淫羊藿苷促进羊骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化

背景:寻找一种简单有效、安全价廉且可替代生长因子的生物活性物质,是骨组织工程的客观要求,中药来源的植物黄酮淫羊藿苷可通过提高成骨细胞功能促进成骨,但是对骨髓间充质干细胞的作用尚未明确.目的:探讨淫羊藿苷对羊骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-09/2009-02在南方医院创伤骨科实验室完成.材料:清洁级成年雄性中国青山羊3只,由南方医院实验动物中心提供.淫羊藿苷标准品由中国药品生物制品检定所提供,批号110737-200312,纯度98.3%.方法:体外分离培养羊骨髓间充质干细胞,传至第3代后,按2×103/孔接种至96孔板,分别加入100,10,1,0.1μmol/L淫羊藿苷培养基150μL进行培养;设立对照组,仅加入等量普通DMSO培养基.主要观察指标:采用MTT法检测细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期,通过碱性磷酸酶试剂盒测定细胞碱性磷酸酶活性,放免法检测细胞骨钙素表达,茜素红染色观察钙化结节形成能力.结果:0.1 μ mol/L淫羊藿苷可明显促进羊骨髓间充质干细胞增殖,增加S期和G2/M期细胞数量:随着淫羊藿苷浓度的增加,促细胞增殖活性降低,100 μmol/L淫羊藿苷表现为明显的抑制细胞增殖作用.淫羊藿苷呈剂量依赖性促进羊骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素表达.10,100 μ mol/L淫羊藿苷诱导钙化结节形成能力优于0.1和1μmol/L淫羊藿苷,对照组羊骨髓间充质干细胞未形成钙化结节.结论:淫羊藿苷对羊骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化具有促进作用,可被视为一种良好的骨诱导活性因子.     

淫羊藿素对人舌鳞癌细胞CAL-27增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的 探索淫羊藿素对人舌鳞癌细胞CAL-27的增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及可能作用机制。方法 分别采用0、10、20、40μmol/L浓度的淫羊藿素干预人舌鳞癌细胞CAL-27。采用CCK-8法及克隆形成实验检测细胞增殖;采用划痕实验检测细胞迁移;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。采用分子对接预测淫羊藿素与舌鳞癌目的基因结合效果,采用逆转录-实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)进行验证。结果 淫羊藿素对CAL-27细胞作用24 h的半数抑制浓度(IC₅₀)为33.37μmol/L, 48 h IC₅₀为15.57μmol/L。与0μmol/L浓度淫羊藿素相比,40μmol/L浓度的CAL-27细胞克隆形成率降低,细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.001)。淫羊藿素浓度增加时,CAL-27的迁移、侵袭数呈淫羊藿素剂量依赖性抑制;细胞内AR、ESR1、PRKACA、PTGS2的相对表达量呈淫羊藿素剂量依赖性减少。结论 淫羊藿素可抑制人舌鳞癌细胞CAL-27的增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,...     

不同浓度淫羊藿苷修复骨损伤：争议与探索

背景：作为淫羊藿主要有效成分之一的淫羊藿苷,对于骨损伤后的修复具有重要作用。淫羊藿苷在体内的持续有效浓度对于骨损伤的修复至关重要。 目的：综述近年国内外淫羊藿苷对于骨修复的研究进展,探讨淫羊藿苷的药理活性浓度。 方法：第一作者应用计算机检索2000年1月至2013年10月PubMed数据（http：//www.ncbi.nlm. nih.gov/PubMed）及CNKI中国期刊全文数据库（http：//www.cnki.net/）有关淫羊藿苷对骨组织修复作用,或者与淫羊藿苷治疗骨损伤的相关基础研究文献。英文检索词＂icariin,concentration,bone＂;中文检索词＂淫羊藿苷,浓度,骨＂。排除重复性研究,共检索到76篇相关文献,44篇文献符合纳入标准。 结果与结论：利用淫羊藿苷的有效活性成分联合缓释支架材料,可以诱导骨髓间充质干细胞成骨分化,增强成骨细胞活性,抑制破骨细胞的吸收,从而起到修复骨组织的作用。淫羊藿苷促进细胞分化作用虽已得到肯定,但是否具有促进细胞增殖作用还存在一定的争议。研究发现,淫羊藿苷的药理活性浓度从10-8到10-5 mol/L不等,总体来看,10-8-10-5 mol/L应该是淫羊藿苷发挥其最佳药理活性可能出现的区间,但目前临床试验尚未开展,具体的持续给药浓度还不确定,这些都需要进一步研究探索。     

淫羊藿提取物对小鼠自发活动和睡眠功能的影响

背景本草纲目记载小檗科淫羊藿属植物淫羊藿有益精气,坚筋骨,补腰漆,强心力等功能,近年来临床应用及药理作用报道较多.目的观察在抖笼换能器法,阈上、阈下剂量戊巴比妥钠干预的情况下淫羊藿提取物对小鼠自发活动和睡眠功能的影响.单位赣南医学院,数理教研室,分析实验室,药理教研室.材料健康成年昆明种雄性小鼠110只,清洁级,体质量18～22 g.方法2004-08/09在赣南医学院科研中心实验室完成.①小鼠(n=30)腹腔注射1 000 g/L的淫羊藿提取物(0.01 mL/g),15 min后放入吊笼中,稳定3 min后记录用药后15 s内自发活动波形.②小鼠(n=40)腹腔注射1 000 g/L的淫羊藿提取物(0.01 mL/g),15 min后,腹腔注射阈上剂量的戊巴比妥钠(2.5 g/L)0.02 mL/g,观察小鼠翻正反射消失时间.③小鼠(n=40)腹腔注射1 000 g/L的淫羊藿提取物(0.01 mL/g),15 min后,腹腔注射阈下剂量的戊巴比妥钠(2.5 g/L)0.01 mL/g,观察小鼠翻正反射消失时间.主要观察指标小鼠自发活动次数;阈上剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠时间;阈下剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠时间.结果实验动物110只,全部进入结果分析.①浓度为0.1 mL/10 g的淫羊藿提取物具有明显抑制小鼠自发活动,与对照组比较中波、大波出现次数显著减少(7.4±6.5,47.1±18.7;t=3.265,P＜0.01).②浓度为0.01 mL/g淫羊藿提取物能显著加速阈上剂量戊巴比妥钠小鼠的入睡时间和延长睡眠时间,与对照组差异显著[(3.9±2.8),(219.7±87.2);(5.8±2.9),(113.0±77.4)min;t=2.452,2.501,P＜0.05].③浓度为0.01 mL/g淫羊藿提取物能显著加速阈下剂量戊巴比妥钠的入睡时间和延长睡眠时间,与对照组比较差异显著[(6.6±5.2),(60.3±71.7);0,0 min;t=3.275,P＜0.01],与戊巴比妥钠有协同的中枢抑制作用.结论淫羊藿提取物具有明显的中枢抑制作用,能明显抑制小鼠自发活动,同时还能明显加快阈上剂量戊巴比妥钠小鼠的入睡时间,同时还可显著延长阈上剂量戊巴比妥钠小鼠的睡眠时间.增强阈下剂量戊巴比妥钠的催眠时间和增加入睡动物数.     

淫羊藿甙对体外培养成骨细胞增殖和分化的影响

目的探讨淫羊藿甙对体外培养成骨细胞增殖和分化的影响及其作用机制。方法采用体外成骨细胞培养技术,进行细胞计数和碱性磷酸酶活性测定,观察淫羊藿甙对成骨细胞生长增殖和分化的影响。结果(1)不同浓度的淫羊藿甙对成骨细胞的生长增殖均有促进作用,以10ng/ml浓度时其作用最强(P<0.05);(2)淫羊藿甙可明显抑制分化早期成骨细胞内ALP活性,而对分化晚期成骨细胞内ALP活性具有促进作用;(3)淫羊藿甙对成骨细胞的作用与药物作用时间有关。结论淫羊藿甙促进成骨细胞增殖的同时,增强了成骨细胞活性。     

淫羊藿苷对大鼠间充质干细胞骨向分化过程中转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2表达的影响

背景:淫羊藿苷作为补肾中药淫羊藿的主要有效成分,能够有效促进间充质干细胞向成骨细胞分化.目的:观察淫羊藿苷在诱导间充质干细胞骨向分化过程中对转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2表达的影响,阐释其可能的诱导机制.方法:运用全骨髓贴壁法分离、纯化大鼠骨髓间充质干细胞:以20 mg/L淫羊藿苷作为间充质干细胞药物干预浓度,根据干预条件的不同将实验分为;空白组、经典组(加经典成骨诱导剂)、淫羊藿苷组、淫羊藿苷+经组:ELISA法检测各组转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2的表达.结果与结论:经典组、淫羊蓍苷组、淫羊藿苷+经组转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2值均高于空白组(P<0.05):各组第7天的转化生长因子β1,值高于14,21 d(P<0.01),各组不同诱导时间骨形态发生蛋白2值之间相比差异无显著性意义(P>0.05).提示上调转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2的表达量可能是淫羊藿苷诱导各组促进间充质于细胞骨向分化的作用机制之一.     

被动吸烟大鼠骨量与骨生物力学指标的相关性及淫羊藿黄酮的干预效应

目的:作者已通过实验证实,被动吸烟可以增加大鼠骨吸收,最终导致骨质疏松.淫羊藿黄酮有促进骨形成防止骨丢失的作用.观察淫羊藿黄酮干预对被动吸烟大鼠骨密度与骨生物力学指标的影响,并分析骨密度占骨生物力学指标的相关性.方法:实验于2005-01/12在中南大学湘雅医学院附属湘雅医院动物实验室和中心实验室完成,对动物的处置方法符合动物伦理学要求.选择SD大鼠60只,按随机数字表法分成6组(n=10):即空白对照组、被动吸烟组、被动吸烟 钙组、淫羊藿黄酮75,150,300mg/(kg·d)组,后5组大鼠按密室熏烟法被动吸烟4个月,每天灌服钙剂及淫羊藿,给药4个月.干预完毕后测定股骨和腰椎骨密度、L4椎体力学性能指标、股骨结构力学性能指标及材料力学性能指标,并分析骨密度与骨生物力学指标的相关性.结果:60只大鼠全部进入结果分析.①与空白对照组比较,被动吸烟组大鼠的股骨和腰椎骨密度、L4椎体力学性能指标、股骨结构力学性能指标及材料力学性能指标均明显降低(P＜0.05);与被动吸烟组比较,被动吸烟 钙组、淫羊藿黄酮各剂量组上述指标均得到改善(P＜0.05).②股骨和腰椎骨密度分别与腰椎体力学性能指标中弹性模量、最大载荷、最大应力、变形位能、结构刚度,股骨结构力学性能指标中最大载荷、破坏载荷、变形位能、结构刚度和股骨材料力学性能指标中弹性模量、最大应力、最大应变、破坏应力呈正相关(股骨骨密度:r=0.802～0.822,P＜0.05;腰椎骨密度:r=0.784～0.843, P＜0.05).结论:淫羊藿黄酮可改善和提高被动吸烟大鼠骨密度、椎骨力学性能、股骨结构力学性能和材料力学性能,且骨密度与骨生物力学指标之间存在明显的相关性.     

淫羊藿甙对体外培养成骨细胞增殖和分化的影响

目的 探讨淫羊藿甙对体外培养成骨细胞增殖和分化的影响及其作用机制。方法 采用体外成骨细胞培养技术，进行细胞计数和碱性磷酸酶活性测定，观察淫羊藿甙对成骨细胞生长增殖和分化的影响。结果（1）不同浓度的淫羊藿甙对成骨细胞的生长增殖均有促进作用，以10ng/ml 浓度时其作用最强（P＜0．05）；（2）淫羊藿甙可明显抑制分化早期成骨细胞内ALP活性，而对分化晚期成骨细胞内ALP生具有促进作用；（3）淫羊藿甙对成骨细胞的作用与药物作用时间有关。结论 淫羊藿甙促进成骨细胞增殖的同时，增强了成骨细胞活性。     

地塞米松磷酸钠对体外培养关节软骨细胞增殖的影响

背景:研究表明,地塞米松可以使关节软骨表层基质中的Ⅱ型胶原减少,Ⅰ型胶原增多,但糖皮质激素对关节软骨细胞增殖作用的机制尚不十分清楚.目的:验证地塞米松磷酸钠对体外培养兔关节软骨细胞增殖的影响.设计:对比观察.材料: 1月龄新西兰白兔用于软骨细胞的分离与培养.方法:兔关节软骨细胞常规培养后随机分为对照组和实验组,对照组用不含地塞米松磷酸钠的DMEM培养液培养,实验组则分别加入含不同质量浓度地塞米松磷酸钠(0.02,0.1,0.5 g/L)的DMEM培养液.主要观察指标:①原代及传代兔关节软骨细胞的形态学观察.②应用流式细胞术及免疫细胞化学法检测软骨细胞增殖及其合成Ⅱ型胶原能力.③透射电子显微镜观察软骨细胞超微结构的变化.结果:实验组软骨细胞贴壁、增殖较对照组缓慢.各实验组Ⅱ型胶原平均灰度值均显著高于对照组(P<0.05).实验组软骨细胞进入S期、G_2+M期的细胞比率较对照组软骨细胞减少、进入G_0/G_1期的细胞比率增加.电镜下见软骨细胞线粒体、粗面内质网数量减少.结论:地塞米松磷酸钠抑制软骨细胞的增殖,可能与抑制关节软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白的合成能力有关.     

肝细胞生长因子诱导前软骨干细胞向软骨细胞的分化

目的:探讨肝细胞生长因子诱导前软骨干细胞向软骨细胞分化的机制。方法:实验于2005-12/2006-03在河南省正骨研究院完成。①实验材料:普通级新生兔10只,平均体质量3kg。②实验干预:采用免疫磁珠分离技术分离新生兔长骨干骺端前软骨干细胞。利用肝细胞生长因子(浓度分别为0.5,1,2,4μg/L)作用前软骨干细胞;另以2μg/L肝细胞生长因子作用前软骨干细胞,对照用相同剂量的培养基,检测前软骨干细胞Ⅱ型胶原及Ⅱ型胶原mRNA的表达。③实验评估:采用光学显微镜观察前软骨干细胞形态及生长情况;四甲基偶氮唑盐比色法检测前软骨干细胞的增殖;免疫荧光检测Ⅱ型胶原表达;反转录-聚合酶链反应检测Ⅱ型胶原mRNA的表达。结果:①前软骨干细胞形态及生长情况:分离纯化的前软骨干细胞贴壁稳定,在光学显微镜下呈多角和梭形,生长旺盛,曲光度好。②前软骨干细胞增殖情况:细胞增殖率上升,在24,48,72h内呈时间浓度依赖。③Ⅱ型胶原表达:肝细胞生长因子作用第5天前软骨干细胞出现Ⅱ型胶原蛋白的表达。④Ⅱ型胶原mRNA的表达:在肝细胞生长因子刺激3d开始出现表达,并且5d,7d逐渐增加。结论:肝细胞生长因子作用前软骨干细胞后,出现软骨特征标志抗原Ⅱ型胶原的表达,细胞增殖活性上升,表明肝细胞生长因子能诱导前软骨干细胞向软骨细胞方向分化。其机制可能是前软骨干细胞也存在肝细胞生长因子受体。