消瘰丸治疗淋巴瘤基于PD-1/PD-L1信号通路的机制研究

[目的]初步探究古方消瘰丸治疗淋巴瘤基于程序性死亡因子(PD-1)/程序性死亡因子配体1(PD-L)信号通路上的免疫调控机制。[方法]从健康人、淋巴瘤患者的外周血中分离外周血单个核细胞,体外培养刺激后,应用流式细胞仪、CFSE等技术,以PD-1/PD-L1信号通路为靶通路,通过是否阻断PD-1/PD-L1信号通路与消瘰丸药物干预,观察消瘰丸对T细胞不同亚细胞的活性作用。[结果]淋巴瘤患者T淋巴瘤细胞在消瘰丸干预下,CD4~+T细胞PD-1(+)和CD69表达降低,而CD8~+T细胞PD-1(+)和CD69表达增加;PD-L1阻断剂和消瘰丸联合使用对淋巴瘤T细胞中的CD4~+细胞CD69抑制作用比PD-L1阻断剂组和消瘰丸组都明显;与PD-L1阻断剂组相比,消瘰丸组CD8~+T细胞活性增加更明显,而同时加入两者,与消瘰丸组相比,增加并不明显。[结论]消瘰丸对大量异常增殖的CD4~+T细胞可以抑制PD-1(+)的高表达,消瘰丸与PD-L1阻断剂二者对于CD4~+PD-1(+)和CD69表达有协同降低的作用;消瘰丸对于有细胞毒作用的CD8~+T细胞活性有增强作用,可以促进PD-1(+)的表达。     

黄芪多糖调节程序性死亡分子 1/程序性死亡配体 1信号通路对非霍奇金 淋巴瘤发展和免疫逃逸的影响

【目的】 观察黄芪多糖对非霍奇金淋巴瘤（NHL）的治疗作用及机制。【方法】 培养WSU-DLCL2、BJAB、SP53等3种NHL 细胞,给予不同浓度（0、5、10、50、100、200、400 μmol/L）黄芪多糖处理,应用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测细胞活 力,筛选黄芪多糖最佳浓度、对黄芪多糖敏感的细胞。将WSU-DLCL2细胞分为对照组、黄芪多糖组、BMS-1[程序性死亡分 子1（PD-1）/程序性死亡配体1（PD-L1）通路抑制剂]组、黄芪多糖+BMS-1组,检测各组细胞菌落形成、凋亡、迁移和侵袭情 况,Western Blot 法检测 PD-1/PD-L1 信号通路蛋白表达。WSU-DLCL2 细胞和 CD8+ T 细胞共培养后,检测 CD8+ T 细胞百分 比、凋亡率和上清液中干扰素（IFN）-γ、肿瘤坏死因子（TNF）-α水平。【结果】 后续实验选择200 μmol/L 黄芪多糖处理WSUDLCL2细胞。与对照组比较,黄芪多糖组、BMS-1组和黄芪多糖+BMS-1组WSU-DLCL2细胞菌落形成数、迁移细胞数、侵 袭细胞数,CD8+ T 细胞凋亡率,及 WSU-DLCL2细胞 PD-1、PD-L1蛋白表达水平显著下降（P＜0.05）,WSU-DLCL2细胞凋 亡率、CD8+ T细胞比例及共培养体系上清液中IFN-γ、TNF-α水平显著升高（P＜0.05）;与黄芪多糖组、BMS-1组比较,黄 芪多糖+BMS-1 组 WSU-DLCL2 细胞菌落形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数,CD8+ T 细胞凋亡率,及 WSU-DLCL2 细胞 PD-1、PD-L1 蛋白表达进一步下降（P＜0.05）,WSU-DLCL2 细胞凋亡率、CD8+ T 细胞比例及共培养体系上清液中 IFN-γ、 TNF-α水平进一步升高（P＜0.05）。【结论】 黄芪多糖可抑制NHL细胞增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡,减少免疫逃逸,其 机制可能与抑制PD-1/PD-L1信号通路有关。     

解毒通络生津方对干燥综合征NOD小鼠PD-1/PD-L1信号通路的影响＊

目的 观察解毒通络生津方对干燥综合征（SS）模型NOD小鼠PD-1/PD-L1通路的影响，探讨其作用机制。方法 将24只8周龄雌性NOD小鼠随机分为3组，即模型组（Model）、解毒通络生津方组（TCM）、解毒通络生津方加抗PD-L1单抗阻断组（TCM＋α-PD-L1），每组8只。另选8只8周龄雌性ICR小鼠作为正常对照组（Ctrl）。12周龄时开始中药干预，TCM组按照每天24.4 g·kg^-1解毒通络生津方灌胃，TCM＋α-PD-L1组在每天给予24.4 g·kg^-1解毒通络生津方灌胃的基础上，腹腔注射抗PD-L1抗体，1周2次，每次100 μg，Ctrl组和Model组给予同等剂量的生理盐水灌胃，实验期间记录各组小鼠第9、12、16、20周龄时的日均饮水量，干预8周后，小鼠统一麻醉下摘取颌下腺。HE染色观察各组小鼠颌下腺中炎症细胞浸润情况；流式细胞仪检测小鼠颌下腺CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺PD-1⁺Treg细胞的表达；Western Blot检测小鼠颌下腺中PD-1、PD-L1和Foxp3蛋白的表达。结果 随着小鼠周龄的增长，Ctrl组小鼠日均饮水量基本不变，Model组小鼠的日均饮水量有明显上升趋势，TCM组小鼠日均饮水量下降，TCM＋α-PD-L1组小鼠日均饮水量上升；与Model组比较，TCM组炎症细胞浸润灶明显减少（P<0.001）；与TCM组比较，TCM＋α-PD-L1组炎症细胞浸润增多（P<0.001）；与Ctrl组比较，Model组CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺PD-1⁺Treg的表达降低（P<0.001），与Model组比较，TCM组CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺PD-1⁺Treg表达升高（P<0.01）；与TCM组比较，TCM＋α-PD-L1组CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺PD-1⁺Treg的表达降低（P<0.01）；与Ctrl组比较，Model组小鼠颌下腺中PD-1、PD-L1和Foxp3蛋白的表达降低（P<0.01）；与Model组比较，TCM组小鼠颌下腺中PD-1、PD-L1和Foxp3蛋白的表达升高（P<0.01）；与TCM组比较，TCM＋α-PD-L1组小鼠颌下腺中PD-1、PD-L1和Foxp3蛋白的表达降低（P<0.001）。结论 解毒通络生津方可能通过PD-1/PD-L1信号通路促进SS模型小鼠Treg细胞活化，上调Foxp3的表达，增强Treg细胞抑制免疫炎症的作用，PD-1/PD-L1可能是解毒通络生津方治疗SS的一个作用靶点。     

养阴扶正方调控PD-1/PD-L1通路逆转T细胞耗竭的机制研究

目的:探讨养阴扶正方调控PD-1/PD-L1通路逆转T细胞耗竭的机制.方法:免疫磁珠分选PD-L1+ Lewis肺癌细胞,建立PD-L1+ Lewis肺癌、Lewis肺癌C57BL/6鼠移植瘤模型,建模成功后,随机分为8组,分别予以养阴扶正方、阿特珠单抗、阿特珠单抗+养阴扶正方干预;绘制肿瘤生长曲线,流式细胞术检测荷瘤...     

基于PD-1/PD-L1及miR-200c/ZEB通路研究健脾消癌方治疗结肠癌肝转移的作用机制

目的：观察健脾消癌方对结肠癌肝转移荷瘤裸鼠肝组织中程序性死亡受体-1(PD-1)/程序性死亡配体-1(PD-L1)及微小RNA200c(miRNA-200c)/转录因子E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)表达的影响。方法：在50只裸鼠中随机抽取10只作为假移植组,另取40只建立结肠癌肝转移模型。造模成功后再将其分为4组：模型组,健脾消癌方低、中、高剂量组(简称为低、中、高剂量组),每组各10只。假移植组和模型组灌胃等量0.9%氯化钠注射液,低、中、高剂量组灌胃健脾消癌方(5.4、10.8、21.6 g/kg),每天1次,连续3周。观察各组裸鼠肝转移瘤的情况,检测PD-1、PD-L1、miRNA-200c、ZEB1 mRNA的表达及PD-1、PD-L1、ZEB1蛋白的表达情况。结果：除假移植组外,其余各组均可在裸鼠的肝脏表面发现肝转移结节。各组肝转移结节数量、质量高剂量组与低、中剂量组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。肝脏组织病理学结果显示,与模型组比较,低、中、高剂量组癌细胞增长速度较慢。与假移植组比较,模型组miRNA-200c表达降低,PD-1、PD-L1、ZEB1 mRN...     

健脾补肾法对拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞调节Th1/Th2的影响

目的:观察健脾补肾中药对拉米夫定治疗慢性乙肝患者外周血树突状细胞调节Th1/Th2的影响.方法:收集60例慢性乙肝E-抗原阳性患者,分为观察组与对照组,观察组采用健脾补肾中药联合拉米夫定治疗,对照组仅用拉米夫定治疗,疗程均为1年.疗程结束后采集外周血检测树突状细胞表型、功能,同时观察树突状细胞对Th1/Th2分化的影响.结果:观察组树突状细胞表型CD1a、CD80、CD86、HLA-DR、ICAM-1的表达均明显高于对照组,经统计学处理有明显著异,刺激指数、分泌因子IL-12亦明显高于对照组;观察组与对照组相比Th1类细胞因子IFN-γ分泌明显增多,Th2类细胞因子IL-4明显减少.结论:健脾补肾中药能够改善拉米夫定治疗慢性乙肝患者外周血树突状细胞对Th1/Th2的调节.     

温阳化瘀方对慢性肾衰竭大鼠 NF-κB/MCP-1 通路影响的研究

目的:观察温阳化瘀方对慢性肾衰竭大鼠核因子κB (Nuclear factor-kappa B,NF-κB)/单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)通路作用的影响。方法:将40只雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、温阳化瘀方组、西药组、中西医结合组。除假手术组外,其余大鼠建立慢性肾衰竭模型,温阳化瘀方组灌胃温阳化瘀方水煎液15.1 g/(kg·d);西药组灌胃洛汀新1.0 mg/(kg·d),中西医结合组灌胃温阳化瘀方水煎液及洛汀新。用全自动生化分析仪检测各组干预前后大鼠血肌酐(Serum creatinine,SCr)水平;ELISA法检测各组大鼠NF-κB、MCP-1水平。结果:与假手术组比较,模型组SCr、NF-κB和MCP-1水平明显升高(P 0.01);与模型组比较,温阳化瘀方组、西药组、中西医结合组SCr、NF-κB和MCP-1水平均显著下降(P 0.01),以中西医结合组的效果最佳。结论:温阳化瘀方能通过影响NF-κB、MCP-1等的表达,改善SCr水平,保护肾脏功能。     

补肾化瘀解毒方荷瘤药物血清对A549/DDP耐药逆转作用的研究

目的 :为了探讨补肾化瘀解毒方对肺癌耐药的逆转作用 ;方法 :选择人肺腺癌耐药细胞株 A5 4 9/DDP为模型 ,采用荷瘤动物血清药理及体外细胞毒试验方法 ;结果 :补肾化瘀解毒方荷瘤动物含药血清对肺癌耐药细胞 A5 4 9/DDP有抑制作用 ,并能增强 A5 4 9及 A5 4 9/DDP对化疗药物 DDP的敏感性 ;结论 :表明补肾化瘀解毒方荷瘤药物血清对化疗药物具有增敏和化疗耐药逆转作用     

清解防感颗粒对流感病毒A/PR/8/H1N1感染小鼠的死亡保护及肺脏保护作用

目的:研究清解防感颗粒抗流感病毒的作用。方法:采用亚洲甲型鼠肺适应株(A/PR8/H1N1)滴鼻感染小鼠制作小鼠病毒性肺炎模型,观察药物延长感染小鼠生命的作用以及光学显微镜下观察小鼠肺组织的病变程度并评分,计算小鼠肺指数,比较组间肺指数的变化趋势及评分差异。结果:清解防感颗粒8g/kg、4g/kg剂量组可显著延长感染小鼠生命、降低死亡率,降低感染小鼠的肺指数,明显增加体重并降低小鼠肺部病变指数。结论:清解防感颗粒对小鼠感染流感病毒PR8有明显的死亡保护及肺脏保护作用。     

泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠TLR2/IκB-α/IL-1β信号通路的影响

目的:观察泄浊解毒方对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠TLR2/IκB-α/IL-1β信号通路的影响。方法:将大鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组、泄浊解毒方小剂量组、泄浊解毒方大剂量组,除正常组外其余各组小鼠采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇混合溶液灌肠复制溃疡性结肠炎大鼠模型,观察经药物处理后各组大鼠结肠组织TLR2、IκB-α和血清IL-1β的表达。结果:泄浊解毒方可明显减少UC模型大鼠结肠组织TLR2、IκB-α和血清IL-1β的表达。结论:泄浊解毒方对大鼠溃疡性结肠炎有良好的治疗作用,其作用机制可能与调节TLR2/IκB-α/IL-1β信号通路有关。     

芪黄补肾泄浊方对肾小球系膜细胞Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的:探讨芪黄补肾泄浊方对人肾小球系膜细胞(HMC)核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶(HO-1)信号通路的影响。方法:体外培养HMC细胞,制备芪黄补肾泄浊方的大鼠含药血清,并用芪黄补肾泄浊方药物血清干预,实验分5组,即正常对照组(A组)、高糖组(B组)、芪黄补肾泄浊方低剂量组(C组)、芪黄补肾泄浊方中剂量组(D组)、芪黄补肾泄浊方高剂量组(E组)。A组HMC给予正常大鼠血清的培养液(血清浓度10%)培养,B组HMC予含正常大鼠血清的高糖培养液(血清浓度10%)培养,C组予含芪黄补肾泄浊方低剂量含药血清的高糖培养液(血清浓度10%)培养干预,D组予含10%芪黄补肾泄浊方中剂量含药血清的高糖培养液(血清浓度10%)培养干预,E组予含10%芪黄补肾泄浊方高剂量含药血清的高糖培养液(血清浓度10%)培养干预,分别于培养48 h末收集细胞进行相关实验指标测定。免疫细胞化学检测方法分析Nrf2及HO-1的表达;运用Western Blot的方法从蛋白质水平观察芪黄补肾泄浊方对HMC Nrf2、HO-1蛋白表达的影响。Real-time PCR定量分析的方法在基因水平探究芪黄补肾泄...     

化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎大鼠Hippo/TAZ信号通路及相关蛋白TAZ、LATS2、MST1的影响

目的:研究化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎大鼠胃组织Hippo/TAZ信号通路及其相关蛋白转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)、肿瘤抑制激酶(LATS2)、哺乳动物不育系20样激酶(MST1)表达的影响。方法:采用联合造模法建立慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠模型成功后随机分为模型组、维酶素0.06 g/kg组、化浊解毒方7、14、28 g/kg组,灌胃治疗12周。采用HE染色法观察胃黏膜组织病理改变,蛋白质印记法(Western Blot)、实时荧光定量PCR技术检测胃黏膜组织中TAZ、LATS2、MST1蛋白和mRNA的表达。结果:与正常组相比,模型组大鼠胃组织TAZ mRNA和蛋白表达水平显著升高,LATS2、MST1 mRNA和蛋白表达水平显著降低;与模型组相比,化浊解毒方组和维酶素组大鼠一般状态、胃黏膜组织病理变化均改善,胃黏膜组织TAZ蛋白和基因表达水平降低,LATS2、MST1蛋白和基因表达水平升高,并且治疗组中以化浊解毒方28 g/kg组作用最为显著。结论:化浊解毒方在CAG大鼠模型中可通过下调胃黏膜组织中TAZ蛋白和基因表达水平,上调LATS2、MST1蛋白和基因的表达水平而起作用,28 g/kg化浊解毒方能显著改善胃黏膜病理情况,在Hippo/TAZ信号通路的调节过程中,下调TAZ蛋白和基因,上调LATS2、MST1均优于维酶素组。     

化痰通腑方通过TGF-β1/Smad3 信号通路对脓毒症肺损伤患者抗炎反应及预后的作用机制

目的：研究化痰通腑方通过TGF-β1/Smad3 信号通路对脓毒症肺损伤患者抗炎反应及预后的作用 机制。方法：本次前瞻性研究的研究对象为80 例脓毒症肺损伤患者,研究时间为2019 年3 月至2022 年 12 月,将研究对象按随机数字表法分为2 组各40 例。对照组采用基础治疗,研究组在对照组基础治疗上服用 化痰通腑方。连续治疗5 d。比较2 组疗效情况、入住重症监护室（ICU） 时间、机械通气时间,以及根据 1 个月随访结果记录28 d 病死率,比较2 组治疗前后脓毒症症状评分、氧合指数（PaO2/FiO2）、肺泡动脉氧分 压差[Pa（A-a）O2],以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）、转化生长 因子-β1（TGF-β1） 含量和Smad3 蛋白表达水平。结果：治疗结束后,2 组脓毒症症状评分（恶心呕吐评分 除外） 均低于治疗前（P＜0.05）,研究组脓毒症症状评分均低于对照组（P＜0.05）;研究组入住ICU 时间和 机械通气时间均低于对照组（P＜0.05）,为期1 个月的随访结果显示,２组均无28 d 病死病例;研究组治疗 总有效率92.50% 高于对照组75.00%（P＜0.05）;治疗结束后,2 组PaO2/FiO2 均高于治疗前（P＜0.05）,研究 组PaO2/FiO2 高于对照组（P＜0.05）;治疗结束后,2 组Pa（A-a）O2 均低于治疗前（P＜0.05）,研究组Pa（A-a） O2 低于对照组（P＜0.05）;治疗结束后,2 组血清TNF-α、IL-6、IL-8 含量均低于治疗前（P＜0.05）,研究组 血清TNF-α、IL-6、IL-8 含量均低于对照组（P＜0.05）;治疗结束后,2 组血清TGF-β1 含量和Smad3 蛋白表 达水平均低于治疗前（P＜0.05）,研究组血清TGF-β1 含量和Smad3 蛋白表达水平均低于对照组（P＜0.05）。 结论：化痰通腑方治疗脓毒症肺损伤疗效良好,可改善机体炎症水平和提高预后,其作用机制可能与抑制 TGF-β1/Smad3 信号通路的表达有关。     

健脾消癌方干预肠癌细胞外泌体对巨噬细胞TGF-β1/Smad信号通路的调控作用研究

目的：研究健脾消癌方干预肠癌细胞外泌体对巨噬细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响。方法：将50只大鼠随机分为正常组和健脾消癌方含药血清组,每组25只,健脾消癌方含药血清组以健脾消癌方水煎液灌胃,正常组大鼠每日以等量蒸馏水灌胃,1次/d,连续7 d后获取含药血清和不含药血清。将对数生长期的HCT116细胞分为JPXAF组、WY组,JPXAF组予20%健脾消癌方含药血清干预,WY组以20%不含药血清干预,采用超速离心法提取外泌体,JPXAF组、WY组提取的外泌体分别命名为JPXAF-Exo、WY-Exo。将THP-1巨噬细胞分为对照组和外泌体组,对照组进行常规培养,外泌体组予HCT116细胞外泌体干预。采用反转录酶-聚合酶链反应（RTPCR）检测细胞MMP2 mRNA、MMP9mRNA、TNF-α mRNA、PD-L1 mRNA、TGF-β1 mRNA相对表达量。将THP-1巨噬细胞随机分为Control组、WY-Exo组、JPXAF-Exo组。Control组常规培养,WY-Exo组、JPXAF-Exo组分别予WY-Exo、JPXAF-Exo干预。采用RT-PCR法检测巨噬细胞中MM...     

八正散加减方对慢性非细菌性前列腺炎大鼠Th1/Th2细胞平衡影响的实验研究

目的:探讨八正散加减方治疗慢性非细菌性前列腺炎(CAP)的作用机制。方法:取15月龄SD雄性大鼠60只,按随机数字表法分为空白组、模型组、对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组l0只。除空白组外,其余组大鼠均用25%乌拉坦按1 g/kg,经腹腔注射麻醉,无菌条件下做去势手术,术后放回鼠笼,密切观察,于术后第2天皮下注射苯甲酸雌二醇0.25mg/kg,每天1次,连续30天。空白组不做任何处理,正常喂养。在最后1次皮下注射苯甲酸雌二醇后第2天,低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予3.12 g/(kg·d)、6.24 g/(kg·d)、12.48 g/(kg·d)八正散加减方水煎剂灌胃;对照组给予前列通瘀胶囊3.9g/(kg·d)灌胃;模型组灌服0.9%的生理盐水,连续用药4周。末次给药24 h后处死大鼠,留取标本。HE染色、光镜下观察各组前列腺组织的病理学表现,ELISA法测各组大鼠血清中干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)的含量。结果:与空白组比较,模型组血清中IFN-γ水平明显升高,IFN-γ/IL-4比值明显增高,差异均有统计学意义(P0.05),说明造模成功。与模型组比较,对照组、中剂量组、高剂量组血清中IFN-γ水平明显下降,IL-4水平明显升高,IFN-γ/IL-4比值明显减小,差异均有统计学意义(P0.01);低剂量组血清中IFN-γ和IL-4水平、IFN-γ/IL-4比值无明显变化。与对照组比较,中剂量组、高剂量组血清中IFN-γ和IL-4水平变化不明显,IFN-γ/IL-4比值大小基本相当,差异无统计学意义。结论:八正散加减方可通过提高机体Th2细胞应答水平,进而调节Th1/Th2细胞平衡,从而达到治疗慢性非细菌性前列腺炎的目的。