）在细胞外无Ｃａ＾２＋时，高Ｋ＾＋对ＰＣ１２细胞［Ｃａ＾２＋］ｉ无影响；（３）Ｌ－     

TMB-8对去甲肾上腺素BHQ引起新生大鼠单个脑细胞内游离钙增高的影响

应用ＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ阳离子测定系统，研究ＴＭＢ－８对体外新生ＳＤ大鼠单个脑细胞内游离钙的抑制作用及其机制。结果表明，在无细胞外钙情况下，静息［Ｃａ２＋］ｉ为７９±１３ｎｍｏｌ·Ｌ－１。ＴＭＢ－８１０，３０μｍｏｌ·Ｌ－１能明显降低静息［Ｃａ２＋］ｉ。ＴＭＢ－８１００μｍｏｌ·Ｌ－１对高钾去极化引起的［Ｃａ２＋］ｉ显著增高无明显影响。在细胞外钙为１．３ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，去甲肾上腺素诱导的细胞内［Ｃａ２＋］ｉ升高可部分被ＴＭＢ－８抑制；ＴＭＢ－８（３０μｍｏｌ·Ｌ－１）对ＢＨＱ引起的［Ｃａ２＋］ｉ的升高无明显抑制作用。而当细胞外液［Ｃａ２＋］ｉ为０时，ＴＭＢ－８几乎完全抑制了去甲肾上腺素和ＢＨＱ的作用。提示ＴＭＢ－８降低脑细胞内游离钙的作用机制是通过促使细胞内钙进入肌浆网以抑制内钙的释放，并通过饱和肌浆网内Ｃａ２＋间接地阻滞细胞膜钙通道     

环境致癌物阻断NIH3T3细胞间隙连接通讯与细胞内游离钙离子…

选用环境致癌物芥子气、苯并（ａ）芘（Ｂ（））、４－硝基喹啉－１一氧化物、二甲基亚硝胺、环磷酰胺、雌二醇、四氯化碳，作用于该细胞１２ｈ后，用划痕标记染料示踪技术检测其对该细胞间隙连接通讯功能的阻断作用，同时测定该细胞内的［Ｃａ＾２＋］ｉ的变化，结果表明，环境致癌物阻断细胞ＧＪＩＣ与［Ｃａ＾＋］ｉ变化密切相关。     

成年大鼠脑细胞内钙的测定

目的：探讨成年大鼠脑细胞分离及其细胞内钙（［Ｃａ２＋］ｉ）的测定。方法：低浓度胰蛋白酶消化及机械吹打等方法分离脑细胞，以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ为Ｃａ２＋－敏感的荧光指示剂，应用荧光分光光度计测定［Ｃａ２＋］ｉ。结果：分离的脑细胞存活率在９５％以上，在细胞外Ｃａ２＋１ｍｍｏｌ／Ｌ的情况下［Ｃａ２＋］ｉ为（２７０±３５）ｎｍｏｌ／Ｌ，高钾使［Ｃａ２＋］ｉ急剧增加。结论：本方法分离成年大鼠脑细胞简单、可靠，且能准确反映［Ｃａ２＋］ｉ的变化。     

糖皮质激素对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞内游离钙浓度的快速影响

目的：探讨糖皮质激素（ＧＣ）快速抑制肾上腺髓质嗜铬细胞（ＡＭＣＣ）受刺激后分泌的机制。方法：用Ｆｕｒａ－２作Ｃａ＾２＋指示剂，观察ＧＣ对乙酰胆碱（ＡＣｈ）刺激引起的ＡＭＣＣ内游离钙（［Ｃａ＾２＋］ｉ）浓度升高的影响，并用放射免疫方法测定了ＧＣ对ＡＣｈ刺激后ＡＭＣＣ的环核苷酸含量的影响。结果：ＧＣ对ＡＣｈ引起的ＡＭＣＣ的［Ｃａ＾２＋］ｉ升高有快速抑制作用，但对ＡＣｈ刺激引起的环核苷酸含量升高无明显作     

外源性神经节苷脂GM3对Ca^2^＋—ATP酶及红细胞浆Ca^2^＋—浓度…

研究神经节苷脂ＧＭ３（简称ＧＭ３）对部分纯化的人红细胞膜Ｃａ＾２＾＋－ＡＴＰ酶的作用和对完整兔红细胞浆［Ｃａ＾２＾＋］的影响。结果表明：外源性ＧＭ３对Ｃａ＾２＾＋－ＡＴＰ酶的作用呈浓度依赖性双相调节，即浓度为１－６．５μｍｏｌ／Ｌ时抑制酶活性，浓度大于６．５μｍｏｌ／Ｌ时激活酶活性，ＧＭ３不影响钙调素（ＣａＭ）对酶的激活；ＧＭ３对兔红细胞浆［Ｃａ＾２＾＋］也呈浓度依赖性双相调节即在ＧＭ３浓度低于６     

蛋白磷酸酶抑制剂对人成神经细胞瘤细胞钙瞬态的影响

应用荧光倒置显微镜系统,分别检测了蛋白磷酸酶ＰＰ－２Ａ和ＰＰ－１抑制剂岗田酸（Ｏｋａｄａｉｃａｃｉｄ,ＯＡ）和ＰＰ－２Ｂ抑制剂三氟吡拉嗪（Ｔｒｉｆｌｕｏｐｅｒａｚｉｎｅ,Ｔｒｉ）处理的人成神经细胞瘤细胞（ＳＨ－ＳＹ５Ｙ）胞浆钙瞬态变化。结果发现：１ｎｍｏｌ／ＬＯＡ抑制ＰＰ－２Ａ时,胞浆游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）瞬时波动明显增强,［Ｃａ２＋］ｉ在２０ｍｉｎ内逐步轻微升高,后逐渐回复;而用１００ｎｍｏｌ／ＬＯＡ同时抑制ＰＰ－２Ａ和ＰＰ－１时,则引起［Ｃａ２＋］ｉ即刻持续升高,并同时伴有［Ｃａ２＋］ｉ瞬时波动明显增强;用１００μｍｏｌ／ＬＴｒｉ抑制ＰＰ－２Ｂ时,则引起［Ｃａ２＋］ｉ即刻持续升高,［Ｃａ２＋］ｉ瞬时波动没有明显变化。提示：蛋白磷酸酶降低可能通过钙瞬态变化而参与Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病（ＡＤ）的发病过程。     

创伤后活化T细胞内游离钙,钙调素,钙调素依赖的蛋白激酶…

研究了创伤小鼠活化Ｔ细胞内游离钙浓度（［Ｃａ＾２＋］ｉ）、钙调素（ＣａＭ）、钙调素依赖的蛋白激酶（ＣａＭ－ＰＫ）活性的变化及其与Ｔ细胞功能之间的关系。结果显示，创伤后活化Ｔ细胞内［Ｃａ＾２＋］ｉ降低，且这一变化同创伤小鼠Ｔ细胞白介素２（ＩＬ－２）ｍＲＮＡ、ＩＬ－２受体α（ＩＬ－２Ｒα）ｍＲＮＡ水平降低，ＩＬ－２生成减少，ＩＬ－２Ｒα表达受抑，Ｔ淋巴细胞转化（ＴＬＴ）降低密度相关。创伤后活化Ｔ细胞内     

钙拮抗剂TMB-8抑制BHQ,NE和KCl引起的培养乳牛基底动脉单个平滑肌细胞内游离钙的升高

用ＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ阳离子测定系统,测量单个细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）,研究８－（Ｎ,Ｎ－二乙胺）－ｎ－辛基－３,４,５－三甲氧基苯甲酸酯（ＴＭＢ－８）对培养乳牛基底动脉平滑肌［Ｃａ２＋］ｉ的作用。在细胞外钙浓度为１．３ｍｍｏｌ·Ｌ－１时,Ｔ...     

颅通定对烧伤早期大鼠心室肌细胞的保护作用

目的：探讨中药颅通定对烧伤早期心室肌细胞保护作用物机理。方法：应用Ｃａ＾２＋荧光控针及ＥＰＣ－９光电联合检测系统测定烧伤早期大鼠心室肌细胞胞浆Ｃａ＾２＋浓度变化及颅通定对其影响。结果：烧伤对照组心室肌细胞于伤后１小时胞浆Ｃａ＾２＋浓度明显升高,６小时达高峰,１２小时后渐恢复。正常对照组及颅通定治疗组（浓度：３００μｍｏｌ／Ｌ）心室肌细胞胞浆Ｃａ＾２＋浓度未见明显升高。结论：颅通定可显著抑制烧伤早期大鼠心室肌细胞内Ｃａ＾２＋超载。     

利用培养乳鼠心肌细胞建立缺血再灌注损伤实验模型的探讨

利用培养乳鼠心肌细胞，复制缺血再灌注损伤模型，通过观察细胞三磷酸腺苷（ＡＴＰ）、细胞内钙离子（［Ｃａ＾２＋］ｉ）、脂质过氧化物（ＬＰＯ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）及心肌细胞扫描电镜变化，发现：①缺血３ｈ培养液中ＬＤＨ及［Ｃａ＾２＋］ｉ、ＬＰＯ轻度上升，ＡＴＰ耗竭明显，细胞严重水肿；②再灌注早期ＬＤＨ、［Ｃａ＾２＋］ｉ及ＬＰＯ急剧增加，ＡＴＰ含量逐渐升高，再灌注１ｈ细胞水肿减轻。结果提示：①在常温、缺氧     

粉防己碱抑制心肌细胞[Ca^2＋]i的瞬间变化

用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ做荧光指示剂，测量粉防己碱对电刺激诱导的〔Ｃａ＾２＋〕ｉ瞬间变化的作用。粉防己碱３－１００μＭ浓度和时间依赖性地抑制电刺激诱导〔Ｃａ＾２＋〕ｉ的瞬间变化幅度，而没有影响静息〔Ｃａ＾２＋〕ｉ水平。该浓度的粉防己碱抑制ＫＣｌ除极化所致的细胞〔Ｃａ＾２＋〕ｉ增加。高浓度的粉防己碱（６０￣１００μＭ）明显延长〔Ｃａ＾２＋〕ｉ衰减的时间，也减少Ｃａｆｆｅｉｎｅ诱导〔Ｃａ＾２＋〕ｉ瞬间变化     

大枣中性多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

目的研究大枣中性多糖（ＪＤＰ－Ｎ）对小鼠脾细胞增殖作用及其对刀豆素Ａ（ＣｏｎＡ）活化脾细胞内游离Ｃａ２＋浓度 （［Ｃａ２＋］ｉ）的影响。方法采用ＭＴＴ法测定脾细胞增殖程度,用激光扫描共聚焦显微镜技术测定细胞内［Ｃａ２＋］ｉ。结果 ＪＤＰ－Ｎ能促进小鼠脾细胞自发增殖反应和混合淋巴细胞培养反应,但对经ＣｏｎＡ活化、ＩＬ－２诱导的脾细胞无促进增殖 作用,且对ＣｏｎＡ活化的脾细胞内［Ｃａ２＋］ｉ无影响。结论ＪＤＰ－Ｎ仅对未活化的小鼠脾细胞有促进增殖作用。     

肿瘤坏死因子受体实验研究

应用本室制备的肿瘤坏死因子生物素（ＴＮＦＢ），藉ＡＢＣ法对几种肿瘤细胞坏死因子受体（ＴＮＦＲ）进行定位分析，结果与文献报道的放射受体结合分析法一致，３株胃癌细胞ＴＮＦＲ存在情况与ＴＮＦ对这３株胃癌细胞的抑制率相吻合。应用荧光分光光度法测定胃癌细胞内游离钙浓度（［Ｃａ＾２＋］ｉ），ＴＮＦ可引起胃癌细胞ＦＧＣ－８５的［Ｃａ＾２＋］ｉ急性升高，提示ＴＮＦ对［Ｃａ＾２＋］ｉ有明显影响。     

血管紧张素Ⅱ对培养心肌细胞自发性收缩及［Ca~（2＋）］_i瞬间变化的影响

应用倒置显微镜闭路电视系统及Ｃａ（２＋）敏感的荧光指示剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ的方法，记录培养心肌细胞的自发性收缩及［Ｃａ（２＋）］ｉ，瞬间变化，结果发现：应用血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ，１０－１０００ｎｍ０１／Ｌ）５ｍｉｎ后，心肌细胞收缩频率增加，分别增加了５５％，８３％及１０７％，但同样浓度的ＡｎｇⅡ引起细胞边缘运动的速度减少。ＡｎｇⅡ１０，１００ｎｍｌ／Ｌ引起［Ｃａ（２＋）］ｉ瞬间变化最大值的明显增加，分别增加了１６％和３７％。但对［Ｃａ］ｉ（２＋）瞬间变化的基线水平没有明显的影响。结果提示：１．ＡｎｇⅡ增加心肌细胞搏动频率与增加细胞内游离Ｃａ（２＋）有关；２．ＡｎｇⅡ对心肌细胞收缩及［Ｃａ（２＋）］ｉ瞬间变化的作用可能关系到其影响Ｃａ（２＋）内流或细胞内Ｃａ（２＋）释放的机制，３．ＡｎｇⅡ减少心肌细胞收缩速度的机制值得进一步研究。     

粉防己碱对实验性胸膜炎的防治作用的研究

角叉菜胶（Ｃａｒｒａｇｅｅｎｉｎ，Ｃａｒ）致大鼠胸膜炎后８ｈ，胸膜腔渗出液中中性白细胞游离钙浓度（Ｎｅｕ［Ｃａ＾２＾＋］ｉ）升高，中性白细胞钙调素活性（Ｎｅｕ－ＣａＭＡ）增强，粉防己碱（Ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ，Ｔｅｔ）（１０－８０ｍｇ．ｋｇ＾－＾１）于致炎前３０ｍｉｎ和致炎后４ｈ给大鼠灌胃可明显减少炎症胸膜腔渗出液量，蛋白渗出量和白细胞游出数，同时能降低Ｎｅｕ［Ｃａ＾２＾＋］ｉ和Ｎｅｕ－ＣａＭＡ；     

槲皮素对血小板激活时胞浆游离钙的影响

采用钙荧光指示剂Ｑｕｉｎ－２定量测试法观察了槲皮素对血小板胞浆内游离钙浓度的影响。结果发现，槲皮素２５￣４００μｍｏｌ／Ｌ能剂量依赖性地抑制凝血酶引起的血小板胞浆游离钙［Ｃａ＾２＋］ｉ的升高（ＩＣ５０和９５％可信区间为７８．５（４９．５￣１２４．４）μｍｏｌ／Ｌ）；但不能抑制同等剂量凝血酶所引起的胞内贮存钙的释放；抑制钙内流可能是槲皮素抑制血小板聚集和［Ｃａ＾２＋］ｉ升高的机制。     

内皮素-1对成纤维细胞内游离钙的影响

目的研究内皮素（ＥｎｄｏｔｈｅｌｉｎＥＴ）对成纤维细胞（ＨＬＦ）内钙离子浓度（［Ｃａ＋２］ｉ）的影响及维拉帕米（Ｖｅｒ）对ＥＴ促［Ｃａ＋２］ｉ效应的阻断作用。方法采用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ钙荧光指示剂测定ＨＬＦ细胞内Ｃａ＋２浓度。结果ＥＴ在很短时间内即可明显提高ＨＬＦ细胞内Ｃａ＋２浓度（Ｐ＜０．０１～０．００１）。并且在细胞外液无Ｃａ＋２存在情况下，亦可提高［Ｃａ＋２］ｉ，且有明显的量效关系（Ｐ＜０．０５～０．０１）。同时，Ｖｅｒ对ＥＴ的上述作用具有显著的作用（Ｐ＜０．０５）。结论ＥＴ对Ｖｅｒ的调控作用是通过［Ｃａ＋２］ｉ转运而产生的。     

黄腐酸和超氧阴离子对软骨细胞内钙离子浓度的影响

目的：为探讨病区黄腐酸（ＦＡ）和活性氧自由基可能引起大骨节病，我们测定了在ＦＡ和超氧自由基（）作用下，软骨细胞内钙离子浓度（［Ｃａ￣（２＋）］ｉ）随时间的变化。方法：应用萤光指示剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ测定细胞内钙离子浓度并用下式计算：［Ｃａ￣（２＋）］ｉ＝Ｋｄ（Ｆ－Ｆ＿（ｍｉｎ））／（Ｆ＿（ｍａｘ）－Ｆ）。结果：作用４５ｍｉｎ后，［Ｃａ￣（２＋）］ｉ从１．６２×１Ｏ￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ升达１．１８×１０￣（－６）ｍｏｌ／Ｌ；ＦＡ作用４ｈ后，［Ｃａ￣（２＋）］ｉ从３．７８×１０￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ升达５．５１×１０￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ。结论：说明ＦＡ与·有相似的促进［Ｃａ￣（２＋）］ｉ升高的作用，［Ｃａ￣（２＋）］ｉ的升高将造成软骨细胞损伤，而软骨坏死是大骨节病的重要病理特症之一。     

应用Fura-Ⅱ/AM检测大鼠多形核中性粒细胞内游离钙浓度

应用ＦｕｒａⅡ技术，检测大鼠无菌性炎症时腹腔多形核中性粒细胞（ＰＭＮ）内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）及中药锦灯笼苦味素Ｂ对其影响。结果：在静息状态下，ＰＭＮ内［Ｃａ２＋］ｉ为（３１９４３±１８９０５）ｎｍｏｌ／Ｌ，酵母多糖激活可使［Ｃａ２＋］ｉ成倍增加，两者相比Ｐ＜００５。中药可抑制［Ｃａ２＋］ｉ增加。各组之间差异显著（Ｐ＜００５）。并探讨了ＦｕｒａⅡ检测ＰＭＮ内［Ｃａ２＋］ｉ的可行性及证明中药可抑制［Ｃａ２＋］ｉ。