mMCP-1对病毒性心肌炎小鼠心肌病变的干预作用

目的研究N端2—8位氨基酸缺失的突变型MCP-1（mutated MCP-1，mMCP-1）对病毒性心肌炎小鼠心肌病变的干预作用。方法CVB3腹腔注射BALB／c小鼠，随机分组：病毒性心肌炎组（A组）、mMCP-1干预组（B组）、空质粒pVAX1对照组（C组）和未感染生理盐水对照组（D组）。比较各组小鼠心脏重量和体重的比值（HW／BW）、心肌组织病理学积分（PS）、心肌组织病毒载量、血清CK—MB水平和心肌浸润的单个核细胞变化。结果与A组相比，B组血清CK—MB水平降低（P〈0．01）、PS减少（P〈0．05），HW／BW和CVB3载量未呈明显改变（P〉0．05）；B组小鼠心肌浸润的单个核细胞减少（P〈0．01），平均下降41、7％；与D组相比，B组CK—MB、PS、HW／BW和CVB3载量均明显升高。而与A组相比，C组CVB3载量、血清CK—MB水平、HW／BW和心肌组织病理学积分均未呈明显改变。结论mMCP-1可缓解病毒性心肌炎中心肌组织病变和心肌损伤，这与单个核细胞浸润减少有关。     

阻断单核细胞趋化蛋白-1可缓解病毒性心肌炎心肌病变

目的　研究单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)在B3型柯萨奇病毒 (CVB3)诱导病毒性心肌炎 (VMC)发病中的作用及其机制。方法　CVB3腹腔注射BALB/c小鼠 ,随机分 3组 :VMC组 (A组 )、抗体阻断组 (B组 )、羊IgG对照组 (C组 ) ,并设未感染生理盐水对照组 (D组 )。比较各组小鼠心脏重量和体重的比值 (HW/BW )、心肌组织病理学积分 (PS)、心肌组织病毒载量、血清CK MB水平和心肌浸润的单个核细胞变化。流式细胞术分析单个核细胞表面CCR2 ,趋化试验分析病毒性心肌炎小鼠外周血单个核细胞对MCP 1的趋化性。结果　与A组相比 ,B组血清CK MB水平降低 (P <0 .0 1)、PS减少 (P <0 .0 5 ) ,但是HW /BW和CVB3载量未呈明显改变 (P>0 .0 5 ) ;B组小鼠心肌浸润的单个核细胞减少 ,下降 2 2 %～ 5 6 % ,平均下降 39% ;与D组相比 ,B组CK MB、PS、HW /BW和CVB3载量均明显升高。而与A组相比 ,C组CVB3载量、血清CK MB水平、HW/BW和心肌组织病理学积分均未呈明显改变。同时发现 ,A组小鼠心肌组织浸润的单个核细胞中CCR2 细胞为 70 .2 9% ,外周血单个核细胞中CCR2 的细胞占 33.76 % ;B组小鼠心肌组织浸润的单个核细胞中CCR2 细胞下降 ,为 4 4 .37%。体外经MCP 1趋化的病毒性心肌炎外周血单个核细胞中CCR2 细胞占 86 .5 5 % ,而未趋     

突变型单核细胞趋化蛋白-1构建及其对单核细胞趋化蛋白-1的干预作用

目的:构建表达N端2-8位氨基酸缺失的突变型单核细胞趋化蛋白-1(mMCP-1),并观察其对单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的干预作用.方法:Megaprimer-PCR构建mMCP-1-pVAX1(pVMm).以脂质体将pVMm转染真核细胞系C2C12,ELISA分析mMCP-1的表达情况.采用趋化实验分析mMCP-1对病毒性心肌炎小鼠外周血单个核细胞(PMNCs)的趋化活性及其对MCP-1的干预作用.结果:①酶切和测序显示野生型MCP-1真核表达载体(pVM)和pVMm构建成功.pVMm在真核细胞C2C12中有效表达.②mMCP-1不具有趋化病毒性心肌炎小鼠PMNCs的活性.与单纯使用MCP-1相比,以不同浓度的mMCP-1和MCP-1同时行趋化实验,被趋化的细胞明显减少(P＜0.01),25 μg/L mMCP-1可阻断10 μg/L MCP-1对病毒性心肌炎小鼠PMNC的趋化活性.结论:小鼠MCP-1 N端2-8位氨基酸决定其趋化活性.mMCP-1可用于干预MCP-1的作用.     

抗IL-22抗体对IL-17A基因敲除小鼠病毒性心肌炎的影响

目的将IL-17A基因敲除病毒性心肌炎小鼠腹腔内注射抗IL-22抗体,探讨抗IL-22抗体对IL-17A基因敲除小鼠病毒性心肌炎的影响。方法将18只小鼠分为抗IL-22抗体组、病毒性心肌炎组和对照组,抗IL-22抗体组和病毒性心肌炎组小鼠建立病毒性心肌炎小鼠模型,建模当天抗IL-22抗体组小鼠腹腔内注射抗IL-22抗体50μg,病毒性心肌炎小鼠腹腔内注射等体积PBS液,对照组小鼠不做任何处理。观察建模2周时各组小鼠心肌Nancy株柯萨奇病毒的复制情况、心肌炎性因子表达情况和血清IL-22蛋白、心肌IL-22 mRNA的表达情况。结果抗IL-22抗体组小鼠心肌Nancy株柯萨奇病毒RNA和病毒滴度均明显高于病毒性心肌炎组(P0.05)。抗IL-22抗体组IFN-γmRNA含量和TNF-αmRNA含量均高于对照组(P0.05);抗IL-22抗体组IFN-γmRNA含量和TNF-αmRNA含量均低于病毒性心肌炎组(P0.05);病毒性心肌炎组IFN-γmRNA含量和TNF-αmRNA含量均高于对照组(P0.05)。抗IL-22抗体组血清IL-22蛋白和心肌IL-22 mRNA含量均高于对照组(P0.05);抗IL-22抗体组血清IL-22蛋白和心肌IL-22 mRNA含量均低于病毒性心肌炎组(P0.05);病毒性心肌炎组血清IL-22蛋白和心肌IL-22 mRNA含量均高于对照组(P0.05)。结论抗IL-22抗体能够加重病毒性心肌炎小鼠心肌病毒的复制,降低小鼠心肌炎性因子的表达,降低小鼠血清IL-22蛋白和心肌IL-22 mRNA水平。     

心肌特异性自身细胞毒反应中单核细胞趋化蛋白-1的作用

目的:研究单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在介导心肌特异性自身细胞毒反应中的作用.方法:腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3)建立病毒性心肌炎小鼠模型,正常对照组腹腔注射生理盐水.在腹腔注射后7 d和9 d分离外周血单个核细胞(PMNCs)和心肌组织浸润的单个核细胞(IMNCs),用10 μg/L MCP-1与PMNCs进行趋化试验,并用1 mg/L、2.5 mg/L和5 mg/L的抗MCP-1多抗做抗体阻断趋化试验,计算趋化指数.差异贴壁法体外分离BALB/c小鼠心肌细胞,以其作靶细胞,用经MCP-1趋化的PMNCs或分离的IMNCs作效应细胞,进行细胞介导的细胞毒试验,计算效应细胞的特异性杀伤率.结果:CVB3感染后7 d小鼠IMNCs对正常心肌细胞的特异性杀伤率是(41.3±7.3)%,高于对照组的(18.3±2.9)%(P＜0.01);与感染后7 d相比,感染后9 d的小鼠心肌IMNCs对心肌细胞的特异性杀伤率增强至(59.2±4.7)%(P＜0.05).MCP-1对CVB3感染9 d小鼠PMNCs的趋化指数为4.3±0.4,2.5 mg/L和5 mg/L的抗MCP-1抗体均可完全阻断此趋化活性.经MCP-1趋化的PMNCs对正常心肌细胞的特异性杀伤率为(43.7±4.7)%,高于对照的(12.2±2.8)%(P＜0.01).结论:病毒性心肌炎心肌组织中的IMNCs对正常心肌细胞有自身细胞毒活性.MCP-1可能是介导心肌特异性自身细胞毒性单个核细胞迁移的一个重要因素.     

小鼠慢性自身免疫性心肌炎模型的建立

目的:建立Balb/c小鼠实验性慢性自身免疫性心肌炎模型.方法:用遗传易感的5周龄雄性Balb/c小鼠,于第0天、第7天、第21天、第42天重复皮下注射纯化的猪心肌肌球蛋白,分别于免疫后14、21、42、70 d处死小鼠,观察组织病理变化情况,测定血清肌球蛋白抗体滴度和心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)浓度.结果:实验组86%(31/36)小鼠出现不同程度的心肌炎病理改变.14 d、21 d出现急性心肌炎表现,主要为心外膜下、心肌间质单个核细胞浸润和肌浆溶解.42 d、70 d符合慢性心肌炎病理表现,主要表现为肌纤维排列紊乱、纤维化,而心肌间质和心外膜下仍可见少量单个核细胞浸润.血清抗心肌肌球蛋白自身抗体滴度、cTnⅠ浓度在急慢性期不同时间段均有不同程度增高.结论:猪心肌肌球蛋白重复免疫可以诱导Balb/c小鼠出现典型的炎症持续存在的慢性自身免疫性心肌炎.     

卡维地洛对柯萨奇病毒B3病毒性心肌炎小鼠的疗效及其抗氧化应激作用

目的观察卡维地洛对柯萨奇病毒B3(CVB3)病毒性心肌炎小鼠的疗效。方法将80只小鼠随机分为3组:正常对照组(n=20),心肌炎组(n=30)与卡维地洛组(n=30),利用BALB/C小鼠感染CVB3建立病毒性心肌炎模型,感染24 h后每天灌胃给予卡维地洛10 mg/kg直至第14天,分别于接种第7天和第14天随机从各组抽取若干只小鼠取血后处死并留取心脏等标本。结果卡维地洛降低病毒性心肌炎小鼠急性期的死亡率,显著减轻心脏病理损伤,显著降低HW/BW(HW=心脏重量,BW=身体重量)比值;小鼠感染CVB3后第7天和第14天体内脂质过氧化物丙二醛(MDA)增高而超氧化物岐化酶(SOD)降低;卡维地洛干预后第7天小鼠心肌与血清中MDA含量显著降低,SOD含量有增加趋势但无统计学意义;干预后第14天SOD含量显著增加,MDA含量显著降低。结论卡维地洛对病毒性心肌炎有保护作用,不仅可以显著减轻感染小鼠的心肌损害,提高生存率,还具有明显抗氧化功效。     

CPG寡核苷酸对卵清蛋白致敏幼鼠血清中Th1/Th2细胞因子及肥大细胞趋化蛋白1的影响

目的：利用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)建立幼鼠食物过敏模型,观察非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤寡核苷酸(CPG oligodeo-xynucleotide,CPG-ODN)对OVA致敏的干预作用。方法选用2～3周龄BALB/c雌性幼鼠40只建立幼鼠食物过敏模型,分为对照组、不同剂量OVA致敏组(20μg、50μg和100μg组)及CPG-ODN干预组(50μg OVA + CPG-ODN),每组8只。观察过敏症状并评分;眼球取血,检测血清中OVA-IgE、肥大细胞趋化蛋白1(mast cell chemotactic protein 1,mMCP-1)及Th1/Th2相关细胞因子IFN-γ、IL-4的水平;空肠组织行病理学检测。结果除对照组外,致敏组小鼠均出现不同程度过敏症状,空肠表现为Ⅰ型变态反应病理特点,Th2细胞因子、OVA-IgE、mMCP-1水平升高,20μg、50μg致敏组Th1水平降低,50μg致敏组指标改变最显著;与致敏组相比,干预组小鼠过敏症状及病理改变明显减轻,Th2细胞因子、IgE及mMCP-1水平降低,Th1水平升高。结论用50μg OVA建立的BALB/c幼鼠食物过敏模型致敏效果最好,CPG-ODN通过改善Th1/Th2失衡状态,抑制幼鼠食物过敏反应。mMCP-1在过敏性疾病的发生、发展中起重要作用,有望成为食物过敏临床检测指标之一。     

实验性自身免疫性心肌炎小鼠的免疫功能变化

目的 观察肌凝蛋白诱导Balb／c小鼠发生自身免疫性心肌炎后小鼠免疫功能的变化。方法 以猪心肌中提取并纯化的肌凝蛋白免疫Balb／c小鼠,建立自身免疫性心肌炎模型。流式细胞仪检测小鼠外周血和脾淋巴细胞CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋、Th1、Th2及TCRVβ8．1＆8．2和TCRVβ10的变化,酶联吸附试验观察外周血TGF-β1和抗肌凝蛋白抗体的变化。^3H—TdR检测小鼠脾脏单个核细胞对肌凝蛋白刺激的增殖反应。结果 940（15／16）小鼠在免疫后第18天出现不同程度的心肌炎病理改变,主要表现为心肌间质单个核细胞浸润;免疫鼠血浆肌钙蛋白Ⅰ水平升高,TGF-β1水平显著下降,并出现较高滴度的抗肌凝蛋白自身抗体。免疫小鼠外周血CD3^＋CD4^＋细胞较正常对照小鼠显著增高。外周血和脾脏Th1、Th1／Th2及TCRVβ8．1＆．8．2阳性T淋巴细胞显著增加;小鼠脾脏单个核细胞对肌凝蛋白的增殖反应较对照组明显增加。结论猪心肌肌凝蛋白可以诱导Balb／c小鼠出现典型的自身免疫性心肌炎,是一种以Th1细胞介导为主的自身免疫反应。     

抗FasL抗体在小鼠病毒性心肌炎治疗中的作用

目的：探讨抗FasL抗体对小鼠柯萨奇B3（CVB3）病毒性心肌炎心肌细胞凋亡及病毒滴度的调节作用。方法：随机将80只Balb／c小鼠分为空白对照组、病毒对照组、IgG对照组及抗FasL抗体治疗组,于感染后第10天每组处死8只并取其心脏,光镜检查的心肌病理变化,原位末端标记法（TUNEL）检测小鼠心肌组织的细胞凋亡,用空斑形成技术（PFU法）测定心肌病毒滴度。结果：抗FasL抗体治疗组小鼠死亡率、心肌病变积分、心肌细胞凋亡率、心肌病毒滴度均明显低于病毒对照组及IgG对照组（P均〈0．01）。结论：抗FasL抗体可降低小鼠CVB,病毒性心肌炎心肌内病毒滴度、减少心肌细胞凋亡和心肌损伤．     

胰岛素样生长因子-1对小鼠病毒性心肌炎心肌细胞凋亡蛋白p53的表达的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌凋亡蛋白p53的影响。方法:将60只Balb/c雄性小鼠随机分为3组,正常对照组、柯萨奇病毒(CVB3)感染组(感染组)和病毒感染加IGF-1干预组(治疗组)。在实验第10天处死动物,留取心肌标本。免疫组织化学法检测心肌组织p53的变化。结果:治疗组心肌p53为123.5±11.2,明显低于感染组(167.9±15.6,P<0.01),故IGF-1能显著降低VMC小鼠心肌凋亡蛋白p53的表达。结论:IGF-1对VMC小鼠的心肌细胞有保护作用。     

内源性硫化氢对柯萨奇病毒B3性心肌炎小鼠心肌内病毒复制的影响

目的观察内源性硫化氢（H2S）对柯萨奇病毒B3（CVB3）所致病毒性心肌炎（VMC）小鼠心肌内病毒复制的影响,探讨内源性H2S在VMC发病机理中的作用。方法雄性Balb／c小鼠通过腹腔接种CVB,复制VMC模型。75只雄性Balb／c小鼠随机分为5组（每组15只）：正常对照组、VMC组及胱硫醚-1-裂解酶（CSE）不可逆抑制剂-炔丙基甘氨酸（PAG）低、中、高剂量干预组（PAG给药采用皮下注射,PAG低、中、高剂量干预组的PAG剂量分别为：20．0、40．0、80．0mg·kg^-1,1次／d,共6次。PAG的首次给药为腹腔接种CVB,的同时皮下注射PAG）。于腹腔接种CVB,后第7天处死小鼠。用光镜观察心肌组织的病理变化;用分光光度法测定心肌组织的H2S含量;用酶免疫吸附法测定心肌组织的CSE活性及血清的心肌肌钙蛋白I（cTnI）含量;用逆转录．聚合酶链反应方法检测心肌组织CVB,mRNA表达。结果VMC组心肌组织的CSE活性、H2S含量明显低于正常对照组（P〈0．01）,心肌组织的病理积分、CVB,mRNA表达水平及血清的cTn I含量明显高于正常对照组（P〈0．01）;PAG低、中、高剂量3个干预组心肌组织的CSE活性、H2S含量明显低于VMC组（P〈0．01）,心肌组织的病理积分、CVB,mRNA表达水平及血清的cTn I含量明显高于VMC组（P〈0．01）。结论心肌内源性H2S能抑制CVB,在心肌内复制。     

Monocyte chemotactic protein 1 increases homing of mesenchymal stem cell to injured myocardium and neovascularization following myocardial infarction

Objective：To investigate the effect of MCP-1 on mesenchymal stem cells（MSCs） homing to injured myocardium in a rat myocardial infarction（MI） model. Methods：Rat myocardial infarction model was established by permanent left anterior descending branch ligation. Mesenchymal stem cells from donor rats were cultured in IMDM and labeled with BrdU. The Rats were divided into two groups. Monocyte chemotactic protein I（MCP-1） expression were measured by in situ hybridization and immunohistochemistry in the sham operated or infarcted hearts at 1, 2, 4, 7, 14 and 28 days post operation in MCP-1 detection group. The rats were injected with MCP-1, anti-MCP-1 antibody or saline 4 days after myocardial infarction in intervention group. Then, a total of 5 × 10^6 cells in 2.5 ml of PBS were injected through the tail vein. The number of the labeled MSCs in the infarcted hearts was counted 3 days post injection. Cardiac function and blood vessel density were assessed 28 days post injection. Results：Self-generating MCP-1 expression was increased at the first day, peaked at the 7^th day and decreased thereafter post MI and remained unchanged in sham operated hearts. The MSCs enrichment in the host hearts were more abundant in the MI groups than that in the non-MI group（P= 0.000）, the MSCs enrichment in the host hearts were more abundant in the MCP-1 injected group than that in the anti-MCP-1 antibody and saline injected groups （P = 0.000）. Cardiac function was improved more in MCP-1 injected group than anti-MCP-1 antibody and saline injected groups（P= 0.000）. Neovascularization in MCP-1 injected group significantly increased compared with that of other groups（P = 0.000）. Conclusion： Myocardial MCP-1 expression was increased only in the early phase post MI. MCP-1 may enhance MSCs homing to the injured heart and improve cardiac function by promoting neovascularization.     

哈巴苷对病毒性心肌炎模型小鼠的影响

目的:本研究旨在探讨哈巴苷对病毒性心肌炎模型小鼠的作用。方法:将小鼠随机分为6组:对照组、柯萨奇病毒B3(coxsackievirus group B type3,CVB3)组、哈巴苷(低、中、高剂量)组和卡托普利组,采用CVB3诱导病毒性心肌炎小鼠模型。HE染色观察心肌病理损伤程度;紫外分光光度法检测肌酸激酶同工酶-MB(creatine kinase lsoenzyme-MB,CK-MB)、乳酸脱氢酶(lactatedehy drogenase,LDH)、心肌肌钙蛋白I(myocardialtroponin I,cTnI)和心肌钙蛋白T(cardiac troponin,cTnT)水平;超声心动图检测小鼠左室舒张期后壁厚度(LVPWd)、射血分数(EF%)、舒张早期二尖瓣血流速度(E)、舒张早期二尖瓣环运动速度(E′IVS);ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β);蛋白免疫印迹法检测NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)、半胱天冬酶-1(cleaved caspase-1)的蛋白表达。结果:与CVB3组相比,哈巴苷低、中、高剂量组和卡托普利组心肌病理损伤程度明显改善;CK-MB、LDH、cTnI、cTnT水平明显降低(P<0.05);LVPWD、E/E′IVS明显降低(P<0.05),EF%明显升高(P<0.05);TNF-α、IL-6、IL-1β水平明显降低(P<0.05);NLRP3、cleaved caspase-1蛋白水平明显降低(P<0.05)。结论:哈巴苷对CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠具有治疗作用。     

反义寡核苷酸抑制柯萨奇病毒B_3致病作用的实验研究

目的 :观察在细胞培养系统和小鼠体内反义寡核苷酸 (AODN)抑制柯萨奇病毒B3(CVB3)致病作用。方法 :观察细胞病变效应 (CPE) ,常规微量法滴定病毒的50 %组织细胞感染量 (TCID50)以及观察感染小鼠心肌组织的病理改变。结果 :1 AODN可推迟和减轻CVB3 感染细胞CPE ,且随AODN浓度增高 ,对CPE的抑制作用增强 ;培养上清中病毒滴度随AODN浓度升高而降低。2 随AODN剂量增加 ,感染小鼠心肌组织病毒滴度逐渐降低 ;心肌细胞病变程度逐渐减轻 ;心肌炎发病率也逐渐降低。结论 :AODN可能通过抑制CVB3 复制来保护Vero细胞和小鼠心肌组织抵抗感染。     

冬虫夏草提取液治疗实验性病毒性心肌炎研究

目的:旨在探讨冬虫夏草提取液早期治疗病毒性心肌炎小鼠模型的疗效。方法:10 0只成年雄性BALB/c鼠随机分为正常对照组(CG)、感染组(IG)和CSAE灌胃治疗组(CIG)。IG组、CIG组小鼠腹腔接种CVB3建立病毒性心肌炎小鼠模型,并于接种病毒后第7天、第14天分批处死。光镜下观察心肌组织学变化、心重/体重及小鼠存活率。结果:接种病毒后第7天及第14天CIG组心肌炎症坏死半定量分析较IG组显著减轻(P <0 .0 1) ,心重/体重降低(P <0 .0 1) ;CIG组14d存活率85 %显著高于IG组5 5 % (P <0 .0 5 )。结论:CSAE对VMC小鼠有保护作用。     

参附注射液对病毒性心肌炎小鼠心肌能量代谢的保护作用

目的 探讨参附注射液对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌能量代谢的保护作用.方法 将雄性Balb/c小鼠随机分为柯萨奇B3病毒(CVB3)感染组、CVB3感染加参附注射液治疗组和对照组.分别采用电镜和形态计量学方法观察心肌线粒体形态、数量和膜磷脂定位;酶细胞化学法分析线粒体细胞色素C氧化酶(CCO)和琥珀酸脱氢酶(SDH)活性.结果 感染组小鼠心肌线粒体大量破坏,膜磷脂严重缺失、定位改变;CCO和SDH活性降低.各时间点治疗组上述各项指标均较感染组显著改善.结论 VMC心肌线粒体结构严重破坏、功能明显下降,参附注射液能有效保护VMC心肌线粒体结构和功能,改善心肌能量代谢.