海马区Bcl-2蛋白在新生大鼠脑缺血后的表达

目的：通过研究新生大鼠脑缺血时Bcl-2蛋白在海马区的表达特点,探讨Bcl-2蛋白在缺血缺氧性脑损伤的作用。方法：48只7日龄新生SD大鼠随机分为1个对照组和7个实验组。给动物吸入含有92%氮气和8%氧气混合气体建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）动物模型,分别在脑损伤后不同时间点（0.5、1、3、6、12、24、48、72 h等）断头处死动物,取海马组织,用免疫组织化学方法检测海马脑神经细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达情况。结果：TUNEL染色的阳性细胞数与Bcl-2蛋白阳性的细胞数在HIBD后的不同时间点出现分别有显著差异,海马区Bcl-2蛋白阳性细胞在HIBD后立即出现,6 h达到高峰。结论：Bcl-2蛋白强表达于海马缺血区和缺血周边区的神经元,与神经元的存活或死亡有一定联系。     

HIBD新生大鼠微管相关蛋白Tau表达变化的研究

目的:本研究采用经典的新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemicbraindamage,HIBD)动物模型,观察HIBD前后脑室周围白质Tau蛋白水平的改变,探讨新生大鼠HIBD早期Tau蛋白表达变化与脑损伤的关系。方法:清洁级7日龄Wistar大鼠82只,随机分成假手术组(对照组,n=40)和缺氧缺血性脑损伤模型组(HIBD组,n=42)。参照Rice法单侧结扎新生大鼠左颈总动脉复制HIBD动物模型;假手术组(对照组)只切开颈部正中皮肤,分离但不结扎左侧颈总动脉;HIBD～大鼠置入低氧环境缺氧2小时,而后按时间随机分为3小时、6小时、12小时、24小时、48小时组(n=8)。HE及嗜银染色后,光镜下观察HIBD前后及不同时间组新生大鼠脑神经细胞的病理变化;免疫组织化学法测各组大鼠脑室周围白质与皮层微管相关蛋白Tau水平的动态变化情况,400倍视野下利用计算机图象分析系统进行Tau蛋白平均光密度值(aver-age opticaldens卸,OD)测定,并统计学分析。结果:HIBD新生大鼠嗜银染色示脑室周围白质神经细胞中存在神经原纤维的增粗、缠绕。各实验组Tau蛋白随着缺氧缺血时间的延长参疫反应牲增强,其中H工后3小时与对照组比较差异无显著性,HIBD后6小时组、12小时组、24小时组以及48小时组的0D值较对照组明显增加(p<0.05),差异有显著性。结论:HIBD可造成新生鼠脑脑室周围白质中神经纤维变性,总Tau蛋白表达增加。     

单核细胞趋化蛋白1mRNA在新生鼠实验性缺氧缺血损伤脑组织中的表达

目的　观察新生鼠实验性缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后脑组织趋化因子单核细胞趋化蛋白1(MCP 1)mRNA的表达变化,探讨其在HIBD中的作用。方法　采用结扎7日龄SD大鼠右侧颈总动脉并暴露于8%氧气环境2 .5h制作HIBD模型,采用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应,动态定量监测大脑皮质、海马区脑组织中MCP 1在HIBD后不同时间点表达的变化,假手术组为对照组。结果　HIBD后6h右侧脑组织MCP 1mRNA表达至高峰,显著高于对照组(P <0 .0 5 )。12h组仍高于对照组(P <0 .0 5 ) ,2 4～72h降至接近对照组水平(P >0 .0 5 )。结论　HIBD后MCP 1mRNA表达显著升高,推测MCP 1参与了缺氧缺血脑损伤的过程。     

缺氧预处理抑制新生鼠缺氧缺血性脑损伤细胞凋亡的观察

目的观察缺氧预处理(HPC)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)海马区Bcl-2和Bax表达的影响,探讨HPC对新生大鼠HIBD的保护机制。方法7日龄新生SD大鼠40只随机分为空白对照组、假手术组、HIBD组、HPC组。各组实验动物于缺氧缺血后24h处死,用免疫组织化学方法,检测脑组织海马区Bcl-2和Bax表达的变化。结果与空白对照组、假手术组相比,HIBD组和HPC组海马区Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达明显增多(P<0.05);与HIBD组相比,HPC组海马区Bcl-2蛋白表达明显增多,Bax蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论促进Bcl-2表达,抑制Bax表达,从而抑制细胞凋亡,是HPC对随后的HIBD的脑保护机制之一。     

新生大鼠HIBD后海马p-Tau蛋白与脑神经元凋亡表达变化

目的:观察微管相关蛋白磷酸Tau( p-tau)在缺氧缺血性脑损伤( HIBD)新生大鼠脑组织中的表达变化. 方法:将80只7日龄SD清洁级大鼠随机分为假手术组40 只和HIBD组(均按处死时间点分为3、6、12、24、48 小时5 个亚组)40只. 参照Rice法建立HIBD动物模型,假手术组仅暴露左颈总动脉,不作缺氧处理,2 组均于HIBD手术结束后3、6、12、24、48小时5个时间点断头取脑. 并分别取其脑组织切片,采用免疫组化S-P法检测其脑室周围白质区 p-tau 的表达,末端脱氧核苷酸转移酶缺口标志 ( TUNEL) 法检测其神经细胞凋亡. 结果:假手术组海马区有部分 p-tau蛋白表达及少量凋亡细胞, 各时间点无明显变化. HIBD组 p-tau的表达在3 小时后开始增加,12 小时达表达高峰后即开始呈下降趋势,与假手术组比较差异均有统计学意义 (F=95.67,p=0.000 <0.05) ;细胞凋亡在处理后3 小时即开始增加,至24小时小时达表达高峰,与假手术组比较差异均有统计学意义(F=18.829,p=0.001 <0.05). 结论:HIBD可造成新生大鼠海马区p-tau蛋白及神经元凋亡表达增加.     

GBE对HIBD新生大鼠脑组织MMP-9及TIMP-1表达影响的研究

目的 通过研究银杏叶提取物(GBE)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响,探讨GBE的脑保护作用及机制.方法 90只新生7dSD大鼠随机分为假手术组(n=30)、HIBD模型组(n=30)、GBE治疗组(n=30).模型制造成功后24 h、72 h、168 h三个时间点,采用干湿质量法测定大鼠脑组织含水量,RT-PCR法检测各组大鼠脑MMP-9、TIMP-1 mRNA的表达情况.结果 CBE组神经系统异常症状较HIBD组更轻.HIBD组大鼠脑组织含水量在缺氧缺血后逐渐上升,72 h达到高峰,168 h开始下降.各时间点均高于假手术组(P＜0.05).同时,MMP-9及TMP-1mRNA表达量与脑含水量呈正相关.GBE治疗组明显小于HIBD模型组(P＜0.05),高于假手术组(P＜0.05).结论 GBE对HIBD脑损伤的保护作用可能与其调节MMP-9及TIMP-1的表达有关.     

缺氧缺血新生鼠脑组织Nogo-A含量变化

目的 探讨Nogo-A在缺氧缺血新生鼠脑组织中含量变化及其意义。方法 将SD大鼠的7日龄新生鼠（n=64）随机分为8组：4个不同时段的缺氧缺血后脑损伤组（HIBD后6h。24h，72h。7d组）和相对时段的假手术对照组，采用Nogo-A（S-19）多克隆抗体免疫组织化学SP法。结果 Nogo-A在HIBD后24h组新生鼠脑组织中含量明显升高达到峰值，72h及7d组降低。与假手术组无统计学差异。结论 Nogo-A在实验性缺氧缺血脑损伤后含量升高，可能抑制了中枢神经系统的再生。     

趋化因子受体CCR2在新生鼠实验性缺氧缺血损伤脑组织中的表达

目的 观察新生鼠实验性缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后脑组织趋化因子受体2(CCR2)mRNA与蛋白质水平的表达变化,探讨其在HIBD中的作用.方法 采用结扎7 d龄SD大鼠右侧颈总动脉并暴露于8%氧气环境2.5 h制作HIBD模型, 用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应和SDS-PAGE免疫印迹方法,动态定量监测大脑皮质、海马区脑组织中CCR2 mRNA与蛋白质表达水平在HIBD后不同时间点的变化, 假手术组为对照组.结果 HIBD后24 h右侧脑组织CCR2 mRNA水平最高,72 h仍高于对照组(P＜0.05),7 d恢复至对照组水平(P＞0.05);CCR2蛋白表达量在HIBG后24 h最高,高于对照组(P＜0.05), 3 d仍保持高水平表达(P＜0.05),7 d明显下降.结论 HIBD后CCR2 mRNA及蛋白质表达水平显著升高,其动态变化过程与脑损伤发展过程一致,提示CCR2参与了新生动物HIBD的发生.     

不同亚低温对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的探讨不同亚低温干预对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用.方法Wistar 7 d龄新生大鼠,随机分为缺氧缺血后29 ℃干预组、31 ℃干预组、34 ℃干预组、常温(37 ℃)恢复组、正常对照组(假结扎组).各组取20只动物于缺氧缺血后78 h处死,测定脑组织含水量及微管相关蛋白-2免疫组化染色;10只于生后42 d用迷宫实验检测其学习和记忆能力.结果与常温恢复组相比亚低温干预各组大鼠脑组织含水量及脑损伤程度显著降低,且随着温度的降低,脑组织含水量及脑损伤程度逐渐降低(P<0.05).亚低温干预各组大鼠学习和记忆能力显著高于常温恢复组(P<0.05),且随着温度的降低逐渐提高(P<0.05).结论亚低温干预可减轻新生大鼠HIBD,且随着温度的降低,效果越好,29 ℃亚低温干预短期效果优于31 ℃、34 ℃低温干预.     

缺氧缺血大鼠脑组织GLUT-1表达及地塞米松对其表达的影响

目的观察葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠脑组织的表达,了解地塞米松对GLUT-1表达的影响。方法7日龄新生SD大鼠,分为对照组、缺氧缺血组、地塞米松给药组0.5mg/(kg.d),于HIBD模型制成后0,6,12,24h及72h处死,取脑组织作免疫组化图像分析,观察各组GLUT-1蛋白水平的变化。结果HIBD大鼠脑内GLUT-1表达较对照组增高,24h达高峰(P<0.05);地塞米松给药组GLUT-1蛋白水平6h即达高峰,在72h内维持在较HIBD组更高的水平(P<0.05)。结论HIBD大鼠脑GLUT-1蛋白表达增加;地塞米松可迅速提高GLUT-1蛋白水平并使其维持在较HIBD组更高的水平。在HIBD后早期给予适当剂量的地塞米松可能具有脑保护作用。     

高强度聚焦超声对新生鼠缺血缺氧性脑损伤SYP的影响

目的:研究国家超声重点实验室研制的高强度聚焦超声(High intensity focused ultrasound,HIFU)对新生鼠缺血缺氧性脑损伤(Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)的突触素(Synaptophysin,SYP)的影响.方法:选取7d龄SD大鼠192只,随机分成...     

早期干预对脑损伤大鼠神经可塑性相关蛋白的影响

目的 研究早期干预对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）大鼠学习记忆能力及脑细胞中神经生长相关蛋白-43（GAP-43）表达的影响。方法 选用SD大鼠建立宫内HIBD动物模型，随机分为HIBD干预组、HIBD非干预组和对照组，每组12只。HIBD干预组采取早期触摸和丰富环境刺激，HIBD非干预组与对照组常规饲养。干预28d后，通过三等臂Y型迷宫试验检测大鼠学习记忆功能，而后取大鼠额皮质和海马组织，用免疫组织化学染色法检测GAP-43表达情况。结果 HIBD非干预组学习与记忆能力明显低于对照组（P〈0．01），HIBD干预组Y迷宫测试成绩则优于HIBD非干预组（P〈0．01）。同时，HIBD非干预组额皮质和海马神经元GAP-43阳性系数高于对照组（P〈0．01），而HIBD干预组GAP-43的表达又明显高于HIBD非干预组（P〈0．01）。结论 早期干预具有改善HIBD大鼠认知能力的效果，其促进HIBD脑功能修复的作用与增加脑组织GAP-43的表达有关。     

转染神经生长因子基因的腹腔移植微囊化细胞对缺氧缺血性脑病新生大鼠脑损伤的保护作用

目的： 探讨腹腔移植微囊化神经生长因子(NGF)基因3T3细胞对缺氧缺血性脑病(HIBD)新生大鼠脑损伤的保护作用,为寻找治疗新生儿HIBD的有效方法提供实验依据。方法:新生Wistar大鼠60只,随机分为假手术组、空囊组和移植组，每组20只。假手术组大鼠腹腔注射生理盐水，空囊组大鼠制备HIBD模型后腹腔注射空微囊，移植组大鼠制备HIBD模型后腹腔注射微囊化3T3细胞。分别观察各组新生鼠脑组织水含量和海马区阳性细胞凋亡率。结果：空囊组和移植组大鼠存在不同程度脑水肿，空囊组大鼠脑组织含水量高于假手术组（P<0.05），移植组大鼠脑组织含水量与假手术组比较差异无统计学意义（P>0.05），但低于空囊组（P<0.05）。TUNLE免疫组织化学，空囊组与假手术组比较细胞凋亡率差异具有统计学意义（P<0.05），移植组阳性细胞凋亡率低于空囊(P<0.05）。结论：腹腔移植微囊化NGF基因3T3细胞可以减轻大鼠HIBD后脑水肿，且对大鼠HIBD后海马神经元有
保护作用。     

脑室内移植hUC-MSCs对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的保护作用

【摘要】 目的 探讨脑室内移植人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的治疗效果及保护性机制。方法 无菌条件下采集在我院产科出生的1例正常足月健康男婴的脐带3~4 cm,运用组织块贴壁法培养hUC-MSCs,使用BrdU标记细胞,并对培养出的MSCs的分化功能进行鉴定;取98只健康SPF级10 d龄SD大鼠,随机分为假手术组（n =30）、HIBD组（n =36）和MSCs组（n =32）,其中HIBD组和MSCs组建立新生大鼠HIBD模型,建模成功24 h后将标记的hUC-MSCs注射入MSCs组大鼠右侧脑室,于移植后3周内,记录大鼠生长发育情况,并用Longa评分法对大鼠的神经行为学进行评价,用免疫荧光法观察移植hUC-MSCs的存活、迁移、分化及促分化情况。结果 移植后,移植组大鼠体质量增加大于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);移植后2、3周,移植组Longa评分小于对照组,差异有统计学意义（P <0.05）;移植后3周内可在大鼠脑组织切片中发现BrdU阳性细胞,主要分布于损伤侧海马区域及大脑皮质;移植后3周内,大鼠脑组织中胶质纤维酸性蛋白（GFAP）或神经元特异性烯醇化酶（NSE）的总体信号强度逐渐增强。结论 hUC-MSCs移植治疗新生大鼠HIBD时,移植的hUC-MSCs可迁移至受损部位并分化为神经样细胞,可促进内源性神经分化,体现了一定程度的脑保护作用。     

新生大鼠缺氧缺血脑组织水肿及水通道蛋白-4的表达变化

目的 探讨新生SD大鼠缺氧缺血不同时间点脑组织水肿及水通道蛋白-4 (AQP-4) 表达的功能意义。 方法 健康3 d龄SD大鼠60只, 分为对照组 (12只) 和缺氧缺血脑损伤模型 (HIBD)组 （48只)。HIBD 组行右侧颈总动脉结扎后,分为吸入80 mL/L O2+920 mL/L N2 4 h、8 h、16 h、24 h 四个亚组,每组12只大鼠。对照组仅行假手术, 不予右颈总动脉结扎和缺氧缺血。HIBD各亚组分别于持续缺氧缺血4 h、8 h、16 h、24 h后处死动物,对照组于手术后12 h处死。取脑组织分别进行HE染色观察脑组织病理改变、脑含水量测定、实时荧光定量PCR检测大脑海马AQP-4 mRNA表达。 结果 HE染色示:随着缺氧缺血时间延长,右脑神经细胞与胶质细胞肿胀进行性加重,24 h组神经细胞溶解损伤明显,胶质细胞稀疏变性。HIBD 组右侧大脑持续缺氧缺血8 h、16 h和24 h脑组织含水量均较对照组增加, 差异有统计学意义 (P<0.05);实时荧光定量PCR显示右脑海马AQP-4 mRNA表达较对照组减少 (P<0. 05)。 结论 新生大鼠缺氧缺血后脑组织水肿,海马AQP-4表达下调,提示AQP-4与脑组织水肿有关。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型的制作

目的 :建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)模型 ,并讨论模型制作中的有关问题。方法 :健康 7日龄SD新生大鼠随机分为空白对照组 (n =18) ,假手术组 (n =8)和HIBD模型组 (n =19) ,采用经典Rice法制作新生大鼠HIBD模型 ,于 14日龄处死 ,观察HIBD后大鼠体重增长情况 ,左、右脑重比值变化 ,行为能力表现 ,以及脑组织病理形态学改变。结果 :①HIBD模型组体重增长明显慢于空白对照组和假手术组 (P <0 .0 1)。②HIBD组制成模型后全部发生行为异常改变 ,6 3 .16 %翻身不能 ,89.47%自发或夹尾左旋 ,抽搐占 47.37%。空白对照组和假手术组未见行为异常表现。③HIBD模型组左 /右脑重比值明显低于空白对照组和假手术组 (P <0 .0 1)。④肉眼观察HIBD组左脑萎缩者占 84.2 1%,出现软化灶占 31.5 8%,液化灶 5 2 .6 3 %,形成空洞脑者占 15 .79%;HE染色可见左侧大脑半球神经元损伤及神经胶质细胞增生 ;空白对照组和假手术组左、右脑无明显异常。结论 :本方法制作新生大鼠HIBD模型成功 ,该模型价格相对低廉、成功率高、重复性好、易于制作 ,值得进一步推广。模型制作中环境温度应保持在 36～ 37℃。     

依达拉奉对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织MMP-9的影响

目的观察依达拉奉对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响,探讨依达拉奉对新生大鼠HIBD的保护作用。方法随机将7日龄Wistar大鼠108只分为3组（假手术组、HIBD组、依达拉奉治疗组）,每组36只。根据造模后处死时间,各组又分6个亚组：6h、1d、2d、3d、5d、7d组,每亚组各6只。通过结扎左颈总动脉和吸入8%低氧混合气制备缺氧缺血性脑损伤（HIBD）动物模型。假手术组动物只分离左颈总动脉,不结扎,亦不做低氧处理。治疗组于缺氧缺血后即刻给予腹腔注射生理盐水稀释的依达拉奉注射液（2mg/kg,每24h1次,连续5d。HIBD组和假手术对照组腹腔注射等量生理盐水）。分别于相应时点断头处死各组动物,取脑,采用干湿质量法测定大鼠脑组织含水量,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测MMP-9mRNA的表达情况。结果 HIBD组大鼠脑组织含水量在缺氧缺血后逐渐上升,2d时达到高峰,各时间点均高于假手术组（P〈0.05）。同时,MMP-9mRNA表达量与脑含水量呈相应逐渐上升改变,MMP-9mRNA表达量与脑组织含水量呈正相关。依达拉奉治疗组与HIBD组相比,脑组织含水量明显下降（P〈0.05）,MMP-9mRNA表达量显著下调（P〈0.05）。结论 MMP-9参与了HIBD脑水肿的发生发展过程,依达拉奉可降低脑组织MMP-9的表达,从而减轻脑水肿,这可能是其脑保护作用机制之一。     

间充质干细胞移植对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内胶质细胞源性神经营养因子含量的影响

目的 观察间充质干细胞（MSCs）移植对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑内胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）含量的影响,初步探讨间充质干细胞移植治疗新生大鼠HIBD的机制。方法 体外分离培养4～6周龄SD大鼠骨髓MSCs。采用新生7日龄SD大鼠结扎左颈总动脉后低氧暴露2.5h制作HIBD模型。24h 后,MSCs移植组（n=20）经尾静脉注射1×106个MSCs,PBS对照组（n=20）尾静脉注射PBS（0.01ml /g）,HIBD手术组（n=20）和正常对照组（n=20）不作注射。采用大鼠改良神经功能损害评分(mNSS)及ELISA法分别检测移植后1、3、7、14d各组大鼠神经功能及脑内GDNF含量。结果 MSCs移植后7、14d,MSCs移植组的神经功能损害评分明显低于PBS对照组和HIE手术组（P<0.05）。制模后,所有HIBD大鼠的GDNF含量均较正常对照组明显升高（P<0.05）。与PBS对照组和HIE手术组比较,MSCs移植组在各个时间点的GDNF含量升高更为明显（P<0.05）。结论 MSCs移植可改善HIBD新生大鼠的神经功能,促进脑内GDNF的合成和分泌,从而发挥神经保护和修复作用。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型的制作

OBJECTIVE: To duplicate a model of hypoxic-ischemic brain damage (HIBD) in the neonatal rat to create unilateral cerebral damage. METHODS: Healthy 7-day-old Sprague-Dawley (SD) rats were used as research subjects and randomly divided into 3 groups: the control group (n = 18), the sham operated group (n = 8), and the HIBD group (n = 19). The HIBD model was produced according to the traditional Rice model and the brains were collected when the rats were 14 days old. The weight, left/right brain weight ratio, behavioral ability, and neuropathologic changes were studied in each group. RESULTS: 1. The weight in the HIBD group increased obviously slowly and was lower than that in the control group and sham operated group (P < 0.01). 2. The abnormity of behavioral ability was found in the HIBD group, including turnover unability (63.16%), spontaneously turn left round (89.47%), convulsion (47.37%), and so on. 3. The left/right brain weight ratio was significantly lower in the HIBD group than in the other two groups (P < 0.01). 4. The pathologic features in the HIBD group were as follows: atrophy of left brain (84.21%), softening of left brain (31.58%), liquefaction of left brain (52.63%), and cavum brain (15.79%). HE staining showed the neuron damage and the proliferation of neuroglial cells in the HIBD group. There was no obvious abnormity found in the control group and the sham operated group. CONCLUSION: The model of HIBD is successful and worthy of spreading, with its cheap price, easy duplication, and higher successful rate. The reasonable ambient temperature should be kept in 36-37 degrees C.