新的癫痫相关基因的筛选及部分cDNA序列的分离鉴定

用mRNA差异显示技术从大鼠癫痫状态的海马分离了20个cDNA差异片段，对4个cD-NA片段进行序列分析并在基因库中进行相同性比较，发现ERG8、ERG11、ERG12无相同性序列，ERG14与鼠的微管相关蛋白基因有64％～69％的相同性。由于这些基因的差异表达是致痫剂马桑内酯和抗痫剂MK－801所致，所以，ERG8可能是新的候选癫痫基因，ERG11和ERG12可能是新的候选抗痫基因；由于微管相关蛋白高表达与惊厥条件下海马苔藓纤维侧枝出芽关系密切，因此，ERG14在癫痫早期高表达可能预示着新的轴突生长和突触形成。     

前列腺癌细胞雄激素受体基因CAG重复序列改变的初步研究

目的 了解前列腺癌细胞雄激素受体（ＡＲ）基因ＣＡＧ重复序列有否改变。方法 显微镜下分别取１１例前列腺癌标本的肿瘤细胞及非肿瘤细胞，提取ＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增后，用变性胶电泳测得肿瘤细胞和非肿瘤细胞ＤＮＡ含ＡＲ基因ＣＡＧ重复序列片段的相对长度。结果 有３例（２７．３％）前列腺癌细胞ＡＲ基因ＣＡＧ重复序列较非肿瘤细胞短。其余８例前列腺癌细胞ＡＲ基因ＣＡＧ重复序列与非肿瘤细胞相同。结论 一些病例的前列腺癌     

从K562细胞中克隆新的锌指蛋白cDNA基因的初步研究

采用５＇加端ＰＣＲ从Ｋ５６２ｃＤＮＡ文库中扩增出含锌指结构域的ｃＤＮＡ基因片段，重组至ｐＧＥＭ７ＺＤＮＡ载体中。通过ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交初步从Ｋ５６２ｃＤＮＡ文库中筛选出９个含锌指基因片段的重组克隆。经ＤＮＡ序列分析和基因库检索，发现有２个克隆的序列与巳知基因差异显著，有可能为新的锌指蛋白基因片段。     

人脑胶质细胞来源神经营养因子基因的克隆及测序

为研究人脑胶质细胞来源的神经营养因子（ｇｌｉａｌｃｅｌｌｌｉｎｅ ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ, ＧＤＮＦ） 在神经系统疾病中的作用,根据ＧＤＮＦ 的ｃＤＮＡ 序列设计并合成引物,以流产胎儿脑组织为来源,分别提取ＲＮＡ 和基因组ＤＮＡ 作模板,经ＲＴ ＰＣＲ 和ＰＣＲ 技术扩增人ＧＤＮＦ 基因片段,采用ＤＮＡ 重组技术将其克隆于ｐＧＥＭ Ｔ Ｅａｓｙ 载体中并测序。结果：ＲＮＡ 和基因组ＤＮＡ 体外扩增得到的片段均是４１０ ｂｐ ,两者无差异。ＰＧＥＭ ＧＤＮＦ 经酶切鉴定正确,测序结果与Ｇｅｎｅｂａｎｋ 比较基本相同。由于ＲＮＡ 和基因组ＤＮＡ 扩增得到的片段大小相同,证实该基因片段内无内含子插入,该片段可用于真核及原核表达。     

带信号肽人VEGF165 cDNA克隆

目的：克隆带信号肽人ＶＥＧＦ１６５ ｃＤＮＡ,以便进一步在真核系统表达人ＶＥＧＦ１６５蛋白或基因治疗。方法：设计引物;从人胎脑ｃＤＮＡ文加ＰＣＲ扩增目的基因;ＤＮＡ片段回收与酶切鉴定;与Ｍ１３ｍｐ１８重组;单链序列测定。结果：克隆片段与人ＶＥＧＦ１６５ｃＤＮＡ序列一致。结论：克隆ＤＮＡ片段为带信号肽人ＶＥＧＦ１６５ ｃＤＮＡ。     

尖海龙中脂溶性成分的GC／MS分析

从中华鳖Ｐｅｌｏｄｉｓｃｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓ和山瑞鳖Ｐｅｌｅａｓｔｅｉｎｄａｃｈｎｅｒｉ的组织材料中提取ＤＮＡ，扩增约１１０ｂｐ的线粒体１２ＳｒＲＮＡ基因片段并进行序列分析，结合从Ｇｅｎｂａｎｋ中检索到的缘板鳖Ｌｉｓｅｍｙｓｐｕｎｃｔａｔａ的序列，构建了３种鳖的１２ＳｒＲＮＡ基因片段序列数据库。序列比较的结果表明中华鳖与其它２种鳖的这段序列均有差别。序列差异在１１．９３％～１９．７８％之间。从江苏省药品检验所提供的４个鳖甲检品各取样０．１～０．５ｇ提取ＤＮＡ，扩增与上述相同的基因片段，与构建的数据库进行比较，结果表明４个检品中只有１块为药典规定的正品，其余３块均为混淆品。     

赖型钩体内鞭毛基因的扩增,克隆,核苷酸序列测定及其在大肠杆…

根据钩体内鞭毛蛋白ｆｌａＢ基因核苷酸序列自行设计一对引物，以赖型钩体ＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ扩增到约８４０ｂｐ的片段。扩增片段经酶切（Ｂａｍ ＨＩ、Ｐｓｔ Ｉ）定向克隆入ｐＵＣ８。重组质粒ｐＬＦ１插入片段与哈勒焦型钩体ｆｌａβ基因相比，核苷酸序列和推测的氨基酸序列同源性很高。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明有一约３３ｋｄ的特异蛋白带，表达量占菌体蛋白１１％。免疫印迹试验表明此区带能被抗赖型钩体内鞭毛（轴丝）抗血     

用聚合酶链反应产物直接测序技术鉴定中药材鳖甲

从中华鳖Ｐｅｌｏｄｉｓｃｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓ和山瑞鳖Ｐｅｌｅａｓｔｅｉｎｄａｃｈｎｅｒｉ的组织材料中提取ＤＮＡ，扩增约１１０ｂｐ的线粒体１２ＳｒＲＮＡ基因片段并进行序列分析，结合从Ｇｅｎｂａｎｋ中检索到的缘板鳖Ｌｉｓｅｍｙｓｐｕｎｃｔａｔａ的序列，构建了３种鳖的１２ＳｒＲＮＡ基因片段序列数据库。序列比较的结果表明中华鳖与其它２种鳖的这段序列均有差别。序列差异在１１．９３％～１９．７８％之间。从江苏省药品检验所提供的４个鳖甲检品各取样０．１～０．５ｇ提取ＤＮＡ，扩增与上述相同的基因片段，与构建的数据库进行比较，结果表明４个检品中只有１块为药典规定的正品，其余３块均为混淆品。     

赖型钩体内鞭毛基因的扩增、克隆、核苷酸序列测定及其在大肠杆菌中的表达

根据钩体内鞭毛蛋白（Ｅｎｄｏｆｌａｇｅｌｌｉｎ）ｆｌａＢ基因核苷酸序列自行设计一对引物，以赖型钩体ＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ扩增到约８４０ｂｐ的片段。扩增片段经酶切（ＢａｍＨＩ、ＰｓｔＩ）定向克隆入ｐＵＣ８。重组质粒ｐＬＦ１插入片段与哈勒焦型钩体ｆｌａβ基因相比，核苷酸序列和推测的氨基酸序列同源性很高。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明有一约３３ｋｄ的特异蛋白带，表达量占菌体蛋白１１％。免疫印迹试验表明此区带能被抗赖型钧体内鞭毛（轴丝）抗血清识别。首次以ＢＡＬＢ／ｃ小鼠钧体病模型为基础，用含重组质粒ｐＬＦ１的大肠杆菌作免疫原进行免疫保护试验，实验组存活率高子对照组，表现了一定程度的保护作用。本研究结果在所查国内外文献中尚属首次报道。     

烟碱诱导基因的差异表达

通过测定分析烟碱诱导出现的差异表达片段的序列，观察与烟碱相关的动脉粥样硬化的致病基因。方法提取以烟碱处理培养的胎儿脐静脉内皮细胞的ＲＮＡ，利用ｍＲＮＡ差异显示技术显示差异表达ｃＤＮＡ片段（ＥＳＴ），经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹证明并测序，经基因库比较查询。结果发现６０条ＥＳＴ，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹证实２３条ｃＤＮＡ确属差异表达片段，测序发现１１条未见报道同源序列的ＥＳＴ。结论确定了１１条差异表达片段的序     

饰胶蛋白（Decorin）基因的cDNA克隆与表达

目的 通过基因克隆技术获得饰胶蛋白基因ｃＤＮＡ克隆并表达。为研究饰胶蛋白的生物学功能及应用打基础。方法 应用ＰＣＲ技术从Ｔ细胞ｃＤＮＡ文库获得饰胶蛋白全长基因ｃＤＮＡ片段。并克隆到ｐＵＣ１９载体中,采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧末端终止法测定全部ｃＤＮＡ序列,将测序正确的饰胶蛋白ｃＤＮＡ序列插入ｐＧＥＸ－４Ｔ－１表达载体中,经ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ双酶切后１．２％凝胶电泳鉴定,ＩＰＴＧ诱导表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析。结果 克隆的饰胶蛋白ｃＤＮＡ序列与ＧｅｎＢａｎｋ中ＡＦ１３８３００记载的序列完全一致,所表达的融合蛋白质分子量与理论计算值（６５．６ＫＤ）也一致并为可溶性蛋白。结论 本研究成功地克隆了饰胶蛋白基因和表达了ＧＳＴ－Ｄｅｃｏｒｉｎ融合蛋白。     

中华按蚊和嗜人按蚊rDNA内转录间隔2区序列差异

目的：比较中华按蚊和嗜人按蚊核糖体ＤＮＡ（ｒＤＮＡ）内转录间隔２区（ＩＴＳ２）序列差异。方法：通过对ＰＣＲ扩增的ｒＤＮＡ ＩＴＳ２片段进行克隆测序，每种蚊测定３个克隆片段序列，比较其差异。结果：中华按蚊和嗜人按蚊的ｒＤＮＡ ＩＴＳ２序列长度分别为４６８和４５２ｂｐ，ＧＣ含量分别为４４．８７％和４９．１２％，两序列差异为２８．８％。结论：ｒＤＮＡ ＩＴＳ２序列差异可用于建立中华按蚊和嗜人按蚊的分子     

重组人单链白细胞介素12融合基因（rhscIL—12）的构建和真？…

目的 克隆人ＩＬ－１２（ｈＩＬ－１２）ｐ４０和ｐ３５亚单位ｃＤＮＡ，构建人单链ＩＬ－２（ｒｈｓｃＩＬ－２）融合基因，并在哺乳动物细胞中进行表达。方法从经ＰＤＢｕ刺激的ＥＢＶ转化的人Ｂ淋巴细胞株ＮＣ３７中提取ｍＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ分别获得ｈＩＬ－１２ｐ４０和ｐ３５亚单位编码序列的ｃＤＮＡ，运用重组ＰＣＲ技术将两段基因通过一疏水性多肽接头（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３ＤＮＡ序列进行体外基因重组，构建ｒｈｓｃＩ     

从K562细胞中克隆新的锌指蛋白cDNA基因的初步研究

采用５加端ＰＣＲ从Ｋ５６２ｒＤＮＡ文库中扩增出含锌指结构域的ＣＤＮＡ基因片段，重组至ＰＧＥＭ７ＺＤＮＡ载体中，通过ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交初步从Ｋ５６２ＣＤＮＡ文库中筛选出９个含锌指基因片段的重组克隆。经ＤＮＡ序更分析和基因库检索，发现有２个克隆的序列与已知基因差异显著，有可能为新的锌指基因片段。     

人染色体8p11.2亚带ANK1位点附近区域表达序列的分离与克隆

目的分离人染色体８ｐ１１．２亚带ＡＮＫ１位点附近区域基因的表达序列。方法采用ｃＤＮＡ选择法从定位于该区域的人工酵母染色体（ＹＡＣ）中分离基因的表达序列，并从分离的表达序列中选取１个序列用于筛选人胎脑ｃＤＮＡ文库。结果获得７个表达序列，其中５个可与目的ＹＡＣ反杂交。所得的表达序列ＢＨＬＣ１５２与鼠的ＣＡｒＧ盒结合因子基因高度同源，ＢＨＬＣ７４与编码心室肌肌球蛋白的碱性轻链１（ＭＬＣ１）基因高度同源，表明ＢＨＬＣ７４可能编码一种ＭＬＣ１的同工蛋白。分离的其它表达序列与数据库内一些位置和功能尚不清楚的表达序列标签（ｅｘｐｒｅｓｅｄｓｅ－ｑｕｅｎｃｅｔａｇ，ＥＳＴ）仅有部分同源性。用表达序列ＢＨＬＣ１１９筛选人胎脑ｃＤＮＡ文库，获得１个插入片段长１９５１ｂｐ的克隆，序列分析表明它编码１７４个氨基酸，该序列与所有已知的蛋白质序列无同源性。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析结果显示，在人胎脑总ＲＮＡ中呈现１条约３．５ｋｂ带；组织表达分析表明，此系一广泛表达的基因。结论ＢＨＬＣ７４可能作为与８ｐ相关的心脏病候选基因，其它序列至少可以作为定位在ＡＮＫ１位点附近区域的肿瘤抑制基因的初筛基因。     

鼠脑谷氨酸脱羧酶GAD65基因的cDNA克隆

目的：从Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑中克隆谷氨酸脱羧酶ＧＡＤ６５的ｃＤＮＡ并进行序列分析。方法：用ＲＴＰＣＲ法扩增目的基因，酶切鉴定后，将特异性ＤＮＡ片段重组入质粒载体中，双脱氧末端终止法测定其全部核苷酸顺序。结果：克隆的特异性ＤＮＡ片段为编码５８５个氨基酸、含终止密码子在内的共１７５８ｂｐ的ＧＡＤ６５全编码序列。经重复实验，与ＥＭＢＬ核酸数据库提供的大鼠ＧＡＤ６５基因比较，发现第５７９位碱基由ＡＴ，并产生一新的ＰｖｕＩ酶切位点，但这种变化不涉及氨基酸的改变。结论：获得鼠脑谷氨酸脱羧酶ＧＡＤ６５基因的全长ｃＤＮＡ，为该基因的体外表达打下基础。     

315例儿童发作性疾病24小时脑电图监测

监测３１５例各类反复发作性症状的患儿２４ｈ脑电图（ＡＥＥＧ）。结果表明：动态脑电图异常２２４例（７１．１１％）；其中１４２例（４５．０８％）记录到痫性放电，以惊厥发作和失神发作症状者阳性率最高。提示ＡＥＥＧ对儿童癫痫的诊断率高于常规脑电图，对儿童发作性疾病有独特的诊断价值。     

手术治疗顽固性癫痫初探（25例临床分析）

随访观察开颅手术治疗顽固性癫痫２５例，病程平均８．４年。术前平均服抗痫药治疗５．２年。皮质电图监测下行颞叶前份＋杏仁核切除１２例；颞叶外皮层痫灶切除３例；病灶＋周围皮层痫灶切除９例；胼胝前部切开１例。无明确病因者占６４％。痫灶光镜和电镜检查（１１例）结果符合癫痫的病理改变。随访结果，痊愈及显效者占８４％，总有效率９６％，无效４％。无手术死亡。     

前列腺特异抗原基因启动子RF15调节元件的初步研究

前列腺特异抗的（ＰＳＡ）基因受雄激素调节，其激素应答元件（ＡＲＥ）位于１７０附近ＡＲＥ上游ＲＦ１５序列的丢失和变异可降低雄激素对ＰＳＡ基因的诱导作用，用ＲＦ１５５ＤＮＡ片段和人前列腺肿瘤细胞ＬＮｃａｐ或ＰＣ－３的核蛋白进行体外结合实验，结果表明ＲＦ１５可与这些细胞中的某些调节蛋白结合，而且ＲＦ１５地调节蛋白的结合Ｚｎ＾２＋的影响。ＲＦ１５可能是ＰＳＡ启动子中的一个新的附属调节元件，与之结合的调节蛋     

非同位素mRNA差异显示方法的建立及应用

目的：建立非同位素ｍＲＮＡ差异显示技术，并用以分析鼠脑甲状腺激素的反应基因。方法用９－１０ｂｐ的随机但序列确定的引物扩增甲减和正常大鼠脑ｃＤＮＡ，用ＰＡＧＥ分析ＰＣＲ产物，ＥＢ染色，切取差异条带，再扩增，测序并作同源性分析。结果得到两个（２２６．２７９ｂｐ）受甲状腺激素上调、一个（２７８ｂｐ）受甲状腺激素下调的片段，前二者与任何已知基因的同源性都低于８０％，提示为两个尚未报道的新基因、后者即大鼠Ｇ