白细胞介素8对宫颈癌细胞增殖和侵袭转移的影响及其机制*

目的：探讨白细胞介素8（ IL-8） 对宫颈癌细胞Caski 增殖、侵袭转移的影响及其机制。方法：将 体外培养的宫颈癌Caski细胞分为对照组、IL-8 组（20、40、60、80、100 ng/mL）、IL-8+LY294002 组 （80 ng/mL IL-8+20 μmol/L LY294002）以及LY294002 组（20 μmol/L）,采用MTT 实验检测Caski 细胞的增殖能力, 采用划痕实验检测Caski 细胞的侵袭能力,采用Transwell 实验检测Caski 细胞的迁移能力。免疫印迹法检测蛋白 激酶B（ PKB）、磷酸化蛋白激酶B（ p-AKT）、波形蛋白、β-连环蛋白、上皮-钙黏蛋白（ E-cadherin）的表达情 况。结果： IL-8 呈剂量依赖性促进细胞增殖,80 ng/mL 与100 ng/mL 组之间差异无统计学意义。IL-8 组划痕愈合 能力和细胞迁移能力均增强,IL-8+LY294002 组及LY294002 组划痕愈合能力和细胞迁移能力均低于IL-8 组。各 组AKT总蛋白表达量差异无统计学意义,IL-8 组中p-AKT、波形蛋白和β- 连环蛋白表达均增加,E-cadherin 减少, AKT通路特异性抑制剂LY294002 可阻断上述作用。结论：IL-8 可能通过PI3K/AKT 通路影响波形蛋白、β- 连环 蛋白和E-cadherin 蛋白的表达,促进宫颈癌细胞的增殖、侵袭和转移。     

靶向TRIM29基因的siRNA通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导鼻咽癌细胞凋亡

目的:探讨沉默TRIM29基因表达对鼻咽癌细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:将人鼻咽癌5-8F细胞分为空白组、阴性对照(NC)组(转染阴性对照siRNA)和si-TRIM29组(转染TRIM29的特异性siRNA),通过CCK-8法检测si-TRIM29转染5-8F细胞0～96 h的细胞活力。通过流式细胞术及Western blot分别检测si-TRIM29转染5-8F细胞48 h的细胞凋亡率及TRIM29、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、Bcl-2、Bax、t-AKT和p-AKT的蛋白水平。10μmol/L的PI3K/AKT信号通路特异性抑制剂LY294002及si-TRIM29单独或联用处理细胞,细胞分为空白组、LY294002组和LY294002+si-TRIM29组,流式细胞术检测3组细胞凋亡率。结果:转染TRIM29 siRNA的5-8F细胞TRIM29蛋白表达明显低于空白组(P0.05)。和空白组比较,si-TRIM29组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白的水平明显升高,Bcl-2和p-AKT蛋白的水平明显降低(P0.05)。LY294002组的细胞凋亡率高于空白组,而LY294002+si-TRIM29组的细胞凋亡率高于LY294002组(P0.05)。结论:沉默TRIM29基因表达可通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导鼻咽癌细胞凋亡。     

槲皮素通过激活PTEN抑制PI3K/AKT及JNK信号通路诱导人乳腺癌细胞凋亡

目的 研究槲皮素对乳腺癌MCF-7细胞增殖活性以及对第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B (PTEN/PI3K/AKT)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响。方法 采用CCK-8法检测(0、20、40、60、80、100)μmol/L槲皮素对MCF-7细胞增殖的影响;Hochesst33342染色观察细胞核数量以及核型的变化,流式细胞术检测细胞凋亡;免疫荧光细胞化学染色检测PTEN和磷酸化的JNK(p-JNK)表达,Western blot法检测PTEN、磷酸化的PI3K (p-PI3K)、p-JNK、磷酸化的AKT (p-AKT)蛋白水平;加入PI3K/AKT通路抑制剂LY294002处理后,再次采用以上方法检测对细胞凋亡和相关蛋白表达的影响。结果 随着槲皮素浓度的升高,细胞活性下降,细胞生长受到抑制,且具有浓度依赖性;细胞核浓缩增强、细胞凋亡增加;高浓度槲皮素显著增强PTEN蛋白表达和分布,降低p-PI3K、p-AKT蛋白水平,并抑制p-JNK蛋白的核表达。加入PI3K/AKT信号抑制剂LY294002处理细胞后,LY294002和槲...     

姜黄素下调PI3K/AKT/mTOR通路抑制人肝癌细胞系增殖

目的观察姜黄素对体外培养人肝癌细胞系HL-7702增殖的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养HL-7702细胞,不同浓度的姜黄素(0、10、20、40和80μmol/L)处理48 h。PI3K/AKT抑制剂LY294002联合姜黄素处理细胞。分别用MTT法检测细胞增殖,用Western blot法检测细胞内PI3K、AKT、m TOR、Bax、Bcl-2及活化的caspase-3的蛋白含量。结果姜黄素可以浓度依赖性的抑制HL-7702细胞增殖,增加细胞中PI3K、AKT和m TOR的磷酸化水平(P0.05)。姜黄素可诱导HL-7702细胞凋亡,增加Bax和活化的caspase-3的含量(P0.05),减少Bcl-2的含量(P0.05)。LY294002与姜黄素联用后,姜黄素对细胞增殖及凋亡无明显作用。结论姜黄素可抑制人肝癌细胞系HL-7702增殖,诱导细胞凋亡,作用机制可能与其下调PIK/AKT/m TOR信号通路的活性有关。     

联合抑制PI3K和MEK的活性可协同抑制顺铂耐药卵巢癌细胞的增殖

目的研究磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002联合丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)特异性抑制剂AZD6244对顺铂耐药卵巢癌细胞株(SKOV3/DDP)增殖的影响。方法 (5、10、20、40、80)μmol/L LY294002、(1、2、4、8、16)μmol/L AZD6244单独及联合作用于SKOV3/DDP细胞,MTT法检测对细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度(IC50)及合用指数(CI);根据结果确定联合用药的浓度,将实验分为对照组、LY294002组(5μmol/L)、AZD6244组(7μmol/L)及联合组(LY294002 5μmol/L+AZD6244 7μmol/L);作用48 h后,采用MTT法确定细胞生长曲线,计算细胞倍增时间;平板克隆检测集落形成能力;annexinⅤ-PE/7-ADD染色结合流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,并测定细胞周期;Western blot法检测细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)、AKT、磷酸化的AKT(p-AKT)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及激活型caspase-3蛋白的水平。结果 LY294002及AZD6244均可抑制SKOV3/DDP细胞增殖,两药联合作用IC50明显降低,此时CI1,具有协同作用;联合组细胞的生长速度较单独作用组及对照组慢;倍增时间延长;集落形成数减少(P0.01);FCM显示联合组凋亡率增高,阻滞于G1期的细胞增多,S期明显减少(P0.05);Western blot结果显示,AKT、ERK1/2蛋白表达水平在各组间无明显差异(P0.05);LY294002组p-AKT水平降低,p-ERK水平增高;AZD6244组p-ERK水平降低,p-AKT水平增高;联合组p-AKT、p-ERK水平均降低,cyclin D1表达较其余各组低,激活型caspase-3较其余各组高。结论 PI3K抑制剂LY294002联合MEK抑制剂AZD6244通过促进细胞凋亡及阻滞细胞周期进展协同抑制SKOV3/DDP细胞生长。     

阿魏酸通过调节PTEN/PI3K/AKT信号通路抑制急性T淋巴细胞白血病进展

目的 探究阿魏酸是否可通过调控PTEN/PI3K/AKT信号通路在体内外抑制急性T淋巴细胞白血病进展。方法将急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞分为对照组、阿魏酸处理组和LY294002处理组进行体外实验,对照组正常培养;阿魏酸处理组分别给予不同浓度（1.25、2.5、5、10、20、40、80、160μmol/L）阿魏酸,采用CCK-8法检测细胞增殖能力,筛选实验浓度;LY294002处理组给予50μmol/L PI3K/AKT抑制剂LY294002,采用克隆形成实验、流式细胞术、Transwell实验检测细胞增殖、凋亡、侵袭情况,采用Western blot检测核蛋白Ki67、增殖细胞核抗原（PCNA）、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、PTEN、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白相对表达量。使用30只雄性BALB/c裸鼠建立移植瘤裸鼠模型,平均分为正常组和阿魏酸处理组进行体内实验,正常组接种Jurkat细胞后以生理盐水灌胃,阿魏酸处理组接种Jurkat细胞后以75 mg...     

沉默PARP-1对乳腺癌细胞MCF-7顺铂耐药的影响

目的:探究沉默多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)对乳腺癌细胞MCF-7顺铂耐药的影响及可能的作用机制。方法:Western blot及real-time PCR实验检测乳腺癌细胞株MCF-7及相应耐药细胞株MCF-7/DDP中PARP-1的表达情况。采用转染PARP-1小干扰RNA(siRNA)的方法沉默乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DDP中PARP-1的表达,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测PARP-1、Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、caspase-3、细胞色素C(Cyto-C)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和磷酸化ERK(p-ERK)的蛋白水平。结果:耐药细胞株MCF-7/DDP中PARP-1的mRNA及蛋白表达水平均明显高于亲本细胞株(P0.05);并且在亲本细胞株MCF-7中加入顺铂刺激后,PARP-1的蛋白表达水平明显升高(P0.05)。沉默PARP-1可诱导乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DDP的凋亡,增强细胞对顺铂的敏感性,还可下调Bcl-2/Bax和p-ERK的蛋白水平,同时上调cleaved caspase-3及Cyto-C的蛋白水平。而应用ERK特异性抑制剂U0126后,PARP-1沉默组的细胞活力进一步降低。结论:沉默乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DDP中PARP-1的表达可恢复细胞对顺铂的敏感性,促进细胞经线粒体途径的凋亡,其机制可能与其抑制ERK的磷酸化,进而阻断该信号通路有关。     

PTTG抑制PI3K/AKT信号通路诱导皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的机制

目的探讨垂体肿瘤转化基因(pituitary tumoRtransforming genes,PTTG)对皮肤鳞状细胞癌细胞活力、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法将设计合成的PTTG特异性siRNA(si-PTTG)转染人皮肤鳞癌细胞系A431(si-PTTG组),无干扰作用siRNA(NC组)及未转染的空白细胞(空白组)作为对照组,LY294002作为PI3K/AKT信号通路的抑制剂。通过MTT法、Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒及ROS检测试剂盒分别检测细胞活力、凋亡率和ROS含量。Western blot法检测PTTG、AKT、p-AKT、Cyclin D1和Bax蛋白表达。结果si-PTTG转染A431细胞后,PTTG表达明显降低(P<0.05)。与空白组比较,si-PTTG组和LY294002组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,si-PTTG组ROS含量明显升高,p-AKT和Cyclin D1蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达明显升高(P<0.05)。A431细胞转染si-PTTG,并用LY294002处理,细胞活力明显低于LY294002组,凋亡率高于LY294002组(P<0.05)。结论沉默PTTG表达可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞活力,诱导细胞凋亡,其机制与细胞ROS水平增高及PI3K/AKT通路抑制有关。     

IL-24对乳腺癌细胞CXCR4表达及肿瘤细胞侵袭、迁移及凋亡能力的影响北大核心CSCD

目的:探究过表达IL-24对乳腺癌细胞CXCR4表达及肿瘤细胞侵袭、迁移及凋亡的影响与机制。方法:免疫组织化学染色(IHC)检测乳腺癌与癌旁正常乳腺组织CXCR4与其配体CXCL12表达,并分析其相关性;Western blot检测CXCR4在人正常乳腺上皮细胞MCF-10A及乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-453和MDA-MB-231中的表达;采用慢病毒稳转技术在乳腺癌细胞系MDA-MB-231中过表达IL-24,免疫荧光显微镜、RT-PCR和ELISA检测感染效率;将细胞分为5组:LV-IL-24组(感染过表达IL-24慢病毒)、LV-NC组(感染阴性对照慢病毒)、AMD3100组(采用CXCR4/CXCL12轴阻滞剂AMD3100进行培养)、LV-IL-24+AMD3100组(采用AMD3100进行培养的感染过表达IL-24慢病毒的细胞)、阴性对照组(正常培养的MDAMB-231细胞);Transwell、划痕实验和Annexin V-FITC细胞凋亡实验检测上述各组细胞侵袭、迁移及凋亡;Western blot检测各组细胞CXCR4、AKT与mTOR蛋白磷酸化水平及凋亡相关蛋白Bax与cleaved-Caspase-3表达。结果:CXCR4与CXCL12在乳腺癌组织中的表达均显著高于正常乳腺组织,且二者表达呈正相关;与MCF-10A细胞相比,CXCR4在乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-453及MDA-MB-231中表达明显增加(P<0.05),以MDA-MB-231最为显著(P<0.01)。转染过表达IL-24的慢病毒后,MDA-MB-231细胞IL-24 mRNA与蛋白表达均显著增加(P<0.05);与阴性对照组相比,LV-IL-24组、AMD3100组和LV-IL-24+AMD3100组细胞侵袭、迁移能力均显著降低(P<0.05),而凋亡率明显提高(P<0.05),LV-IL-24+AMD3100组变化最为显著(P<0.01);Western blot结果显示,与阴性对照组相比,LV-IL-24组、AMD3100组和LV-IL-24+AMD3100组细胞CXCR4、AKT与mTOR蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05),而凋亡相关蛋白Bax与cleaved-Caspase-3表达明显增加(P<0.05),LV-IL-24+AMD3100组变化最为显著(P<0.01)。结论:乳腺癌细胞中过表达IL-24可抑制CXCR4表达,通过下调PI3K/AKT/mTOR信号通路降低肿瘤细胞侵袭、迁移能力,促进其凋亡,联合使用CXCR4/CXCL12阻滞剂AMD3100可显著提高IL-24的上述抑癌效应。     

人参皂苷Rg1介导PI3K/AKT/FOXO3通路缓解高糖诱导的肾小球系膜细胞氧化应激反应

目的探究人参皂苷Rg1通过PI3K/AKT/FOXO3通路对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞氧化应激反应的调控作用。方法首先将细胞分为对照组、HG组、低浓度Rg1组(HG+20 ng/ml Rg1)、中浓度Rg1组(HG+50 ng/ml Rg1)、高浓度Rg1组(HG+100 ng/ml Rg1),通过MTT法、Hoechst 33258染色和Western blot分别检测Rg1对高糖作用下HBZY-1细胞存活率、凋亡率和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9表达的调控作用。其次,通过试剂盒检测Rg1对高糖作用下HBZY-1细胞中氧化应激标志物ROS、MDA、SOD、Gpx浓度的影响。并通过Western blot检测在Rg1作用下,PI3K/AKT/FOXO3通路中各蛋白的磷酸化及表达情况。最后,验证在AKT被抑制的情况下Rg1对高糖作用下HBZY-1细胞的调控作用。结果与对照组相比,HG组中细胞存活率、Bcl-2表达量、SOD、Gpx含量显著下降(P<0.05),而凋亡率、Bax、caspase-3、caspase-9的表达量、ROS、MDA含...     

人宫颈癌细胞端粒酶活性与PI3K/AKT信号转导通路及细胞生物学行为

目的 观察磷脂酰肌醇-3激酶(P13K)/AKT信号转导通路特异性抑制剂LY294002对人官颈癌细胞株(HeLa细胞)端粒酶活性的影响,同时观察其对细胞生物学行为的改变,探讨肿瘤细胞内端粒酶活性可能的调节机制.方法 ccK.8法测定LY294002作用于HeLa细胞的Ic50值;Western blot检测总AKT以及磷酸化AKT(P-AKT);端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附测定法(TRAP-ELISA)测定细胞的端粒酶活性;生长曲线、流式细胞术和Hoechst33258染色分别检测细胞增殖、细胞周期和细胞的凋亡;最后用划痕实验检测细胞的迁移能力.结果 LY294002作用于HeLa细胞的Ic50值为1.73 mg/L;Western blot结果显示LY294002作用使细胞在总AKT蛋白表达相同的情况下明显抑制了P-AKT,此时细胞内端粒酶活性由对照组的98.61%显著降低至36.72%.LY294002降低了细胞内端粒酶活性同时,使细胞的生长增殖能力明显降低,处于Go/G.期(静止期)的细胞由对照组的47.36%增加到实验组的66.88%,凋亡细胞的比例则由2.4%增加至14.9%,同时细胞的运动迁移明显降低,迁移距离由对照组62.57%明显降低为24.6%.结论 LY294002抑制P13K/AKT信号转导通路能明显改变HeLa细胞内端粒酶活性,同时引起细胞生物学行为的改变,其细胞内端粒酶活性的调节可能与P13K/AKT信号转导通路密切相关.     

PI3K/AKT信号通路的抑制促进B7-H4分子的核转移

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对负性共刺激分子B7-H4细胞定位的调控作用。方法体外培养稳定转染B7-H4/HEK293细胞,采用PI3K/AKT特异性抑制剂LY294002和/或出核转运抑制剂来普霉素B(LMB)处理细胞之后,免疫荧光技术结合激光共聚焦显微镜检测B7-H4蛋白在B7-H4/HEK293细胞中亚细胞定位的变化;Western blot法检测B7-H4蛋白在细胞膜、细胞质和细胞核表达水平的变化。结果激光共聚焦显微镜观察结果显示,PI3K抑制剂LY294002作用于B7-H4稳定转染的B7-H4/HEK293细胞后,与空白对照组相比,B7-H4发生核转移,加入出核转运抑制剂LMB后,核转移的程度显著增加;Western blot法结果显示,LY294002抑制PI3K/AKT信号通路活性24 h后,B7-H4在细胞膜和细胞质中的定位均显著降低(P0.05),而细胞核中B7-H4的定位显著增加(P0.05)。结论 PI3K/AKT信号通路可抑制B7-H4的核转移。     

PI3K和MAPK信号通路对A549细胞FOXO1蛋白表达及其亚细胞定位的调节

目的探讨非小细胞肺癌中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/AKT和丝裂原活化蛋白激酶MAPK/ERK信号通路对Forkhead转录因子(Fox蛋白家族)FOXO1活性的影响及分子机制。方法体外培养人非小细胞肺癌系A549,分别选用PI3K/AKT信号通路特异性抑制剂LY294002和MAPK/ERK信号通路特异性抑制剂UO126及两种抑制剂联合处理细胞之后,MTT比色法检测其对细胞增殖的影响;Western blot检测蛋白FOXO1、p-FOXO1及信号下游蛋白Bim表达的变化;免疫荧光法检测FOXO1蛋白在A549细胞中亚细胞的定位的变化。结果与对照组相比,LY294002和UO126都能明显地抑制A549细胞的增殖,且具有时间依赖性。Western blot结果显示,FOXO1的蛋白水平未见显著性变化,而FOXO1的磷酸化水平明显下降,Bim的表达相应增加。免疫荧光结果显示,FOXO1在A549细胞中的核转位增多。LY294002和UO126联合处理A549细胞时,较药物单独作用效果明显增加。结论 PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路能调节FOXO1磷酸化水平,且具有协同作用,抑制其转录活性。FOXO1通过激活Bim蛋白,促进细胞凋亡,抑制细胞的增殖。     

分形趋化因子(fractalkine)引起H9C2心肌细胞损伤

目的探讨分形趋化因子(FKN)对H9C2心肌细胞炎症因子、细胞凋亡的影响。方法采用(100、200、300、400、500)ng/m L的可溶性FKN(s FKN)处理H9C2细胞0、12、24、36、48 h,利用MTT法检测s FKN对H9C2细胞增殖的作用。筛选出200 ng/m L s FKN作用H9C2细胞24 h后,实时定量PCR和Western blot法分别检测细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA和蛋白的表达,筛选出s FKN最佳处理剂量和处理时间。采用200 ng/m L s FKN,200 ng/m L s FKN与5 ng/m L AKT抑制剂LY294002分别处理H9C2细胞24 h,通过Hochest33258染色检测细胞核染色质聚集情况。采用实时定量PCR和Western blot法分别检测H9C2细胞中Bax和Bcl-2的表达。结果 s FKN可以抑制H9C2细胞的增殖情况。FKN促进心肌细胞TNF-α的表达,具有剂量依赖性。FKN可通过上调Bax蛋白的表达与下调Bcl-2蛋白的表达促进心肌细胞凋亡。FKN可能通过激活PI3K/AKT通路促进心肌细胞的炎症发生与凋亡。结论 FKN通过激活PI3K/AKT通路促进心肌细胞的炎症反应和凋亡作用。     

6-姜酚对大鼠髓核细胞凋亡的影响

目的:研究6-姜酚对过氧化氢(H_2O_2)诱导的大鼠髓核细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:获取SD大鼠髓核细胞并在体外扩增培养,CCK-8法测定不同浓度H_2O_2及6-姜酚对髓核细胞活力的影响,同时采用Western blot检测6-姜酚作用不同时间后p-Akt的蛋白水平。实验分为4组:对照组、H_2O_2组、6-姜酚组(6-姜酚+H_2O_2)及LY294002组(6-姜酚+H_2O_2+LY294002)。流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧簇(ROS)水平,TUNEL荧光比较凋亡细胞比率,透射电镜观察线粒体微结构改变,Western blot检测caspase-3、Bcl-2、Bax、p-Akt、Akt及p53蛋白的水平,RT-qPCR检测蛋白多糖及Ⅱ型胶原的mRNA表达。结果:CCK-8实验结果发现24 mg/L为6-姜酚促进大鼠髓核细胞活力的最佳浓度,80μmol/L的H_2O_2作用6 h可用于氧化损伤造模。p-Akt的蛋白水平随6-姜酚干预时间延长而增多。与对照组比较,H_2O_2组的细胞凋亡率、细胞内ROS水平及TUNEL染色阳性细胞比率增高,细胞线粒体肿胀明显,同时促凋亡蛋白caspase-3、Bax及p53的蛋白水平明显增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,蛋白多糖及Ⅱ型胶原的mRNA表达下降(P0.05);与H_2O_2组比较,6-姜酚可以减少H_2O_2造成的髓核细胞凋亡及相关凋亡蛋白表达,而PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002可以抑制6-姜酚的作用。结论:6-姜酚可经PI3K/Akt信号通路减轻H_2O_2诱导的髓核细胞氧化损伤,抑制髓核细胞凋亡,促进髓核细胞外基质表达。     

上调GDF-15 表达对H2O2 诱导的H9C2 心肌细胞生物学特性及PI3K/ AKT 信号通路的影响

目的：探讨上调生长分化因子-15（GDF-15）的表达对H₂O₂诱导的H9C2心肌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法：CCK8法检测不同浓度的H₂O₂处理H9C2心肌细胞后的细胞增殖情况;H9C2心肌细胞分为Control组、NC组、H₂O₂组、GDF-15+H₂O₂组,各组细胞处理24 h后收集细胞,RT-PCR及Western blot分别检测各组细胞中GDF-15的mRNA及蛋白表达;CCK8法及流式细胞术分别检测细胞的增殖和凋亡情况;2′,7′-二氯二氢荧光素黄二乙酸酯（DCFH-DA）探针检测细胞活性氧簇（ROS）水平;Western blot检测Ki67、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、PI3K、p-AKT蛋白表达。10 μmol/L的PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002处理H9C2心肌细胞,通过CCK8法及流式细胞术分别检测GDF-15+H₂O₂组及PI3K/AKT信号通路抑制剂组细胞活力及凋亡率,Western blot检测Ki67、Bcl-2、Bax、PI3K、p-AKT蛋白表达。结果：不同浓度H₂O₂处理H9C2心肌细胞后,细胞活力均受到抑制,且有浓度依赖性（P<0.05）,由于200 μmol/L的H₂O₂处理H9C2心肌细胞后可抑制将近一半的细胞增殖,选择200 μmol/L的H₂O2作为研究对象;与Control组比较,H2O2组GDF-15的mRNA及蛋白表达均显著升高,细胞增殖显著降低,凋亡率增加,ROS水平升高,Ki67、Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高（P<0.05）;与H₂O₂组比较,GDF-15+H₂O₂组细胞GDF-15的mRNA及蛋白表达均显著升高,细胞增殖显著增加,凋亡率降低,ROS水平降低,Ki67、Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低（P<0.05）。PI3K/AKT信号抑制剂组细胞活力及Bcl-2、PI3K和p-AKT的蛋白表达均显著低于GDF-15+H₂O₂组,细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于GDF-15+H₂O₂组（P<0.05）。结论：上调GDF-15表达可促进H₂O₂诱导的H9C2心肌细胞增殖,降低细胞凋亡,其机制可能与调节细胞中ROS水平,Ki67、Bcl-2、Bax表达及PI3K/AKT信号通路有关。     

知母皂苷AⅢ对急性B淋巴细胞白血病细胞的抑制作用及其号转导机制

目的研究知母皂苷AⅢ(TA-Ⅲ)对急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞的影响和潜在的作用机制。方法采用不同浓度的TA-Ⅲ对B-ALL细胞进行处理,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡。Western blot方法检测线粒体途径凋亡信号通路相关蛋白caspase-8、BID、Bax、Bcl-2、细胞色素c、caspase-9、caspase-3、PARP等表达水平和裂解激活水平,并检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白AKT,GSK3、FOXO1的磷酸化水平。结果 TA-Ⅲ以剂量依赖方式显著抑制B-ALL细胞活力,促进其凋亡;TA-Ⅲ能剂量依赖性的使caspase-8,caspase-9,caspase-3,PARP裂解激活,上调Bax/Bcl-2比值,并升高细胞质中的细胞色素c表达水平。而caspase抑制剂能显著的抑制这种作用。此外,不同浓度的TA-Ⅲ能提高AKT,GSK3、FOXO1的磷酸化水平。结论 TA-Ⅲ能够抑制B-ALL细胞活力,可能是通过线粒体途径激活caspase级联反应而诱导B-ALL细胞凋亡来完成。这些作用可能与其抑制PI3k/AKT信号通路的激活有关。     

低氧预处理通过激活AKT通路提高老年hBM-MSCs对氧化应激损伤的耐受能力

 目的:探讨低氧预处理对老年人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)的保护作用,为提高老年自体干细胞移植治疗效果提供实验支持。方法:老年hBM-MSCs于低氧培养箱中培养24 h进行低氧预处理,实验分为年轻hBM-MSCs组(young组),老年hBM-MSCs组(old组)及低氧预处理老年hBM-MSCs组(old+hypoxia组)。300 μmol/L H₂O₂作用30 min建立细胞氧化应激模型,50 μmol/L LY294002作用2 h阻断PI3K/AKT信号通路,BrdU掺入实验检测细胞增殖能力; CCK-8法检测细胞活力,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达水平和AKT磷酸化水平。结果:BrdU掺入实验显示低氧预处理的老年hBM-MSCs细胞阳性率为39.85%±3.45%,与old组相比增殖能力显著提高(P<0.05)。300 μmol/L H₂O₂作用30 min诱导细胞氧化应激后,old+hypoxia组与old组比较,细胞活力显著提高(P<0.05),凋亡相关蛋白Bax表达量显著降低(P<0.05),抑制凋亡的Bcl-2蛋白表达量显著增高(P<0.05),且AKT磷酸化水平显著增高,差异有统计学显著性(P<0.05);应用LY294002抑制PI3K/AKT信号通路后,细胞活力下降(P<0.05)。结论:低氧预处理可以通过激活AKT信号通路提高老年人骨髓间充质干细胞活力及增殖能力。     

二甲双胍联合紫杉醇对人乳腺癌细胞凋亡及AMPK信号通路的影响

目的:探索二甲双胍联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞活力和凋亡的影响及其可能的机制。方法:采用不同浓度(2、5、10、20、40和80 mmol/L)二甲双胍作用于体外培养的MCF-7细胞,MTT法检测细胞的活力。采用2 mmol/L二甲双胍和2. 4 mg/L紫杉醇单独或联合处理细胞,并加入一磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK)信号转导通路抑制剂compound C。实验分为对照组、二甲双胍组、紫杉醇组、联合组和联合+compound C组;流式细胞术检测细胞的凋亡率,采用RT-qPCR和Western blot法检测Bax、Bcl-2和caspase-3的mRNA和蛋白表达量,Western blot检测AMPK和P21蛋白的表达量。结果:不同浓度二甲双胍(2、5、10、20、40和80 mmol/L)显著抑制乳腺癌细胞的活力(P 0. 05),且具有一定浓度依赖性。与对照组相比,2 mmol/L二甲双胍和2. 4 mg/L紫杉醇单独或联合均可显著抑制细胞活力并诱导其凋亡(P 0. 05),显著下调Bcl-2水平(P 0. 05),上调Bax和caspase-3水平(P 0. 05),促进AMPK和P21蛋白表达。联合使用的效果优于单独使用。加入AMPK抑制剂可削弱此作用。结论:二甲双胍联合紫杉醇可抑制乳腺癌MCF-7细胞活力,诱导其凋亡。此作用与激活AMPK信号转导通路并调节细胞凋亡信号通路有关。     

IL-23通过PI3K/AKT途径诱导甲状腺上皮细胞凋亡

目的探讨白细胞介素23(IL-23)对人甲状腺上皮细胞增殖、凋亡的影响。方法用(10、50、100)ng/m L IL-23处理Nthy-ori 3-1甲状腺上皮细胞24 h后,用MTT法检测细胞增殖能力改变,藻红蛋白标记的膜联素Ⅴ/7-氨基放线菌素D(annexinⅤ-PE/7-AAD)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡水平变化,Western blot法检测磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、Bcl-2、Bcl-x L、活化caspase-3蛋白的水平。结果与对照组相比,随着IL-23剂量增加,甲状腺上皮细胞的增殖能力逐渐下降;IL-23下调PI3K/AKT信号蛋白的磷酸化水平并促进甲状腺上皮细胞凋亡。结论 IL-23通过调节PI3K/AKT途径促进甲状腺上皮细胞凋亡。