APO2.7在凋亡和坏死的HL—60细胞中的表达

目的研究单克隆抗体APO2.7识别的一种线粒体膜蛋白质在凋亡和坏死的HL-60细胞中的表达情况.方法依托泊甙(VP16)和热处理分别诱导HL-60细胞产生凋亡和坏死,用荧光显微镜检查、DNA片段化和PI摄取试验进行鉴定,利用流式细胞仪分析其APO2.7的动态表达.结果凋亡细胞的APO2.7表达率在0、2、4、8、16、24h分别为(2.5±0.56)%、(4.4±0.61)%、(6.5±0.70)%、(6.2±0.17)%、(25.8±0.56)%和(15.7±0.26)%.而坏死细胞却分别是(4.5±0.72)%、(62.8±0.26)%、(87.8±0.41)%、(93.5±0.95)%、(94.8±0.53)%和(89.3±0.85)%.二者均在16h达到峰值.结论提示APO2.7可能不是凋亡测定的特定标志而是在细胞死亡(凋亡和坏死)过程中发挥作用.     

左旋-二脱水伊地醇双甲磺酸酯对HL-60细胞Bax蛋白表达的影响

目的探讨左旋—二脱水伊地醇双甲磺酸酯(DMDAI-L)对HL-60细胞Bax蛋白表达的影响.方法通过免疫细胞化学法和western blot分别测定不同剂量DMDAI-L对HL-60细胞的Bax蛋白的表达情况.结果免疫细胞化学法定性实验结果显示药物干预后HL-60细胞Bax阳性表达高于正常对照组;western blot结果显示不同浓度药物(2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)干预HL-60细胞48h后,Bax蛋白相对表达(0.59±0.02、0.90±0.09、1.07±0.03),正常对照组为(0.32±0.03);各给药组与正常对照组比较均有统计学意义(p<0.05).结论 DMDAI-L诱导HL-60细胞凋亡过程中,其作用机制可能与上调Bax蛋白表达有关.     

拓扑替康对HL-60细胞凋亡的影响

目的:探讨拓扑替康(TPT)对人髓系白血病细胞株HL-60细胞凋亡的影响.方法:取倍增期的HL-60细胞分组培养,实验组培养液中加入0.15 μmol/L的TPT,空白对照组继续常规培养.分组培养4 h、12 h后分别采用流式细胞仪Annexin V-FITC染色及TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果:分组培养4 h后,实验组细胞凋亡率为(28.57±3.16)%,高于空白对照组的(3.12±0.38)%,差异具有统计学意义(t=13.85,P=0.000 2).分组培养12 h后,实验组TUNEL阳性细胞数达38.33%,高于空白对照组的2.67%(χ2=117.08,P<0.05).结论:拓扑替康具有诱导HL-60细胞凋亡的作用.     

NHE-1特异性抑制剂DMA逆转HL-60/ADM细胞多药耐药的实验研究

目的 探讨钠/氢交换器-1(Na /H exchanger-1, NHE-1)特异性抑制剂二甲基氨氯吡咪(dimethyl amiloride, DMA)是否能在体外逆转耐药细胞株HL-60/ADM的多药耐药及其可能机制.方法 以阿霉素诱导产生多药耐药(multidrug resistance, MDR)的HL-60/ADM细胞株为研究对象,用MTT法检测化疗药物敏感性,流式细胞仪检测细胞内柔红霉素积累量,RT-PCR法检测mrp、bcl-2、bax mRNA表达,免疫细胞化学法检测细胞膜多药耐药相关蛋白(MRP)表达,TUNEL法检测原位细胞凋亡.结果 与50 μmol/L DMA共同培养24 h后,HL-60/ADM细胞对ADM、MIT、VCR、HAR 4种化疗药物的IC50值分别由(839.5±45.2 )、(321.2±28.9)、(70.5±15.5)、(65.2±20.7)ng/ml降低至(180.5±38.9)、(76.4±12.0)、(30.2±7.5)、(31.7±7.2)ng/ml;分别与50、100 μmol/L DMA共培养24 h后,HL-60/ADM细胞内DNR积累量荧光强度由作用前的33.56升高到48.74和70.10,细胞内mrp mRNA表达量、MRP蛋白表达量及bcl-2 mRNA表达量明显降低,bax mRNA表达量明显升高;与100 μmol/L DMA共同培养24 h后,5 μg/ml ADM作用下的HL-60/ADM细胞凋亡率明显增高.结论 DMA可逆转HL-60/ADM细胞的MDR,其机制可能与下调MRP表达及促进bcl-2/bax凋亡途径有关.     

姜黄素抗白血病细胞活性及其机制

目的 探讨姜黄素对白血病细胞的致凋亡作用及其相关作用机制.方法 MTT细胞毒实验检测姜黄素对白血病HL-60细胞的生长抑制作用,Annexin V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡的发生,提取细胞总蛋白Western blot检测survivin蛋白、caspase-9和caspase-3剪切带的表达.结果 姜黄素对白血病HL-60细胞显示了高效的细胞毒活性,IC50值为(1.66±0.31)μmol/L.0、2、4和8μmol/L的姜黄素处理HL-60细胞48h后,细胞的凋亡率分别为(2.44±1.24)％、(17.12±3.61)％、(34.82±6.63)％和(53.94±8.17)％,各处理之间差异有显著性(P＜0.01).Western blot结果显示姜黄素诱发了HL-60细胞内caspase-9的裂解和继发的caspase-3剪切,同时姜黄素也剂量依赖性的下调了HL-60细胞内survivin蛋白的表达.结论 姜黄素对人白血病细胞具有高效的致凋亡作用,下调细胞survivin蛋白的表达激活线粒体凋亡途径是其致凋亡的主要作用机制.     

HL-60细胞分化与凋亡关系的初步研究

目的探讨HL-60细胞分化与凋亡的初步关系,指导白血病的联合化疗.方法NBT还原试验检测细胞分化、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡及bcl-2、c-myc蛋白的表达,观察分别经ATRA、TPA诱导分化的HL-60细胞对VP-16的凋亡反应.结果与对照组相比,经ATRA、TPA分化的HL-60细胞bcl-2、c-myc蛋白表达都明显降低(P＜0.05),其中以TPA下调c-myc蛋白的幅度最大(76%);对VP-16的诱导反应,经TPA分化的HL-60细胞凋亡率明显减少(P＜0.05),而经ATRA分化的细胞凋亡率则无明显变化(P＞0.05).结论HL-60细胞对VP-16的凋亡诱导反应与bcl-2、c-myc蛋白的下调表达程度有关;分化诱导剂ATRA与低剂量的VP-16联合应用可望改善AML的化疗效果,并且以后者先用效果更好.     

自分泌血管内皮细胞生长因子对HL-60细胞生物学活性的影响

目的研究自分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)对髓系白血病细胞株HL-60的增殖及凋亡影响。方法采用脂质体转染VEGF165 cDNA入HL-60细胞,通过RT-PCR及ELISA方法鉴定转染克隆HL-60/VEGF165细胞中VEGF mRNA及蛋白的表达,MTT、集落形成实验比较HL-60/VEGF165及带有pcDNA3.1-- neo空载体的HL-60/neo细胞增殖活性,流式细胞仪观察转染细胞凋亡。结果HL-60/ VEGF165细胞的VEGF mRNA表达量增加,细胞培养上清中VEGF蛋白浓度为(399.07±12.45)ng/L,高于HL-60/neo 细胞的(184.45±10.53)ng/L(P<0.01);HL-60/VEGF165细胞与其对照组HL-60/neo 细胞相比较,生长速度明显加快,集落形成能力明显增加,集落数分别为(157.00±17.00)/500细胞和(110.00±12.90)/500细胞(P<0.05),而细胞凋亡率减少,分别为(3.18±0.33)%和(6.61±0.50)%。结论自分泌VGEF在白血病细胞的增殖与凋亡中起重要作用。     

Survivin基因RNAi真核表达载体对HL-60细胞增殖及凋亡的影响

目的 构建Survivin的shRNA表达质粒并将其导入白血病细胞株HL-60细胞以探讨PNA干扰对HL-60细胞增殖及凋亡的影响.方法 设计、合成两对针对survivin的shRNA序列,连接到带有人U6启动子的裁体质粒pSINsi-Hu6中,将构建重组质粒命名为pSIN/shRNA1和pSIN/shRNA2.pSIN/shRNA1转染HL60细胞,应用四唑盐(MTT)比色法观察细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 酶切分析和测序证实pSIN/shRNA1和pSIN/shRNA2构建成功.MTT测定显示转染重组质粒pSIN/shRNA1入HL-60细胞48、72和96 h后细胞增殖明显受到抑制,分别与阴性对照组、空白对照组组比较,差异有显著性(P＜0.05).流式细胞仪分析pSIN/shRNA1组胞凋亡率达(20.21±0.75)%,明显高于阴性对照组的(2.58±0.48)%和空白对照组的(1.26±0.30)%.结论 成功地构建了survivin基因RNAi真核表达栽体,且pSIN/shRNA1可序列特异性地抑制HL-60细胞的增殖并诱导其凋亡,为白血病的基因治疗奠定基础.     

染料木黄酮诱导人白血病HL-60细胞凋亡的实验研究

[目的]研究染料木黄酮(Gen)在诱导白血病HL-60细胞凋亡时,对c-Myc和Bcl-2蛋白表达水平的影响,初步探讨Gen的抗肿瘤作用机制.[方法]HL-60细胞分别以终浓度0.1 mmol/L、0.5 mmol/L和1.0 mmol/L的Gen处理12 h后,再分别用碘化丙啶染色和异硫氰酸荧光素(FTTC)标记的抗体,用流式细胞仪(FCM)检测凋亡细胞和表达c-Myc或Bcl-2细胞的百分率.[结果]0.1～1.0 mmol/L浓度的Gen可诱导HL-60细胞凋亡,下调c-Myc和Bcl-2蛋白表达水平,且均呈剂量效应关系.[结论]下调HL-60细胞c-Myc和Bcl-2蛋白表达水平,可能是Gen诱导HL-60细胞凋亡的机制之一.     

蝎毒抗癌多肽对HL-60细胞凋亡及Bcl-2和p53基因表达的影响

目的：研究蝎毒抗癌多肽（APBMV）在体外诱导人急性粒细胞白血病HL-60细胞凋亡的作用及其相关机制。方法采用CCK-8法检测APBMV作用后HL-60细胞的增殖抑制率,光镜观察APBMV作用后HL-60细胞的形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测APBMV对相关凋亡基因蛋白表达的影响。结果 CCK-8法显示APBMV能够抑制HL-60细胞增殖,其对HL-60细胞增殖的IC50为15.64μg/ml。流式细胞仪检测提示APBMV能诱导HL-60细胞凋亡,且呈浓度-效应关系。APBMV（16μg/ml）作用48h后,细胞凋亡率为（36.1±2.1）%,与正常对照组比较有统计学差异（P＜0.05）。Western blot提示APBMV （4、8、12和16μg/ml）组的Bcl-2蛋白表达量分别为正常对照组的78.60%、54.60%、25.50%和4.20%;p53蛋白表达量分别为正常对照组的163.00%、271.00%、355.00%和447.00%。结论 APBMV可有效抑制HL-60细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其机制可能与促进HL-60细胞内p53基因的表达,抑制Bcl-2基因的表达有关。