口腔鳞状细胞癌组织乏氧状况的初步研究

目的 检测口腔鳞状细胞癌组织乏氧程度,探讨口腔鳞状细胞癌组织乏氧影响因素,认识和利用肿瘤乏氧区域的特性,为治疗提供依据.方法 经临床和病理证实的口腔鳞状细胞癌组织石蜡标本42例,建立口腔鳞状细胞癌动物移植瘤模型,采用单光子发射计算机断层成像(single photon emission computerized tomography,SPECT)乏氧显像技术检测癌组织的乏氧程度;采用免疫组织化学方法检测肿瘤乏氧标志物(hypoxia inducible factorla,HIF-1α)在口腔鳞状细胞癌组织中的分布,并分析与临床病理资料的相关性.结果 乏氧显像剂在动物模型鳞状细胞癌组织内高浓度聚集,与肿瘤体积呈线性相关,相关指数为0.926(P＜0.05),呈全层乏氧;口腔鳞状细胞癌组织中HIF-1α蛋白高表达,且在低分化、淋巴结转移及高临床分期组中的表达较高分化、无淋巴结转移及低临床分期组高(P＜0.05);正常口腔黏膜组织巾HIF-1α无表达.结论 口腔鳞状细胞癌组织乏氧区域分布广泛.HIF-1α在口腔鳞状细胞癌组织中高表达,可能在口腔鳞状细胞癌的发生和发展中起重要作用.     

口腔癌前病变、口腔鳞癌中诱导型一氧化氮合酶与p53蛋白表达及细胞增殖相互关系的研究

目的:探讨诱导型一氧化氮合酶(inducible netric oxide synthase,iNOS)在口腔鳞癌发展过程中的表达及与p53蛋白表达和细胞增殖的相互关系。方法:采用免疫组化SABC法检测10例正常口腔黏膜、8例上皮单纯增生、20例上皮异常增生和32例口腔鳞癌组织中iNOS、p53及Ki-67蛋白的表达。结果:口腔鳞癌发展过程中存在着iNOS、p53、Ki-67表达的上调;三种蛋白的表达与上皮异常增生的病理分级有关(P<0.05),与鳞癌的病理分级无关;各组中iNOS和p53表达之间均存在显著正相关(P<0.05);iNOS阳性表达的鳞癌组织中Ki-67标记指数较阴性者显著增高(P<0.05)。结论:iNOS与p53蛋白互为反馈影响,在口腔鳞癌发展过程中意义重大;鳞癌中iNOS的阳性表达可能提示该组织的快速增殖优势。     

荷瘤裸鼠口腔鳞状细胞癌乏氧状况的初步研究

目的检测荷口腔鳞状细胞癌裸鼠肿瘤组织乏氧区域分布,明确厌氧菌能否在肿瘤乏氧区内生长,为认识和开发利用肿瘤乏氧区域提供依据。方法荷瘤裸鼠尾静脉注射^99mTc-HL91,应用SPECT检测鳞癌组织及正常组织乏氧区域分布。荷瘤裸鼠尾静脉注射青春双歧杆菌菌悬液,切取鳞癌组织及其它正常组织,匀浆后厌氧培养。结果^99mTc-HL91在肿瘤组织内高浓度聚集,与肿瘤体积呈线性相关;肿瘤区域、肿瘤对侧部位及头胸部位平均像素^99mTc-HL91吸收值有显著性差异。肿瘤组织内可见青春双歧杆菌生长,其它正常组织内未见青春双歧杆菌生长。结论口腔鳞癌组织中乏氧区域分布广泛,且与肿瘤体积密切相关。口腔鳞癌组织乏氧微环境适合严格厌氧菌-青春双歧杆菌的生长。     

口腔癌前病变、口腔鳞癌中诱导型一氧化氮合酶与p53蛋白表达及细胞增殖情况的相互关系的研究

目的探讨诱导型一氧化氮合酶(inducible netric oxide synthase,iNOS)在口腔鳞癌发展过程中的表达及与p53蛋白表达和细胞增殖的相互关系. 方法采用免疫组化SABC法检测10例正常口腔黏膜、8例上皮单纯增生、20例上皮异常增生和32例口腔鳞癌组织中iNOS、p53及Ki-67蛋白的表达. 结果口腔鳞癌发展过程中存在着iNOS、p53、Ki-67表达的上调;三种蛋白的表达与上皮异常增生的病理分级有关(P<0.05),与鳞癌的病理分级无关;各组中iNOS和p53表达之间均存在显著正相关(P<0.05);iNOS阳性表达的鳞癌组织中Ki-67标记指数较阴性者显著增高(P<0.05).结论iNOS与p53蛋白互为反馈影响,在口腔鳞癌发展过程中意义重大;鳞癌中iNOS的阳性表达可能提示该组织的快速增殖优势.     

口腔鳞癌NOS和VEGF的表达及其与肿瘤血管形成的关系

目的　研究Ⅱ、Ⅲ型一氧化氮合酶 (iNOS、eNOS)和血管内皮生长因子 (VEGF)在口腔鳞癌中的表达及其与肿瘤血管形成的关系。方法　应用免疫组化检测 40例口腔鳞癌患者手术切除标本的iNOS、eNOS、VEGF的表达。抗CD34单克隆抗体显示血管内皮细胞。根据CD34阳性的血管内皮细胞来测定肿瘤微血管密度(MVD)。结果　iNOS、eNOS分别在 82 .9%、84.3%的口腔鳞癌中阳性表达 ,而正常口腔粘膜组织不表达。iNOS阳性的口腔鳞癌组织 33例MVD为 34 .3± 1.5 /高倍视野。iNOS阴性的组织为 30 .2± 2 .1/高倍视野 ,两者差异有显著性 (P <0 .0 1) ;VEGF阳性口腔鳞癌组织 2 4例MVD为 38.6± 2 .8/高倍视野 ,VEGF阴性组织为 2 4.2± 1.6 /高倍视野 ,两者差异有显著性 (P <0 .0 1) ,iNOS、eNOS的表达与VEGF的表达无相关性 (P >0 .0 5 )。结论　iNOS和VEGF可促进口腔鳞癌肿瘤血管形成 ,NOS和VEGF可能在口腔鳞癌的发生发展过程中起重要作用。     

诱导型一氧化氮合酶在颌骨肉瘤中的表达及意义

目的：研究诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在颁骨肉瘤中的表达情况及其和肿瘤血管形成、临床病理特征之间的关系。方法：应用S-P免疫组织化学法检测iNOS和CDB4在颌骨肉瘤中的表达。结果：颌骨肉瘤中存在iNOS的过度表达;iNOS表达与微血管密度有关;iNOS表达与颌骨肉瘤大小、病理分级、临床分期、初／复发等临床病理特征有关,与肿瘤的转移无关。结论：iNOS有促进颌骨肉瘤中肿瘤血管形成的作用,iNOS是肿瘤治疗的一个重要靶点。     

整合素连接激酶和一氧化氮合酶在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:探讨整合素连接激酶(ILK)和一氧化氮合酶(NOS)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及意义。方法:收集71例择期行手术切除治疗的OSCC患者肿瘤组织及癌旁组织,利用免疫组化SP法对ILK、eNOS和iNOS在肿瘤组织及癌旁组织中表达进行检测。结果:ILK、eNOS和iNOS在癌旁组织中阳性表达率分别为39.4%、45.1%和29.6%,且主要以弱阳性为主,而在OSCC组织中阳性表达率分别为98.6%、93.0%和95.8%,且以强阳性表达为主,ILK、eNOS和iNOS在OSCC组织中阳性表达显著高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05);ILK和iNOS在OSCC组织中表达均与分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05);Spearman相关分析显示,ILK在OSCC组织中强表达与iNOS强表达呈正相关(r=0.529,P=0.000)。结论:ILK、eNOS和iNOS在OSCC组织中出现高表达,可能通过促进肿瘤中血管生成而参与OSCC细胞浸润和转移过程。     

Ezrin蛋白及诱导型一氧化氮合酶在黏液表皮样癌中的表达及意义

目的探讨Ezrin蛋白、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在黏液表皮样癌（MEC）中的表达以及在肿瘤侵袭转移过程中的作用。方法应用免疫组化SP法检测36例高分化MEC、24例低分化MEC,以及正常唾液腺组织中Ezrin蛋白、iNOS蛋白的表达,结合临床资料进行Ezrin蛋白、iNOS蛋白表达与MEC转移的相关性分析。结果Ezrin蛋白、iNOS在正常唾液腺组织、高分化MEC及低分化MEC中的表达均依次增强,差异均有统计学意义（P〈0．05）,而Ezrin蛋白和iNOS两者之间的表达也有相关性（P〈0．01）;Ezrin蛋白与iNOS的表达分别与MEC肿瘤的转移有相关性（P〈0．05）。结论Ezrin蛋白和iNOS之间存在密切关系．均与MEC的转移高度相关。     

口腔粘膜癌前病变和鳞癌组织凋亡相关蛋白Bcl-2和Fas的表达

目的 :研究凋亡相关蛋白Bcl 2、Fas在口腔异常增生上皮和鳞癌组织中表达。方法 :采用免疫组化SP法检测 10例正常粘膜 ,48例异常增生上皮 ,42例鳞癌石蜡包埋样本中Bcl 2和Fas的表达。结果 :Bcl 2在正常粘膜和异常增生上皮中少见表达 ,鳞癌组织中Bcl 2表达明显增强 (p <0 0 5 )。Fas在正常粘膜中广泛表达 ,在异常组和鳞癌组中表达明显下调 (p <0 0 5 )。结论 :Fas在异常增生上皮中表达下降 ,可能导致异常增生细胞累积 ;Bcl 2和Fas共同作用导致肿瘤的最终发生、发展     

诱导型一氧化氮合酶表达在口腔癌前病变口腔鳞癌发展过程中的作用研究

目的　探讨诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)在口腔癌前病变、口腔鳞癌发展过程中的表达情况及其作用。方法　采用免疫组化SABC法检测 10例正常口腔黏膜、8例上皮单纯增生、2 0例上皮异常增生和 3 2例鳞状细胞癌组织中iNOS的表达。结果　正常口腔黏膜iNOS阴性表达 ;上皮异常增生组和鳞癌组中iNOS的表达较上皮单纯增生组均显著增加 (P <0 .0 5 ) ;随着上皮异常增生程度的加重 ,iNOS的标记指数逐级显著上升 (P <0 .0 5 ) ;上皮异常增生组与鳞癌组之间以及鳞癌的各病理分级之间iNOS的表达均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　iNOS的表达可能参与了口腔鳞癌的衍进过程     

NOS和VEGF在唇鳞癌组织中的表达

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在唇鳞癌组织中表达的相关性,及该三者与唇鳞癌血管生成和临床病理特征的关系,探讨一氧化氮(NO)和VEGF对唇癌生长的作用机制。方法: 应用免疫组织化学方法检测42例唇鳞癌手术切除标本VEGF、iNOS和eNOS的表达,第Ⅷ因子相关抗原(FⅧRAg)血管内皮细胞特异性染色计数肿瘤微血管密度(MVD)。结果:(1)26例唇鳞癌组织表达VEGF,28例表达iNOS,31例表达eNOS;VEGF与iNOS的表达正相关,与eNOS的表达无相关;(2)VEGF、iNOS的表达与唇鳞癌MVD呈正相关,eNOS的表达与唇鳞癌MVD的差异无显著性意义;(3)VEGF的表达与唇鳞癌淋巴结转移和肿瘤分化程度及肿瘤浸润深度正相关;与临床分期无关。iNOS表达与唇鳞癌的分化程度、临床分期和有无淋巴结转移及肿瘤浸润深度正相关;eNOS表达与唇鳞癌临床分期、分化程度和有无淋巴结转移及肿瘤浸润深度均无关。结论: (1)iNOS对VEGF的生成和发挥作用的过程可能有重要影响;(2)MVD随着VEGF和iNOS表达的增强而增加,说明两者对唇鳞癌血管生成具有促进作用。     

乏氧对IL-17调控牙周膜细胞RANKL及OPG表达的影响

目的探究不同乏氧条件下IL-17对人牙周膜成纤维细胞RANKL及OPG表达的影响。方法在常氧(氧体积分数20%)及不同乏氧条件下:轻度乏氧(氧体积分数10%)、中度乏氧(氧体积分数5%)、重度乏氧(氧体积分数2%)IL-17处理人牙周膜成纤维细胞24 h。通过CCK8比色法检测细胞增殖情况,实时定量RT-PCR和Western-blot方法检测细胞中骨吸收相关因子RANKL及骨保护因子OPG的表达水平。结果氧体积分数10%、5%时,人牙周膜成纤维细胞的增殖与时间呈正相关关系,氧体积分数2%时,细胞增殖受到明显抑制。乏氧培养后随氧体积分数的降低,人牙周膜成纤维细胞RANKL蛋白及mRNA的表达升高,OPG的蛋白及mRNA表达呈现先升后降的趋势。结论当氧体积分数在5%左右时最大程度上调RANKL/OPG比例,提示中度乏氧可促进IL-17调控人牙周膜成纤维细胞骨吸收相关因子的表达,并参与牙槽骨的改建。     

口腔鳞癌VEGF和NOS的表达及其相关性

目的：研究VEGF、iNOS和eNOS在口腔鳞癌的表达及其相关性；研究NO和VEGF的相互作用及在促肿瘤生长中的作用机制。方法：应用免疫组化方法检测64例口腔鳞癌标本VEGF、iNOS和eNOS的表达及分布。结果：1)64例口腔鳞癌组织中，表达iNOS的为65．63％，表达eNOS的为70．31％．表达VEGF的占60．94％。2)VEGF与iNOS的表达具有明显相关性(P＜0．01)，VEGF与eNOS的表达无明显相关性(P＞0．05)。结论：VEGF与iNOS的表达具有明显相关性，iNOS在VEGF的生成和发挥过程中起重要作用。     

乏氧对人舌癌Tca8113细胞尿激酶型纤溶酶原激活物表达的影响

目的　研究乏氧对人舌癌Tca8113细胞尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)表达的影响,探讨乏氧与口腔鳞 癌侵袭、转移的关系。方法　采用免疫组化染色和流式细胞术,对Tca8113细胞在不同乏氧时间(0、3、6、12、24 h)下 的uPA蛋白表达进行染色和定量分析。结果　乏氧可促进人舌癌Tca8113细胞uPA蛋白表达,而且随着乏氧时间 3 h→6 h→12 h→24 h的延长,uPA表达逐渐增高。结论　乏氧可通过激活肿瘤细胞高表达uPA而促进口腔鳞癌侵 袭和转移。     

大鼠正畸牙移动中牙髓iNOS表达的免疫组化研究

目的:建立大鼠正畸牙移动模型,观察牙髓组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达及分布,探讨正畸牙移动过程中牙髓改建的分子机制。方法:采用免疫组织化学方法对正畸加力后12h、1d、3d、7d和14d大鼠牙髓组织中iNOS进行检测,观察iNOS的时空分布。结果:iNOS阳性反应的产物呈深褐色均质沉淀,主要在血管内皮细胞、成牙本质细胞胞浆核周区颗粒状阳性表达。这种染色在正畸加力后12h、1d、3d天有不同程度的增强,3d达到高峰,加力后7d和14d表达减弱,第14d与对照组无明显差异。结论:正畸牙移动过程中牙髓组织iNOS的表达先升高后逐渐恢复正常,提示iNOS可能在正畸牙移动牙髓组织改建过程中起重要作用。     

口腔鳞癌中NOS和VEGF的表达与血管生成及临床病理因素的关系

目的 :研究血管内皮生长因子 (VEGF)、诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)和内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)在口腔鳞癌中表达的相关性 ;探讨三者与口腔鳞癌血管生成和临床病理特征的关系 ;研究一氧化氮 (NO)和VEGF的相互作用及NO在VEGF促肿瘤生长中的作用机制。方法 :应用免疫组织化学方法检测 64例口腔鳞癌手术切除标本VEGF、iNOS和eNOS的表达 ,Ⅷ因子相关抗原 (FⅧRAg)血管内皮细胞特异性染色 ,计数肿瘤微血管密度 (MVD )。结果 :( 1) 3 9例口腔鳞癌组织表达VEGF ,42例表达iNOS ,45例表达eNOS ;( 2 )VEGF与iNOS的表达正相关 ,与eNOS的表达无相关 ;( 3 )VEGF、iNOS的表达与口腔鳞癌MVD呈正相关 ,eNOS的表达与口腔鳞癌MVD的差异无显著性意义 ;( 4 )VEGF的表达与口腔鳞癌淋巴结转移和肿瘤分化程度正相关 ;与临床分期无关。iNOS表达与口腔鳞癌的分化程度及临床分期和有无淋巴结转移正相关 ;eNOS表达与口腔鳞癌临床分期和分化程度及有无淋巴结转移均无关。结论 :( 1)iNOS对VEGF的生成和发挥作用的过程有重要影响 ;( 2 )MVD随着VEGF和iNOS表达的增强而增加 ,说明两者对口腔鳞癌血管生成具有促进作用     

乏氧对人牙周膜细胞HIF-1α及VEGF表达的影响

目的:检测人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)在乏氧环境下乏氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelia1 growth factor,VEGF)的表达情况.方法:组织块法培养人牙周膜细胞,第3代细胞用于实验,分2组分别在20%O2,5%CO2,75%N2(对照组)和1%O2,5%CO2、94%N2(乏氧组)的37℃培养箱中培养24h和48h.采用RT-PCR技术和免疫组化技术检测HIF-1α和VEGF的表达情况.应用SPSS13.0软件包进行t检验、单因素方差分析及LSD检验.结果:乏氧组HIF-1αmRNA的表达与对照组相比,差别无统计学意义.乏氧24h与48h VEGF mRNA的表达显著高于对照组(P＜0.05).免疫细胞化学细胞爬片结果显示,乏氧组HIF-1α染色阳性,大量HIF-1α蛋白在胞核积聚,且表达量随乏氧时间增加而增加,而常氧组未观察到HIF-1α的表达;VEGF的表达呈时间依赖性增加,乏氧组VEGF的表达明显强于对照组.常氧48h后,VEGF呈微弱阳性表达.结论:乏氧可以改变人牙周膜细胞的代谢途径,上调HIF-1α及相关因子的表达.     

口腔白斑及鳞癌中Rb、P53蛋白的表达

目的 :探讨抑癌基因p5 3 、Rb蛋白产物在口腔白斑及鳞癌中的表达。方法 :用免疫组化法检测 2 0例口腔白斑 (OLK)、3 3例鳞癌 (OSCC)组织中P5 3 及Rb蛋白的表达。结果 :Rb蛋白在OLK、OSCC中的表达较正常口腔黏膜组增强 ,但无显著性差异 ;突变型P5 3 蛋白的表达在OLK即已出现 ,且随着细胞异常增生程度的增高而增强 ,在OSCC中其阳性表达率高达 80 %。结论 :p5 3 基因突变、P5 3 蛋白过度表达与OSCC的发生发展密切相关 ;OSCC的发生可能涉及Rb、p5 3 细胞周期生长抑制反馈调节通路的异常     

iNOS在口腔扁平苔藓癌变过程中的表达研究

目的 :研究诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)在口腔扁平苔藓、口腔鳞状细胞癌发展过程中的表达水平及其作用。方法 :以正常口腔黏膜作对照 ,采用免疫组化SP法检测 2 5例口腔扁平苔藓和 10例口腔鳞状细胞癌组织中的iNOS表达。结果 :正常口腔黏膜iNOS阴性表达 ;扁平苔藓组和鳞癌组iNOS表达较正常黏膜组均非常显著增加 (P <0 .0 1) ;扁平苔藓组与鳞癌组之间以及扁平苔藓组内部按上皮异常增生程度分组之间iNOS的表达均无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :iNOS在口腔扁平苔藓伴上皮异常增生和鳞癌中高表达 ,在口腔鳞癌的发生发展中起着重要的作用。     

PTEN、p53在口腔黏膜白斑和口腔鳞癌组织中的表达及意义

目的:探讨抑癌基因PTEN、p53在口腔黏膜白斑(oralleukoplakia,OLK)和口腔鳞癌(oralsquamouscellcancer,OSCC)组织中的蛋白表达及意义。方法:应用免役组化S-P法检测10例正常口腔黏膜、25例口腔黏膜白斑(其中白斑伴上皮异常增生15例,白斑不伴上皮异常增生10例)及32例口腔鳞癌组织中抑癌基因PTEN和p53的蛋白表达情况,分析两者之间的相互作用关系及其在口腔鳞癌发生、发展过程中的作用。结果:正常口腔黏膜和白斑不伴上皮异常增生组织中PTEN蛋白全部阳性表达;白斑伴上皮异常增生组织中PTEN蛋白阳性表达率为93. 3%;OSCC组织中PTEN蛋白的阳性表达率为71. 9%,其中高、中、低分化OSCC组织中PTEN蛋白的阳性表达率分别为85. 7%、75%和33. 3%,统计学分析表明PTEN在OSCC组织中的蛋白表达与组织分化程度明显相关(P<0. 05)。正常口腔黏膜组织中p53蛋白阴性表达;白斑组织中p53蛋白的阳性表达率为48%;OSCC组织中p53蛋白的阳性表达率为56. 3%,其中高、中、低分化OSCC组织中p53蛋白的阳性表达率分别为57. 1%、58. 3%和50%,统计学分析表明p53在OSCC组织中的蛋白表达与组织分化程度无明显相关(P>0. 05)。p53阴性表达的14例OSCC组织中有5例PTEN也阴性表达。结论:OSCC组织中PTEN和p53蛋白异常表达,说明PTEN和p53基因突变或缺失