病毒引起内分泌功能的紊乱和疾病

新生C3H/St,C3H/HeJ、C57Br/cdj、CBA/N、 AKR/J和BALB/kae裸鼠用60个空斑形成单位(PFU)的淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)Armstrong 1371株脑内接种感染后5～7天,动物有明显的体重减轻和体长不足症状.感染小鼠的垂体有病毒抗原,但垂体的显微结构正常。采用抗LCMV多肽的单克隆抗体,作者证明病毒的复制限于垂体腺前叶.双荧光色素技术[一种染料使LCMV核蛋白染色,另一种染料可使生长激素(GH)或催乳激素(PL)染色]表明,LCMV主要在生产GH的细胞中复制,而不在生产PL的细胞中复制。其它研究也表明,LCMV不能在生产甲状腺刺激素或促肾上腺皮质激素的细胞中复制。GH的两种主要作用是调节生长和葡萄糖代谢。     

β干扰素联合全反式维甲酸通过抑制JAK2/STAT3信号通路抑制HepG2人肝癌细胞增殖并促进其凋亡

目的研究β干扰素(IFN-β)和全反式维甲酸(ATRA)联合应用对Hep G2人肝癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨Janus激酶2/信号转导子与转录激活子3(JAK2/STAT3)通路在其中可能的机制。方法分别用1000 U/m L IFN-β、10μmol/L ATRA及1000 U/m L IFN-β联合10μmol/L ATRA处理Hep G2细胞24 h,采用MTT法检测Hep G2细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡。Western blot法检测磷酸化的Janus激酶2(p-JAK2)和磷酸化的信号转导子与转录激活子3(p-STAT3)、维甲酸-干扰素诱导死亡相关基因19(GRIM-19)、Bcl-2、Bcl-xl、Bax蛋白的表达。结果 IFN-β、ATRA作用于细胞后,Hep G2细胞增殖受到抑制,同时诱导细胞发生凋亡,IFN-β联合ATRA联合处理作用更强;Hep G2细胞中p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达在IFN-β或ATRA作用下减弱,GRIM-19和Bax蛋白表达升高。IFN-β联合ATRA处理作用更强。结论 IFN-β联合ATRA通过抑制JAK2/STAT3信号通路抑制Hep G2人肝癌细胞的增殖并促进其凋亡。     

激素对T淋巴细胞生长激素基因表达调控的影响

目的 :探讨各种激素对T淋巴细胞GH基因表达的影响。方法 :构建含人GH调控序列的荧光素酶报告基因质粒PGL2 GH luc,然后转染入T淋巴细胞系———JurkatE6 1细胞中 ,在培养液中分别加入各种激素。结果 :各浓度的GH、GHRH对Jurkat细胞中荧光素酶的表达有抑制作用 (P <0 0 1) ,而高剂量的TRH( 10、10 0nmol/L)和SS( 10 0nmol/L)对Jurkat细胞中荧光素酶的表达也有抑制作用 ( P<0 0 5 )。结论 :T淋巴细胞中GH基因的表达受下丘脑激素和GH的调节。     

线粒体自噬受体蛋白BNIP3的研究进展

<正>作为细胞的“能量工厂”，线粒体源源不断地生产三磷酸腺苷(adenosine triphosphate, ATP)，参与细胞内多个生物合成过程，为机体细胞提供着支持生命活动过程所必需的能量，在调控细胞生长、代谢和死亡等方面发挥重要作用^[1]。然而，受损的线粒体能够生成大量的活性氧(reactiveoxygenspecies, ROS)，导致细胞功能出现紊乱甚至发生细胞死亡^[2]。     

IL-8通过上调Bcl-2的表达和下调caspase-3的表达抑制MCF-7乳腺癌细胞凋亡

目的探讨白细胞介素8(IL-8)对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响及其机制。方法 Western blot法检测MCF-7细胞IL-8受体CXC趋化因子受体1(CXCR1)、CXCR2的表达;反转录PCR、Western blot法检测(0、20、40、80、160)ng/mL IL-8对MCF-7细胞Bcl-2、caspase-3表达的影响;CCK-8法检测(0、40、80)ng/mL IL-8对MCF-7细胞增殖的影响;相差显微镜下观察80ng/mL IL-8处理MCF-7后细胞形态的变化;Western blot法检测80ng/mL IL-8联合信号通路抑制剂10μmol/L PD980590、10μmol/L LY294002或50μmol/L AG490[分别为丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)、磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)、Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)信号通路抑制剂],共同处理MCF-7细胞后,细胞内Bcl-2蛋白表达的变化;Western blot法检测(0、20、40、80、160)ng/mL IL-8对MCF-7细胞磷酸化p-AKT表达的影响;流式细胞术、反转录PCR以及Western blot法分别检测80ng/mL IL-8联合10μmol/L LY294002共同处理MCF-7细胞后,细胞凋亡以及细胞内Bcl-2、caspase-3表达的变化。结果 IL-8受体CXCR1、CXCR2在MCF-7细胞中均有表达;在IL-8的作用下,MCF-7细胞Bcl-2表达升高,caspase-3表达下降,抗凋亡能力明显增强;IL-8能显著上调MCF-7细胞中p-AKT的表达;PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002能显著抑制IL-8抗MCF-7细胞凋亡的作用,且减少Bcl-2并增加caspase-3的表达。结论 IL-8可显著抑制MCF-7细胞的凋亡,其机制可能与IL-8激活PI3K/AKT信号通路而上调Bcl-2、下调caspase-3的表达有关。     

三叶因子3在大鼠腺垂体嗜色细胞中的定位

目的探讨三叶因子3(TFF3)在腺垂体远侧部嗜酸性细胞和嗜碱性细胞中的表达,明确TFF3在远侧部的分布。方法采用相邻切片的免疫组织化学染色,在相邻切片上分别显示TFF3/生长激素(GH)、TFF3/催乳素(PRL)、TFF3/促甲状腺激素(TSH)、TFF3/促肾上腺皮质激素(ACTH)、TFF3/卵泡刺激素(FSH)、TFF3/黄体生成素(LH)的表达。结果 TFF3和各嗜色细胞的免疫反应产物为棕黄色,主要位于细胞质,ACTH免疫阳性信号在胞膜也有表达,主要分布在腺垂体的远侧部。邻片显示TFF3存在于部分GH、PRL、TSH、ACTH、FSH、LH细胞,分别占19.4%、22.4%、9.2%、6.5%、35.7%、8.3%,以FSH最多,PRL、GH次之。结论垂体远侧部TFF3可分别表达于GH、PRL、TSH、ACTH、FSH、LH细胞。     

生物活性骨基质材料的研制及其细胞相容性的研究

制备聚丙交酯/乙交酯/天冬氨酸-聚乙二醇(PLGA-[ASP-PEG])多元共聚物并检测其细胞相容性,为骨组织工程生物材料的研制和改进提供实验依据。通过本体开环共聚方法合成PLGA-[ASP-PEG]多元共聚物,进行红外光谱(IR)和核磁共振氢谱(1HNMR)分析;以PLGA作对比,分别复合骨髓基质细胞(Bonemarrowstromalcells,BMSCs)进行体外培养,进行相差显微镜和扫描电镜观察。IR和1HNMR证明PLGA-[ASP-PEG]多元共聚物形成;BMSCs在PLGA-[ASP-PEG]表面的黏附、扩展和增殖情况均优于PLGA。PLGA-[ASP-PEG]具有良好的细胞相容性,有望成为骨髓基质细胞的载体应用于骨组织工程。     

鲍曼不动杆菌通过活化血小板激活因子受体引起感染人支气管上皮细胞的氧化应激和细胞凋亡

目的探讨血小板激活因子受体(PAFR)在鲍曼不动杆菌(A.baumannii)感染人支气管上皮(HBE)细胞过程中的作用。方法 HBE细胞分为对照组、银杏内酯B(GB)处理组、A.baumannii感染组、A.baumannii感染联合GB处理组。使用临床分离的A.baumannii感染HBE细胞,GB处理组分别用1×10~3CFU/m L、1×10~5CFU/m L和1×10~7CFU/m L的A.baumannii感染HBE细胞,A.baumannii感染联合GB处理组则先用10μmol/L GB阻断PAFR活性而后进行1×10~3CFU/m L A.baumannii感染。采用Western blot法检测HBE细胞PAFR、磷酸化的Janus激酶1(p-JAK1)、磷酸化的信号转导子与转录激活子1(p-STAT1)的蛋白水平,使用CCK-8法检测细胞增殖能力,使用超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒检测各组细胞氧化应激水平;异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)染色结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果与对照组相比,A.baumannii感染的HBE细胞中PAFR蛋白水平显著升高,细胞活力显著下降,细胞内MDA水平和细胞凋亡明显增加,p-JAK1和p-STAT1蛋白水平增加。结论 A.baumannii感染的HBE细胞PAFR活化,激活JAK1/STAT1信号通路促进HBE细胞的氧化应激和细胞凋亡。     

Slit/Robo信号在中枢神经发育和再生中的作用

<正>1984年Kidd等[1]首次在果蝇胚胎中发现Slit蛋白,1999年Brose等[2]发现Slit蛋白受体Roundabout(Robo),自此人们对Slit/Robo信号的认识有了重要的进展。在脊椎动物和无脊椎动物中,Slit/Robo是轴突导向和细胞迁移的一个重要调节机制[3-5]。它主要是通过对细胞骨架蛋白产生排斥、吸引等作用而影响生物的结构、发育和导向,产生众多的生物学功能[6,7]。除此之外,Slit/Robo信号还影响肿瘤的发生与迁移[8-12],白细胞趋化,肾脏血管生成和心脏发育等[13]。Slits是一种分泌型细胞外基质蛋白,在哺乳动物体内存     

GGA2在囊泡转运和相关疾病中作用的研究进展

<正>囊泡转运(vesicle transport)是大分子及颗粒性物质在细胞器间的跨膜转运方式,参与细胞多项重要的生命活动,如激素分泌、神经递质的释放及信息传递、天然免疫等,反式高尔基体网络(trans-Golgi network, TGN)-内体(endosome)运输作为其中一条途径,参与跨膜蛋白回收和重复利用^[1]。TGN-内体运输缺陷引起的蛋白平衡紊乱和细胞功能紊乱,与恶性肿瘤、     

颗粒蛋白前体(PGRN)敲除小鼠的巨噬细胞抑制乳腺癌细胞侵袭和迁移的分子机制

目的探究颗粒蛋白前体基因敲除(PGRN~(-/-))小鼠的巨噬细胞与乳腺癌细胞侵袭和迁移的关系及机制。方法选择野生型和PGRN~(-/-)小鼠巨噬细胞条件培养基培养乳腺癌细胞,采用Transwell~(TM)实验、划痕实验检测癌细胞的侵袭、迁移能力,Western blot法检测上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)的表达。通过细胞因子芯片、实时定量PCR和ELISA检测野生型和PGRN~(-/-)小鼠巨噬细胞分泌的细胞因子差异;用筛选出的差异表达细胞因子白细胞介素6(IL-6)处理乳腺癌细胞,采用上述方法检测对癌细胞侵袭迁移能力的影响并采用Western blot法检测核因子κB(NF-κB)信号通路和Janus激酶/信号转导子和转录激活子3(JAK/STAT3)信号通路在其中的作用。结果 PGRN~(-/-)小鼠的巨噬细胞NF-κB信号通路被阻断,减少IL-6分泌,抑制乳腺癌细胞侵袭和迁移; IL-6激活JAK/STAT3信号通路促进乳腺癌细胞侵袭迁移。结论 PGRN~(-/-)小鼠的巨噬细胞NF-κB信号通路被阻断,下调IL-6表达,进而抑制JAK/STAT3信号通路的激活,抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移。     

敲减FEZF1-AS1通过阻断JAK2/STAT3通路抑制食管鳞状细胞癌细胞的侵袭和迁移

目的探讨长链非编码RNA Fez家族锌指蛋白1反义核糖核酸1(FEZF1-AS1)与食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞侵袭、迁移以及与Janus激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路的关系。方法用实时定量PCR检测ESCC的癌组织和ESCC细胞系中FEZF1-AS1的表达;构建敲减FEZF1-AS1的慢病毒表达载体,敲减KYSE150、 KYSE510细胞的FEZF1-AS1后,流式细胞术检测细胞周期的变化,集落形成实验检测细胞增殖能力, Transwell~(TM)侵袭实验检测细胞侵袭能力, Transwell~(TM)迁移和划痕实验检测细胞迁移能力, Western blot法检测JAK2和磷酸化的STAT3(p-STAT3)蛋白水平。结果在ESCC的癌组织FEZF1-AS1高表达;与正常食管鳞状上皮细胞相比, KYSE150、 KYSE510细胞FEZF1-AS1表达高;敲减FEZF1-AS1表达后, ESCC癌细胞的细胞周期和增殖无明显变化,但明显抑制细胞的侵袭和迁移,且JAK2蛋白水平降低, p-STAT3蛋白水平增加。结论敲减FEZF1-AS1阻断JAK2/STAT3通路抑制ESCC细胞的侵袭和迁移。     

细胞因子调节垂体MtT/S细胞中人生长激素基因启动子的活性

目的:探讨细胞因子白介素-11(IL-11)、睫状神经营养因子(CNTF)和转化生长因子(TGF-β)对大鼠垂体MtT/S细胞中人生长激素(hGH)基因启动子活性的影响及其与垂体特异性转录因子Pit-1蛋白的关系。方法:采用荧光素酶报告基因的方法。首先建立含hGH基因启动子(-484～30 bp)和荧光素酶融合基因的稳定转化MtT/S细胞系,然后用细胞因子刺激,检测细胞培养液和细胞裂解液中GH的含量,反映它们对GH分泌和合成的影响;检测MtT/S细胞内荧光素酶的变化,说明细胞因子对hGH基因启动子活性的作用。将Pit-1蛋白表达质粒(pcDNA-pit-1-cDNA)单独转染或与Pit-1反义寡核苷酸(Pit-1OND)共转染于稳定转化的MtT/S细胞中,观察加入细胞因子后荧光素酶的变化,探讨细胞因子的作用与Pit-1蛋白的关系。结果:IL-11(20 nmol/L)、CNTF(10 nmol/L)能刺激大鼠垂体MtT/S细胞中GH的分泌和合成,增强MtT/S细胞中荧光素酶的表达,分别增加到对照组的134%、122%。TGF-β(5 nmol/L)能减少GH的分泌和合成,抑制荧光素酶的表达到对照组的72%。Pit-1蛋白过表达和表达被抑制对细胞因子的调节作用没有影响。结论:IL-11、CNTF和TGF-β通过调节大鼠垂体MtT/S细胞中hGH基因启动子活性影响GH的合成,Pit-1蛋白可能不参与这一调节作用。     

生长激素与免疫

近些年来,越来越多的实验资料证实生长激素(GH)在免疫系统发育和功能维持中具有重要的作用。GH 的分泌与胸腺发育相平行,外源性GH 能阻止和恢复老年动物胸腺的萎缩,增加胸腺素合成。人淋巴细胞有GH 受体,也能分泌GH;其分泌的GH 生物学活性、抗原性和分子量与垂体分泌的GH 一致。GH 能增强T 杀伤细胞、NK 细胞活性,亦能活化巨噬细胞和影响多核细胞的吞噬活性。GH 对免疫系统的调节可能是通过调控淋巴组织的生长来实现的。     

虾青素通过阻断JAK1/STAT3通路抑制肺癌A549细胞增殖并促进其凋亡

目的探讨虾青素对A549肺癌细胞增殖、凋亡的影响及可能的作用机制。方法实验分为对照组、DMSO溶剂对照组、(20、40、60、80、100)μmol/L虾青素组;CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2、Bax、信号转导子和转录激活子3(STAT3)和Janus激酶1(JAK1)蛋白水平。结果虾青素能够抑制A549细胞增殖,使A549细胞阻滞于G0/G1期,细胞凋亡增加;虾青素上调Bax蛋白水平,下调Bcl-2、STAT3、JAK1蛋白水平。结论虾青素通过抑制JAK1-STAT3信号通路抑制肺癌A549细胞增殖并促进其凋亡。     

激素对T淋巴细胞生长激素基因表达调控的影响1

目的探讨各种激素对T淋巴细胞GH基因表达的影响.方法构建含人GH调控序列的荧光素酶报告基因质粒PGL2-GH-luc,然后转染入T淋巴细胞系--JurkatE6-1细胞中,在培养液中分别加入各种激素.结果各浓度的GH、GHRH对Jurkat细胞中荧光素酶的表达有抑制作用(P＜0.01),而高剂量的TRH(10、100nmol/L)和SS(100nmol/L)对Jurkat细胞中荧光素酶的表达也有抑制作用(P＜0.05).结论T淋巴细胞中GH基因的表达受下丘脑激素和GH的调节.     

酪氨酸蛋白激酶在自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖肥大中的作用

目的: 明确自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞(SHR-VSMC)增殖与血小板源生长因子-AA(PDGF-AA)、PDGF-α受体表达的关系及酪氨酸蛋白激酶在其中的作用。方法: 在培养的血管平滑肌细胞中,采用免疫印迹(Westernblot)、[³H]-TdR及[³H]-Leu掺入等方法,观察在不同来源大鼠(SHR/WKY)血管平滑肌细胞中,PDGF-AA、PDGF-α受体及PDGF-β受体表达的差异性;在PDGF-AA刺激下细胞的增殖、肥大反应及酪氨酸激酶抑制剂(genistein)对其的影响。结果: SHR-VSMC中PDGF-AA、PDGF-α受体蛋白表达明显高于WKY-VSMC,而PDGF-β受体蛋白表达在SHR-VSMC与WKY-VSMC无明显差异;在不同浓度PDGF-AA刺激下,PCNA及[³H]掺入率在SHR-VSMC明显增强且呈剂量依赖性;酪氨酸激酶抑制剂(genistein)明显抑制PCNA表达及[³H]掺入。结论: 自发性高血压大鼠VSMCPDGF-A链及其α受体的自发性增高,可能是导致SHR-VSMC异常增殖、肥大,从而触发血管反应性和血管构型变化的重要原因之一;酪氨酸蛋白激酶介导的信号转导在其中发挥重要作用。     

黄精多糖对自身免疫性心肌炎大鼠JAK/STAT通路及心肌纤维化的影响

目的 探讨黄精多糖(Polygonatumsibiricumpolysaccharide,PSP)对自身免疫性心肌炎(AM)大鼠Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)通路及心肌纤维化的影响.方法 建立自身免疫性心肌炎大鼠模型,随机分为:模型组、PSP低剂量组、PSP中剂量组、PSP高剂量组、卡托普利...     

HPD-红光对离体人胃癌MGC80-3细胞DNA合成和细胞杀伤作用

血卟啉衍生物(HPD)光敏作用有明确的杀伤肿瘤效应,其作用机制已有不少报导;我们在研究离体人肿瘤和正常细胞对[~3H]-HPD的摄取和存留的基础上,用液闪计数及细胞计数方法,测定HPD-红光对离体人胃癌MGC80-3细胞DNA合成和细胞杀伤作用。 MGC80-3细胞用小方瓶培养,每瓶接种1.5×10~5细胞,加2ml培养液(含15％小牛血清的Eagle液),细胞在37℃温箱培养16～18小时,以5μg/mlHPD处理30分钟、红光(波长6300A±,功率密度50mw/cm~2)照射5分钟,换含[~3H]-胸苷(1μcl/ml)培养液,继续培养,用液闪计数方法,测定5和30分钟及2、6、10、24、48、72小时标本中掺入[~3H]-胸苷的cpm值。为测定HPD-红光的细胞杀伤效应,经