运动对血清胰岛素和生长激素水平的影响

运动对血清胰岛素和生长激素水平的影响金其贯本文观察有系统训练的体育系大学生和无系统训练的大学生运动前、后血清胰岛素（Ｉｎｓｕｌｉｎ）和人生长激素（ｈＧＨ）含量的变化，以探索运动对人体内分泌的影响，并探讨其生物学意义。资料和方法１．对象本院体育系男大学...     

糖皮质激素调节JAK2/STAT5信号抑制小鼠气道重塑平滑肌细胞的增殖作用

目的 观察糖皮质激素(glucocorticoid, GCS)通过调节JAK2/STAT5信号通路,抑制小鼠气道重塑气道平滑肌细胞增殖的作用.方法 以卵白蛋白致敏和雾化激发制备慢性小鼠哮喘气道重塑模型,计数支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中嗜酸性粒细胞(eosinophil, EOS)占白细胞总数的百分比;肺组织切片HE染色观察小鼠气道平滑肌厚度的病理改变;Western Blot检测肺组织中磷酸化p-JAK2和p-STAT5的蛋白表达.结果 糖皮质激素能显著降低哮喘模型小鼠BALF中EOS的百分比(P<0.05);糖皮质激素组小鼠气道平滑肌厚度低于模型组(P<0.05);糖皮质激素能显著降低p-JAK2和p-STAT5的蛋白表达(P<0.05).结论 糖皮质激素能通过调节JAK2/STAT5信号通路够有效缓解小鼠气道重塑气道平滑肌细胞增殖的作用,具有一定的气道保护作用.     

胰岛素抵抗糖尿病KKAy小鼠肌肉和肝组织PTEN蛋白表达增强

目的观察胰岛素抵抗KKAy小鼠胰岛素敏感组织肌肉及肝组织PTEN蛋白的表达,了解PTEN在胰岛素抵抗机制中的作用。方法实验分为对照组1(C57BL普通饲料喂养组),对照组2(C57BL高脂饲料喂养组),KKAy小鼠组。均尾静脉血测末梢血糖,连续两周随机血糖>16.7 mmol/L诊断为糖尿病,取等量股四头肌、肝组织进行Western blot检测。结果与对照组相比,KKAy组股四头肌、肝PTEN蛋白均明显增多(P<0.01)。结论PTEN可能是一种重要的负性调节因子,调节三磷酸肌醇激酶(PI3Ks)/蛋白激酶B(Akt)所介导的信号传导通路,在胰岛素抵抗的发生、发展中起着重要的作用。     

基于HepG2细胞胰岛素抵抗模型探讨miR-7-5p对Itch基因的靶向作用

目的:通过体外建立Hep G2细胞胰岛素抵抗模型,检测胰岛素抵抗状态下微小RNA-7-5p(miR-7-5p)及其预测靶基因Itch的差异表达,初步探讨miR-7-5p对Itch基因的靶向作用及其与胰岛素抵抗的关系。方法:采用适宜浓度的软脂酸诱导Hep G2细胞,建立体外胰岛素抵抗模型;基于生物信息学分析预测miR-7-5p可能作用的靶基因及其富集的相关信号通路;运用RT-q PCR和Western blot技术检测在胰岛素抵抗状态下miR-7-5p和Itch的表达变化。结果:0.25 mmol/L的软脂酸作用于Hep G2细胞24 h可诱导细胞产生胰岛素抵抗,RT-q PCR检测表明,与阴性对照组相比,胰岛素抵抗组的miR-7-5p表达下调(P0.01)。生物信息学分析结果表明,miR-7-5p有相当数量的靶基因富集于泛素-蛋白酶体系统,其中E3泛素连接酶Itch基因是与胰岛素抵抗最为相关的靶基因;Western blot结果揭示,在胰岛素抵抗状态下,Hep G2细胞中Itch蛋白表达上调(P0.01)。结论:miR-7-5p可能参与了胰岛素抵抗的病理生理过程,其机制可能通过靶向调控Itch基因的表达,进而直接或间接影响胰岛素信号通路的正常转导。     

大黄素和小檗碱改善HepG2细胞胰岛素抵抗的机制研究

目的： 探讨大黄素和小檗碱对高浓度游离脂肪酸(FFA)诱导HepG2细胞的胰岛素抵抗（IR）的影响及机制。方法: 用高浓度的FFA培养HepG2细胞,诱导为IR的细胞模型,测定培养液中葡萄糖浓度及细胞内糖原含量作为模型鉴定指标;MTT法分别检测大黄素和小檗碱的最适药物浓度;RT-PCR方法检测细胞中脂联素受体2（AdipoR2）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）的mRNA表达。结果: （1） IR的模型组培养液中葡萄糖含量明显高于正常对照组,细胞内糖原含量显著减少,AdipoR2和PPARγ mRNA表达下降,PEPCK mRNA表达升高(P<0.01)。（2）培养液中分别加入大黄素、小檗碱和吡格列酮可明显改善IR。结论: 高浓度的FFA培养HepG2细胞,能够诱导IR,大黄素、小檗碱能显著改善FFA引起的IR,并且可能通过AdipoR2、PPARγ、PEPCK而起作用。     

短期和长期过氧化状态对HepG2细胞Sestrin2以及PKB胰岛素信号的影响

目的探讨短期和长期过氧化状态对Sestrin2（Sesn2）及PKB胰岛素信号的影响及调控机理。方法在人肝HepG2细胞株以葡萄糖氧化酶（GO）和含糖培养基共培养4h或16h分别造成细胞短期和长期氧化状态;或胰岛素刺激（15min或16h）,然后以蛋白印迹法检测Sesn2蛋白含量和胰岛素信号变化（如PKBSer473和Thr308磷酸化水平）。为明确Sesn2作用,用Sesn2siRNA沉默Sesn2后,探讨胰岛素信号及相关信号变化。结果GO和胰岛素处理均可明显增加HepG2细胞Sens2蛋白水平;GO短期（4h）处理可明显刺激胰岛素标志性信号分子PKBSer473的磷酸化并刺激细胞Sesn2蛋白升高;而长时间（16h）GO处理则可抑制胰岛素刺激的Sesn2表达作用;Sesn2siRNA转染后．可增强胰岛素刺激的PKBSer473和Thr308位点的磷酸化作用。因此,Sesn2对上述不同机制调控的两个PKB磷酸化位点均有抑制作用。结论HepG2细胞在短期氧化状态下,可激活PKB活性（PKBSer473磷酸化）并诱导Sesn2蛋白表达;长期过氧化及胰岛素刺激情况下能激活Sesn2功能,而Sesn2可分别通过对PKBSer473及PKBThr308两个活性位点的抑制性作用和调控。实现对胰岛素信号及PKB活性的长期负反馈平衡作用。     

益母草碱调节JAK2/STAT3信号通路对乳腺癌细胞化疗敏感性的影响

目的 研究益母草碱对乳腺癌细胞化疗敏感性的影响,并分析其潜在机制。方法 体外培养萤火虫萤光素酶（Luc）基因标记的小鼠乳腺癌细胞系4T1-luc并构建其多柔比星（DOX）耐药细胞4T1-luc/DOX,以CCK-8法检测0、2.5、5、10、20、30μg/mL浓度益母草碱对4T1-luc及4T1-luc/DOX细胞存活率的影响并筛选其最佳作用浓度。将4T1-luc/DOX细胞分为对照组、DOX组、DOX+益母草碱组、DOX+益母草碱+colivelin(JAK2/STAT3信号激活剂)组,分组处理后以免疫印迹法检测各组细胞Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路相关蛋白、Bax、Bcl-2和P-糖蛋白（P-gp）表达;CCK-8法、生物发光法与流式细胞实验分别检测各组细胞增殖与凋亡。构建4T1-luc/DOX移植瘤小鼠模型,体内验证益母草碱对乳腺癌细胞化疗敏感性的影响。结果 与对照组、DOX组相比,DOX+益母草碱组细胞与小鼠肿瘤组织Bax蛋白表达、细胞凋亡率升高（P<0.05）,p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、Bcl-2及P...     

逆转录病毒介导人胰岛素基因感染pT67、Phoenix和HepG2细胞的表达

十余年前，第一例腺苷酸脱氨酶缺陷症的基因矫正作用为多种疾病的基因治疗带来了极大希望和鼓舞。基因治疗是解决人类遗传缺陷症极有希望的途径。寻找可靠、高效、安全的载体仍是当前基因治疗的关键任务。本研究的目的在于探讨构建人胰岛素基因逆转录病毒载体并检测逆转录病毒介导人胰岛素基因感染pT67、Phoenix和HepG2细胞后胰岛素蛋白质的表达。     

转录因子2过表达改善人肝癌细胞HepG2的胰岛素抵抗

目的研究转录因子2(TCF2)过表达对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响。方法用高浓度胰岛素(1×10-8mol/L)诱导处理人肝癌HepG2细胞24 h建立人肝癌HepG2细胞胰岛素抵抗模型,分为空白组、胰岛素抵抗模型组(IR组)、IR+空载体组和IR+TCF2过表达组;RT-qPCR和Western blot检测TCF2的表达;葡萄糖氧化酶法检测培养液中的葡萄糖浓度;蒽酮法检测糖原合成量;MTT法检测细胞存活率;比色法检测己糖激酶和丙酮酸激酶的活性;Western blot检测人胰岛素受体底物(IRS-1)和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达。结果与空白组比较,IR组细胞葡萄糖消耗量显著降低(P<0.05),表明模型建立成功。IR组细胞TCF2 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05)。与IR组相比,TCF2过表达可显著增加胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量、肝糖原合成量、己糖激酶活性和丙酮酸激酶活性,增加IRS-1和GLUT4蛋白表达(P<0.05)。结论过表达TCF2可改善人肝癌HepG2细胞的胰岛素抵抗。     

普鲁卡因调控CXCR7并影响AKT和STAT3信号通路从而抑制膀胱癌细胞活力、迁移和侵袭

目的:探讨普鲁卡因(PCA)及CXC趋化因子受体7(CXCR7)对膀胱癌细胞活力、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法:用不同浓度PCA处理人膀胱癌RT4细胞,并将细胞分为PBS组(无PCA处理)、PCA组(4 mmol/L PCA处理)、siRNA阴性对照(si-Con)组(转染si-Con)、CXCR7 siRNA(si-CXCR7)组(转染si-CXCR7)、PCA+pcDNA组(4 mmol/L PCA处理并转染pcDNA)和PCA+pcDNA-CXCR7组(4 mmol/L PCA处理并转染pcDNACXCR7),siRNA和pcDNA均用脂质体法转染至RT4细胞。运用RT-qPCR检测RT4细胞中CXCR7的mRNA表达水平;采用CCK-8法检测各组细胞的活力;Transwell实验检测各组细胞的侵袭和迁移能力;Western blot检测各组细胞中CXCR7、AKT、STAT3、p-AKT和p-STAT3的蛋白水平。结果:相较于PBS组,不同浓度PCA处理后RT4细胞的活力、迁移能力和侵袭能力显著降低(P<0. 05),PCA组RT4细胞中CXCR7的mRNA和蛋...     

无生长追赶SGA幼鼠生长激素和胰岛素受体后信号交联对话的研究

目的：在生长激素（GH）和胰岛素（INS）共享受体后PI3K通路基础上探讨无生长追赶的出生低体重（NCU-SGA）幼鼠GH和INS抵抗的受体后机制，以及2者受体后信号通路的交联对话（cross-talk）。方法:取4周龄NCU-SGA雄性大鼠，采用Western印记及免疫共沉淀技术分别测定NCU-SGA幼鼠在基础状态下、胰岛素激发以及先给予GH受体后信号通路JAK2阻滞剂AG490后再行胰岛素激发后（AG490+INS组）肝组织胰岛素受体底物-1（IRS-1）及其下游信号磷酸化Akt(p-Akt)的表达。结果:（1）IRS-1信号表达： SGA鼠基础状态、INS激发后和AG490+INS组，3组间的IRS-1总蛋白及IRS-1磷酸化水平与正常对照组（C组）无显著差异（P＞0.05）。（2）p-Akt信号表达： C组基础状态时无p-Akt信号表达，INS刺激后表达明显增强。SGA鼠基础状态时p-Akt已有显著表达（慢性激活），INS刺激后表达较基础状态增加，但增殖显著低于正常对照组（P＜0.01）；AG490+INS组的p-Akt较JAK2未被阻断时明显增强（P＜0.01），但仍显著低于正常对照组（P＜0.01)，提示GH的信号干扰了INS受体后IRS-1至Akt的信号转导。结论:NCU-SGA幼鼠INS抵抗的发生与IRS-1-Akt通路受损有关，GH抵抗经GH和INS 2者受体后信号通路间的交联对话（cross-talk）使IRS-1至Akt间的信号转导解偶联,诱导和加重了INS抵抗；而PI3K-Akt可能是发生该解偶联的主要交汇点。     

丝胶对2型糖尿病大鼠睾丸生长激素/胰岛素样生长因子-1轴的作用

目的 探讨丝胶对2型糖尿病大鼠睾丸生长激素（GH）/胰岛素样生长因子-1（IGF-1）轴的作用。 方法 40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、丝胶治疗组和阳性对照组,每组均为10只。链脲佐菌素连续腹腔注射制作2型糖尿病大鼠模型,1周后以血糖≥16.7mmol/L作为成模标准。待模型成功建立后,模型组大鼠不做任何处理,丝胶治疗组大鼠给予丝胶灌胃［2.4g/(kg&#8226;d)］,阳性对照组大鼠给予二甲双胍［55.33mg/(kg&#8226;d)］灌胃,均为35d。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）方法检测大鼠血清睾酮、GH和IGF-1水平;分别采用免疫组织化学染色、免疫印迹法和RT-PCR法检测睾丸GH、GH受体（GHR）和IGF-1的表达。 结果 丝胶可明显降低糖尿病大鼠血GH水平、下调睾丸GH的表达,升高血IGF-1和睾酮水平,上调睾丸IGF-1和GHR的表达（P＜0.05,P＜0.01）。并且丝胶治疗组各项指标与阳性对照组比较无明显差别（P＞0.05）。 结论 丝胶可通过调节糖尿病时GH/IGF-1轴紊乱改善生精功能,发挥对糖尿病生殖功能损害的保护作用,其作用与二甲双胍相当。     

番泻苷B抑制STAT3和ERK1/2磷酸化对A549细胞生长侵袭及裸鼠成瘤的影响

目的　探讨番泻苷B对A549细胞生长、侵袭及裸鼠成瘤的影响及机制。 方法　采用0、5、10、20 μM番泻苷B处理非小细胞肺癌A549细胞,将细胞随机分为4组进行后续实验,Brdu染色检测各组细胞增殖;Hoechst染色检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹检测ki67、PCNA 、cl-caspase-3、cl-caspase-9、VEGF、N-cadherin和E-cadherin蛋白表达水平,STAT3和ERK1/2的磷酸化情况;建立荷瘤小鼠模型,检测肿瘤重量,免疫组化检测Ki67和VEGF表达。 结果　与Control组相比较,各番泻苷B剂量组Brdu阳性细胞数量、侵袭细胞数明显减少（P<0.05）,细胞凋亡率明显上升（P<0.05）,细胞划痕愈合率降低（P<0.05）,ki67、PCNA、VEGF、N-cadherin蛋白水平明显降低（P<0.05）,cl-caspase-3、cl-caspase-9、E-cadherin蛋白水平明显升高（P<0.05）,STAT3和ERK1/2的磷酸化水平均明显降低（P<0.05）,降低荷瘤小鼠肿瘤重量与Ki67和VEGF表达水平（P<0.05）。 结论　番泻苷B抑制STAT3、ERK1/2磷酸化对A549细胞体内外生长有抑制作用。     

番泻苷B抑制STAT3和ERK1/2磷酸化对A549细胞生长侵袭及裸鼠成瘤的影响

目的　探讨番泻苷B对A549细胞生长、侵袭及裸鼠成瘤的影响及机制。 方法　采用0、5、10、20 μM番泻苷B处理非小细胞肺癌A549细胞,将细胞随机分为4组进行后续实验,Brdu染色检测各组细胞增殖;Hoechst染色检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹检测ki67、PCNA 、cl-caspase-3、cl-caspase-9、VEGF、N-cadherin和E-cadherin蛋白表达水平,STAT3和ERK1/2的磷酸化情况;建立荷瘤小鼠模型,检测肿瘤重量,免疫组化检测Ki67和VEGF表达。 结果　与Control组相比较,各番泻苷B剂量组Brdu阳性细胞数量、侵袭细胞数明显减少（P<0.05）,细胞凋亡率明显上升（P<0.05）,细胞划痕愈合率降低（P<0.05）,ki67、PCNA、VEGF、N-cadherin蛋白水平明显降低（P<0.05）,cl-caspase-3、cl-caspase-9、E-cadherin蛋白水平明显升高（P<0.05）,STAT3和ERK1/2的磷酸化水平均明显降低（P<0.05）,降低荷瘤小鼠肿瘤重量与Ki67和VEGF表达水平（P<0.05）。 结论　番泻苷B抑制STAT3、ERK1/2磷酸化对A549细胞体内外生长有抑制作用。     

胰岛素抗性对肝癌HepG2细胞生物学功能及顺铂敏感性的影响

 目的:研究胰岛素抗性在原发性肝癌细胞中的生物学功能及对顺铂抗癌药物的抗药敏感性的影响。方法: 利用高浓度的胰岛素连续培养HepG2细胞72 h获得抗胰岛素的HepG2细胞（HepG2/IR）,检测HepG2/IR细胞的黏附、迁移和侵袭的能力改变以及对顺铂的敏感性;同时利用流式细胞术测定HepG2和HepG2/IR中胰岛素受体和葡萄糖转运蛋白2的表达情况。结果: 胰岛素抗性HepG2/IR细胞中葡萄糖消耗量显著降低;胰岛素受体和葡萄糖转运蛋白2表达下调;而HepG2/IR细胞的黏附、迁移和侵袭能力明显增强;同时HepG2/IR细胞对顺铂的敏感性降低;但用吡格列酮处理HepG2/IR细胞后其黏附、迁移和侵袭能力显著减弱。结论: 胰岛素抗性与HepG2细胞的耐药性、细胞黏附、迁移和侵袭能力密切相关。这有助于解释具有胰岛素抗性的癌症患者对化疗失敏的临床现象。     

检测血清IGF-1和IGFBP-3对儿童生长激素缺乏症的诊断价值

目的：探讨血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)浓度在诊断生长激素缺乏症(GHD)患儿中的应用价值。方法：用免疫放射分析检测38例GHD患儿和42例对照儿童的血清IGF-1和IGFBP-3,同时进行生长激素(GH)激发试验,用化学发光法检测GH,对两组结果进行比较。结果：GHD组患儿IGF-1和IGFBP-3均显著低于对照组儿童,且在GH激发试验中,GH的增加值也明显低于对照组。结论：检测血清中的IGF-1和IGFBP-3,对诊断GHD儿童具有重要价值。