β淀粉样肽22—35单克隆抗体的制备和应用

目的制备稳定分泌Aβ     

β-淀粉样蛋白Aβ25-35诱导HT22细胞自噬及其对V-ATPase表达的影响

【目的】探讨β-淀粉样蛋白Aβ25-35诱导HT22细胞产生自噬及与V-ATPase变化的关系。【方法】将HT22细胞分为对照组、无血清培养组、Aβ处理组和Aβ+Bafilomycin A1组,不同浓度的Aβ25-35作用于HT22细胞24 h,用CCK8测定细胞活力变化,免疫细胞荧光检测自噬斑点变化,及Western blot检测LC3、V-ATPase蛋白变化。【结果】Aβ可以诱导HT22细胞出现明显的自噬现象,且这种自噬同Aβ的浓度以及作用时间具有一定的相关性。V-ATPase的表达伴随自噬的增多也逐渐增多。Bafilomycin A1可以进一步诱导V-ATPase增加,增加细胞内自噬体的聚积。【结论】Aβ25-35可诱导HT22细胞产生自噬,且与V-ATPase表达有关。     

β-淀粉样肽（25-35）对PC12细胞bax和bcl-2基因表达的影响

目的：观察β-淀粉样肽25-35（β-amyloid peptide 25-35,Aβ25-35）诱导PC12细胞凋亡和对bax及bcl-2基因表达的影响。方法：采用MTT法检测PC12细胞的存活率;DNA电泳法观察细胞凋亡时特异性梯状条带;Hochest33258-PI荧光染色观察细胞核形态学改变;RT-PCR检测bax和bcl-2基因mRNA表达变化,Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达变化。结果：随着Aβ25-35浓度的增加,PC12细胞存活率逐渐降低;DNA电泳呈凋亡特异性梯状条带;荧光染色可见细胞核碎裂、核固缩等凋亡特征;bax mRNA及Bax蛋白表达增加,bcl-2 mRNA及Bcl-2蛋白表达降低。结论：在Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中,Bax和Bcl-2可能起重要作用。     

Tenuigenin对转染APP695cDNA的SH-SY5Y细胞β-淀粉样蛋白生成的抑制作用及机制

目的用转染APP695cDNA的SH-SY5Y细胞模型,研究tenuigenin对β-淀粉样蛋白(Aβ)生成的抑制作用及其作用机制。方法应用免疫沉淀和蛋白印迹法(Westernblot)检测Aβ含量,应用MTT和LDH法测定tenuigenin的细胞毒性。结果Tenuigenin降低SH-SY5YAPP695细胞Aβ分泌水平;无细胞增生和毒性作用;能抑制SH-SY5YAPP695细胞APPC99的生成,但对SH-SY5YSPA4CT细胞APPC99生成无抑制作用,亦不影响该细胞株Aβ的分泌。结论Tenuigenin可能通过抑制β-分泌酶对APP的水解,降低SH-SY5YAPP695细胞Aβ水平。Tenuigenin这一针对阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)上游病理环节的药效,显示了其在AD治疗方面重要的开发和临床应用的价值,值得进一步研究。     

β-淀粉样蛋白25-35片段诱导PC12细胞凋亡

目的　探讨 β -淀粉样蛋白 2 5 - 35片段 (Aβ2 5-3 5)对体外培养的PC12细胞的毒性作用机制。方法　用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)代谢率检测 ,光镜吖啶橙荧光染色术 ,透射电镜以及流式细胞仪技术研究Aβ2 5-3 5损伤PC12细胞的途径。结果　用Aβ2 5-3 5处理PC12细胞 2 4h ,Aβ2 5-3 5剂量依赖性地引起PC12细胞的MTT代谢率减少 ,荧光染色及电镜观察发现经Aβ2 5-3 5处理的PC12细胞表现出凋亡细胞的特征 ,流式细胞仪检测发现 ,对照组 2 0 μmol/L及 5 0 μmol/L的Aβ2 5-3 5组PC12细胞的凋亡率分别为 0 .0 8%± 0 .0 1% ,14 .8%± 1.13% ,2 5 .9%± 2 .34%。结论　Aβ对PC12细胞的损伤主要通过细胞凋亡的途径     

β-淀粉样肽研究进展

<正> 阿尔采末病(Alzheimer’s disease,AD)是临床上最常见的一种老年期痴呆综合征,它以细胞外老年斑(SPS)、细胞内神经原纤维缠结(NFTS)、神经元大量丢失为主要病理特征。β-淀粉样肽(β-amy-loid precursor Aβ)是老年斑的主要结构物质,且Aβ聚集后对体外培养的神经元具有毒性,Aβ被普遍认为     

β-淀粉样肽研究进展

阿尔茨海默病(AD)是发生于老年期的一种以认知障碍和记忆能力损害为主的中枢神经系统退行性疾病，旧称老年痴呆，是引起老年期痴呆的主要原因。在西方国家AD已成为排在心脏病、肿瘤、脑卒中之后的第4位威胁人类健康的杀手。β-淀粉样肽(Aβ)在阿尔茨海默病(AD)患者的老年斑中它能较早地有选择地沉积，它是各种原因诱发AD的共同途径，是AD形成和发展的关键因素。Aβ的出现早于神经原纤维缠结、     

β-淀粉样肽与阿尔茨海默病

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是老年人群中最常见的一种痴呆症,为病因和发病机制尚不清楚的神经系统退行性病变。AD的组织病理学表现主要为老年斑(senile plaques,SP),神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs),以及由凋亡引起的区域性神经细胞死亡等。患者脑内老年斑主要是由具有神经毒性和血管毒性的β淀粉肽(β-amyloid,Aβ)生成。由于AD为多因异质性疾病,目前Aβ-淀粉样肽级联假说引起广泛关注和重视,本文就近年关于Aβ与AD的关系作一综述。     

β-淀粉样蛋白与阿尔茨海默病

随着人均寿命的延长,阿尔茨海默病（俗称老年痴呆）的发病率逐年上升,已成为现代社会老年人的主要致死疾病之一。本文就β-淀粉样蛋白与阿尔茨海默病的关系进行文献综述,提示：人们的焦虑、紧张和抑郁等不良情绪会引起人体的应激反应,从而激活细胞膜上的β-2-肾上腺素受体,进而引起β-淀粉样蛋白的生成增加,使细胞外产生老年斑和脑血管淀粉样变性,细胞内发生神经元纤维缠结,导致神经元变性乃至形成痴呆。     

阿尔茨海默病与β-淀粉样蛋白

阿尔茨海默病（Alzheimer disease,AD）是1907年由巴伐利亚一位神经病理学家首先发现,此人名为阿尔茨海默（AloisAlzheimer）,所以以其名字命名,是中枢神经系统一种常见的进行性神经退行性疾病,最终带来极高的致死率和致残率^[1]     

原花青素对β-淀粉样肽25-35诱导PC12细胞par-4 和bcl-2基因表达的影响

目的探讨原花青素(PC)对β-淀粉样肽(Aβ25-35)诱导凋亡PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA和蛋白表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst33258-PI荧光染色法检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA的表达,Westernblotting检测PC12细胞Par-4和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量(5、10、20、30mg/L)PC预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的细胞凋亡,提高PC12细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的PC12细胞核固缩、凝聚和碎裂,降低par-4基因mRNA表达及蛋白表达,增加bcl-2基因mRNA表达及蛋白表达。结论PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与下调凋亡基因par-4和上调抗凋亡基因bcl-2表达有关。     

调心方对杏仁核注射Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病模型大鼠的影响

目的 研究调心方(HBR)对杏仁核注射β淀粉样蛋白(Aβ25-35)致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠相关病理变化的作用。方法 单侧杏仁核注射Aβ25-35造成AD大鼠模型，采用Morris水迷宫法、放射免疫法、免疫组化法、RT—PCR法，以Aricept为对照，观察HBR对AD模型大鼠的空间学习记忆能力、胆碱能系统、Aβ1-40沉积、tau蛋白异常磷酸化及脑额叶皮层内APPmRNA表达的影响。结果 HBR可显著改善Aβ25-35诱导的AD大鼠空间学习记忆障碍，提高模型大鼠的胆碱乙酰化转移酶(ChAT)活性及M受体结合容量(Rt)值，减少APPmRNA的表达和Aβ1-40的沉积，抑制tau蛋白的异常磷酸化。结论 HBR对Aβ25-35诱导的AD大鼠空间学习记忆障碍及胆碱能系统损害具有显著改善作用，可以明显减轻Aβ1-40的沉积和tau蛋白的异常磷酸化。     

不同浓度的Aβ31-35对大鼠学习记忆功能的影响

目的通过观察不同浓度的Aβ31-35对在体大鼠海马LTP和空间学习记忆功能的影响,探讨全长A片段的活性中心。方法急性手术后进行海马CA1区fEPSP的记录,比较给予不同的处理后海马LTP的变化;侧脑室注射药物2周后进行Morris水迷宫测试,比较不同处理后的大鼠逃避潜伏期、到达平台游过距离以及目标象限内游泳所占的时间和距离。结果高浓度的Aβ31-35可以引起大鼠在体海马LTP幅度的降低（P〈0.01或P〈0.05）、以及延长大鼠逃避潜伏期、到达平台游过距离（P〈0.01）,并且减低了大鼠在目标象限内游泳所用的时间和距离（P〈0.01）。结论高浓度的Aβ31-35能够引起大鼠学习记忆功能的损伤。     

Aβ1-42单克隆抗体对阿尔茨海默病大鼠认知能力及脑组织Aβ和ChAT表达的影响

目的:探讨经颅内注射β-淀粉样蛋白(Aβ)142单克隆抗体(mAb)对阿尔茨海默病(AD)大鼠的疗效及机制.方法:30只SD大鼠分3组:AD模型组和治疗组各12只,生理盐水组6只.AD模型组和治疗组于侧脑室注入Aβ1-42蛋白片段建立AD大鼠模型,治疗组大鼠在注射后第14天于侧脑室内注入Aβ1-42 mAb,连用3 d...     

知母皂甙对Aβ25-35激活的小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α和iNOS表达的抑制作用

目的 观察知母皂甙（SAaB）对Aβ25-35激活的小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α和iNOS表达的抑制作用，并初步探讨其作用机制。方法分离小鼠腹腔巨噬细胞进行培养，用10μg／L的Aβ25-35刺激细胞，对照组同时加入不同浓度（10μg／L、30μg／L、100μg／L）的SAaB共同孵育。采用ELISA法、Griess反应和免疫组织化学（sP）方法分别检测TNF-α分泌量、iNOS表达、NO的生成量。结果 Aβ25-35能激活小鼠腹腔巨噬细胞，使其分泌的TNF-α增多、iNOS表达上调、NO的生成量增加。SAaB能有效地抑制此变化，并呈剂量依赖关系。结论这一作用的机制可能与其抑制激活的巨噬细胞释放炎症因子有关。     

Aβ25-35对体外培养大鼠神经干细胞分化的影响

目的 探讨β淀粉样蛋白（Aβ25-35）对体外培养神经干细胞分化的影响和机制.方法 分离培养新生SD大鼠经干细胞,加入10%的胎牛血清使其分化7 d时,一部分细胞用Aβ25-35作用12 h,观测细胞生长状态,运用免疫细胞化学和免疫蛋白印记迹术研究各组Tau蛋白在Ser396,Ser262位点磷酸化水平变化及活化型GSK-3β[pTyr279,216]的表达水平.结果 呈球形生长的神经干细胞在加入胎牛血清培养液后,逐渐从球的周边分化出神经细胞,长出神经细胞样的触突,在Aβ25-35作用下,分化细胞的突起粗大且生长速度较快.免疫细胞化学染色和Western-blot结果显示,所有分化细胞都有Tau[pS396]、Tau[pS262]、GSK-3β[pTyr279,216]表达,但经Aβ处理后表达量增高.结论 Aβ25-35可通过上调GSK-3β的表达提高Tau蛋白磷酸化水平,促进神经干细胞向神经细胞分化.     

阿魏酸钠对β淀粉样蛋白25-35诱导的体外培养神经细胞损伤的保护作用

目的研究阿魏酸钠(SF)对β淀粉样蛋白25-35(A β25-35)诱导的原代培养神经细胞损伤的保护作用.方法以原代培养孕17～18d的SD大鼠胎鼠的大脑皮层神经细胞为观察对象.倒置显微镜下观察给药前后神经细胞的形态学变化,用MTT比色实验检测神经细胞活性,依据LDH漏出率检测神经细胞膜的损伤程度,以MDA生成量推测生物膜不饱和脂肪酸过氧化程度.结果与正常对照组相比,A β25-35(20μmol/L)处理24h,可使神经细胞活性显著下降(P<001),SF(10μmol/L,50μmol/L,100μmol/L,500μmol/L, 1ol/L)能剂量依赖地减轻A β25-35的细胞毒性.结论 SF能够对抗A β25-35诱导的培养皮层神经细胞的损伤.     

β淀粉样肽研究述要

老年性痴呆病理学特征主要表现为神经元内大量出现的双股螺旋细丝———神经纤维缠结 (ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ ,ＮＦＴ)和细胞外间隙出现的以β 淀粉样肽 (β ａｍｙｌｏｉｄｐｅｐｔｉｄｅ,β ＡＰ)沉积为主的老年斑 (ｓｅｎｉｌｅｐｌａｑｕｅｓ,ＳＰ)。近年来 ,对 β ＡＰ在阿尔茨海默病 (ａｌｚｈｅｉｍｅｒｄｉｓｅａｓｅ ,ＡＤ)发病中的作用已引起广泛关注和重视 ,现将有关 β ＡＰ的研究进展报道如下。1　β ＡＰ的发现早在Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ报道世界上首例ＡＤ患者之前 ,人们就已知道在大脑皮层有许多球状斑。斑的中心为…     

淫羊藿苷对Aβ25-35所致神经细胞损伤的保护作用研究

目的 观察淫羊藿苷对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)所致神经细胞损伤的作用.方法 18只Wistar大鼠简单随机分为5组,分别为假手术组、模型组、ICA药物组(30、60、120 mg·kg-1),海马内注射Aβ25-3510μg(5μg.μl-1)制备AD大鼠模型,ICA30、60、120 mg·kg-1连续灌胃给药14天后,石蜡切片HE染色观察海马神经元形态及数量的变化;神经细胞原代培养,MTT检测神经细胞增殖活性.结果 与模型对照组比较,ICA连续灌胃给药14天可减少皮质和海马神经元的丢失;ICA给药组噻唑蓝值较模型组增加.结论 淫羊藿苷对Aβ25-35所致神经细胞损伤具有保护作用,有利于老年性痴呆的治疗.