正常人成纤维细胞老化过程中活性氧水平的变化

目的 研究正常人成纤维细胞在老化过程中细胞活性氧水平的变化。方法 取常规体外培养的原代人成纤维细胞,按不同传代数（PD22－24和PD50－52）分为两组,代表老化过程中两个阶段（早期和中－晚期）,用流式细胞仪检测罗丹明123显示细胞活性氧水平,同时用β-半乳糖苷酶组化染色,形态观察衰老细胞,用群体倍增时间和流式细胞周期分析显示细胞增殖情况。结果 中－晚期细胞中衰老细胞增多,活性氧水平增高,未出现增殖阻滞。结论 正常人成纤维细胞在老化过程中细胞活性氧水平呈升高趋势。     

长波紫外线致人皮肤成纤维细胞凋亡和活性氧生成的作用

目的 :分析长波紫外线照射诱发人皮肤成纤维细胞凋亡及活性氧生成的作用。方法 :用长波紫外线照射培养的人皮肤成纤维细胞 ,经流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞凋亡情况 ,荧光分光光度计检测活性氧 ,电子自旋共振波谱仪检测自由基。结果 :110～ 12 0kJ·m-2 的UVA照射能够诱导明显的细胞凋亡 ,甘露醇能够拮抗这种作用 ,照射样品中发现活性氧生成增加 ,并检测到了羟自由基信号。结论 :低辐照度UVA(0 .6mW·cm-2 )照射能够诱发人皮肤成纤维细胞凋亡 ,氧化损伤可能在其中发挥着一定作用。     

心肌成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ作用中活性氧水平及p22phox的表达

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)干预心肌成纤维细胞时活性氧的改变及可能的产生途径,为防治心室重塑发展提供思路.方法 培养出生2～3 d大鼠心肌成纤维细胞,分为正常对照组,Ang Ⅱ(10-7mol/L)组,APO(100 μmol/L)组,APo+AngⅡ(APO 100 μmol/L培养1 h后加入终浓度10-7mol/L AngⅡ)组.干预48 h后应用荧光显微镜观测活性氧水平;免疫组织化学法检测p22phox蛋白表达.结果 AngⅡ组活性氧荧光最强,APO+AngⅡ组明显减弱,对照组和APO组最弱.组化染色结果显示对照组和APO组几乎未见p22phox蛋白阳性表达;AngⅡ组细胞普遍阳性表达,显著高于其他3组;APO+AngⅡ组稍强于对照组和APO组,但无显著性差异.结论 AngU可能通过增强p22phox蛋白表达,导致NADPH氧化酶途径产生活性氧增多.     

玉屏风散对紫外线致人皮肤成纤维细胞光老化的防护作用

目的研究玉屏风散对人皮肤成纤维细胞光老化的保护作用及其作用机制。方法紫外线(UVA+UVB)照射人皮肤成纤维细胞,建立光老化模型,使用三种不同浓度的玉屏风散含药血清进行干预,通过β-半乳糖苷酶染色法检测细胞的衰老情况,ELISA法检测细胞DNA总体甲基化水平,透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果与正常组相比,模型组细胞β-半乳糖苷酶染色结果阳性率明显上升,DNA总体甲基化水平降低,细胞形态发生明显改变,胞浆中可见大量空泡形成,线粒体显著肿胀变形,形态不规则。经玉屏风散干预后,人皮肤成纤维细胞的衰老程度有所减轻,β-半乳糖苷酶染色结果细胞阳性率明显下降,细胞的DNA总体甲基化水平有所升高,对成纤维细胞内细胞器尤其是线粒体的破坏明显减轻,细胞形态也有明显的改善。结论玉屏风散可能通过调控细胞DNA总体甲基化水平,保护细胞的形态,进而对于人皮肤成纤维细胞的光老化具有防护作用,其中又以大剂量玉屏风散的抗衰效果为佳。     

线粒体活性氧在心肌成纤维细胞NLRP3炎症小体激活中的作用

目的: 探讨线粒体活性氧在心肌成纤维细胞NLRP3炎症小体激活中的作用。方法: 培养原代小鼠心肌成纤维细胞,细胞分为对照组（正常培养组）,使用脂多糖刺激的引发组,使用脂多糖加三磷酸腺苷的激活组,以及再加用mito-TEMPO的干预组。通过MitoSOX染色检测各组细胞线粒体活性氧水平;通过蛋白质印迹法检测细胞内NLRP3、凋亡相关微粒样蛋白（ASC）、Pro-caspase-1、Pro-IL-1β及上清液中caspase-1 p20、IL-1β蛋白水平; 用酶联免疫吸附法检测上清液中IL-1β蛋白的含量; 使用免疫共沉淀法观察ASC与NLRP3蛋白的结合情况。结果： 激活组细胞胞内线粒体活性氧水平较对照组明显增加（P＜0.05）,而干预组线粒体活性氧水平较激活组明显下降（P＜0.05）;心肌成纤维细胞经脂多糖刺激后,细胞内NLRP3和Pro IL 1β蛋白较对照组明显升高（P＜0.05）,干预组中Pro-IL-1β较激活组明显升高（P＜0.05）。激活组上清液中caspase-1 p20和IL-1β较对照组明显升高（P＜0.05）,干预组caspase-1 p20和IL-1β较激活组明显减少（P＜0.05）。激活组NLRP3-ASC连接形成复合体,干预组NLRP3和ASC的结合减少。结论： 心肌成纤维细胞中线粒体活性氧通过促进NLRP3蛋白和ASC蛋白的结合,使NLRP3炎症小体激活。     

成纤维细胞体外培养过程中超微结构改变的观察

目的 观察正常人成纤维细胞体外培养过程中超微结构的变化规律。方法 将正常人二倍体成纤维细胞进行传代培养，以不同代次的细胞为实验对象，通过倒置相差显微镜与透射电镜对各代细胞进行了观察。结果 45代以内的细胞生长较迅速，45代后的细胞生长逐渐缓慢，65代细胞几乎无增殖趋势。40代以内细胞的超微结构无明显变化，41—65代细胞出现核膜内折，细胞核／浆比例减小，细胞表面突起和微绒毛减少。结论 各代成纤维细胞超微结构改变程度不同。41代后变化明显。     

成纤维细胞与成纤维细胞激活蛋白在结肠癌中的研究进展

肿瘤发生、发展是一个错综复杂的生物学过程,不仅是实质细胞本身的恶性转变,还有赖于肿瘤微环境的作用。肿瘤微环境一般由间质细胞、细胞外基质(extracellular matrix, ECM)和血管构成,其中成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)是主要的间质细胞,在微环境中与癌细胞接触,相互作用,转化为癌相关成纤维细胞(carcinoma associated fibroblasts,CAFs)。近年来,肿瘤中CAFs的研究备受关注,这些细胞在上皮肿瘤的恶性转变中发挥着不可忽视的作用。成纤维细胞激活蛋白(Fibroblast activation proteih,FAP)是活化的成纤维细胞表面上的特异性表达分子,与肿瘤的生长及侵袭密切相关。现就NFs、FAP在结肠癌中的特点、具体作用及机制综述如下。     

成纤维细胞超微结构的研究

本文用实验组织学的方法系统地观察了成纤维细胞的六种基本细胞形态的超微结构。发现成胶原细胞有前、中、后期三个功能阶段,中期细胞又有合成期和分泌期之分;破纤维细胞可区分出吞噬型和溶酶体型两种亚型;纤维细胞亦存在静止型和衰老型两种亚型。成胶原细胞和破纤维细胞分别是胶原合成和胶原降解的主要细胞。本文还证实了成纤维细胞来源于毛细血管旁未分化间充质细胞,少分化成纤维细胞是其他形态的成纤维细胞的始祖。成纤维细胞各种成熟的细胞形态可以互相转化,在功能上互相协调。本文提出了“成纤维细胞系统”的概念,该系统包括上述成纤维细胞的六种基本细胞形态,系统的主要机能是合成胶原蛋白和其他细胞间质,降解胶原和使结缔组织(包括疤痕组织)收缩。     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜成纤维细胞的影响

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是近年来研究较为热门的生物因子,为具有多种功能的多肽生长因子,能广泛促进来源于中胚层及神经外胚层细胞的增殖,是体内重要的创伤愈合因子之一。bFGF有主动诱导分化和加速生长作用,可以促进牙周膜成纤维细胞的分化和增殖,促进牙周组织的修复和再生。     

心脏成纤维细胞和肌成纤维细胞中miRNA的表达差异

目的应用微小RNA(miRNA)芯片技术筛选心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)及心脏肌成纤维细胞(cardiac myofibroblasts,CMFs)中差异表达的miRNAs,为寻找与心脏纤维化有关的miRNA提供理论基础.方法体外分离培养小鼠心脏成纤维细胞,常氧培养传代至第2代,然后在37℃、3%O2条件下培养48 h得到心脏肌成纤维细胞.免疫荧光染色鉴定心脏成纤维细胞和心脏肌成纤维细胞,miRNA芯片技术分别检测miRNA在心脏成纤维细胞及心脏肌成纤维细胞中的表达.结果芯片实验数据分析软件V.4.0对芯片数据进行聚类分析,筛选获得80个在心脏成纤维细胞及心脏肌成纤维细胞中差异表达的miRNAs.相对于心脏成纤维细胞,心脏肌成纤维细胞中有55个miRNAs表达显著上调,25个miRNAs表达显著下调.结论心脏成纤维细胞和心脏肌成纤维细胞中存在差异表达的miRNA分子,差异表达可能与心脏纤维化的发生发展有关.     

成纤维细胞体外培养过程中β-半乳糖苷酶的变化

目的 观察正常人成纤维细胞老化过程中β-半乳糖苷酶的变化规律。方法 取正常人二倍体成纤维细胞进行传代培养，以不同代次的细胞为实验对象，通过细胞生长曲线、群体倍增时间和β-半乳糖苷酶染色等一系列检测方法，对成纤维细胞老化过程进行了观察。结果 随着成纤维细胞的连续传代培养，SA-β-Gal表达呈现从弱(在年轻细胞中占4％)到强(在老化细胞中占60％)的趋势、结论 为建立成纤维细胞衰老模型提供了实验依据。     

表皮细胞体外培养过程中生物学特性改变的观察

目的 通过观察表皮细胞体外增殖与老化规律，为选择合适的纽织工程化皮肤种子细胞提供依据。方法 取正常年轻人表皮细胞进行传代培养，以不同代龄细胞为实验对象，采用形态学观察、群体倍增时间(PDT)、免疫细胞化学及β-半乳糖苷酶染色等一系列方法，检测表皮细胞老化规律。结果 体外单层培养9代，P2的PDT最短，前5代增殖能力较强，P5以后PDT明显延长，P8细胞不再增殖；随着细胞的连续传代培养，SA-β-Gal表达呈现从弱(在年轻细胞中占9％)到强(在老化细胞中占65％)的趋势。结论 建立了体外培养正常人表皮细臆的衰老模型，第1-5代表皮细胞(拱者年龄16～18岁)可作为构建组织工程化皮肤的种子细胞。     

流式细胞术检测细胞内活性氧的方法

目的流式细胞术检测NB4和U937细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平。方法双氢罗丹明123(DHR)以不同的时间孵育细胞(1、6、24h),DHR可被细胞内ROS氧化为罗丹明123,通过流式细胞仪来检测细胞内罗丹明123的荧光,同时设立阴性及阳性对照。结果 1μmol/L DHR孵育细胞,1～24h NB4和U937细胞内的平均荧光强度分别从19.20增加到384.38和12.31增加到97.15。结论适当延长DHR孵育时间可检测不同细胞系ROS基准水平的差异。     

流式细胞术检测细胞内活性氧的方法

目的：流式细胞术检测NB4和U937细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS)的水平。方法双氢罗丹明123（DHR）以不同的时间孵育细胞（1、6、24h）,DHR可被细胞内ROS氧化为罗丹明123,通过流式细胞仪来检测细胞内罗丹明123的荧光,同时设立阴性及阳性对照。结果1μmol/L DHR孵育细胞,1－24h NB4和U937细胞内的平均荧光强度分别从19．20增加到384．38和12．31增加到97．15。结论适当延长DHR孵育时间可检测不同细胞系ROS基准水平的差异。     

活性氧与线粒体损伤

活性氧(reactive oxygen species,ROS)是细胞代谢不可避免的产物。细胞内高水平的ROS直接或间接地参与细胞信号传导,诱导细胞凋亡,是肿瘤及许多其它疾病的共同发病机制。线粒体是细胞能量生成的重要细胞器,也是广受关注的细胞调节氧化应激的中枢。但ROS与线粒体损伤之间的关系,至今尚未完全清楚。近年来的研究表明,线粒体是ROS产生的主要场所,又是ROS作用最敏感的部位。ROS通过氧化线粒体心磷脂、线粒体DNA和线粒体重要的蛋白质对线粒体造成氧化损伤,进而诱导细胞凋亡。     

吸入高浓度氧对大鼠脑组织匀浆内活性氧的影响

目的 大鼠吸入一定时间的高浓度氧后,测定其脑组织匀浆内活性氧含量的变化,评价吸入高浓度氧的安全性.方法 选用纯种wister大鼠60只,随机分为A、B、C、D、E 5组,每组12只,其中A、B、C、D组为高氧组,分别放置于氧浓度为85%～100%的自制氧箱中,于实验4、8、12、16h后制取标本,E组为空气对照组.取脑组织低温高速粉碎、离心提取匀浆液,比色法测定脑组织匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)和总抗氧化能力(T-AOC)的浓度.结果 与对照组相比,高氧各组脑组织匀浆中MDA、NO、NOS均显著升高(P＜0 01﹚,并随吸氧时间的延长有升高的趋势;而SOD、GSH、CAT、T-AOC均显著降低(P＜0.01﹚,并随吸氧时间的延长有降低的趋势.结论 吸入高浓度氧导致脑内活性氧浓度的升高,应引起重视.     

莱菔硫烷诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡与胞内活性氧的关系

目的研究莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）在体外对人胃癌SGC7901细胞增生及凋亡的影响,探讨其作用机制。方法MTT比色法检测SFN对SGC7901细胞增生的影响,透射电镜观察SGC7901细胞形态学变化,流式细胞术检测早期凋亡率、细胞线粒体跨膜电位（△ψm）以及胞内活性氧（ROS）水平。结果SFN呈剂量时间依赖地抑制SGC7901细胞增生,透射电镜观察到SFN作用后SGC7901细胞典型的早期凋亡改变。SFN由0-50μmol／L作用24h,早期凋亡率明显升高（P〈0.01）;△ψm明显降低（P〈0.01）;ROS有不同程度的升高。结论SFN对SGC7901细胞有明显的增生抑制及诱导凋亡作用,SFN可能通过诱发细胞内活性氧水平增高,弓I发经线粒体途径的内源性凋亡。     

活性氧致正常精子膜脂质过氧化作用分析

为探讨活性氧 (ROS)致正常精子膜损伤机理 ,采用硫巴比妥酸法 (TBA)检测 ROS攻击后精子膜脂质过氧化产物— MDA。结果发现 :与对照组相比 ,ROS攻击后的正常精子膜脂质过氧化损伤明显加重 ,MDA含量显著增高(P<0 .0 0 1)。提示 :ROS可导致精子膜脂质过氧化损伤 ,影响正常精子功能