右归饮择时使用对肾阳虚大鼠睾酮昼夜节律的影响

为探讨右归饮择时用药在肾阳虚证治疗中的意义,将SD大鼠随机分为正常、模型、右归饮酉时用药和右归饮卯时用药四个大组,其中每组再分别设 4个亚组,即 02: 00、08: 00、14: 00、20: 00组,共计 16个小组。皮下注射氢化可的松的方法制作肾阳虚模型,造模同时灌胃右归饮水煎剂,共计 14d。造模结束次日,于 02: 00、08: 00、14: 00、20: 00将相应组别动物摘眼球取血,采用放免法测定血清睾酮水平。结果显示,模型大鼠血清睾酮水平较正常降低,各时间点中尤以 14: 00和 20: 00下降为显著,与同一时间正常大鼠比较均有显著性差异 (P<0. 01),节律几乎消失,近似直线。两用药组中,酉时用药组的睾酮变化模式与正常组接近。提示右归饮治疗肾阳虚证应当提倡择时用药,酉时用药对睾酮昼夜节律维护较卯时为好。     

金匮肾气丸对肾阳虚大鼠17α-羟化酶基因表达的影响

目的探讨金匮肾气丸对肾阳虚大鼠17α-羟化酶基因表达的影响。方法将大鼠随机分为正常组、模型组、金匮肾气丸组,采用腺嘌呤法造模。在用药后的不同时间(10、20、30d),用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肾上腺17α-羟化酶的基因表达。结果与模型组比较,金匮肾气丸能上调肾阳虚大鼠的肾上腺17α-羟化酶的基因表达(P<0.05,P<0.01),随着用药时间的延长,17α-羟化酶基因表达有逐渐增强的趋势。结论金匮肾气丸上调肾阳虚大鼠的肾上腺17α-羟化酶的基因表达是其治疗肾阳虚证的机理之一。     

金匮肾气丸温补肾阳药理作用的实验研究

目的以下丘脑-垂体-性腺轴为基础,探究金匮肾气丸对肾阳虚大鼠的药理作用,探讨其温补肾阳的作用机制。方法用氢化可的松建立肾阳虚模型大鼠,60只,随机分为6组,造模后连续灌喂给药30 d;分别于给药第15天、第30天进行强迫负重游泳实验;第30天,眼球取血,放射免疫分析法检测血清睾酮(T)、雌二醇(E2)的水平;采用RT-PCR法检测各组大鼠下丘脑、垂体和靶腺(睾丸)钙调蛋白(Ca M)mRNA的表达。结果与模型组比,金匮肾气丸可明显提高肾阳虚模型大鼠的负重游泳时长(P0.05),给药20 d后其体能趋于正常;金匮肾气丸可明显降低血清中雌二醇水平及升高睾酮水平(P0.05);金匮肾气丸可明显降低下丘脑、垂体、睾丸中Ca M RNA的表达(P0.05)。结论金匮肾气丸具有明显的温补肾阳作用,可通过调节机体下丘脑-垂体-性腺轴中钙调蛋白基因表达,改善肾阳虚大鼠激素水平,逆转肾阳虚状态。     

金匮肾气丸对"劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠睾丸结构功能的影响

目的:以"劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠为模型.观察金匮肾气丸对肾阳虚小鼠睾丸结构功能的影响.方法:用强迫小鼠游泳法造成劳倦过度,以Colldege效应诱导雄性小鼠房室不节,建立肾阳虚小鼠模型.设正常组、模型组与金匮肾气丸治疗组.计算睾丸指数,光镜观察睾丸大体结构,透射电镜观察睾丸超微结构,放射免疫分析法测定睾酮(T)含量.结果:模型组睾丸指数和睾酮的分泌量比正常组有明显下降,而经治疗后均有明显升高;模型组睾丸大体结构及超微结构均有不同程度的损害,金匮肾气丸治疗组未见结构明显改变.结论:金匮肾气丸可使肾阳虚小鼠睾丸受损结构得以一定程度的恢复,可改善睾丸的分泌功能.     

金匮肾气丸对肾阳虚小鼠睾丸组织端粒酶活性的促进作用

目的探讨金匮肾气丸对肾阳虚小鼠睾丸组织端粒酶活性的影响。方法以"劳倦过度,房事不节"制备肾阳虚小鼠模型,随机分为模型组及金匮肾气丸治疗组(治疗组),每组15只,另选取15只正常雄鼠作为正常组。正常组常规饲养,每天灌胃蒸馏水0.1mL/10g;模型组造模同时每天灌胃蒸馏水0.1mL/10g;治疗组造模同时每天灌胃金匮肾气丸混悬液0.1mL/10g(浓度0.241g/mL)。共干预4周。4周后采用ELISA法检测各组小鼠睾丸组织端粒酶活性。结果 "劳倦过度、房事不节"法复制肾阳虚模型成功,同时金匮肾气丸对肾阳虚模型小鼠的体征有一定的改善作用。与正常组比较,模型组小鼠睾丸端粒酶活性降低(P<0.01);与模型组比较,治疗组端粒酶活性升高(P<0.01)。结论 "劳倦过度、房事不节"肾阳虚小鼠睾丸端粒酶活性较之正常小鼠明显降低,金匮肾气丸可使肾阳虚小鼠睾丸端粒酶活性得以恢复。     

金匮肾气丸对肾阳虚大鼠睾丸转化生长因子-β1和细胞色素P-19表达的影响

目的观察金匮肾气丸对肾阳虚及转化生长因子-β1(TGF-β1)受体阻滞后大鼠转化TGF-β1、细胞色素P-19(CYP19)、性激素水平和精子质量的影响,并探讨其治疗男性不育的作用机制。方法将40只成年雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、阻滞剂组、金匮组,每组10只。除正常组外,腺嘌呤混悬液灌胃制备肾阳虚不育模型。正常组给予生理盐水灌胃,阻滞剂组注入大鼠睾丸间质TGF-β1受体阻滞剂,金匮组给予金匮肾气丸水煎剂灌胃。经尾静脉采血并摘取睾丸,采用免疫组化法、放射免疫法和电镜观察,检测睾丸TGF-β1和CYP19的表达、性激素水平、精子密度和活率及睾丸形态学改变。结果与正常组比较,模型组TGF-β1表达水平升高、CYP19表达水平降低(P0.05);与模型组比较,金匮组和阻滞剂组TGF-β1表达水平降低、CYP19表达水平升高(P0.05)。与正常组比较,模型组大鼠精子数量较少且形态异常(P0.05);与模型组比较,金匮组和阻滞剂组睾酮(T)、雌二醇(E2)、精子密度和活率升高(P0.05);金匮组和阻滞剂组各项指标比较差异无统计学意义(P0.05)。结论金匮肾气丸可改善肾阳虚模型大鼠精子质量和性激素水平,其机制可能是通过抑制睾丸TGF-β1受体表达、促进CYP19表达进而影响精子发育与增殖。     

加味金匮肾气丸调节肾阳虚哮喘大鼠体内激素和细胞因子功能紊乱的研究

目的:观察加味金匮肾气丸对支气管哮喘大鼠模型神经内分泌免疫网络若干组分以及细胞因子功能紊乱的影响。方法:清洁级雄性Wistar大鼠40只按随机数字表法分为正常对照组、哮喘模型组、加味金匮肾气丸组和地塞米松组。采用模拟中医病因并结合卵蛋白致敏法建立肾阳虚证哮喘大鼠模型。用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定大鼠血清睾酮(T)、皮质醇(COR)、甲状腺素(T4)水平和大鼠肺泡灌洗液测定细胞因子IL-4、IL-5、IL-13水平。结果:肾阳虚哮喘模型组大鼠血清T4、COR、T值水平下降(P0.05);肾阳虚哮喘模型组肺泡灌洗液IL-4、IL-5、IL-13值水平均上升(P0.05);中药组及西药组血清T4、COR、T值均上升(P0.05)以及泡灌洗液IL-4、IL-5、IL-13值均下降(P0.05)。结论:加味金匮肾气丸可以改善肾阳虚哮喘体内激素分泌水平,调节细胞因子失衡从而达到治疗目的。     

金匮肾气丸对颌下腺切除大鼠生精调控的作用及机理研究

目的探讨金匮肾气丸对颌下腺切除大鼠生精调控的作用和机理。方法 SD大鼠经灌胃腺嘌呤复制成肾阳虚伴生精障碍模型,切除颌下腺将大鼠复制成唾液缺乏伴生精障碍模型。大鼠经灌胃给予金匮肾气丸混悬液,观察1个生精周期后大鼠附睾内成熟精子的数量与睾丸曲细精管的参数,采用免疫细胞化学法结合图像分析系统观察生精细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况。结果金匮肾气丸作用1个生精周期后,与其他5个实验组比较,肾阳虚+肾气丸组大鼠曲细精管中生精细胞出现增殖,同时生精细胞内Bax表达下调和Bcl-2表达上调(P<0.01),与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。肾阳虚合并颌下腺切除+肾气丸组、颌下腺切除+肾气丸组大鼠曲细精管中生精细胞有所增殖,但与肾阳虚合并颌下腺切除组、颌下腺切除组比较,差异无统计学意义(P>0.05),Bax和Bcl-2表达变化不明显(P>0.05)。结论金匮肾气丸能通过调控生精细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2,促进肾阳虚伴生精障碍模型大鼠生精细胞增殖,但对颌下腺切除的唾液缺乏伴生精障碍模型大鼠的Bax和Bcl-2表达基本没有调控作用,生精细胞增殖促进能力有限。     

金匮肾气丸对肾阳虚证COPD大鼠瘦素水平影响的实验研究

目的根据肾阳虚COPD大鼠发病机制,研究瘦素与COPD肾阳虚证的发生相关性,论证金匮肾气丸治疗COPD肾阳虚证治疗作用。方法采用运用烟雾联合脂多糖及注射氢化可的松进行肾阳虚证COPD大鼠造模。将大鼠分为空白组,模型组,中药中剂量组、高剂量组。中药高、中剂量组灌服金匮肾气丸混悬液。光镜下检测大鼠肺叶肺组织病理变化;血清瘦素表达水平;RT-PCR法检测脂肪组织瘦素受体mRNA表达及Western Blot法检测肺组织瘦素受体蛋白表达。结果模型组大鼠肺组织可见大量淋巴细胞、浆细胞、中性粒细胞等炎症细胞浸润,支气管柱状上皮细胞剥脱,纤毛倒伏、粘连,支气管壁,部分肺泡壁破坏、融合,肺大泡架构消失;与模型组比较,金贵肾气丸中、高剂量组大鼠肺组织病理损伤有所减轻。血清瘦素水平,模型组大鼠血清瘦素含量升高(P0.01),给予金贵肾气丸高、中剂量治疗后血清瘦素含量有明显降中(P0.01)。Western印迹检测肺组织瘦素受体蛋白表达,模型组大鼠平均灰度值显著降中(P0.01),金贵肾气丸干预后,高剂量组平均灰度值显著升高(P0.05)。大鼠肺瘦素受体mRNA含量检测,模型组大鼠肺瘦素受体mRNA表达明显增高(P0.01),干预组中瘦素受体mRNA表达强度明显降中(P0.05)。结论瘦素水平与COPD肾阳虚证的发生负相关;采用金匮肾气丸,温补肾阳,对实验模型大鼠进行干预血清瘦素、脂肪组织瘦素受体蛋白含量均有所下降,对瘦素蛋白进一步的研究将为COPD的发病机制阐明和防治提供新研究方向。     

金匮肾气丸对肾阳虚变应性鼻炎缓解期小鼠Th1/Th2细胞因子的影响

目的 观察金匮肾气丸对肾阳虚变应性鼻炎(AR)缓解期小鼠Th1/Th2细胞因子的影响,探讨中医在AR缓解期“治未病”的可能机理。方法 建立肾阳虚AR小鼠模型,实验分肾阳虚AR组、金匮肾气丸组和正常对照组。采用酶联免疫吸附法测定小鼠血清中Th1/Th2细胞因子和组胺,并观察小鼠鼻黏膜肥大细胞、嗜酸性粒细胞浸润情况。结果 金匮肾气丸能改善肾阳虚AR模型小鼠鼻黏膜的变态反应症状;降低肾阳虚AR小鼠血清IL-4水平,升高IFN-γ、IL-2水平,降低组胺含量(P ＜ 0.01)。结论 金匮肾气丸对肾阳虚AR小鼠的治疗作用可能与其下调小鼠血清IL-4,上调IFN-γ、IL-2水平,纠正失衡的Th1/Th2有关。     

金匮肾气丸对肾阳虚大鼠垂体ACTH基因表达的影响

目的探讨金匮肾气丸(简称肾气丸)不同浓度、不同时间对肾阳虚大鼠垂体促肾上腺皮质激素(ACTH)基因表达的影响。方法造模大鼠随机分成模型组,肾气丸高、中、低剂量组,在喂药后不同时间(10、20、30天),用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肾气丸对垂体组织ACTH基因表达的影响。结果与模型组比较,肾气丸中、高剂量组大鼠血清ACTH水平升高(P<0．05或P>0．01)及垂体组织ACTH基因表达明显上调,差异有显著性(P<0．05);中剂量组与高、低剂量组比较明显增高(P<0．05或P<0．01)。结论肾气丸能上调ACTH基因表达可能是其治疗肾阳虚的机理之一。     

金匮肾气丸对腺嘌呤致不育大鼠精子质量与肾脏功能的影响

目的:观察金匮肾气丸对腺嘌呤致雄性不育大鼠精子质量及肾功能的影响。方法:30只成年雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、金匮肾气丸组。应用自动精子质量分析仪检测实验大鼠的精子质量(精子密度、活率及活动度);应用放射免疫法测定血清睾酮(T)、雌二醇(E2)、促黄体激素(LH)和促卵泡激素(FSH)含量;自动生化分析仪分析血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)含量;HE染色、光镜观察肾脏组织变化,透射电镜观察实验大鼠睾丸中精子鞭毛密度。结果:金匮肾气丸能明显增加大鼠精子密度、活率及活动度,提高大鼠血清T含量,降低E2,LH,FSH含量;降低血清BUN和Scr含量。结论:金匮肾气丸可提高模型大鼠的精子质量,改善肾功能。其提高精子质量可能是通过刺激间质细胞产生T及降低异常升高的E2这一间接作用实现的。     

肾气丸治疗脾肾阳虚型胃溃疡动物模型的实验研究

目的：探讨肾气丸治疗脾肾阳虚型胃溃疡的作用机制及靶点。方法：建立脾肾阳虚型胃溃疡大鼠模型40只,随机分为模型组、雷尼替丁组、肾气丸组、肾气丸加手参组,每组10只。用药14天后分别测定各组大鼠胃溃疡面积,胃液pH值、胃蛋白酶活性,血清表皮生长因子（EGF）、胃泌素（GAS）含量,胃壁结合黏液含量,并作光镜下病理观察。结果：雷尼替丁组、肾气丸组、肾气丸加手参组再生黏膜总面积中PAS阳性面积多于模型组（P〈0.05）;模型组与肾气丸加手参组之间EGF值水平差异有非常显著性意义（P〈0.01）;肾气丸组、肾气丸加手参组GAS水平较模型组升高（P〈0.05）。结论：肾气丸可能通过抑制胃窦G细胞分泌GAS,进而减少胃酸和胃蛋白酶原分泌而起抗溃疡作用。     

基于Fas/FasL途径的金匮肾气丸对肾阳虚模型睾丸细胞凋亡的影响

目的以"劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠为模型,从Fas/FasL途径探讨肾阳虚小鼠睾丸组织细胞凋亡发生机制及金匮肾气丸的治疗作用。方法以Colldege效应诱导雄性小鼠房室不节,用强迫小鼠游泳法造成劳倦过度,建立肾阳虚小鼠模型。4周后,分别用普通光学显微镜和电子显微镜进行睾丸组织的形态学观察,TUNEL法测定小鼠睾丸生殖细胞的凋亡率,利用RT-PCR检测小鼠睾丸组织Fas/FasL mRNA表达,用免疫组织化学分析Fas、FasL蛋白表达差异。结果1模型组小鼠睾丸组织曲细精管内支持细胞及各级生精细胞层次不清,结构破坏明显,金匮肾气丸组和睾酮组小鼠睾丸生殖细胞较模型组有一定程度改善。2在透射电镜下,模型组小鼠睾丸细胞中,可以观察到处于凋亡不同阶段的初级精母细胞,凋亡小体。3模型组TUNEL阳性细胞较正常组显著增加,主要为精原细胞和初级精母细胞,并可见精子细胞凋亡。金匮肾气丸治疗组睾丸细胞凋亡率明显低于模型组,但高于正常组,凋亡细胞类型以精原细胞和初级精母细胞为主。4模型组与正常组相比,Fas/FasL的mRNA表达量明显增高,金匮肾气丸组和睾酮组Fas、FasL mRNA表达较正常组稍高,但与模型组比较,明显降低。5模型组Fas在支持细胞和精原细胞及初级精母细胞高表达增多,精子细胞高表达增加明显;模型组FasL高表达细胞明显增多,在支持细胞、各级生精细胞及精子细胞、精子中均有分布,无明显定位特异性;金匮肾气丸组和甲基睾酮对肾阳虚模型小鼠的Fas/FasL均有明显的抑制作用。结论房劳-倦劳所致肾阳虚小鼠的睾丸内生殖细胞凋亡率上升,通过Fas、FasL的外源性死亡通路引起生殖细胞凋亡。金匮肾气丸可以通过调节Fas/FasL表达,降低小鼠睾丸生殖细胞凋亡。     

金匮肾气丸对雄性2型糖尿病大鼠睾酮与一氧化氮的影响

目的:探讨金匮肾气丸能否改善雄性2型糖尿病大鼠的雄激素水平和提高性功能。方法:雄性SD大鼠随机分成4组:正常对照组、模型组、阳性对照组、金匮肾气丸组,每组10只,采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方式造模,正常对照组及模型组每日给予生理盐水灌胃,阳性对照组每日给予二甲双胍及枸橼酸西地那非片灌胃,金匮肾气丸组每日给予二甲双胍及金匮肾气丸灌胃,给药4周后空腹测血糖、睾酮(T)、一氧化氮(NO)。结果:金匮肾气丸组及阳性对照组治疗后T及NO均明显高于模型组(P<0.05),但此两组间比较差异无统计学意义。结论:金匮肾气丸能有效改善雄性2型糖尿病大鼠的雄激素水平和提高性功能。     

金匮肾气丸对2型糖尿病模型大鼠脂肪代谢及胰岛素抵抗的影响

目的:探讨金匮肾气丸对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠脂肪代谢和胰岛素敏感性的影响。方法:40只SD大鼠采用高脂高糖饲料喂养3周,小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱导2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠,随机分为模型组、二甲双胍组、肾气丸高剂量组、肾气丸低剂量组,每组10只。另设正常组10只,饲以普通饲料。给药6周后处死大鼠,末次给药后禁食12 h,测体重及体长,检测空腹血糖、血清胰岛素含量、血脂,计算体重指数(BMI),胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素敏感指数(ISI)。结果:肾气丸高、低剂量组TG、LDL-C较模型组明显降低(P<0.05),肾气丸高剂量组CHO较模型组明显降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组BMI明显增高(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍组、高、低剂量组降低,但差异无统计学意义,以高剂量组降低明显。二甲双胍组、肾气丸高、低剂量组FBG、FINS水平较模型组均明显降低(P<0.05,P<0.01),HOMA-IR均明显降低(P<0.01)I,SI有明显升高(P<0.05)。结论:金匮肾气丸可改善大鼠血脂代谢,降低HOMA-IR,提高ISI,增强胰岛素的敏感性。     

金匮肾气丸对肾阳虚大鼠睾丸中TGF-β_1表达、精子数量及活率的影响

目的:观察金匮肾气丸作用于腺嘌呤诱导的肾阳虚不育大鼠睾丸中精子密度、精子活率的变化以及TGF-β1的表达。方法:雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组和治疗组。诱导肾阳虚不育模型成功后,模型组灌胃生理盐水,治疗组灌胃金匮肾气丸浓缩剂,称重造模后观察各组大鼠体质量、检测大鼠睾丸中TGF-β1的表达水平、检测精子密度及活率。结果:造模后模型组大鼠体质量与对照组比较明显减轻(P<0.05),精子密度显著降低(P<0.05),精子活率显著减弱(P<0.05),大鼠睾丸TGF-β1表达显著高于对照组(P<0.05),正常对照组与治疗组比较无显著性差异(P>0.05);与模型组相比,治疗组大鼠体质量逐渐恢复(P<0.05),精子密度显著提高(P<0.05),精子活率明显增强(P<0.05),TGF-β1表达与对照组比较显著下调(P<0.05),正常对照组与治疗组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:金匮肾气丸能够显著增加肾阳虚大鼠的体质量、精子密度与活率,降低肾阳虚大鼠睾丸中TGF-β1表达。     

右归丸对肾阳虚大鼠下丘脑-垂体-性腺轴影响的实验研究

目的:探讨右归丸对氢化可的松所致肾阳虚动物模型下丘脑-垂体-性腺轴的影响。方法:氢化考的松法制造大鼠肾阳虚模型,观察模型组、用药组、空白组体重变化,睾丸重量及HE染色后睾丸精曲小管的变化。放射免疫法测取血清睾酮含量,比较各组差异。结果表明,右归丸能显著提高肾阳虚大鼠的睾酮含量,对大鼠肾阳虚证有改善作用。     

中药天年饮对衰老大鼠睾丸生精细胞增殖及相关因素的作用

目的研究中药天年饮对衰老大鼠睾丸生精细胞增殖及相关因素的影响。方法40只SD大鼠随机分为4组,正常组、衰老模型组、天年饮用药组及阴性对照组,每组均为10只。D-半乳糖连续腹腔注射制作亚急性衰老的大鼠模型。采用ELISA方法检测各组大鼠血清睾酮含量、SP免疫组化法检测睾丸生精细胞PCNA、端粒酶的表达情况。结果衰老大鼠血清睾酮含量、睾丸PCNA阳性细胞率及生精细胞端粒酶的表达明显低于正常大鼠(P<0.05,P<0.01)。天年饮可明显提高衰老大鼠血清睾酮含量(用药组与模型组比较P<0.05)、提高睾丸PCNA阳性细胞率(用药组与模型组比较P<0.01)及提高衰老大鼠端粒酶的表达。结论天年饮可明显改善衰老大鼠的生精功能,具有一定延缓衰老的作用。     

金匮肾气丸对“恐伤肾”小鼠的免疫调节作用

目的：采用猫吓鼠结合空瓶实验,建立＂恐伤肾＂动物模型,观察情绪应激对小鼠行为和免疫功能的影响,用金匮肾气丸进行干预,探讨金匮肾气丸对情绪应激的免疫调节作用。方法：通过建立＂恐伤肾＂动物模型,观察应激7、14、21天以及金匮肾气丸干预后免疫功能的变化;结果：应激7、14、21天组小鼠胸腺重量、胸腺指数、脾重量、脾指数、血清免疫球蛋白含量与对照组相比,差异显著（P〈0.01或P〈0.05）。结论：金匮肾气丸可以改善应激状态下动物行为和机体的免疫功能,可以调节情绪应激小鼠的免疫功能。