CTGF——肝纤维化治疗新亮点

肝纤维化是大多数慢性肝病所共有的病理特征,是各种慢性肝病向肝硬化发展的主要中间环节。近年来,发现了一种被称为致肝纤维化总开关的因子——结缔组织生长因子(CTGF),为研究肝纤维化的发病机制及新的治疗方案添加了新的亮点。     

实验性肝纤维化大鼠细胞因子及超微结构的变化和意义

目的:研究四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化大鼠肝脏转化生长因子β1(TGFβ1)和结缔组织生长因子(CTGF)的表达及定位,血清IL-6、IL-10和IL-18的变化,以及肝组织超微结构的改变.方法:将28只大鼠随机分为正常对照组与模型组,模型组大鼠予以40?l4皮下注射8周后处死.免疫组化技术检测TGFβ1和CTGF在肝脏的表达及细胞内的定位;ELISA检测血清IL-6、IL-10和IL-18;电镜检测肝组织超微变化.结果:与正常组大鼠比较,模型组大鼠肝内TGFβ1和CTGF表达增加,免疫阳性反应信号的主要位于纤维间隔中的细胞浆;模型组大鼠血清IL-6和IL-18升高,而IL-10较正常组降低(P＜0.05 or P＜0.01);超微结构符合肝纤维化改变.结论:TGFβ1、CTGF、IL-6、IL-10和IL-18与肝纤维化的形成发展有关,可作为抗肝纤维化的新途径.     

糖尿病大鼠肾脏纤维化与CTGF表达的相关性

目的 探讨糖尿病大鼠肾脏纤维化与结缔组织生长因子（CTGF）表达的关系.方法 应用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）的方法诱导糖尿病大鼠模型,共成功造模23只,其中18只按照饲养时间随机分为3组;4周（n=6）、12周（n=6）、24周（n=6）],同时设置18只大鼠作为对照组,分别饲养4周（n=6）,12周（n=6）和24周（n=6）,在相应时间点采用免疫组织化学法检测肾脏CTGF含量,同时进行肾脏病理检测并进行组间比较.结果 糖尿病模型组CTGF蛋白表达在各时间点,随病程的进展,表达逐渐增高.第4周分别为（0.88±0.05）×10^3/μm^2vs.（0.41±0.06）×10^3/μm^2第12周分别为（0.29±0.05）×10^3/μm^2vs.（0.60±0.05）×10^3/μm^2第24周分别为（3.13±0.08）×10^3/μm^2vs.（1.50±0.05）×10^3/μm^2差异均有统计学意义（P＜0.05）.且CTGF的含量与肾脏间质血管周围胶原面积（PVCA）（r=0.89）、肾小球胶原沉积评分（GCDS）（r=0.87）、肾小管间质病变评分（TIDS）（r=0.76）、肾小球系膜基质指数（Ms/Gs）（r=0.82）（P＜0.05）均呈正相关.结论 糖尿病大鼠CTGF的高表达,可能与肾脏纤维化有关,检测肾脏CTGF含量可考虑作为评价肾脏纤维化的方法.     

结缔组织生长因子基因表达与大鼠肝纤维化关系初步研究

目的探讨结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）基因在肝纤维化大鼠肝组织中的表达及其在肝纤维化发展中的作用。方法采用四氯化碳（CCl4）皮下注射制备肝纤维化模型，并于注射后1、4、8周取大鼠肝组织，免疫组化检测CTGF的表达，RT—PCR检测肝组织结缔组织生长因子和I型胶原α2[COL Ⅰ（α2）]基因的转录，并作图像扫描和统计学分析。结果CTGF免疫组化显示正常大鼠肝组织未见明显阳性着色，模型组大鼠注射CCl4 1周后，肝窦周和汇管区细胞出现阳性染色，随着CCl4注射时间的延长，其表达逐渐增强趋势。正常大鼠肝组织COLⅠ（α2）无表达，注射CCl4 1周后有弱表达，注射CCl4 4周后表达增强，8周时达到高峰。CTGF基因的表达与Ⅰ型胶原（α2）的表达呈正相关。结论CTGF作为TGF-β1的下游细胞因子在肝纤维化的发生和发展中可能发挥重要作用。     

反义抑制结缔组织生长因子对实验性肝纤维化的影响

目的观察结缔组织生长因子(CTGF)反义RNA对实验性肝纤维化的影响。方法应用分子生物学技术构建CTGF反义RNA真核表达质粒,经腹腔注射入CCl4诱导的肝纤维化模型大鼠体内;通过RT-PCR、Western blot及免疫组织化学等方法检测CTGF反义RNA基因转染前后CTGF mRNA和蛋白质在肝组织中含量的变化;并通过检测肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的变化,观察CTGF反义RNA对大鼠肝纤维化的影响。结果转染CTGF反义RNA后,可抑制CTGF mRNA和蛋白质的表达(P<0.01),减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的沉积(P<0.01),并在一定程度上促进肝组织的改善(P<0.01)。结论CTGF反义RNA对肝纤维化有一定的治疗作用。     

EGCG对肝纤维化大鼠TGF-β1和CTGF表达的影响

目的:研究表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)的抗肝纤维化作用及其机制.方法:运用腹腔注射CCl4构建大鼠肝纤维化模型,观察EGCG对大鼠肝纤维化的影响.运用HE染色、Massion三色染色检测肝纤维化的变化;生化检测血清丙氨酸转移酶(ALT)及天冬氨酸转移酶(AST);同时检测肝组织的羟脯氨酸、还原型谷胱甘肽(GSH)和硫代巴比妥酸反应底物(TBARS)含量.免疫组织化学法观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;分别运用RT-PCR和Western blot法检测转化生长因子β1(TGF-β1)及结缔组织生长因子(CTGF)mRNA和蛋白质表达.结果:EGCG对CCl4诱导的大鼠肝纤维化程度具有显著的抑制作用.EGcG对肝细胞具有显著的保护作用,与纤维化模型组比较,EGCG干预组血清ALT、AST水平降低(138.4±45.8vs 234.6±63.2,96.4±20.5 vs 186.2±36.6,均P<0.05).EGCG显著抑制肝组织α-SMA的表达.EGCG通过抑制TBARS的形成和提高GSH含量,显著改善CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝脏的氧化状态.同时EGCG显著抑制肝组织TGF-β1及CTGF的mRNA和蛋白质的表达(均P<0.05).结论:EGCG能够显著抑制肝纤维化的进展,其机制与EGCG改善大鼠肝脏的氧化状态及抑制TGF-β1和CTGF的表达有关.     

结缔组织生长因子与肝纤维化相关性的研究进展

结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）是Bradham等于1991年首次在人脐静脉内皮细胞条件培养基中发现的细胞因子，它属于一种即刻早期基因（CTGF Cyr61 nov，CCN）家族成员之一，是转化生长因子（transforming growth factor-beta，TGF-β）的下游介质。广泛存在于人类肝脏、肾脏、心脏、肺脏和结缔组织等多种咒织器官中，具有明显的有丝分裂原性和趋化性，在体内参与胚胎发育、细胞增生、分化及创伤愈合等病理生理活动。     

苦参素对实验性大鼠肝纤维化的防治作用

目的 :研究苦参素在体内的抗肝纤维化作用。方法 :用 CCl4 诱导大鼠肝纤维化模型 ,设正常对照组、模型组、苦参素预防组和治疗组 ,实验结束后分别测定肝功能 ,纤维化指标 : 型前胶原 (PC- )、层粘蛋白 (L N)、透明质酸 (HA) ,并作肝组织病理检查。结果 :苦参素可显著改善肝功能 ,降低 PC- 、L N、HA水平 ,组织学检查也显示具有抗肝纤维化作用。结论 :苦参素在体内具有抗肝纤维化作用 ,可望用于肝纤维化的防治。     

中西药抗四氯化碳实验性大鼠肝纤维化研究

目前，中西药抗肝纤维化的实验研究已取得可喜进展，四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型是经典的研究肝纤维化的模型，本文将近几年中西药抗CCl4中毒性肝纤维化的实验研究综述如下。     

抗结缔组织生长因子小分子干扰RNA防治大鼠肝纤维化研究

目的探讨经门静脉注射抗结缔组织生长因子(CTGF)小分子干扰RNA(siRNA)是否能在体内抑制大鼠肝CTGF基因表达及防治大鼠肝纤维化。方法雄性SD大鼠24只,均分成4组,模型组皮下注射40%CCl4(3ml/kg)及门静脉注射生理盐水,每3d1次,连续6周;预防组皮下注射CCl4及门静脉注射抗CTGFsiRNA(0.1mg/kg),每3d1次,连续6周;治疗组皮下注射CCl42周,随后再给予抗CTGFsiRNA及CCl44周;对照组门静脉注射生理盐水6周。于最后1次CCl4注射后3d行门静脉测压,并取血及组织标本,检测血清转氨酶、透明质酸(HA)及Ⅲ型前胶原(PⅢNP)浓度,应用RTPCR及Western印迹法检测CTGFmRNA及蛋白质在大鼠肝组织表达,应用HE及Siriusred胶原染色检测肝组织炎症及纤维化,应用偏光扫描对肝组织胶原染色面积进行定量。结果与模型组相比,预防组及治疗组大鼠肝组织CTGFmRNA及蛋白质表达显著下调,肝组织炎症、坏死及纤维化明显减轻,血清转氨酶、HA及PⅢNP浓度显著降低;预防组、模型组和治疗组的肝组织胶原染色面积分别为5.8%±0.8%、12.3%±0.8%和7.2%±0.9%(P<0.01);门静脉压力分别为(14.2±2.3)cmH2O、(20.6±5.8)cmH2O和(15.1±3.6)cmH2O(P<0.05),明显降低。结论经门静脉注射抗CTGFsiRNA能在体内显著抑制大鼠肝CTGF基因表达并能有效防治大鼠肝纤维化,提示抗CTGFsiRNA有潜力成为防治肝纤维化的一种新策略。     

DNA methylation of angiotensin Ⅱ receptor gene in nonalcoholic steatohepatitis-related liver fibrosis

AIM To clarify whether Agtr1 a methylation is involved in the development of nonalcoholic steatohepatitis(NASH)-related liver fibrosis in adult rats.METHODS A choline-deficient amino acid(CDAA) diet model was employed for methylation analysis of NASH-related liver fibrosis.Agtr1 a methylation levels were measured in the livers of CDAA- and control choline-sufficient amino acid(CSAA)-fed rats for 8 and 12 wk using quantitative methylation-specific PCR.Hepatic stellate cells(HSCs) were isolated by collagenase digestion of the liver,followed by centrifugation of the crude cell suspension through a density gradient.Agtr1 a methylation and its gene expression were also analyzed during the activation of HSCs.RESULTS The mean levels of Agtr1 a methylation in the livers of CDAA-fed rats(11.5% and 18.6% at 8 and 12 wk,respectively) tended to be higher(P = 0.06 and 0.09,respectively) than those in the livers of CSAA-fed rats(2.1% and 5.3% at 8 and 12 wk,respectively).Agtr1 a was not methylated at all in quiescent HSCs,but was clearly methylated in activated HSCs(13.8%,P 0.01).Interestingly,although Agtr1 a was hypermethylated,the Agtr1 a m RNA level increased up to 2.2-fold(P 0.05) in activated HSCs compared with that in quiescent HSCs,suggesting that Agtr1 a methylation did not silence its expression but instead had the potential to upregulate its expression.These findings indicate that Agtr1 a methylation and its upregulation of gene expression are associated with the development of NASH-related liver fibrosis.CONCLUSION This is the first study to show that DNA methylation is potential y involved in the regulation of a renin-angiotensin system-related gene expression during liver fibrosis.     

依达拉奉对实验性肝纤维化大鼠脂质过氧化的影响

目的探讨依达拉奉（EDA）对实验性肝纤维化大鼠脂质过氧化的影响。方法以四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型。30只Sprague—Dawley大鼠随机分为对照组（10只）、肝纤维化模型组（10只）和EDA防治组（10只）。检测各组大鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平及肝组织羟脯氨酸、丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性。结果EDA防治大鼠血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平分别为714．2±28．2U／L和766．0±11．0U／L,较模型组（1110．3±45．9U／L和1640．3±26．7U／L,P〈0．05和P〈0．01）明显降低;EDA组大鼠肝组织羟脯氨酸和丙二醛含量分别为0．4±0．1μg／mg和5．5±2．3nmol／gl,较模型组（0．8±0．1μg／mg和7．5±2．1nmol／gl,P均〈0．01）显著下降;EDA组大鼠超氧化物歧化酶活性为129．7±2．3u／g,较模型组（933±3．9u／g,P〈0．01）明显升高;EDA组和模型组大鼠肝组织纤维化评分分别为2．7±1．0和3．5±0．7,差异显著（P〈0．01）。结论EDA对大鼠肝纤维化有一定的防治作用,其机制很可能与抗脂质过氧化损伤有关。     

肝炎平对肝纤维化大鼠血浆同型半胱氨酸水平的影响

目的探讨肝炎平对肝纤维化大鼠血浆同型半胱氨酸、半胱氨酸、半胱．甘氨酸及谷胱甘肽水平的影响。方法制备CCl4大鼠肝纤维化模型。动物随机分为正常对照组（N组）、肝炎平治疗组（G组）、和络舒肝胶囊治疗组（H）及肝纤维化模型组（D组）。采用高效液相色谱法（HPLC）测定各组血浆同型半胱氨酸（homocysteine）、半胱氨酸（cysteine）、半胱．甘氨酸（cysteinyl-glycine）及谷胱甘肽（glutathione，GSH）水平。结果肝炎平治疗组及和络舒肝胶囊治疗组同型半胱氨酸含量明显下降，与模型组相比较有显著性差异（P〈0．05）。结论肝炎平通过调节肝纤维化大鼠体内含硫氨基酸代谢，降低血浆同型半胱氨酸，可能是其抗大鼠肝纤维化作用的机制之一。     

DNA methylation in liver diseases

Recently, growing evidences show that the combination of epigenetic and genetic abnormalities contribute together to the development of liver diseases. DNA methylation is a very important epigenetic mechanism in human beings. It refers to addition of the methyl groups to DNA and mainly occurs at cytosine adjacent to guanine. DNA methylation is prevalent across human genome and is essential for the normal human development, while its dysfunction is associated with many human diseases. A deep understanding of DNA methylation may provide us deep insight into the origination of liver diseases. Also, it may provide us new tools for diseases diagnosis and prognosis prediction. This review summarized recent progress of DNA methylation study and provided an overview of DNA methylation and liver diseases. Meanwhile, the association between DNA methylation and liver diseases including hepatocellular carcinoma, liver fibrosis, nonalcoholic steatohepatitis and liver failure were extensively discussed. Finally, we discussed the potential of DNA methylationtherapeutics for liver diseases and the value of DNA methylation as biomarkers for liver diseases diagnosis and prognosis prediction. This review aimed to provide the emerging DNA methylation information about liver diseases. It might provide essential information for managing and care of these patients.     

抗结缔组织生长因子小分子干扰RNA防治大鼠肝纤维化的研究

目的 探讨经腹腔注射抗结缔组织生长因子(CTGF)小分子干扰RNA(siRNA)是否能抑制大鼠体内肝脏CTGF基因表达及防治大鼠肝纤维化.方法 雄性SD大鼠30只,随机分成5组,分别为模型组腹腔注射40%CCl4 (3 mL/kg)及尾静脉注射生理盐水,1次/3 d,连续8周;预防组腹腔注射40%CCl4 及尾静脉注射...     

大鼠结缔组织生长因子部分cDNA序列的克隆及其mRNA在实验性 …

目的 克隆出大鼠结缔组织生长因子（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ ｇｒｏｗｔｈ ＣＴＧＦ）的部分ｃＤＮＡ序列,并观察在实验性肝经大鼠肝脏中ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ的表达改变。方法 根据小鼠ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ序列设计引物,用ＲＴ－ＰＣＲ从大鼠肝脏总ＲＮＡ中扩增出一段４３０ｂｐ的产物,并测定其序列,将１６只雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机为胆管堵塞组（ｎ＝８）及假手术组（ｎ＝８）,６周后取大鼠提取总ＲＮＡ,利用     

DNA 甲基化在特发性肺纤维化中的研究进展

DNA 甲基化作为最常见的表观遗传修饰形式,可调节基因的表达,在胚胎发育、衰老和肿瘤形成等多种生命活动中发挥作用。近年来,研究发现 DNA 甲基化通过调控特发性肺纤维化关键基因的表达而对其发生、发展起重要作用,这为特发性肺纤维化的分子机制、临床诊断与治疗提供新的研究方向。本文就 DNA 甲基化在特发性肺纤维化中的研究进展作一综述。